文摘
乙胺丁醇(EMB)作为药物治疗方案的一部分用于治疗肺结核(TB)。磁化率的结核分枝杆菌复杂(MTBC)隔离可以看出EMB DNA测序检测突变embB基因与电阻有关。美国公共卫生实验室(PHL)主要使用以药敏试验(DST)方法来确定EMB阻力。疾病控制和预防中心(CDC)为耐药的分子检测提供了一个服务(MDDR) DNA测序和并发以DST使用琼脂比例。PHL和疾病预防控制中心211年的测试结果比较MTBC样品提交给疾控中心从2009年9月到2011年2月。以DST PHL结果之间的一致性和美国疾控中心是88.2%。以比较的39个样本,embB突变与EMB电阻检测,显示更高比例的EMB阻力由美国疾病控制与预防中心(84.6%)比PHL(59.0%)是重要的(值= 0.002)。所有以测试结果之间的不整合来自PHL和疾控中心也显著(值= 0.003)。最不整合与使用BACTEC虚假的易感性™MGIT™960 (MGIT)以发展系统。我们的分析支持合并以发展和分子的结果通知解释潜在的EMB阻力。
1。介绍
2014年,9412年新的结核病病例报道在美国(1]。在这些病例中,有96例(1.3%)为耐多药耐药(MDR),定义为至少耐利福平(RMP)和异烟肼(INH)。可靠的药敏测试(DST)的隔离结核分枝杆菌复杂(MTBC)是必不可少的选择有效的治疗方案,阻断疾病的传播和预防耐药结核病的进一步发展。
(EMB)结合异烟肼、乙胺丁醇RMP,吡嗪酰胺(PZA)公开作为一线药物疗法用于药物敏感结核病患者。EMB通常包括,结合二线药物,作为治疗方案的一部分,为耐多药结核病易感(隔离时2- - - - - -4]。EMB抑菌抗菌,干扰细胞代谢的抑制arabinosyltransferase所需的阿拉伯半乳聚糖生物合成细胞壁(4,5]。突变的embCAB编码分枝杆菌arabinosyltransferase操纵子,与以抵抗EMB显著相关(6]。这些突变也经常报道embB密码子306或embB密码子4067- - - - - -9]。
产生的突变被发现在这些位置以外的其他密码子在密码子296年和497年之间EMB-resistant隔离(10]。然而,这些密码子突变的报道,比如Glu378Ala,可能沿袭标记与阻力[无关11- - - - - -14]。因此,DNA测序不能单独依靠检测EMB电阻由于突变的存在不是因为其他机制提供以抵抗EMB阻力可能存在的13,14]。测试方法之间的不和谐的结果以DST EMB阻力已经有据可查的,与困难建立等效临界浓度(CC) [7,15- - - - - -19]。此外,等位基因交换实验已经证明了一些embB306突变,如Met306Ile,可能导致只有适度提高最低抑制浓度(MIC)高于CC和MTBC隔离这些突变可能错误地报道敏感(8,20.]。EMB-susceptible和EMB-resistant隔离Met306Ile突变是在相同的研究报告琼脂用于以DST比例(13]。
疾病控制和预防中心(CDC)提供了分子检测耐药(MDDR)通过DNA测序与结核病耐药性相关的位点,包括EMB阻力和并发以DST。分子测试可以执行与MTBC隔离或沉积物MTBC阳性的临床标本核酸扩增检测(NAAT) [13]。这个服务可以根据公共卫生实验室要求(PHL)定义的样品会议提交标准21]。PHL提交MTBC样品测试用分子收到一个临时报告的结果和以DST的最终报告完成。最终报告包含解释评论基于分子和以发展的结果。疾病预防控制中心MDDR服务一直在前面描述的22,23]。
以前,我们研究了分子之间的一致性和以DST MTBC RIF和异烟肼耐药性检测的样品提交给疾控中心的MDDR服务(23]。在这项研究中,我们比较EMB敏感性结果MDDR服务,分子和以发展,以发展成果由PHL提供。此外,我们分析了测试结果和方法不一致的可能原因。
2。材料和方法
2.1。MTBC样品和以DST PHL结果的集合
EMB测试结果分析本研究MTBC隔离和NAAT-positive沉积物从提交的结核病患者PHL CDC的MDDR服务从2009年9月到2011年2月。以DST结果和测试方法用于这些样本在PHL可以从先前描述的研究中,使用一个安全的在线调查工具收集数据从PHL23,24]。疾病预防控制中心确定之前的研究不是人类受试者的研究;因此,它不需要机构审查委员会审查。以DST结果EMB成功收集了211 MTBC PHL提交的样本期间学习时间表。收集的所有数据被批准的行政管理和预算局(OMB)通用的间隙包(信息集合推进状态、部落、当地和领土政府机构系统性能、容量、和项目交付;OMB数量0920 - 0879)的要求下减少文书工作的行为。
2.2。以DST和DNA测序
以发展为EMB进行DST CDC使用间接琼脂比例方法使用一个临界浓度(CC) 5μ补充麦德7 g / mL h10琼脂(25]。PHL执行以DST 211 MTBC样品提交给疾控中心MDDR使用BACTEC MGIT 960 (MGIT)系统(Becton Dickinson和公司)(136个样本),BACTEC 460 (Becton Dickinson和公司)(45)样品,BACTEC 460和琼脂比例(18)样品,琼脂比例(2)样品,VersaTrek™(长途跋涉诊断系统)(1样本)或隔离指的另一个实验室样品(9)DST方法是未知的。为检测突变的DNA测序embB轨迹与EMB耐药性进行如前所述[13]。
2.3。数据分析
以从PHL DST数据分析使用PASW统计(版本18;IBM SPSS软件)。在疾病预防控制中心之间的一致性测试(包括DNA测序和以DST)和以测试由PHL百分比是由交叉表和计算结果的协议。样本比例比较使用McNemar检验法测试没有连续性校正的显著性水平值= 0.05。
3所示。结果与讨论
3.1。比较以DST由PHL DNA测序和以DST由疾病预防控制中心
EMB阻力测定的结果的交叉表以DST PHL和DNA测序和以DST由疾控中心如表所示1。211年MTBC提交的样品与相应的以DST结果EMB PHL,以DST的结果是不能用于比较来自30个样本由疾病预防控制中心进行测试。缺乏以DST的结果是由于污染(14个样本)或未能成长(16样本)。DNA测序并不是表现在2009年美国疾病控制与预防中心12样品提交之前,分子检测EMB抵抗了。疾控中心检测到14 MTBC样本包含Glu378Ala或Leu355Leu中性多态性确认由疾控中心EMB-susceptible琼脂比例。PHL以EMB结果和DNA测序,以疾病预防控制中心170年可供比较的结果中列出的211份MTBC样本表1。之间有协议以DST PHL和疾控中心150个样本结果导致88.2%的总体协议。
是否一个交叉表embB突变与EMB电阻检测使用DNA测序MTBC样品由疾控中心与耐药以DST PHL和疾控中心如表所示2。DNA测序确定39样品(22.9%)的170份MTBC样本以结果可用PHL和疾控中心包含一个embB突变与电阻有关。当一个embB突变与电阻检测,一个更高的比例(84.6%)的这些样本被发现使用以耐DST在疾控中心琼脂比例与以DST由PHL(59.0%),和这种差异显著(值= 0.002)。之间没有显著差异在以DST结果CDC和PHL MTBC样品没有检测到突变(值= 0.317)。然而,对于所有170 MTBC样品检查,有显著差异(值= 0.003)之间以确定EMB阻力由PHL,由疾控中心。
3.2。不整合以DST由PHL和疾病预防控制中心之间
PHL和疾控中心包括DST方法之间不和谐的结果列在表中3。有20个之间不和谐的测试结果以DST由PHL和琼脂比例由疾控中心16(80%)样品被发现是容易EMB PHL和抵抗EMB疾控中心。以DST方法最常用的PHL其中16个样本是MGIT样本(11)。10的16个样品,测试由疾病预防控制中心检测embB突变与EMB阻力位密码子306(6个样品),密码子406(3样本),或密码子296(1示例)。这个类别中的其他六个不和谐的结果,由疾控中心没有检测到一个DNA测序embB突变。然而,据报道,MTBC隔离可能EMB-resistant使用琼脂比例没有分子的检测embB突变(13,26]。三MTBC样本与不和谐的结果,PHL报告EMB抵抗分子测试时使用MGIT疾控中心没有检测到一个embB突变,这些样本容易使用琼脂比例。PHL也报道EMB阻力为一个示例使用MGIT分子检测中心检测到突变无关embB阻力位密码子378 (Glu378Ala),发现它被琼脂EMB-susceptible比例。
结合分子和以疾病预防控制中心的检测结果显示,大多数不调和PHL以DST是由于错误的易感性。虚假的易感性EMB的原因是多方面的。一些EMB-resistant菌株生长在固体介质与液体媒体(如媒体使用MGIT系统)(16,18]。因此,尽管推荐CC确定主要阻力EMB MGIT和琼脂比例都是5μg / mL,这些测试浓度可能不是相当于当使用这些测试方法的比较结果27]。孤立的特定突变可能影响麦克风,CC周围的变化是由于麦克风靠近CC,从而影响假MGIT易感性。Heteroresistance与后期增长可能出现耐药突变体在固体介质的存在EMB未能检测到这些突变体的液态MGIT系统由于缺乏增长(17]。
4所示。结论
大多数实验室依赖单一以DST等方法完善MGIT系统。虽然MGIT系统被发现为以可靠的DST MTBC隔离公开对大多数药物,本研究和先前的报道发现不一致的结果,该方法仅用于测定EMB电阻(16,18,19,28]。通过提供两种分子检测和以DST琼脂比例,CDC的MDDR发现EMB-resistant MTBC样本数量显著高于PHL雇佣只以发展方法。我们的结果加强分子测试结合的重要性的可靠方法以DST EMB-resistant结核病的准确检测。
信息披露
这份报告的调查结果和结论的作者,不一定代表美国疾病控制和预防中心的观点或有毒物质与疾病登记处联合机构。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
作者欣然承认公共卫生实验室的数据贡献。