实用的方法来识别处理珍珠鸡的白肉,兔子,并使用端点PCR选定的鱼类

文摘

在食品中,最常掺假是白色的肉及肉类产品以及鱼和鱼产品。出于这个原因,我们评估在实践中识别的可能性选择白肉的物种,也就是说。,guinea fowl and rabbit as well as four fish species, namely, pollock, hake, sole, and panga, in thermally treated samples. The aim was to check whether the previously published in the scientific literature species-specific primers allows for the identification of processed meat using the end-point PCR technique. To identify the six species, the short sequence fragments (from 130 to 255 bp) of 12S rRNA, COX3, mitochondrial ATP synthase Fo subunit 6 (ATP6) gene, pantophysin (Pan I) gene, 5S rRNA gene, and microsatellite markers (locus: Phy01-KUL) were selected. Stability and specificity of the six pair primers were evaluated on cooked and autoclaved meat, and commercially processed food samples such as rabbit and guinea pâtés, ready-made baby food, and breaded, fried, and deep-frozen fish products. The method proved to be useful for the authentication of severely processed food products against fraudulent species substitution and mislabelling and this approach may be an alternative to more advanced and more expensive PCR techniques.

1。介绍

现代技术的发展与原材料的收购,加工,运输使得食品在全世界的分布。这有利于扩大市场,满足了日益增长的粮食需求。然而,在一个全球化贸易的时代,复杂的食品供应链创造了许多食物欺诈的机会。提供更廉价食物的压力意味着它并不总是产生相当,最近就是明证大量欺诈行为在大众媒体宣传,如添加三聚氰胺奶粉、苏丹染料添加到肉类,用马肉代替牛肉(1]。在违反通知的类型在管理援助和合作系统(AAC),欧盟成员国,可用标签错误(68.17%)是第一位的,其次是未经批准的治疗和/或过程(15.35%)、文档(8.93%),和更换/稀释/添加/删除产品(7.55%)(2,3]。肉,鱼,和他们的产品是最经常掺假的食品。肉类市场价值高,有吸引力的原因营养和理想的感官特性,尤其容易掺假。白肉物种引起客户的兴趣,容易受到经济动机的掺假行为包括兔子、珍珠鸡,和鱼。

在欧洲,兔肉在地中海国家尤其欣赏烹饪的原因以及由于其营养价值和低过敏潜力;兔子建议儿童和青少年(4,5]。兔肉的特点是高含量的蛋白质(约。(约22%),不饱和脂肪酸。60.5%的脂肪酸,包括32.5%的多不饱和脂肪酸),和钾;它也是一种很好的维生素B的来源,特别是维生素B12 (4,6]。在欧洲市场上,珍珠鸡肉特别认可在法国和意大利,和感官特性类似于鹿肉使这个物种的肉也欣赏在美国(7]。珍珠鸡肉包含有利钠和钾的比例是一种多不饱和脂肪酸的来源,约占总脂肪酸的29% (8,9]。鱼,特别是海洋起源,是均衡的饮食建议的组成部分。鱼的肉含有蛋白质生物价值高和多不饱和脂肪酸,主要是n,富含维生素和矿物质;因此,经常食用的鱼减少患心脏病的风险、强化骨骼系统(10,11]。

食品掺假可以对公共卫生和经济有严重的负面影响,也可能阻碍个人信仰的维护关系到一个人的人生观或宗教,因为世界人口的很大一部分不包括某些类型的肉从他们的日常饮食。正如上面提到的,欺诈行为通常与替换或将食品的标签组件相关联,可能误导消费者,让他们有害物质。例如,一些肉蛋白,肌动蛋白、肌红蛋白,小清蛋白,原肌球蛋白、血清白蛋白,和主要的鱼类起源,摄入人体后可引起过敏反应(12,13]。对人类健康的威胁可能是毒素的存在可以在鱼和海鲜。神经毒素积聚在肌肉组织由于环境恶化。消费者也担心食用动物的肉的可能性可能患有疾病,如禽流感、非洲猪瘟(ASF),口蹄疫(FMD),和牛海绵状脑病(疯牛病);因此也对那些原因,买方应保证他们购买产品,验证的成分(14]。

如今广泛讨论另一个问题是自然的退化通过加强农业、动物源食品的生产,和自然资源的过度开采,导致全球变暖。过度的开发环境,在海鲜,是相关的,其中,过度捕捞或获得濒危物种,,结果是,可能会导致动物种群的破坏。不公平的粮食生产和不公平的贸易造成经济损失不仅为相互竞争的企业,也为消费者本身,他们可能感觉受到了欺骗,在购买的产品,不符合他们的期望。检测控制身体的不公平做法不仅破坏了信任的客户特定的制造商,但往往整个行业参与给定产品的生产。

以前文献中,原始和解冻肉被选中的鱼类,包括鳕科的和爱琴海的鱼类(如鳕鱼,鳕鱼和唯一的),被确认使用等电点聚焦和免疫学方法通过检测种特异的酶存在于肌质蛋白的电泳分离获得的分数(15,16]。鱼类也通过基因识别方法,例如,原始鳕鱼肉,鳕鱼,和唯一的肉类、生和15分钟加热在100°C,以及鳕鱼在生肉,semiprocessed,加工产品使用PCR-RFLP方法(17- - - - - -20.]。常规PCR和PCR-RFLP 12 s rRNA基因片段的分析被用来区分唯一和格陵兰大比目鱼(21,22)在细胞色素氧化酶序列的DNA条码技术应用于验证生肉和非洲的大砍刀加工品在意大利和越南23,24]。鳕鱼,鳕鱼也确定了在各种鱼类产品结合DNA条码技术和PCR-RFLP方法(25,26]。

加工过的肉类和鱼类产品特别容易受到掺假因为原材料的形态学特征是生产过程中,这可以防止视觉方法的使用来验证的构成最终的即食产品。此外,个别物种的肉可能也有类似的纹理处理后。出于这个原因,基于蛋白质分析的先进方法,例如,电泳和大规模spectrometry-based技术,或DNA分析,用于识别物种的肉在加工食品。目前,基于PCR的方法对肉类物种形成;然而,低效率的PCR方法报道高度加工样品由于热变性和降解核酸片段的监控,与遗传物质的提取问题,物种之间大(27,28]。例如,提取DNA的质量(即。,yield and integrity) from bovine supraspinatus muscle was affected by microwave cooking, which was observed for both mitochondrial and nuclear regions [27]。在另一项研究中,煮和烤烘箱影响物种的决心和量化的鸡肉、猪肉和牛肉线粒体DNA (mtDNA)使用实时聚合酶链反应(28]。

肉物种形成以来即食餐使用PCR是受到热条件的影响,本研究进行验证识别的可能性选择白肉物种遗传方法严重处理和复杂的产品。热处理的目的是调查是否会影响稳定的选择标记和热是否加工肉类的珍珠鸡,兔子,和鱼类,如鳕鱼,鳕鱼,非洲的大砍刀,多佛唯一可以确定基于特定DNA序列片段。此外,跨物种进行分析,商业加工和即食餐头上检查来验证如果处理和额外的样品中成分的存在阻碍特定的肉类型的检测。在这项研究中,可用端点PCR技术和引物在科学文献中被用来评估加工白肉的可识别性选择的物种。端点PCR是易于使用和更便宜和更先进的技术,如rt - PCR相比,测序,或质谱;因此,它可以实现在加工产品的常规筛查。

2。材料和方法

2.1。样品

研究材料获得以下动物物种:珍珠鸡(Numida 30种),兔(Oryctolagus cuniculusf。家),多佛比目鱼/通用唯一(Solea Solea),鳕鱼(Merluccius Merluccius),非洲的大砍刀鲶鱼(Pangasianodon hypophthalmus),阿拉斯加鳕鱼(Gadus chalcogrammus)。其他常见消费鱼类的DNA也孤立排除可能的交叉反应,即。鸡(背带吊裤带)、土耳其(吐绶鸡)、鹅(雁属雁属)、羊(羊属白羊座)、猪(野猪)、牛(牛)。鱼(新鲜多佛比目鱼和冷冻鳕鱼,非洲的大砍刀,和波洛克)和养殖动物鲜肉在当地的商店和超市购买。商业加工各种制造商在当地商店购买的产品在波兰,比如去年底,现成的婴儿食品,而且,对于鱼,面包,煎,速冻产品。表1介绍了物种组成和加工类型的测试产品。立即购买后,约5克样品被切断在无菌条件下,转移到无菌试管,储存在−20°C,直到进一步的DNA分析。

2.2。加热处理

鱼和肉切片厚度为25毫米被包裹在铝箔和加热在一个理性的结合对流烤箱鳞状细胞癌模型61(德国兰茨贝格是莱赫)。加热的温度进行了160°C炉室的空气湿度75%直到核心温度达到75°C。相同的样本集是消毒在121°C 0.1 MPa的压力为20分钟。样品冷却,转移到无菌试管,储存在−20°C,直到进一步的DNA分析。

2.3。DNA分离,浓度和纯度

所有样本的DNA是孤立的重复使用PureLink™基因组DNA迷你包(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)根据制造商提供的协议,轻微的改变。中提取DNA的浓度是由测量紫外吸光度在260 nm (A260)和280 nm (A280),使用NanoDrop™OneC microvolume紫外可见分光光度计(热费希尔科学Inc .)、沃尔瑟姆,妈,美国)。

仪器校准,TE缓冲(EDTA Tris-HCL 10毫米,0.1毫米),和DNA纯度估计通过计算A260 / A280比率。样品A260 / A280比率在1.8 - -2.0的范围被认为是高质量的纯样品,免费从蛋白质、RNA和其他污染物。DNA的完整性检查原始形式和加热肉类组织2%琼脂糖凝胶电泳(Sigma-Aldrich、Schnelldorf、德国)包含SimplySafe™染色(EURx有限公司、Gdańsk波兰)1 x此种缓冲(tris-borate-EDTA)。在SUB15凝胶电泳进行单元(Holliston Hoefer, Inc ., MA)在150 V 45分钟。

2.4。PCR扩增

选择六种特异的引物对扩增的珍珠鸡,兔子,鳕鱼,非洲的大砍刀,鳕鱼,唯一的dna。6个引物对特定于鸡、火鸡、鹅、猪、牛、羊被用来控制交叉反应。引物被TIB custom-synthesised MOLBIOL GmbH(德国柏林);样品处理的引物序列和方法如表所示2。反应条件应用按照给定表的引用2,除了兔子和波洛克引物对,反应条件的测试经验。

有利条件形成常规PCR扩增兔产品从DNA的如下:最初的热变性步骤在95°C 5分钟,其次是35周期组成的95°C为30年代DNA变性,56°C为引物退火30多岁,45岁和72°C DNA扩展。最后延伸步骤进行了5分钟的72°C。在波洛克,PCR反应包括45个连续周期:95°C 10 s, 65°C 20年代,60年代和72°C,最后延伸步骤10分钟的72°C。的物种特异性片段进行扩增反应混合物组成的100 ng DNA(在波洛克和鱼产品,20 ng收集DNA), 1μ每个引物的米,2.5μL 10 x PCR缓冲(Sigma-Aldrich), 0.2毫米核苷酸(Sigma-Aldrich)和0.25μL (5 U /μL) DNA聚合酶(Sigma-Aldrich)。反应的解决方案是最后一个25的体积μL与无菌水分子生物学(默克密理博,达姆施塔特,德国)。放大了的S1000热循环(Bio-Rad实验室、Inc .、大力神、钙、美国)。

2.5。PCR产品的分离和可视化

扩增子被水平在2%琼脂糖凝胶电泳分离(Sigma-Aldrich Schnelldorf,德国)包含SimplySafe™染色(EURx有限公司、Gdańsk波兰)1 x此种缓冲(tris-borate-EDTA)。在SUB15凝胶电泳进行单元(Holliston Hoefer, Inc ., MA)在150 V 45分钟。的分子大小PCR产品使用PCR验证了低梯(Sigma-Aldrich),以及由此产生的DNA片段被紫外线透照视觉效果,分析了使用凝胶Doc™XR +系统(Bio-Rad实验室、Inc .、大力神、钙、美国)。

3所示。结果与讨论

3.1。引物的选择

我们专注于实践能力识别特定种类的白肉(珍珠鸡和兔子)和鱼(鳕鱼,黑线鳕,唯一和非洲的大砍刀)使用选定的遗传标记。标记的物种特异性和热稳定加工肉类样品进行评估;随后,我们决定矩阵的复杂性是否准备好了饭菜,即。,the presence of vegetables, spices, and additives in the analysed sample, impedes their detection. To identify guinea fowl, rabbit, pollock, hake, sole, and panga meat, the sequence fragments of 12S rRNA, COX3, mitochondrial ATP synthase Fo subunit 6 (ATP6) gene, pantophysin (Pan I) gene, 5S rRNA gene, and microsatellite markers (Locus: Phy01-KUL) were selected (Table2)。之前动物物种识别的引物设计在食品和法庭科学领域,但是,除了珍珠鸡,他们没有被测试样品进行热处理。因此,在目前的工作,6对引物的稳定性和特异性评估在煮熟、热压处理过的、和商业加工食品样品。

基因识别、线粒体(mtDNA)和核DNA序列。mtDNA序列的特点是低种内的可变性和高种间变异和无数的点突变;他们也可以发生在更大数量的副本而核DNA。这些特征意味着mtDNA使甚至密切相关的物种的分化和相比,可以更容易地获得基因组DNA,也从严重热处理样品38,39]。在目前的研究中,三个六个引物序列,即COX3, 12 s RNA和线粒体ATP合酶Fo单元6基因,特定于兔子,珍珠鸡,鳕鱼,分别与mtDNA序列相关。

与线粒体DNA不同,核DNA从动物细胞更难获得,因为它只发生在细胞核中两个副本。只有25%的基因组DNA构成基因和相关基因序列。的一个非常重要的组成部分,大约70 - 80%,是nongenic DNA,其中约20 - 30%对应适度或反复散布在整个基因组序列或曼联和安排衔接着大数组的重复序列。排列序列包括卫星DNA,它分为三类:卫星minisatellite和微卫星。

为了确定非洲的大砍刀,微卫星标记在Phy01-KUL轨迹(表使用2)。多态性的微卫星是基于变量数量的短串联重复序列(str)相同的核苷酸的主题40]。协同进化过程中,这些序列成为种专一性(41]。方法基于分散和重复单位使用基因组中重复出现的事实,这就增加了池研究的分子目标(42]。

5 s rRNA pantophysin我(Pan)基因序列用于这项研究出现在基因组DNA。5 s rRNA基因由120 -核苷酸编码序列高度保守的基因组中发生的形式串联重复序列。这些重复由nontranscribed序列(nt)的长度和序列具有种特异性(31日]。锅我基因应用于这项工作也是一个高度多态标记。Pantophysin不可或缺的膜蛋白存在于小cytoplasmatic微泡,被认为是一个函数在各种细胞内穿梭通路(17]。以前,pantophysin我基因尤其是用来描述大西洋鳕鱼的遗传多样性43- - - - - -45]。

3.2。处理DNA提取和质量的影响

基因方法的基本问题,如PCR,适当的遗传物质的质量和数量,,从样本隔离后,进行进一步的分析。这些参数确定等的提取方法、样品组成、和处理的类型(46,47]。在遗传物质的提取从肉类产品,许多化合物可能进入DNA制备及影响其纯度,可能抑制PCR反应。这些化合物包括脂肪、多糖、牛奶蛋白、糖原、胶原蛋白、铁、钴、野鸭反应产品,和酚类化合物。抑制剂也可能是细菌的遗传物质,植物或动物来源出现在示例中,除了目标DNA分析(48,49),以及其余试剂用于DNA提取。反应抑制剂干扰PCR扩增过程,其中,通过减少或完全抑制DNA聚合酶活性(46,50]。

当评估DNA纯度,紫外线吸收比率A260 / A280 1.8 - -2.0的范围内进行DNA提取的杂质(51]。在我们的工作中,我们获得了高质量的DNA分离分析样本,即。,from frozen and thawed, cooked, and sterilised muscle tissue and commercial products, and the A260/A280 ratios for the analysed samples were within the recommended limits. However, we observed that DNA preparations isolated from pollock, hake, panga, and commercial fish products contained less DNA compared to preparations from Dover sole and other types of meat. This is in line with previous reports where the muscle tissue of fish, with a few exceptions, usually contained less DNA compared to the tissue of cattle, pigs, or poultry [52]。冷冻的因素也可能影响鱼类遗传物质的低效率的隔离,因为在三个分析鱼类的情况下,即鳕鱼,鳕鱼,非洲的大砍刀,冷冻鱼片被用于这项研究。长途运输冷冻产品,通常情况下与鱼或海鲜,和与他们分布相关的所有操作会引起温度波动在负载,因此,DNA降解。之前有牛肉和蚯蚓的研究表明,即使是一个单一产品的冻融循环导致DNA降解[51,53]。

在我们的研究中,从热处理样品的91.7%,比从原始遗传物质得到/解冻组织,测量显示DNA浓度较高。这些结果与获得的结果由另一个作者(54),观察产生重大影响的加热方法从肉获得的DNA的质量和数量。作者表明,DNA的量与生肉相比,肉烤在300°C或在微波炉加热5分钟560 W是显著降低,这可能是由于核或细胞膜的破坏由于加热,促进更多的DNA细胞的释放。然而,即使准备从加热样品DNA的浓度越高,也由于水的损失,一般来说,这种材料是低质量的,即相比,更加分散,存在于原始或冷冻/解冻样本[54]。

3.3。兔子和珍珠鸡物种的识别

我们的研究关注肉的识别在不同的条件下,加热导致DNA降解。因此,PCR引物选择研究放大相对较短序列片段,即。,从130个基点至255个基点(表2)。在第一阶段,兔子和珍珠鸡生/解冻,烹饪,和热压处理过的肉类进行分析,当放大片段被证实的特异性和稳定性,进行物种鉴定的加工产品。种特异的PCR引物组放大兔子152个基点和130个基点几内亚家禽产品。这些放大PCR产品预期的大小是生肉样本中发现,在对流烤箱熟(获得核心温度为75°C),甚至变相20分钟的121°C。兔子和珍珠鸡放大产品的识别热加工肉类的数据所示1(一)和1 (b)。

交叉反应也进行了验证选择的物种特异性引物。为引物设计检测兔DNA,交叉反应进行了猪,牛,羊的DNA,而珍珠鸡底漆cross-tested鸡,火鸡,鹅的DNA。结果证明,这两个物种的识别标记都是选菌种(数据未显示)。

虽然DNA被认为是更耐温度或高压力比其他化合物,也影响和受到退化(55,56]。同样,低pH值、紫外线辐射和高湿度会导致DNA分子的化学修饰,体现在其分裂或PCR产物的形成49]。它也可能存在于富含碳水化合物的酶产品,如大豆的准备工作,导致DNA降解[56]。

使用退化的DNA进行PCR反应可能导致背景。也很难放大DNA序列,有时,这是完全不可能由于目标材料的降解49,54]。在先前发表的研究,它是不可能扩大439年英国石油公司产品从120°C马肉加热30分钟(57),835个基点的产品从猪肉消毒在121°C 15 psi 20分钟的压力(38],271个基点的短的产品无法获得从牛肉炒80分钟时脂肪的温度超过190°C (58]。在另一项研究中,a的放大 英国石油公司从牛肉加热95°C以上失败59]。

在目前的工作,检测兔珍珠鸡扩增产品菌进行杀菌处理肉类,以及加工产品的分析包含这两个测试的物种,是成功的;七个产品的调查,两人烤和五个买断。兔子被确认在去年底和现成的婴儿食品。在加工产品种类检测,检查矩阵是严重退化由于热处理,和它的组成很复杂。婴儿碗和高度复杂的产品加工,以确保微生物的安全;因此,生产这类食物包括烹饪、粉碎,冲销;他们还包含,除了肉,各种蔬菜,谷物和蔬菜油(表1)。

兔肉宣布在婴儿食品的8%和8.5(分别样品3 p和4 p)检测(图1(一))。珍珠鸡被正确地宣布的5 - 11.2%(样品6 p和7 p;图1 (b))。成功识别两种白肉的消毒产品确认所选标记具有种特异性和稳定,无论加工产品经历了治疗。由于短序列的扩增片段,即。,152年 bp and 130 bp, it was possible to detect specific DNA, which was fragmented due to the technological processes carried out.

3.4。识别的鳕鱼,鳕鱼,非洲的大砍刀,唯一的物种

我们专注于识别处理白肉来源于三种鱼类广泛使用冷冻鱼片和即食餐的形式在欧洲,很受消费者欢迎,即。阿拉斯加鳕鱼,鳕鱼,非洲的大砍刀鲶鱼。此外,我们分析了常见的唯一/多佛比目鱼,更贵的物种,价值由消费者和在餐厅菜肴,因此容易掺假和便宜的物种。确认识别鱼类加工样品的能力是重要的诚实的食品生产商,餐馆,和消费者,因为便宜的物种也有风险,如鳕鱼,鳕鱼和非洲的大砍刀,可以替代物种在加工食品更贵。

在研究的初期阶段,选择检测的PCR引物对狭鳕DNA扩增492个基点的产品(数据未显示)。但是,没有放大产品选择的序列片段的获得和使用它在生的和熟的鳕鱼样本,表明冻鳕鱼片的重要DNA降解。出于这个原因,4个引物对选择待分析识别所有鱼类放大短PCR产品,从158年到255年英国石油公司(表2)。因此,在第二次尝试,确定波洛克DNA引物旨在扩大255个基点的产品应用。原来这样规模的产品可以从原始放大/冷冻鱼也从样品进行烹饪和高压灭菌法为20分钟(图121°C2)。的鳕鱼,唯一和非洲的大砍刀,201年当PCR产品,231年和158年英国石油公司被放大,分别证实了他们的存在在所有三种类型的样本,即。nonheated和热鱼组织处理。然而,观察显著差异在乐队之间的放大产品的强度(图四个物种2)。这表明不同级别之间的DNA降解鱼类研究,可能由于不同的存储条件和贮存时间由分销商和零售商。然而,检测珍珠鸡、兔子和鱼扩增产品加工样品是成功的,在所有的菌进行确认所选标记具有种特异性和稳定无论加工产品经历了治疗。

能够识别选择鱼类在热食品加工产品商业了。检查产品面包鱼手指,在生产过程中,prefried然后卖冰冻。制造商声明的鳕鱼肉完全在他们的作文。PCR引物特定于阿拉斯加鳕鱼DNA使这个物种的鉴定分析样品,但是当使用hake-specific引物,观察一些特异性的产品,也就是说。,乐队的低强度和不同大小(图3)。这样的非特异性的产品没有发现鞋底和非洲的大砍刀底漆对。结果显示所选的稳定遗传标记和其实际应用的可能性研究的物种组成商业产品使用常规PCR方法。然而,我们观察到显著DNA降解冰冻鱼和鱼产品。

加工产品通过一个漫长而复杂的供应链面临不公平的造假行为。虽然有一些法律法规、国际和州内的,旨在消除非法行为,食品骗子不断发现。迄今为止,许多研究和方法的基因识别鱼类和农场动物被公布,但是,其中的一些有关复杂和严重的加工食品,如消毒去年底,现成的菜宝宝,即食餐。以前,阿拉斯加鳕鱼中已被确认样品(鱼片)从百货公司在德黑兰收集使用DNA条码技术基于650个基点的线粒体细胞色素氧化酶亚基基因片段(COI) [60]。三个阿拉斯加鳕鱼样本标签不正确。

最近,DNA微阵列实验的验证10鱼类,其中包括阿拉斯加鳕鱼(Gadus chalcogrammus),常见的唯一(Solea Solea)和条纹鲶鱼(Pangasianodon hypophthalmus),设计了基于16 s rDNA cyt b探针序列(61年]。微阵列的测试是新鲜的、冷冻、烟熏、腌制,但没有热处理样品。太cyt b的PCR-RFLP和测序为种内的差异化开发鳕鱼样本在捷克市场,但结果并不总是决定性的(62年]。在另一项研究中,鱼菜在商业销售寿司餐馆和酒吧停业在布鲁塞尔收集检测利用DNA条码技术和细胞色素氧化酶亚基我(COI)基因(63年]。唯一标示错误样本的11.1%,和其他物种不定期是鳕鱼(13.1%)和蓝鳍金枪鱼(95%)。然而,大多数现代基因方法更昂贵和更费时,需要进一步的数据处理,使他们不太适合日常物种鉴定目的相比传统PCR分析。

4所示。结论

我们的研究证实了选定的物种特异性遗传标记及其耐热性在烹饪和冲销。选择白肉物种的识别,即兔子,珍珠鸡,阿拉斯加鳕鱼,黑线鳕,常见的唯一,和非洲的大砍刀,可以执行在加工产品样品暴露于高温和复杂的成分。严重的方法可以用于身份验证对欺诈性的物种替代和沃尔玛的加工食品。然而,我们观察到DNA的准备与冷冻鳕鱼,黑线鳕,非洲的大砍刀,和商业鱼类产品含有更少的DNA与其它肉类的新鲜样品和产品相比,我们无法再DNA-amplified产品检测的492个基点,特定于阿拉斯加鳕鱼,这表明显著DNA降解冰冻鱼和鱼产品。

数据可用性

使用的数据和/或分析的研究可从相应的作者以合理的要求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项研究是由美国国家科学中心、波兰,在项目数量/ B / NZ9/02000 2017/25。

引用

1. p . j . O’mahony”发现马肉牛肉产品——一个全球性的问题,“QJM卷,106年,第597 - 595页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. a . Wisniewski和a . Buschulte”如何应对食品欺诈在官方食品控制当局在德国,”保护消费者和食品安全》杂志上,14卷,第328 - 319页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. RASFF,食品和饲料快速预警系统- 2018年度报告欧盟、出版物办公室、卢森堡、2019年,https://ec.europa.eu/food/sites/food/files/safety/docs/rasff_annual_report_2018.pdf。
4. m . Cullere和a .装饰板材Zotte”,兔肉生产和消费:国家的知识和未来的视角,“肉类科学卷,143年,第146 - 137页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. c . Escriba-Perez a Baviera-Puig, l . Montero-Vicente“儿童食用兔肉,”兔子的世界科学27卷,第122 - 113页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. m . Petracci f . Soglia f·勒罗伊,“兔肉需要一个帽子戏法:从传统到创新(回来),“肉类科学卷,146年,第100 - 93页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 美国Yamak, m . Sarica m·a·博兹和a . Ucar”的影响生产系统(谷仓和放养)对部分生产性状和屠宰年龄珍珠鸡,”家禽科学卷。97年,47-53,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. g . Geldenhuys l·c·霍夫曼和n .穆勒”方面的埃及鹅煮的营养价值(Alopochen aegyptiacus肉与其他著名的家禽品种相比,“家禽科学卷,92年,第3059 - 3050页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. z Bernacki, m . Bawej和d . Kokoszyński肉质量两个珍珠鸡(Numida 30种品种。”档案毛皮Geflugelkunke,卷76,不。3、203 - 207年,2012页。视图:谷歌学术搜索
10. d . Sarma, m . s ., p . Das et al .,“营养质量的氨基酸和脂肪酸的五个冷水鱼类:对人类健康的影响,”国家科学院科学信,36卷,不。4、385 - 391年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. n .话题瑞尔l . Kozacinski i Strunjak-Perovic et al .,“蓝鳍金枪鱼的脂肪酸和近似成分(鳍thynnus肌肉对血浆脂质。”水产养殖的研究,43卷,第729 - 722页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. l .傅c .王朱y, y,“海鲜过敏:发生、机制和措施。”食品科学和技术的趋势,8卷,第92 - 80页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. b . thel k . Brockow和b . k . Ballmer-Weber肉过敏的临床表现和诊断在瑞士和德国南部’。”瑞士医学周刊上卷,139年,第270 - 264页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 徐p .秦,瞿w . j . et al .,“一个敏感的多重PCR协议同时检测鸡,鸭,猪肉牛肉样品中,“食品科学与技术杂志》上卷,56号3、1266 - 1274年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. c . Pineiro j . Barros-Velazquez r . i Perez-Martı́n,和j·m·盖拉多“特异酶检测等电点聚焦后的免费工具分化相关的鳕科的鱼类,”食品化学卷,70年,第245 - 241页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. c .哥萨克,侯赛因,h . Rehbein”识别一些爱琴海鱼类本地等电点聚焦,“欧洲食品研究和技术卷,222年,第104 - 99页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. f . Aranishi t Okimoto, s和泉”识别PCR-RFLP鳕科的物种(双鱼座,鳕科)的分析,“应用遗传学杂志,46卷,不。1,第73 - 69页,2005。视图:谷歌学术搜索
18. g . l ., v . j . Russell s e . Pryde et al .,“开发一个基于dna的方法,旨在识别中的鱼类食品,”农业与食品化学杂志》上卷,49号3、1175 - 1179年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. p . Calo-Mata c . g . Sotelo r . i Perez-Martin et al .,“识别鳕科的鱼类利用dna技术。”欧洲食品研究和技术,卷217,不。3、259 - 264年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. j·佩雷斯和大肠Garcia-Vazquez九鳕鱼物种的基因识别检测商业欺诈,“《食品保护,卷67,不。12日,第2796 - 2792页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. a·德斯t·加西亚·e·卡雷拉et al .,“唯一的识别(Solea Solea)和格陵兰大比目鱼(Reinherditus hippoglossoides)5 s rDNA PCR扩增的基因,”农业与食品化学杂志》上47卷,第1050 - 1046页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. a·德斯t·加西亚·e·卡雷拉et al .,”之间的遗传分化唯一(Solea Solea)和格陵兰大比目鱼(Reinhardtius hippoglossoides)PCR-RFLP 12 s rRNA基因片段的分析,“粮食和农业的科学杂志》上卷。80年,29-32,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. f . Bellagamba d . Velayutham m . c . Cozzi et al .,“细胞色素氧化酶序列为基础的研究商用Pangasius hypophthalmus在意大利,“意大利动物科学杂志》上,14卷,不。3、377 - 382年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. t·t·t·哈,n . t .部副惠普Nguyen y Guiguen,“物种识别使用DNA条码技术处理非洲的大砍刀在越南鲶鱼产品显示重要的不当,”土耳其的渔业和水产科学》期刊上18卷,第462 - 457页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. 诉Ferrito、诉Bertolino和a . m .搜集“白鱼COIBar-RFLP认证:向一个共同的战略快速识别的物种方便海鲜,“食品控制卷,70年,第137 - 130页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. s·j·波拉克,m . d . Kawalek d . m . Williams-Hill和r . s . Hellberg”评价DNA条码识别的方法煮鱼的种类产品,”食品控制卷,84年,第304 - 297页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. 周报,穆·m·d·Faraone f . Cellini周报,穆和大肠”改变DNA的质量和肉理化性质在微波加热的牛冈上肌肌肉,”粮食和农业的科学杂志》上卷,94年,第791 - 785页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. e .Şakalar m . f . Abasiyanik e . Bektik和a . Tayyrov”加热处理对DNA的影响量化肉的物种,”食品科学杂志,卷77,不。9日,N40-N44, 2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. m·罗哈斯冈萨雷斯,诉法et al .,“从鹌鹑肉(身份验证Coturnix Coturnix),野鸡(Phasianus colchicus)、帕特里奇(Alectorisspp),和珍珠鸡(Numida 30种)使用聚合酶链反应针对特定从12 s rRNA线粒体基因序列,”食品控制,20卷,第902 - 896页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. n .石田m . Sakurada h . Kusunoki, y上野,”发展的同时识别方法13种动物使用两个多路实时PCR检测和融化曲线分析,“法医学,30卷,第71 - 64页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. c . Tognoli m . Saroglia g . Terova r . Gornati和g . Bernardini”识别鱼类的5 s rRNA基因扩增,”食品化学卷,129年,第1864 - 1860页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. z Hubalkova, p .克莱里克,j . Kasalova, e . Rencova”识别鱼肉类的鳕科的物种基因组DNA聚合酶链反应(PCR),“农业与食品化学杂志》上,56个卷,第3459 - 3454页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. f . a . m . Volckaert b . Hellemans和l . Pouyaud”九个多态性微卫星标记在SE亚洲鲶鱼Pangasius hypophthalmus和claria batrachus”,动物遗传学,30卷,第384 - 383页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. a . Namikoshi y高岛,j .井口t . Yanagimoto和m .山下式”物种识别阿拉斯加鳕鱼,Gadusspp。,Micromesistius种虫害鳕鱼卵产品使用pcr方法,”渔业科学卷,77年,第678 - 671页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. s . Lahiff m . Glennon l . O ' brien et al .,“种特异的PCR鉴定的绵羊的,猪和鸡物种肉骨粉(清楚),“Mollecular和细胞探针15卷,27-35,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. f . nautica c .沙漠,m . f . Cochet et al .,“土耳其检测、鸭和珍珠鸡鸡蛋鸡蛋产品种特异的PCR,”食品分析方法,卷2,不。3、231 - 238年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. 孟侯,x, l . Zhang j .郭s . Li和h·金,“发展一个敏感的和特定的多重PCR方法同时检测鸡,鸭和鹅的DNA在肉类产品,”肉类科学卷,101年,第94 - 90页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. s . Haunshi r . Basumatary p s Girish s Doley r·k·Bardoloi和a·库马尔”鉴定鸡、鸭、鸽子和猪肉导致的线粒体起源的标志,”肉类科学卷,83年,第459 - 454页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. f·佩雷拉、j . Carneiro和a·阿莫林”识别物种的dna技术:目前的进展和挑战,”最近的DNA和基因序列专利,2卷,第200 - 187页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. n z Ballin、f . k . Vogensen和a . h . Karlsson”的重复序列PCR扩增可能量化方法相对物种,”肉类科学卷,90年,第443 - 438页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. e . l . c . Verkaar i . j . Nijman k . Boutaga和j·a . Lenstra“牛物种的分化PCR-RFLP牛肉的线粒体和卫星DNA,”肉类科学,60卷,第369 - 365页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. e·p·坎宁安和c . m . Meghen“生物识别系统:遗传标记,”Revue科学化等技术,20卷,不。2、491 - 499年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. c . Pampoulie t·d·Jorundsdottir a . Steinarsson g . Petursdottir m . O。Stefansson, a . k . Danielsdottir“人工养殖和野生菌株的遗传比较实验冰岛大西洋鳕鱼数量(Gadus morhual .),“水产养殖卷,261年,第564 - 556页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. Ø。安徒生,h·约翰森·m·c·德·罗莎et al .,“历史进化和适应意义的迁徙和固定群体的多态锅我大西洋鳕鱼(Gadus morhua),“海洋基因组学卷。22日,45 - 2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. g . Dahle t·约翰森j . i Westgaard a . Aglen和k·a·格洛弗,”基因mixed-stock渔业管理“实时”:最大的情况下剩余的操作在大西洋鳕鱼渔业在2007 - 2017年,“渔业研究卷,205年,第85 - 77页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. 诉Babak z Piskata,大肠Servusova, m . Nesvadbova和g . Borilova”DNA远离加工食品和饲料的质量通过不同的提取过程,”分子,24卷,不。6日,第1188条,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. 公元平托,诉的强项,m . c . Guastadisegni c·马蒂诺f p . Schena和g . Tantillo”食品分析DNA提取方法的比较,“食品控制,18卷,不。1,第80 - 76页,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. c . Camma m . Di Domenico,摩纳哥,“快速的开发和验证实时PCR检测生或熟的肉混合物种鉴定,“食品控制,23卷,不。2、400 - 404年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. f . Teletchea c Maudet, c . Hanni”食品和法医分子识别:更新和挑战,”生物技术的发展趋势,23卷,不。7,359 - 366年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. i g·威尔逊,“抑制核酸扩增的便利化,”应用与环境微生物学,卷63,不。10日,3741 - 3751年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. j .赵张t、y刘et al .,“定性和定量评估基于DNA的DNA质量的冷冻牛肉产量、凝胶电泳和PCR扩增及其牛肉质量的相关性,”食品化学卷,260年,第165 - 160页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. 山本a . Adjei s, a . Kulkarni“核酸和/或他们的组件:一个可能的免疫功能的作用,“营养科学和维生素学杂志》上第41卷。。1,硕士论文,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. d Straube和a . Juen”存储和运输组织样本的DNA分析:一个案例研究在蚯蚓,“欧洲的土壤生物学》杂志上十三至十八卷,57页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. m .周报,穆”DNA的质量和完整性核和线粒体序列从牛肉肉受到不同的烹饪方法,”食品技术和生物技术卷,49号4、523 - 528年,2011页。视图:谷歌学术搜索
55. n . s . Karabasanavar s p·辛格·d·库马尔,和s . n . Shebannavar“猪肉掺假的检测线粒体D-loop的特定PCR分析,“食品化学卷,145年,第534 - 530页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. c·j·奇泽姆科尼尔斯,c·布斯,w··罗莉和h . Hird,”马和驴使用实时PCR的检测,“肉类科学,卷70,不。4、727 - 732年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. t . Matsunaga k . Chikuni r .田边et al .,“用一种快速而简单的方法识别物种的肉及肉类产品通过PCR分析,“肉类科学,51卷,不。2、143 - 148年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. 亚斯兰a、o . i Ilhak和m . Calicioglu”的烹饪方法对识别的影响热牛肉加工利用聚合酶链反应(PCR)技术,”肉类科学,卷72,不。2、326 - 330年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. O。阿斯兰,r·m·哈米尔·t·斯威尼,w·里尔登,和a . m .马伦”完整的核基因组脱氧核糖核酸在煮肉:食品可追溯性的影响,“动物科学杂志》,卷87,不。1,57 - 61,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. r··长吉h . Farahmand m . Soltani f . Darvish)和a . Elmdoost”识别一些鱼类加工产品在伊朗DNA条码技术,”农业科学和技术杂志》上15卷,第980 - 973页,2013年。视图:谷歌学术搜索
61. k·卡柏,大肠Eschbach、m·费舍尔和j . Fritsche”设计一个用户友好的和快速的DNA微阵列实验的验证十重要的食用鱼类,”食品化学第125884条,卷。311年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. z Hubalkova, p .克莱里克,j . Kasalova, e . Renčova”应用dna技术的种内的分化鳕鱼鱼,”Acta Veterinaria布尔诺,卷78,不。4、673 - 678年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. h·克里斯琴森:弗尔涅,b . Hellemans和f . a . m . Volckaert“海鲜替代和不当在布鲁塞尔的餐厅和食堂。”食品控制卷,85年,第75 - 66页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2021 Anita Spychaj et al。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。