通过抑制异丙酚变弱小肠缺血再灌注损伤NADPH氧化酶介导肥大细胞激活

文摘

氧化应激和肥大细胞(MC)脱粒过程参与小肠缺血再灌注(IIR)损伤和氧化应激诱发MC脱粒。的麻醉剂异丙酚的抗氧化性质,可以减弱IIR受伤。我们假定异丙酚能预防IIR损伤通过抑制氧化应激随后从NADPH氧化酶介导MC激活。培养RBL-2H3细胞(NAC)或使用抗氧化剂防治异丙酚和过氧化氢(H₂O₂)无刺激、MC degranulator化合物48/80 (CP)。H₂O₂显著增加细胞脱颗粒,由南京废除或异丙酚。MC脱粒的CP进一步加剧了H₂O₂小肠上皮细胞诱导细胞脱粒,IEC-6细胞,刺激类胰蛋白酶。老鼠受到IIR增加细胞损伤和海拔的NADPH氧化酶亚基p和全科医生蛋白表达,增加的具体产品15 -脂质过氧化作用-Isoprostane和白细胞介素- 6,减少超氧化物歧化酶活性类胰蛋白酶和随之而来的增强β己糖胺酶。MC脱粒的CP进一步加剧了IIR受伤。和所有这些变化被南汽减毒或异丙酚预处理,也废除CP-mediated IIR伤害的恶化。得出预处理抑制异丙酚授予IIR损伤防护的NADPH氧化酶介导MC激活。

1。介绍

小肠缺血再灌注损伤(IIR)已经出现在许多病理生理的设置,包括感染性和出血性休克诱导灌注不足(1),以及急性肠系膜缺血(2),小肠移植或肝切除(3]。信息检索与高死亡率相关仍然是一个关键的问题(4]。

在信息检索,氧化应激增加是由于生产活性氧(ROS),这是一种IIR损伤的主要机制(5]。众多研究表明,活性氧产量的增加导致overactivation prooxidant NADPH氧化酶,它大量存在于小肠组织(6),在调解中扮演关键角色组织损伤相关的一系列炎性疾病(7),包括缺血再灌注损伤(8,9]。NADPH氧化酶的抑制(NAC)的防治作用,氧自由基的清道夫,可以大大减弱心肌缺血再灌注损伤(10,11]。然而,活性氧的生产管理机制,具体地说,从overactivation NADPH氧化酶,在信息检索还有待探索。

NADPH氧化酶的活化可导致肥大细胞(MC,细胞广泛存在在小肠)脱粒/激活(12),无论MCs激活已经证明是一个关键调解人IIR和导致许多疾病的发病机制的结果增加了各种各样的介质包括组胺释放,类胰蛋白酶和炎性细胞因子如白细胞介素- 6 (il - 6)13),抑制MCs从脱粒可以减轻IIR受伤14,15]。我们曾发现活性氧产量显著增加后信息检索与增强MC脱粒[平行16),但它是未知之间是否存在因果关系ROS增加生产和MC脱粒IIR的设置在活的有机体内。这些发现(6,17一起)报告显示,MC可以ROS-dependent通路被激活(18),在体外(18),在活的有机体内(16),促使我们假定在IIR ROS增加生产启动和/或加剧IIR损伤主要通过激活MC, NADPH氧化酶激活期间增加IIR可能是活性氧的主要来源在丁基橡胶生产过剩。

异丙酚静脉麻醉与抗氧化性质,我们广泛应用于重症监护室和操作剧院,已被证明存在剂量依赖的相关性减弱心肌缺血再灌注损伤的患者(19]。异丙酚也已被证明能够抑制肥大细胞胞外分泌方式存在剂量依赖的相关性在体外(20.]。一项最近的研究表明,异丙酚变弱脑外伤引起的脑损伤通过抑制NADPH氧化酶激活(21]。因此,我们推测,抑制ROS介导MC激活后衰减的肠道NADPH氧化酶激活可能代表一个主要机制异丙酚变弱IIR受伤。这个假设是在肠系膜缺血再灌注的大鼠模型进行测试在活的有机体内和一只老鼠细胞的肥大细胞暴露于ROS在体外。

2。材料和方法

2.1。细胞培养

大鼠肥大细胞线(RBL-2H3)购买从中国科学院的细胞库(上海,中国)在鹰的最低基本培养基培养,含10%胎牛血清,补充与100 U /毫升青霉素和100年μg / mL链霉素在37°C在湿润的气氛中5%的有限公司₂描述(22]。大鼠小肠上皮细胞株(IEC-6)也从细胞库获得中国科学院(中国上海)。这个细胞株培养RPMI 1640年中有10%胎牛血清在37°C公司5%₂孵化器。

2.2。测量细胞脱颗粒

脱粒RBL-2H3细胞是通过确定发布的活动来衡量的β己糖胺酶在文化上层清液和细胞溶解产物(23]。RBL-2H3细胞与不同浓度的NAC(孵化24)或异丙酚(20.]12 h;细胞被洗后用1×PBS为3次,RBL-2H3细胞孵化24-well板(1×10⁶一夜之间细胞/)37°C。上述细胞被洗1×PBS然后孵化与不同浓度的脂多糖(LPS) [25]或H₂O₂(26)或复合48/80 (271 h - 4 h。来衡量的β己糖胺酶活动释放的细胞,培养媒体则转移到离心机在4°C。上层清液(25μL)和50μL p-NAG(10毫米)在0.1 M柠檬酸钠缓冲(pH值4.5)成一个96孔板和孵化1 h在37°C。反应被终止的挡车器(0.1米碳酸钠缓冲区,pH值10.0)。的β己糖胺酶活动是由测量吸光度在波长405纳米的差异。

2.3。测量细胞的生存能力

IEC-6细胞被播种到96 -平底文化板块的密度5×10⁴细胞/好,孵化24 h。在暴露于类胰蛋白酶(0 - 1000 ng / mL) 12 h RPMI 1640培养基,细胞生存能力是衡量改良MTT测定[描述28]。试验检测到的减少四唑甲瓒产品。细胞的生存能力是评估使用以下公式。存活率(%)= (- - - - - -)/ (- - - - - -)×100%。

2.4。评估细胞的细胞毒性

细胞毒性(细胞坏死)是评估通过测量乳酸脱氢酶(LDH)的释放。暴露后不同浓度的类胰蛋白酶(0 - 1000 ng / mL) 2 h的RPMI 1640培养基,细胞坏死被LDH-release试验评估使用商业套装(建成,中国)根据制造商的指示。

2.5。动物

女性Sprague-Dawley (SD)大鼠体重180 - 200克,从广东省动物中心购买(广州),分别被安置在wire-bottomed笼子里,被放置在无菌条件下照亮从8点到晚上8点(十二12 h光暗周期)在使用前一个星期。实验协议和设计批准的中山大学动物实验委员会和执行根据中山大学动物实验指南。

2.6。在活的有机体内鼠信息检索模型和治疗

所有的动物都禁食16 h(同时免费水被允许)手术前。老鼠分别注射防治(NAC, 0.5 g / kg,σ公司),异丙酚(50毫克/公斤,商业产品曾从阿斯利康),intralipid(50毫克/公斤,20%,乳状液从σ),或生理盐水(0.5毫升/ 100克),作为对照组,腹腔内连续3天的下午6点。南汽的剂量选择基于结果显示治疗大鼠与i.p NAC(500毫克公斤⁻¹每天9天)改善了肾血流动力学的变化引发了cisplatin-mediated肾毒性(29日]。异丙酚的剂量选择的基础上,发现异丙酚50毫克/公斤由于腹腔内提供镇静效应而不是麻醉效应(30.使用时),异丙酚在这个剂量减毒IIR损伤大鼠(31日]。在第四天,部分的老鼠被过量的麻醉剂水合氯醛,牺牲和肠粘膜得到刮进一步确定和肠道形态学变化进行评估。

2.7。实验小组

其他的老鼠分成以下组。(1)Sham-operated集团(假的)():老鼠使用生理盐水(10毫升/公斤,i.p。)受到相同的手术除了肠系膜上动脉(SMA)闭塞75分钟,是在麻醉期间实验和管理同样体积的生理盐水(1毫升/公斤,增长值)试剂溶剂控制。(2)唯一的IIR集团(IIR) ():老鼠使用生理盐水(10毫升/公斤,i.p。)受到小肠缺血,使SMA(75分钟),其次是再灌注生理盐水(2 h) +管理(1毫升/公斤,注射。)5分钟再灌注前立即。(3)IIR +复合48/80组(IIR + CP) ():老鼠使用生理盐水(10毫升/公斤,i.p。)受到小肠缺血,使SMA(75分钟),其次是再灌注(2 h) +复合管理48/80(0.75毫克/公斤,增长值)溶解在生理盐水(1毫升/公斤)再灌注前5分钟立即。(4)NAC + IIR集团(NAC +信息检索():老鼠使用NAC (0.5 g / kg, ip /天)溶解在生理盐水(10毫升/公斤)连续3天被阻塞接受小肠缺血SMA(75分钟),其次是再灌注生理盐水(2 h) +管理(1毫升/公斤,注射)。(5)南汽+ IIR +复合组(NAC + IIR + CP) (48/80):老鼠使用NAC (0.5 g / kg, i.p。)受到小肠缺血,使SMA(75分钟),其次是再灌注(2 h) +复合管理48/80(0.75毫克/公斤,注射)。(6)异丙酚+ IIR组(专业+信息检索():老鼠用异丙酚预处理(50毫克/公斤,ip /天)溶解在intralipid(10毫升/公斤)连续3天被阻塞接受小肠缺血SMA(75分钟),其次是再灌注生理盐水(2 h) +管理(1毫升/公斤,注射)。(7)异丙酚+ IIR +复合组(专业+ IIR + CP) (48/80):老鼠用异丙酚预处理(50毫克/公斤,i.p。)受到小肠缺血,使SMA(75分钟),其次是再灌注(2 h) +复合管理48/80(0.75毫克/公斤,注射)。(8)Intralipid + IIR集团(唇+信息检索():老鼠用intralipid预处理(50毫克/公斤,i.p。)(10毫升/公斤)的体积受到小肠缺血,使SMA(75分钟),其次是再灌注生理盐水(2 h) +管理(1毫升/公斤,注射)。(9)Intralipid + IIR +复合组(唇+ IIR + CP) (48/80)。老鼠用intralipid预处理(50毫克/公斤,i.p。)受到小肠缺血,使SMA(75分钟),其次是再灌注(2 h) +复合管理48/80(0.75毫克/公斤,注射)。的注意,对老鼠进行了信息检索的低存活率CP的存在,实验进行共有12个动物IIR + CP, IIR + CP + intralipid组。在所有的实验小组,老鼠被腹腔内注射10%水合氯醛麻醉后(3.5毫升/公斤)禁食16 h。美国的48/80(σ;0.75毫克/公斤)或同样体积的生理盐水静脉注射通过尾静脉注射在再灌注前5分钟。代理的剂量调整符合我们之前的研究(15]。在手术期间,所有大鼠体温保持在38°C使用加热垫。和10毫升/公斤37°C生理盐水注射皮下注射,以避免脱水后腹部已经关闭。

2.8。组肠粘膜

在完成上述治疗方法和实验中,老鼠被麻醉,然后安乐死。整个小肠被仔细了,一段1.0厘米肠(位于10厘米从末端回肠)被切断和固定在10%甲醛,然后嵌入石蜡部分。剩下的小肠是用0°C生理盐水彻底清洗,然后打开纵向公开肠道上皮细胞,冲洗后完全0°C生理盐水和用吸水纸擦干。粘膜层被温柔的刮收获一个板载玻片的上皮在冰上,然后存储在−进一步测量的70°C。

2.9。肠道组织学

五μ米厚的部分是准备从石蜡包埋肠组织;的段小肠hematoxylin-eosin染成了红色。和肠粘膜损害的评估由两个组织学家盲实验根据赵的标准(32]:0,年级正常粘膜;牙龈Gruenhagen 1级,发展的空间的绒毛;二年级、扩展与温和的上皮提升的空间;三年级,大量上皮解除一些裸露的绒毛;4级,裸露的绒毛毛细血管暴露;五年级,固有层的瓦解,溃疡和出血。

2.10。检测15-F_{2 t}在小肠粘膜-Isoprostane内容

小肠粘膜均质生理盐水。的组织内容免费15 --isoprostane指数在活的有机体内氧化压力诱导脂质过氧化反应,测量使用商业免疫测定试剂盒(开曼化工、安阿伯、MI)我们描述33]。

2.11。测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢含量在小肠粘膜

小肠粘膜与生理盐水制成匀浆,冻结在−5分钟20°C,和离心机15分钟在4000 r / min。上层清液转移到新鲜管SOD活性和过氧化氢含量的评价。SOD活性和过氧化氢SOD、过氧化氢检测试剂盒进行评估的内容根据制造商的指示(南京建成生物工程有限公司,中国)。提出了数据标准化组织的重量。

2.12。测量β己糖胺酶水平血清

β己糖胺酶水平在血清中决定使用修改先前所描述的方法(34]。简单地说,50μL血清与50孵化μ1毫米p-nitrophenyl-N-acetyl - Lβ-D-glucosaminide溶解在0.1 M柠檬酸缓冲(5)pH值在96孔板在37°C 1 h。反应是与200年终止了μL / 0.1的碳酸盐缓冲(pH值10.5)。405纳米的吸光度测量使用标。

2.13。西方墨点法

肠道粘膜样本均质与裂解缓冲30秒与液氮研钵和研杵。匀浆在13000转离心10分钟4°C和上层清液收集样品的蛋白质来源。蛋白质免疫印迹分析处理标准方法描述(10]。鼠单克隆anti-tryptase抗体,鼠单克隆anti-gp和anti-p抗体,鼠单克隆anit-P-selectin anti-ICAM-1抗体,α微管蛋白抗体是来自圣克鲁斯(圣克鲁斯、钙、美国)。二次抗体结合辣根过氧化物酶在稀释1:2000(圣克鲁斯,美国)。免疫印迹孵化了一个增强化学发光检测系统(凯基生物生物技术,中国)和微分析使用一个软件数量。

2.14。测定il - 6在小肠粘膜的生产酶免疫分析法

肠粘膜组织与冰冷的生理盐水制成匀浆和旋转在4000 r / min 15分钟。上层清液被转移到新的管检测il - 6的内容。短暂,肠道蛋白质是由BCA测量分析吉生物科技公司提供的工具包,南京,中国,和蛋白质内容表示为g / L。il - 6的水平测量使用商业ELISA试剂盒制造商的指令(研发系统公司、美国)。吸光度是阅读450海里的生物运动学标模型EL340 (Biotek仪器,美国),和结果表示为ng / L;最后的il - 6水平小肠被计算为ng / g蛋白。

2.15。测定髓过氧化酶(MPO)活动在小肠粘膜

髓过氧化酶(MPO)活动决心O-dianisidine方法(35),使用MPO检测设备(南京建成生物工程研究所),我们描述36]。MPO活性被定义为酶降解的数量1μ过氧化氢的摩尔每分钟在37°C和表达单位每克的重量湿组织。

2.16。统计分析

数据(除了存活率)表示为±SEM。生化检测,都是在重复执行。方差分析是使用Graphpad棱镜执行软件。单向方差分析是用于多个比较,其次是Bonferroni的学生以及对未配对的价值观。存活率是表示为活体动物的比例,和曼特尔考克斯日志等级测试被用来确定组之间的差异。差异被认为是重要的时候值小于0.05。

3所示。结果

3.1。细胞氧化应激而不是LPS-Induced RBL-2H3脱粒NAC可以抵消和异丙酚预处理

细菌易位和氧化应激是两个小的性格特征信息检索(37),和我们以前的研究表明,肥大细胞(MC)脱粒可能会加剧损伤(14]。因此,在当前的研究中,我们最初试图探索细菌和氧化应激是否能诱导MC脱粒。如图1,暴露RBL-2H3不同浓度的有限合伙人1或4 h没有造成大的释放的变化β己糖胺酶活动与对照组相比(图1(一))而MC激活化合物48/80显著增加释放β己糖胺酶活动与对照组相比(图1 (b))。这一结果表明,有限合伙人本身没有影响MC脱粒至少在这个实验设置。然而,治疗RBL-2H3细胞H₂O₂剂量依赖性增加的活动释放β己糖胺酶(图1 (c))。准确度和南汽,氧自由基的清道夫,废除了H₂O₂介导海拔的释放β己糖胺酶活动(图1 (d))。同样,与异丙酚预处理,但不是intralipid(溶剂异丙酚),废除了增强的释放β己糖胺酶活动引起的H₂O₂(图1 (e)),这表明氧化应激导致MC脱粒和异丙酚抑制MC脱粒通过其抗氧化性质。

3.2。类胰蛋白酶导致小肠上皮细胞损伤

释放类胰蛋白酶,独特的中介MC脱粒[38发挥了至关重要的作用,IIR介导急性肺损伤在活的有机体内(15]。因此,我们试图定义类胰蛋白酶的直接作用在小肠上皮细胞损伤在体外。小肠上皮细胞行IEC-6受雇和暴露于不同浓度的类胰蛋白酶。结果表明,类胰蛋白酶可能直接导致剂量依赖性的方式IEC-6损伤表现为大幅增加LDH活动和伴随的减少细胞生存能力与对照组相比(数字1 (f)和1 (g))。

3.3。南汽、异丙酚和Intralipid方法并不影响小肠结构检索

首先,我们试图评估如果老鼠的预处理与南汽,异丙酚,或者intralipid可能造成严重的肠道损伤。在使用的剂量,南汽和异丙酚或intralipid造成任何挑战的小鼠小肠结构相比,与正常生理盐水(NS)。如图2,所有肠道正常的层组和组间没有显著差异的损伤评分(图2 (d))。

3.4。南汽和异丙酚但不是Intralipid预处理改变肠道IIR之前氧化剂和抗氧化剂的水平

南汽和异丙酚是众所周知的抗氧化性质(10,39]。如图3、南汽和异丙酚类似的减毒氧化剂水平显著降低15 -做了演示-isoprostane(图3(一个)(图)内容和增加SOD活动3 (b))在小肠粘膜与NS治疗组。此外,南汽和异丙酚预处理导致蛋白表达显著减少gp和pNADPH酶的重要组成部分,在小肠粘膜与NS治疗组相比,在信息检索(数字3 (c)- - - - - -3 (e))。相比之下,intralipid NS治疗组显示比较结果。数据表明,异丙酚的剂量使用,赋予类似NAC的抗氧化效果。

3.5。南汽、异丙酚和预处理Intralipid IIR之前没有激活肥大细胞

Trypatse和β己糖胺酶的特定标记肥大细胞脱粒的评估40]。如数据所示3 (f)和3 (g)、南汽、异丙酚或独自intralipid对肥大细胞脱颗粒没有明显影响。没有明显的差异类胰蛋白酶蛋白质在小肠粘膜和表达β己糖胺酶水平在所有信息检索前进行预处理组。从目前的研究结果表明,南汽和异丙酚预处理能显著改善超氧化物产品在不影响肥大细胞在正常条件下和小肠形态。

3.6。南汽和减少异丙酚改善大鼠的存活率挑战通过抑制肥大细胞激活信息检索

接下来,我们试图调查南汽的影响和异丙酚在打击IIR和抑制肥大细胞在检索的过程中受伤。如图4(一),激活肥大细胞的化合物48/80导致显著降低2 h后存活率夹释放与唯一的IIR组相比。相比之下,南汽和异丙酚预处理显示类似的有前途的好处在减少肥大细胞脱颗粒介导损伤2 h再灌注期间证明增加缺血后(图2 h存活率100%4 (b))。Intralipid没有减弱复合48/80介导缺血后存活率的恶化老鼠受到信息检索(图4 (c))。这些数据表明,氧化应激是一个主要的机制肥大细胞脱粒加剧了IIR受伤。

3.7。南汽和异丙酚减毒老鼠的小肠损伤进行IIR通过抑制肥大细胞激活

再灌注后2小时时,小肠进行评估的部分染色;IIR诱导严重损害小肠。图中所描绘的一样4 (d)和4 (e)中,观察到了多个侵蚀和出血IIR集团,而化合物48/80进一步加剧了IIR损伤表现为多个侵蚀和流血和炎性细胞次削减的IIR + CP组,而绒毛和腺是正常的,没有炎症细胞浸润在粘膜上皮细胞层观察到Sham-operated组。南汽和异丙酚同样的伤害显著降低小肠粘膜绒毛,只有轻微的水肿和发现了一些坏死的上皮炎症细胞的浸润在粘膜上皮细胞层。此外,南汽和异丙酚预处理阻止化合物48/80诱导恶化在再灌注后2小时时小肠形态学变化。相比之下,预处理intralipid不能减弱IIR和化合物48/80诱导损伤。与形态学变化一致,赵的分数明显增加在信息检索组与Sham-operated相比组肥大细胞治疗degranulator化合物48/80后缺血导致赵的进一步增加分数。南汽和异丙酚同样大幅降低了赵的成绩,大大限制了复合48/80(引起的变化,南汽+ IIR + CP或异丙酚+ IIR + CP和IIR + CP组)。值得注意的是,没有赵的分数差异IIR和intralipid预处理组。

3.8。南汽和异丙酚降低氧化应激在大鼠小肠进行IIR通过抑制肥大细胞激活

缺血再灌注损伤的特点是upregulation ROS (10]。与以前的结果一致(16),我们观察到75分钟缺血后再灌注2小时时导致15 -大幅增强-isoprostane内容在小肠粘膜和显著降低SOD活动与Sham-operated集团(数字5(一个)和5 (b))。与此同时,IIR在全科医生也造成了极大的增加和p蛋白表达与Sham-operated相比。此外,化合物48/80进一步加重氧化应激诱导的变化信息检索(IIR + CP和信息检索。毫不奇怪,异丙酚和南汽同样减毒IIR介导的氧化应激的差别是对这些15 -证明了这点-isoprostane内容和全科医生和p蛋白表达和upregulation SOD活动在异丙酚和NAC治疗组与组信息检索。此外,异丙酚预处理和南汽也限制了进一步增加化合物氧化应激诱导的48/80。正如所料,intralipid没有任何标记的抗氧化特性的氧化压力测量组IIR和组间可比性intralipid +信息检索。Intralipid没有保护作用对复合48/80 upregulation诱导的氧化应激。

3.9。南汽和异丙酚减毒炎症在大鼠小肠进行IIR通过抑制肥大细胞激活

白介素6 (il - 6)是一种炎性细胞因子,已经证明是涉及信息检索损伤的发病机理(41]。在目前的研究中,我们观察到组小肠粘膜IIR的il - 6水平相比明显增加,Sham-operated组(图5 (e))。此外,政府与化合物48/80进一步导致显著增强il - 6水平IIR + CP(组与集团信息检索。与异丙酚预处理和南汽不仅同样废除了il - 6水平增加,但也阻止产生il - 6水平的增强信息检索存在的MC激活化合物(图48/805 (e))。

3.10。南汽和异丙酚抑制中性粒细胞滚动在大鼠小肠进行IIR通过抑制肥大细胞激活

IIR受伤也是以中性粒细胞没收到炎症组织(42]。与以前的结果一致(42),我们还发现,IIR导致MPO活动大幅增加(图5 (f))和ICAM-1(图5 (g))和P-selectin(图5 (h))蛋白表达与Sham-operated组;此外,化合物48/80导致进一步增加MPO活动和P-selectin蛋白表达在IIR + CP组比组信息检索。政府与异丙酚和南汽显著抑制中性粒细胞浸润MPO活动和P-selectin差别/激活证明对这些基因的蛋白表达IIR所致。此外,异丙酚和南汽还阻止化合物48/80介导恶化的IIR诱导中性粒细胞浸润。

3.11。南汽和异丙酚降低肥大细胞脱颗粒在大鼠小肠进行信息检索

肥大细胞释放介质,导致恶化的IIR受伤,有很多因素可以引起肥大细胞脱粒在信息检索。类胰蛋白酶和β己糖胺酶从肥大细胞释放独特的标记和他们可以认为是肥大细胞脱颗粒释放增加。如图6再灌注后2小时时,我们发现,类胰蛋白酶蛋白质表达和β己糖胺酶水平大大增加在集团信息检索与Sham-operated组相比,复合48/80导致进一步的肥大细胞脱粒证明类胰蛋白酶蛋白质表达和戏剧性的增加β己糖胺酶水平组中观察到IIR + CP组相对于信息检索。值得注意的是,异丙酚和南汽同样抑制肥大细胞脱颗粒的表达下调蛋白质表达和类胰蛋白酶β己糖胺酶水平引发了IIR和化合物48/80。总的来说,从目前的研究结果表明,氧化应激介导的肥大细胞脱粒加剧IIR损伤和异丙酚通过其抗氧化特性抵御IIR稳定肥大细胞。

4所示。讨论

我们显示在当前的研究中,增加了活性氧在IIR加剧了IIR损伤主要通过激活肥大细胞可以作为缺血后15 -的同时增加-isoprostane类胰蛋白酶和海拔β己糖胺酶和增加肠道损伤分数,导致显著降低缺血后生存。此外,我们表明,活化肠道NADPH氧化酶是生产缺血后活性氧的主要来源。抗氧化南汽和异丙酚抑制缺血后肠道NADPH氧化酶激活通过减少gp和p蛋白质过度和减少ROS和随后的肥大细胞激活在活的有机体内和在体外异丙酚,这可能代表了主要的机制减弱IIR损伤和提高缺血后生存。

肥大细胞(MC),它包含了各种各样的介质,驻留在胃肠道,也被称为肠黏膜肥大细胞(IMMC)。尽管MC可以作为宿主防御,防止细菌入侵(43),激活增强MC可能导致各种疾病,包括信息检索的发展释放组胺,伤类胰蛋白酶,TNF -α,和其他因素。应该注意的是,MC是TNF -的主要来源α在束44]。拉莫斯等人报道,肥大细胞脱粒脓毒症的发展中起着重要作用通过调节细胞死亡,导致multiorgan功能障碍(45]。与先前的研究一致表明,稳定MC从脱粒的一个潜在的战略打击IIR损伤(14),我们目前的研究进一步表明,增加氧化应激在IIR扮演重要的角色在肥大细胞激活/脱粒证明类胰蛋白酶蛋白质表达和增强β己糖胺酶的水平,导致或加剧IIR损伤。这个概念进一步支持这一事实激活肥大细胞通过化合物进一步加剧了IIR损伤和48/80类胰蛋白酶直接受损的就是小肠上皮细胞生存能力和增强LDH活性降低在体外。数据从当前的研究进一步证明,肥大细胞激活中起着重要的作用加剧了IIR受伤,尽管执政肥大细胞活化机制在信息检索还有待探索。

肥大细胞可以通过几个不同的激活机制;除了IgE / Fcε,经典信号通路的激活,有越来越多的证据表明nonimmunological刺激如创伤和物理压力也有助于肥大细胞激活(46]。Yoshimaru和他的同事证明了银介导upregulation肥大细胞激活的NADPH氧化酶介导ROS生产(18]。另外,Collaco等人发现过氧化物生产有助于肥大细胞脱颗粒,抑制活性氧可以稳定肥大细胞在体外(12]。此外,我们之前的研究在老鼠模型的信息检索显示显著增加的肥大细胞活化与伴随的海拔ROS (16]。这些结果为我们提供了良好的基本原理推测存在肥大细胞激活和过氧化物生产之间的联系。我们当前的研究扩展先前的研究的结果(16),显示在信息检索中NADPH氧化酶是过表达的增加了氧化应激和MC激活,导致恶化的IIR受伤。此外,使用抗氧化剂防治(NAC)已被证明,防止心肌NADPH氧化酶超表达在糖尿病47,48和减弱心肌缺血再灌注损伤10),我们发现,在在活的有机体内信息检索模型,与南汽预处理大鼠不仅减毒NADPH氧化酶超表达和降低ROS生产,但与此同时减少MC激活,因此减毒IIR损伤和提高生存率。我们还发现,NAC逆转氧化应激介导的肥大细胞脱粒在体外。从目前的研究结果表明,氧化应激之后NADPH氧化酶超表达在信息检索中起关键作用肥大细胞激活,进而导致了有害的伤害。值得注意的是,在最近的研究中,肥大细胞激活通过CP诱导氧化应激表现为15 -增加-isoprostane和SOD降低,增加p4和gp9蛋白表达在IIR + CP组相比,IIR组(数字5(一个)- - - - - -5 (d))。这是符合来自Collaco等人的研究表明,亚硫酸钠激活肥大细胞脱粒,随后增加细胞间RBL-2H3细胞氧化应激(12]。这些表明,肥大细胞激活本身诱发氧化应激。

过度生产的ROS NADPH氧化酶通常被认为是参与炎症的发病机制组织(49),包括缺血性组织。有许多NADPH同系物在许多不同的器官,如Nox1 Nox2(也叫医生),Nox3-4 [50]。重要的是欣赏,Nox2主要是表达在上皮细胞内。除了活性氧清除剂,南京还能抑制NADPH氧化酶活动;我们之前的结果表明,预处理的糖尿病大鼠心脏缺血再灌注与南汽减毒伤下调NADPH子单元p和p表达,减少氧化应激(48]。井上等人证明了封锁的ROS生成NADPH氧化酶抑制可以限制肥大细胞脱粒[51]。关等人证明了细胞内NADPH浓度绒毛提示肠细胞明显迅速增加即使短期缺血(52]。在目前的研究中,我们还发现,全科医生的高度和p蛋白表达是信息检索的突出特点。此外,前提IIR-rats与抗氧化剂NAC或异丙酚不仅大大降低了gp和p蛋白表达,但在稳定肥大细胞方面也发挥了重要作用。

异丙酚是一种短效,静脉注射催眠剂。除了它的镇静/催眠性质,异丙酚显示在许多器官受到缺血再灌注损伤保护作用通过抑制氧化细胞损伤(53,54]。Hama-Tomioka等人最近报告说,异丙酚可以阻止过氧化物生产起源于NADPH氧化酶在体外(55]。尽管如前所述,一个50或100毫克/公斤的腹腔内注射异丙酚可能大大减弱IIR受伤在急性大鼠模型(31日),异丙酚是最常用的代理总在ICU(短期和中等长度的镇静56];因此,在当前的研究中,我们探讨异丙酚预处理对缺血后的连续性的三天,将调查死亡率除了观察它对IIR损伤的影响。据我们所知,我们的研究首次表明,异丙酚预处理在镇静剂用量显著抑制了NADPH氧化酶,减少氧化介导的超表达MC在信息检索或采取行动在体外和减少IIR受伤,随后增强大鼠缺血后死亡率。

IIR受伤也表现为无法控制炎症和中性粒细胞封存在炎症组织中。中性粒细胞迁移到有害的网站是由selectins和细胞间粘附分子(icam)激活内皮细胞(57]。康普顿等人回顾了从肥大细胞类胰蛋白酶释放脱粒可以吸引白细胞渗透和迁移到缺血组织(58]。和治疗大鼠肥大细胞稳定剂色甘酸钠可以大大减少肺部ICAM-1的表情pancreatitis-associated肺损伤和减少释放il - 6 (59]。这些发现指出,肥大细胞脱颗粒的重要性通过增加释放促炎介质诱导中性粒细胞迁移到炎症组织。在目前的研究中,我们发现,在信息检索中,肥大细胞脱粒导致更多的中性粒细胞浸润到小肠证明MPO活性显著增加和ICAM-1 P-selectin蛋白质表达,异丙酚和南汽同样封锁了IIR和阻止MC刺激引起的改变化合物48/80介导IIR伤害的恶化。我们发现异丙酚可以抑制肠道MC激活在信息检索和减少组织中性粒细胞浸润以及随后的系统性炎症可能有潜在的临床重要性鉴于IIR通常发生在病人接受心脏手术等主要手术与心肺旁路(60),是一个具有挑战性的和危及生命的临床问题。延误诊断和治疗IIR损伤导致的持续高住院死亡率(61年]。预防异丙酚可能是一个有前途的方法管理衰减术后肠道缺血和死亡率。

在总结中,我们已经表明,肥大细胞激活,通过增加释放介质,导致有害的信息检索,氧化应激引起的损伤在肥大细胞激活中起着核心作用。异丙酚,类似于抗氧化剂南汽,抑制ROS介导肥大细胞激活和减毒IIR受伤和增强缺血后死亡率。减少异丙酚介导的氧化应激和MC激活信息检索实现至少部分通过衰减IIR诱导NADPH氧化酶超表达,而底层机制值得进一步研究。肥大细胞激活导致和加剧了小肠缺血再灌注损伤。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

邢Xiaoliang甘,丹丹,光洁苏、回避,Chenfang罗,和迈克尔欧文进行实验和分析数据。Xiaoliang Gan写道。李Haobo Zhengyuan夏,路上吃黑的构思和设计研究和修订。Haobo李和路上吃喜分享资深作者。路上吃黑博士负责的工作作为一个整体,包括研究设计,对数据的访问,并决定提交和发布。Xiaoliang Gan和丹丹兴本研究同样起到了推波助澜的作用。

确认

本研究由国家自然科学基金支持的中国(国家自然科学基金委,30901408)和部分基础研究基金支持的中国中央大学(12 ykpy37)。

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