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氧化医学和细胞寿命
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氧化医学和细胞寿命/2013年/文章
特殊的问题

Janus的氧化应激信号在不同病理生理条件

把这个特殊的问题

研究文章|开放获取

体积 2013年 |文章的ID 186795年 | https://doi.org/10.1155/2013/186795

尼古拉诉Gorbunov,布拉德利·r·加里森丹尼斯·麦克丹尼尔分钟翟,Pei-Jyun辽、迪Nurmemet, Juliann g .西藏野驴, ”自适应间充质基质细胞的氧化还原反应和脂多糖刺激Inflammagen:重塑组织机制障碍在脓毒症”,氧化医学和细胞寿命, 卷。2013年, 文章的ID186795年, 16 页面, 2013年。 https://doi.org/10.1155/2013/186795

自适应间充质基质细胞的氧化还原反应和脂多糖刺激Inflammagen:重塑组织机制障碍在脓毒症

尼古拉诉Gorbunov,1 布拉德利·r·加里森,1 丹尼斯·p·麦克丹尼尔,2 分钟翟,1 Pei-Jyun廖,1 迪Nurmemet,1 和 Juliann g .西藏野驴1,3,4

1辐射损伤程序相结合,武装部队放射生物学研究所的贝塞斯达,MD 20889 - 1402,美国

2生物医学仪器中心的健康科学统一服务大学的贝塞斯达,MD 20814,美国

3放射生物学部门的健康科学统一服务大学的贝塞斯达,MD 20814,美国

4医学部门的健康科学统一服务大学的贝塞斯达,MD 20814,美国

学术编辑器:Sumitra Miriyala
收到了 2012年12月23日
修改后的 2013年3月08
接受 2013年3月11日
发表 2013年4月18日

文摘

急性细菌性炎症伴随过度释放细菌毒素和生产活性氧和氮物种(ROS和RNS),最终导致氧化还原的压力。这些因素可以引起损坏组件的组织障碍,包括伤害无处不在的间充质基质细胞(msc),从而加剧脓多器官功能障碍。机制采用msc为了生存这些压力条件仍然知之甚少,需要澄清。在这个报告中,我们证明了在体外治疗msc与脂多糖(LPS)诱导炎症反应,其中包括,但不限于,upregulation伊诺和RNS和活性氧的释放。这些事件引发了在msc的级联反应驾驶适应性改造和抵抗氧化应激“自找的”。因此,虽然msc显示高水平的持续产生,例如,HSP70和线粒体,Sirt3治疗LPS诱导的适应性反应,包括感应和核易位氧化还原反应的元素,比如NFkB TRX1, Ref1, Nrf2, FoxO3a HO1,激活自噬和线粒体重构。我们建议上述prosurvival通路激活在msc在体外可能是一种适应性反应的一部分受雇于感染性条件下基质细胞。

1。介绍

能够很好的证明,常见的创伤性损伤和并发症急性辐射综合症是细菌感染和脓毒症有关,被认为是高发病率和死亡率的主要因素的疾病1- - - - - -4]。脓毒症已经被定义为急性系统性炎症反应综合征,发生在感染和中毒(2]。因此,工作领域的脓毒性休克一直专注于炎症为主要致病机制。然而,各种各样的治疗方法,主要是抗炎,未能治愈人类败血症(例如,研究涉及il - 1α肿瘤坏死因子-β前列腺素,白细胞三烯等)(2,5]。由于抗炎策略的失败,医生社区面临的问题是否炎症或免疫抑制的驱动因素是死于败血症(2,5]。这个问题会导致搜索其他潜在的机制,可以在主机代谢物产生不利影响导致感染性中毒。其他主要的说明(重要)通路的影响氧化应激(氧化还原压力)急性细菌性炎症是解决这个问题的关键。事实上,累积活性氧和氮氧化影响的物种(ROS和RNS resp)中生成overreactive网状内皮组织的反应,内皮,和lymphoepithelial细胞细菌和细菌因素最终会改变组织屏障的完整性,维持免疫化学的自我平衡的组织与内部和外部环境的相互作用。

它已经确定,组织壁垒的基本成分之一是间充质基质细胞(msc) [6- - - - - -9]。虽然msc被认为是无所不在地集成到连接,血管、皮肤、肺、肠、和其他组织,它们在体内的主要来源是骨髓,释放msc在损伤和炎症(6- - - - - -9]。最近获得的数据从骨髓msc的研究表明,这些细胞显示抗菌和免疫调节特性,可以适度感染性中毒和改善生存在实验脓毒症(10- - - - - -14]。此外,对炎症刺激效应系统介导msc响应,如有限合伙人,由网络toll样受体和模式识别受体(14),例如,分子机器,还可以促进炎症氧化还原压力(15- - - - - -18]。结合这些现象,有许多收集的数据从不同的模型表明,自相矛盾的是,inflammagens直接和间接地也能导致细胞prosurvival redox-response元素和自适应机制介导的自噬(18- - - - - -27]。到目前为止,只有有限的信息自适应机制使得msc在炎症条件下(14,28]。在某种程度上,这可能是由于共谋在组织间叶细胞网络的体系结构。因此,在目前的工作,我们探索的主要文化老鼠骨髓msc的挑战与脂多糖(LPS) inflammagen。

我们假设(i)的挑战msc与有限合伙人可能导致氧化还原的压力;(2)msc的适应性反应的氧化还原压力伴随着upregulation redox-response thioredoxin-1等因素(Trx1) apurinic apyrimidinic核酸内切酶氧化还原效应因子1 (Ref1),核因子NFκB, forkhead盒O3a (FoxO3a),和NF-E2-related因子2 (Nrf2)、血红素加氧酶1 (HO1)和自噬;(3)自噬的激活LPS-challenged msc使重建受损的细胞成分包括线粒体。这种通信的目的是提供实验证据的潜在作用msc在维持氧化还原内稳态脓毒性氧化应激下的组织障碍。

2。材料和方法

小鼠骨髓间充质基质细胞(msc)表型和功能是定义良好的最近评论(14]。建立MSC文化研究中使用的是前面描述的11)当他们确定为骨髓成纤维细胞克隆形成单位(11,29日]。他们缺乏造血和内皮细胞谱系标记(CD45、CD34、CD4和CD117)但积极为各种各样的其他细胞表面分子(CD44、CD105和Sca1)。III型胶原和基质金属蛋白酶表达的细胞类型3、9、13和回应刺激血小板源生长因子。扩大和培育这些细胞在缺氧条件下(5%啊2,10%的公司2,85% N2)Mesencult介质(干细胞技术有限公司)。

MSC文化增长到大约80% confluency之前被用于实验。有限合伙人(Sigma-Aldrich有限公司产品目录号L4391)大肠杆菌0111:B4用于浓度0.05 - -2.5μ克/毫升。msc与有限合伙人的挑战是在“脉冲”模式进行1 - 3 h,然后孵化中被替换为一个新的。吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC 10μ米)被用来抑制NFκB-mediated应对有限合伙人挑战近日报道(30.]。

被质疑的细胞被固定或收获,然后在不同时间点细胞溶解后(24小时)有限合伙人的挑战。获得的细胞溶解产物都冻结在−80°C,直到进一步的分析。LPS-induced基因和蛋白质表达测定中存在和免疫印迹技术。荧光成像技术被用于(i)的评估核易位p65 NF的亚基κB, NF (p65)κB,硫氧还蛋白1 (TRX1)、Ref1和核因子(erythroid-derived 2)——2 (Nrf2),(2)表达和活性的进气阀打开,(3)评估ROS的生成和RNS dihydrorhodamine 123测定,凋亡转换膜联蛋白V (iv)评估分析,(V) LC3-containing形成自噬体和线粒体融合,和(vi)估计的增殖活动Ki67标记。LPS-induced线粒体重构和mitophagy,线粒体自噬的演示了通过透射电子显微镜(TEM)。

存在分析,细胞总RNA分离msc使用试剂盒RNeasy Miniprep装备,量化通过测量吸光度在260 nm和限定在1.2%琼脂糖凝胶电泳。互补脱氧核糖核酸合成使用上标二世(表达载体)和执行中存在使用SYBR绿色智商Supermix (Bio-Rad),每个根据制造商的指示。被用于以下引物序列中存在:伊诺向前5′CAGCTGGGCTGTACAAACCTT 3′;伊诺反向5′CATTGGAAGTGAAGCGTTTCG 3′;IL-1a向前5′CGGGTGACAGTATCAGCAAC 3′;IL-1a反向5′GACAAACTTCTGCCTGACGA 3′;IL-1b向前5′CCCAACTGGTACATCAGCAC 3′;IL-1b反向5′TCTGCTCATTCACGAAAAGG 3′;向前白介素5′AGTCGGAGGCTTAATTACACATGTT 3′;il - 6反向5′AAGTGCATCATCGTTGTTCATACA 3′; IL-8 Forward 5′ GCGCCTATCGCCAATGAG 3′; IL-8 Reverse 5′ AGGGCAACACCTTCAAGCTCT 3′. The quality of qRT-PCR data was verified by melt curve analysis, efficiency determination, agarose gel electrophoresis, and sequencing. Relative gene expression was calculated by the method of Pfaffl using the formula 。

蛋白质分析,msc是细胞溶解和总蛋白提取依照先前描述的协议(11]。整除的蛋白质决定SDS-polyacrylamide板凝胶(NuPAGE Bis-Tris 4% - -12%;表达载体,卡尔斯巴德、钙、美国)。蛋白质电泳后,涂抹到PDVF膜,这些墨迹孵化与抗体(1μ对地图LC3 g / mL)提出,Nrf2, NF (p65)κB, HSP70, Sirt3 p62 / SQSTM1 HO1,进气阀打开,肌动蛋白(Abcam,圣克鲁斯生物技术公司,EMD微孔,和Sigma-Aldrich有限公司)孵化与物种特异性免疫球蛋白过氧化物酶共轭紧随其后。

蛋白质的表达和空间定位msc、细胞(每组5标本)在2%多聚甲醛固定,immunestaining加工,分析了荧光共焦显微镜(11]。正常驴血清抗体稀释在磷酸盐(PBS)含0.5% BSA和0.15%甘氨酸。任何非特异性结合被孵化的样品纯化正常驴血清(圣克鲁斯生物技术有限公司、圣克鲁斯、钙、美国)稀释1:20。主要提出了抗体对地图LC3,进气阀打开,Ref1, Trx1, NF (p65)κB Nrf2 FoxO3a、p53和汤姆20(线粒体标记)。紧接着孵化与二级fluorochrome-conjugated抗体和/或streptavidin-Alexa萤石610共轭(分子探针,Inc .,尤金,或者美国),和33342年Heochst(分子探针,Inc .,尤金,或者美国)稀释1:3000。二次抗体使用Alexa萤石488年和594年Alexa萤石共轭驴免疫球蛋白(分子探针Inc .,尤金,或者美国)。消极的非特异性结合的控制包括正常山羊血清没有初级抗体或单独使用二次抗体。五个共焦荧光和DIC的图像隐窝(每个标本)被捕蔡司LSM 710显微镜。如前所述进行免疫荧光图像分析(12]。

一氧化氮(NO)的分析形成LPS-challenged MSC是如下。二乙酸二乙酸DAF-FM (4-amino-5-methylamino-2′, 7′-difluorofluorescein,生命技术公司)是用于检测活细胞中没有形成后24 h与有限合伙人(500 ng / mL)的挑战。DAF-FM本质上是nonfluorescent直到没有反应生成荧光苯并三唑。试剂溶液(5μ在PBS M)是应用于细胞和荧光加合物的形成是共焦显微镜蔡司LSM 710监控。L - ——(1-iminoethyl)赖氨酸(LNIL Sigma-Aldrich有限公司),伊诺的选择性抑制剂,用于抑制生产的细胞。

Dihydrorhodamine 123 (DhRho 123,生命技术公司)是用于检测活性氧的生成和RNS(即。过氧亚硝基)细胞24小时后与有限合伙人(500 ng / mL)的挑战。Dihydrorhodamine 123是一个卸货和nonfluorescent活性氧(ROS)指标,可以被动跨膜扩散,它是阳离子氧化罗丹明123年在线粒体和细胞质和展品的绿色荧光。试剂溶液(10μ在PBS M)是应用于细胞的形成与共焦荧光产品监控蔡司LSM 710显微镜。L - ——(1-iminoethyl)赖氨酸(LNIL Sigma-Aldrich公司),伊诺的选择性抑制剂,用于抑制没有释放和随之而来的RNS-dependent DhRho 123细胞的氧化。

透射电子显微镜(TEM), msc在文化固定在2%甲醛和戊二醛2% PBS一夜之间,在2%四氧化锇在PBS后缀,在一系列毕业的乙醇脱水的解决方案,并嵌入在性欲的环氧树脂。块处理如前所述[11]。嵌入式的部分与飞利浦CM100电镜标本进行了分析。

统计学意义是利用学生的决定 以及独立样本。据报道在一定程度的意义 。

3所示。结果

在第一组实验中,我们评估了改变后的MSC应激反应的蛋白质有限合伙人的挑战。有限合伙人,革兰氏阴性细菌外膜的主要组成部分,被认为是一个强大的inflammagen。在基质细胞,LPS-induced激活toll样受体类型4触发NF的危险信号导致核易位κB和随后的几个已知的炎症介质包括伊诺upregulation生产没有(14,26,30.]。最终,LPS-induced效应会导致氧化还原的压力。

正如前面发表,msc相对大量的本构NF的控制κB (11]。共聚焦免疫荧光成像的NF (p65)κB在msc,蛋白免疫反应性控制主要存在于细胞质中(图1(一))。NF (p65)κB在LPS-challenged预测细胞图所示1 (b)。这些数据表明,细胞的挑战与LPS促进一个提示(1 h) NF的核分数的增加κB(图1 (b)用箭头指示)。(p50)的核易位NF (p65)κB被认为是部分凋亡反应应激因素(14,19]。因此,预培养的msc 10μM PDTC, NF的抑制剂κB通路,抑制核易位NF (p65)κB(图1 (c)),是伴随着proapoptotic转换和细胞的损失后confluency有限合伙人(图的应用1 (d))。总结量化评估这些LPS-induced效应提出了图的直方图1 (e)。如数据所示1 (e)和1 (d),增加核易位的NF (p65)κB在几乎所有msc治疗500 ng / mL有限合伙人(3 h脉冲)24小时后处理。观察到LPS-induced transactivation NFκB在msc是伴随着剧烈的促炎介质包括il - 1的表达α,il - 1β、il - 6和进气阀打开,发生在剂量依赖性的方式(表1存在分析)。
有限合伙人 IL1A 摘要意思β 白细胞介素6 IL8 伊诺
纳克/毫升 表情,a.u。 表情,a.u。 表情,a.u。 表情,a.u。 表情,a.u。
0 1±3.25 1±1.82 1±1.54 1±1.41 1±3.14
50 194±2.77 * 317±1.63 * 99±1.48 * 26±1.8 * 882±2.46 *
One hundred. 265±2.33 * 465±1.78 * 155±1.4 * 46±1.36 * 1128±2.3 *
500年 315±2.35 * 755±1.68 * 47±2.67 * 18±1.98 * 1596±2.46 *
1000年 247±2.38 * 498±1.78 * 98±1.6 * 11±1.61 * 1489±2.37 *
2500年 338±2.35 * 729±1.57 * 224±2.32 * 20±3.33 * 1438±2.25 *
条件:msc孵化了50 ng / mL - 2500 ng / mL有限合伙人对3 h,然后是信使rna提取和分析中存在细胞溶解。在数据统计上显著的信心水平P< 0.005,( )。
表1
中存在的评估基因转录与LPS msc的挑战。
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(b)
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(e)
图1
κ κ κ κ κ μ κ μ 2 κ κ 2 κ 共聚焦免疫荧光的评估核易位NF (p65)B在msc与LPS刺激后。((一)- (c))覆盖预测的原子核(蓝色通道)和NF (p65)B在msc(红色通道)。(一)控制细胞。(b) msc被质疑500 ng / mL有限合伙人1 h。激活(p65 NF)B核易位定义增加免疫荧光的NF (p65)B在核区域。核区域的msc对比染色测定核DNA与赫斯特33342(蓝色通道)。核(p65) NF的本地化B出现在紫(用箭头指示)。(c)和(b)是一样的,除了msc preincubated 10吡咯烷二硫代氨基甲酸M PDTC ()、NF的抑制剂b (d) (c)的治疗方法是一样的,但提出了图像覆盖预测的膜联蛋白V(绿色通道),proapoptotic转换的一个标志,各自DIC msc的形象。凋亡事件用箭头指示。针孔的共焦图像被设置来获得0.5m Z-sections。条件:msc与500 ng / mL孵化有限合伙人在中1小时或3 h(见部分)。(e)直方图描述发生的频率(每100细胞)增加NF (p65)B核易位msc治疗有限合伙人。空间的NF (p65)B在msc决心与免疫荧光共焦显微镜示部分。共焦核分数的预测(p65 NF)B所示((一)——(c))。

最大的表情观察伊诺的剂量500 ng / mL有限合伙人(表1);因此,我们进一步实验LPS-induced MSC毒性进行了使用这个剂量。应该注意的是,虽然msc显示抵抗更高剂量的有限合伙人(5000 ng / mL),他们有经验的抑制增殖活动在这些条件下(数据没有显示)。此外,有证据表明(艾略特博士结核病,未发表的数据)有限合伙人剂量500 ng / mL的血液可以诱导小鼠的严重感染性综合症预测死亡率80% - -90%。

LPS-pulse挑战3 h导致延长msc redox-status的变化。因此,24小时后,我们观察到的有限合伙人挑战增加NF (p65)κB易位≈90%的msc(图处理1 (e)),是伴随着一个戏剧性的积累伊诺蛋白质在细胞(图2)。免疫印迹数据呈现在图2经免疫荧光成像伊诺蛋白质的细胞(图3)。伊诺积累导致过度生产的细胞由荧光加合物的荧光强度的增加与没有DAF-FM LPS-treated细胞(数字4(一)和4(b))。这种效应在LNIL的存在被压抑了,但具体伊诺抑制剂(图4(c))。增加活性氧的形成和RNS LPS刺激监控DhRho 123,另一个分子探针,被氧化的ROS和过氧亚硝基,从而转化为荧光ρ123。DhRho成像的结果在图中给出的细胞5。如图,在控制细胞温和ρ123荧光只出现在线粒体活性氧的主要发电机在正常条件下(图5(a))。戏剧性的变化在123年ρ荧光观察msc治疗后的有限合伙人(图5(b))。的确,这些msc与对照组相比具有显著增加线粒体ρ123(数字的荧光5(c)和5(d))。此外,绿色荧光的ρ123还发生在整个细胞质(数字5(c)和5(d))。这个观察表明,在msc LPS-treatment也引起感应ROS / RNS的生成途径在线粒体外身体和压力导致氧化还原。有趣的是,伸长的线粒体激活线粒体融合的观察在这些条件下(图5(b))。增加123年ρ荧光在LNIL的存在被压抑了,但具体伊诺抑制剂(图5(c))。总的来说,提出了数据显示LPS-challenged细胞经历了氧化还原iNOS-dependent由于增加生产的压力。因此,我们预期upregulation redox-response元素的调解细胞适应长期的压力条件。

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(一)
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(b)
图2
κ κ 免疫印迹分析NF的表情B和伊诺蛋白质msc受到有限合伙人的挑战。(一)免疫印迹NF的乐队B和进气阀打开。(b)微密度直方图伊诺乐队的msc与有限合伙人受到挑战。了条指示伊诺的相对密度蛋白肌动蛋白密度乐队(归一化)。统计学意义是取决于学生的以及。条件:msc与500 ng / mL孵化有限合伙人对3 h。这些细胞被收获与LPS后24小时的挑战。






图3
μ 2 进气阀打开蛋白质的共聚焦免疫荧光成像与LPS msc的挑战。(a1)预测控制msc的原子核(蓝色通道)。(a2)的预测伊诺(红色通道),(a3)覆盖预测提出了(a1)和(a2)和各自的DIC的形象。(b1)预测LPS-challenged msc的原子核(蓝色通道)。(b2)的预测伊诺(红色通道)和(b3)覆盖预测提出了(b1)和(b2)和各自的DIC的形象。伊诺发生的大规模积累LPS-challenged msc。对比染色细胞核的赫斯特33342(蓝色通道)。针孔的共焦图像被设置来获得0.5m Z-sections。条件一样显示在图。









图4
共聚焦免疫荧光成像的DAF-FM-detectable一氧化氮与LPS msc的挑战。的加合物(a1)投影DAF-FM没有(DAF-FM-NO)(绿色通道)控制msc。(a2)的投影覆盖DAF-FM-NO所示(a1)和各自的DIC的形象。(a3)直方图相对荧光DAF-FM-NO (a1)所示。的加合物(b1)投影DAF-FM-NO LPS-challenged msc(绿色通道)。(b2)覆盖的投影DAF-FM-NO所示(b1)和各自的DIC的形象。大幅增加DAF-FM-NO荧光发生在LPS-challenged msc。((c1)——(c3))一样(b1b3)除了LPS-challenged msc治疗LNIL,伊诺抑制剂。抑制DAF-FM-NO荧光发生在LPS-challenged msc。






图5
μ 2 共聚焦免疫荧光成像DhRho 123检测活性氧在msc / RNS产品与有限合伙人的挑战。(a1)投影的氧化形式的DhRho 123(ρ123)(绿色通道)控制msc。123年ρ(a2)覆盖的投影所示(a1)和各自的DIC的形象。123年ρ(b1)投影(绿色通道)LPS-challenged msc。(b2)的投影覆盖ρ123所示(b1)和各自的DIC的形象。123年ρ大幅增加荧光发生在LPS-challenged msc。123年ρ(c1)投影(绿色通道)与LNIL LPS-challenged msc和治疗,伊诺抑制剂。123年ρ(c2)覆盖的投影所示(c1)和各自的DIC的形象。抑制ρ123荧光发生在LPS-challenged msc。明亮的绿色荧光的ROS-activatedρ123线粒体与红色箭头所示所示。 Diffused green fluorescence of the ROS/RNS-activated Rho 123 in the cytoplasm is shown with white arrows in (b). The confocal images were taken with pinhole setup to obtain 0.5 m Z-sections。在图所示的实验条件是相同的。

它也承认,许多维生食物在进化中逐渐适应细胞氧化应激管理;包括但不限于redox-sensitive转录因子,抗氧化剂,热休克蛋白,和监管机构自噬和线粒体功能的22,24,25,27,31日- - - - - -37]。从我们的结果呈现在图2,3 h脉冲msc与有限合伙人的挑战导致NF的大幅增加κB细胞中蛋白质分数。NFκB被称为redox-sensitive转录因子,其中包含一个关键的半胱氨酸残基(半胱氨酸- 62)的p50亚基参与DNA结合(24,36]。NFκB通常存在于细胞质与抑制在一个复杂的亚基IkB但在氧化条件下,IkB被I-kB磷酸化激酶(IKK) ubiquitinated,随后退化。过度氧化应激会导致半胱氨酸的氧化- 62不影响其易位细胞核而是干扰DNA结合,减少基因trans-activation [24,38]。因此,在氧化应激的存在,核易位激活(p50) (p65 NF)κB必须同步增加核的还原剂TRX1和Ref124,38]。总的来说,虽然NFκB系统已被公认是主要由inflammagens激活(如有限合伙人)通过toll样和其他受体,它是第一个哺乳动物转录因子确定为氧化还原调控的,建议直接激活ROS和RNS (24,36,38]。

共焦的预测细胞NFκB所示的数据6(一)-6(f)表明NF核分数水平相对较低κB在控制细胞。这种平衡挑战与有限合伙人(数据后发生了巨大的变化6(h) -6(n))。与增加核TRX1分数,减少因素激活氧化核NF的必要条件κB;注意定位核TRX1出现在靠近核NF (p65)κB(图6)。



图6
κ κ κ κ κ κ κ μ 2 共聚焦免疫荧光成像NF的核易位B和硫氧还蛋白1 (TRX1)与有限合伙人msc的挑战。((一)- (c))的预测(p65 NF)B(红色通道)和TRX1 msc(绿色通道)的控制。(d)叠加(p65) NF的预测B、TRX1和原子核在((一)——(c))。(e) ROI (d)中选择。(f)免疫荧光(p65)的NF的柱状图B在核(e)所示。(g)直方图TRX1免疫荧光的原子核(e)所示。((h) - (j))的预测(p65 NF)B(红色通道)和TRX1 LPS-challenged msc(绿色通道)。(k)叠加(p65) NF的预测B、TRX1和原子核在((h) - (j))。(左)ROI (k)中选择。((m) - (n))免疫荧光的直方图(p65 NF)B和TRX1核(左)所示,对比染色细胞核的赫斯特33342(蓝色通道)。针孔的共焦图像被设置来获得0.5m Z-sections。在图所示的实验条件是相同的。

最重要的一个细胞防御机制与氧化应激和nitrosative压力是由转录因子介导Nrf2 [23,24,33,38,39]。在基础条件下,Nrf2区划在细胞质和Nrf2-dependent转录由负监管机构Keap1压抑。ROS的存在和RNS Nrf2释放是一个复杂和Keap1转移到细胞核,它激活抗氧化反应元素——(是)相关的基因表达来维持细胞氧化还原内稳态(23,24,40]。在这方面,“感应”机制的氧化还原压力Nrf2看起来类似NF的证明κb。因此,这是不足为奇的模式upregulation Nrf2和NFκB在LPS-challenged msc(图中是相似的2,6,7),与NF的例外κB我们没有观察到显著增加在1 h核分数Nrf2脉冲有限合伙人挑战的细胞(数据未显示)与NF像我们那样κB。







图7
2 评估核易位Nrf2 redox-response元素与LPS msc的挑战。对比染色的核DNA与赫斯特33342(蓝色通道)。Nrf2染色是绿色的。Nrf2局部核出现在绿松石/绿色由于干扰的“绿色”和“蓝色”(用箭头指示)。实验条件都一样显示在图。

在这个阶段,它是合理的假设深代谢变化必不可少的长期生存的细胞氧化还原压力条件下可能继续通过一连串的事件是由同步激活不同的信号机制(或抑制)。例如,我们测试了LPS-induced核易位的另外两个转录因子,即FoxO3a和p53。FoxO3a,哺乳动物forkhead转录因子家族的成员类的啊,最近提出的中介不同生理过程,包括抗氧化还原的监管压力和增加寿命31日,32]。FoxO3a相反,p53转录因子是凋亡细胞死亡的地讨论主调节器,可激活基质细胞的氧化还原基因毒性压力(41]。核易位的影响有限合伙人的挑战FoxO3a和p53在图所示8。的确,正如预期的那样,大规模增加核分数LPS-treated FoxO3a发生的细胞(图8;控制(a1)和(a2)对LPS处理(b1)和(b2)),证实效果观察Nrf2和NFκB(数据6和7)。与此同时,没有明显的核p53蛋白的免疫荧光(图的变化8;控制(c1)和(c2)与有限合伙人(d1)和(d2))。


图8
μ 2 评估核易位FoxO3a和p53 redox-response元素与LPS msc的挑战。对比染色的核DNA与赫斯特33342(蓝色通道)。FoxO3a染色是红色的(控制(a1)和(a2)对LPS处理(b1)和(b2))。((a2) - (b2)覆盖的共焦FoxO3a蛋白质的预测(红色通道)和核DNA(蓝色通道)。FoxO3a核转位用箭头指示(b1)和(b2)的核分数FoxO3a出现在粉红色由于干扰的“红色”和“蓝色”。((c1), (c2), (d1), (d2))共焦p53蛋白的预测(红色通道)msc(控制(c1)和(c2)与有限合伙人(d1)和(d2))。对比染色用赫斯特33342年(核DNA,蓝色通道)和anti-TOM20免疫球蛋白(线粒体,绿色油页岩)。(c2)和(d2)覆盖p53蛋白的共焦预测(红色通道),TOM20蛋白质(绿色通道)和核DNA(蓝色通道)。注意,没有检测到增加p53-immunofluorescence在核领域LPS-challenged msc。针孔的共焦图像被设置来获得0.5m Z-sections。实验条件都一样显示在图。

上述分析转录因子,Nrf2 NFκB, FoxO3a,参与调节多种产生,抗氧化剂,和介质的自噬和线粒体重构包括HSP70、HO1, p62, Sirt3和LC3 [23,24,33,35,42]。此外,越来越多的证据表明陪护人员的热休克蛋白、蛋白激酶参与自噬活动(42,43]。这些蛋白质的免疫印迹分析的结果LPS-treated msc图所示9(一个)。LPS-induced HSP70的表达,Sirt3微不足道(图9(一个)),显然是由于持续高水平的蛋白质。同时,我们观察到大幅提高HO1蛋白质(图9 (b)),在康科德Nrf2 LPS-induced响应(数字7和9(一个)),一个反式激活因子HO1 [35]。

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图9
西方redox-response和autophagy-mediated蛋白免疫印迹分析与LPS msc的挑战。HSP70免疫印迹(a)代表乐队,Nrf2, p62 / SQSTM1, Sirt3和LC3蛋白质。蛋白质提取得到来自MSC文化的挑战与LPS后24小时。((b) - (c))代表免疫印迹乐队Hemeoxygenase 1 (HO1)蛋白质(b)和各自的微密度直方图HO1乐队(c)与有限合伙人msc刺激。了条指示HO1蛋白质的相对密度(规范化的肌动蛋白密度乐队)。统计学意义是取决于学生的以及。条件:msc与500 ng / mL孵化有限合伙人对3 h。这些细胞被收获与LPS后24小时的挑战。

非凡的反应发生在ubiquitin-associated目标适配器p62 / SQSTM1和LC3 I型和II型蛋白质(图9(一个)),介质的macroautophagy (ATPhG) [11,22,37,43]。自噬体的关键一步生源论的转换是轻链蛋白3 I型(LC3-I,也称为ubiquitin-like蛋白质,Atg8) II型(LC3-II)。的转换通过解理发生LC3-I羧基末端的redox-sensitive Atg4半胱氨酸蛋白酶。随后的绑定修改LC3-I磷脂酰乙醇胺,也就是说,LC3-1 lipidation的过程,在隔离膜形式,是由e 1 -和E-2-like酶Atg7 Atg3 [11,22,37]。因此,转换LC3-I LC3-II和LC3-positive囊泡的形成被认为是激活的标志ATPhG [11,22,37]。如图9(一个),MSC与有限合伙人的挑战导致增加LC3-I和LC3-II表达式由免疫印迹,表示upregulation LC3-I LC3-II过渡。在这个阶段,我们的进一步研究是集中在免疫荧光共焦成像和TEM分析LPS-challenged ATPhG-mediated重塑的细胞。

在第二组实验中,我们分析了自噬/ autolysosomal响应和线粒体重塑msc受到有限合伙人的挑战。ATPhG通路被认为是一个进化发展prosurvival机制,删除和过程受损和错误折叠的蛋白质和受损细胞器在氧化还原反应压力21,25,27,37,44]。激活ATPhG与形成自噬/细胞质中液泡autolysosomal调节蛋白水解过程(11,22,25,27]。

图像呈现在图10表明upregulation LPS-challenged LC3-I / LC3-II蛋白质的细胞与大规模LC3-positive囊泡的形成自噬体和自吞噬泡。


图10
μ 自噬体形成的评估与LPS msc的挑战。((a) - (d))共聚焦免疫荧光成像。(一)绿色通道。LC3投影控制msc。(b)覆盖LC3的预测(绿色通道),伊诺(红色通道)和原子核(蓝色通道)控制msc。(c)绿色通道。LC3投影与LPS msc的挑战。(d)覆盖LC3的预测(绿色通道),伊诺(红色通道)和原子核(蓝色通道)与有限合伙人msc的挑战。LC3的空间定位与白色箭头指示。条件:msc与500 ng / mL孵化有限合伙人对3 h。 The cells were analyzed 24 h after challenge with LPS. Counterstaining of nuclei was with Hoechst 33342 (blue channel). The confocal images were taken with pinhole setup to obtain 0.5 m Z-sections。(e)的TEM图像msc与有限合伙人的挑战。自噬体(ATG)膜与黄色箭头表示;ATG的线粒体碎片与白色箭头指示;溶酶体的融合与ATG用粉色箭头指示。

进一步评估LPS-challenged细胞自噬与TEM显示事件的多个空泡的存在特点,这是由双层膜,隔离不同密度(图的成分10)。一些液泡可以确定为分泌自吞噬泡的存在multilamellar结构(最可能的胶原蛋白纤维)释放细胞外地,而其他含有线粒体细胞器包括破坏骨折(图11)。

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图11
透射电镜(TEM)分析线粒体重塑inMSCs挑战与有限合伙人。(一)控制MSC的形象。线粒体是用黄色箭头指示。((b) - (f))的图像与LPS msc的挑战。(b)受损的线粒体进行重构和mitophagy与红色箭头所示。双层膜的自溶酶体用白色箭头指示。太,线粒体。((c) - (d))受损的线粒体的融合(Mt)和自噬体(ATG)用红色箭头指示。ATG膜有白色的箭头表示。(d)分泌自吞噬泡的形成包含multilamellar结构(红色箭头)辐照MSC。 (e) Fusion of mitochondria (Mt) is indicated with yellow arrow. (f) Formation of elongated mitochondria is indicated with white arrow. Mitophagy is indicated with red arrow. Conditions: MSCs were incubated with 500 ng/mL LPS for 3 h. The cells were analyzed 24 h after challenge with LPS.

最近的观测表明,自噬体并不会形成细胞质中的随机而是隔离线粒体选择性(45,46]。选择破坏线粒体mitophagy需要激活PINK1 /帕金通路和适配器蛋白质的含义,例如,p62 / SQSTM1 ubiquitin-like修饰符,线粒体和最终目标协调融合的处理线粒体自噬体(45,46]。

的图像数据10(e)和11 (b)- - - - - -11 (d)表明,线粒体可以融合与自噬小体类似的大小而进一步退化发生在大型自吞噬泡。

观察到mitophagy伴随着大量线粒体融合导致的线粒体网络(人物的改造和扩张11和12)。线粒体融合的事件,形成细长的线粒体(超过10μ米长度)被捕与TEM和共聚焦免疫荧光显微镜和给出数据11 (e),11 (f),12(d)。上述数据表明LPS引起的短期挑战msc电池复杂的适应性反应导致增加抗氧化还原压力和破坏细胞成分,以及整个线粒体网络的重构。


图12
μ 线粒体的共聚焦免疫荧光成像重构与LPS msc的挑战。线粒体网络可视化使用预测TOM20(红色通道),线粒体标记。((a) (b))控制msc:线粒体网络提出了小型点。((c) - (d))与有限合伙人msc挑战:长度形成线粒体网络发生由于线粒体融合。条件:msc与500 ng / mL孵化有限合伙人对3 h。分析了细胞后24 h与有限合伙人的挑战。对比染色细胞核的赫斯特33342(蓝色通道)。针孔的共焦图像被设置来获得0.5m Z-sections。

4所示。讨论

氧化还原应力发生在各种损伤的发病机制类型,包括辐射损伤和脓毒症相关,并有多个原始论文和评论最近解决这一现象(4,14,47- - - - - -49]。相关的二次氧化损伤敏感的细胞成分和ER应激可以影响体内平衡的组织障碍,从而加剧愈合的过程。这方面,随着新兵团的发展治疗复杂的损伤可以更有效和更好地理解基本的细胞机制涉及氧化还原适应性反应的组织障碍。这一特定区域的分子氧化还原病理生理学是不发达尽管细胞应激反应的一般概念是广泛讨论的文献[35,38,50]。我们的沟通是第一个报道证明msc的潜在作用维持在感染性条件下抗氧化还原屏障功能。

根据当前的范式,一般应激反应包括守恒的信号模块,反过来,是相互联系的细胞适应性机制(21,33,50]。它最近已被证明,细菌感染引发特定敏感机制介导炎症,氧化还原压力,适应和改造2,3,17,20.- - - - - -22]。氧化还原的压力本身刺激信号级联由转录因子和通路在细胞生存方面发挥核心作用。这包括,但不限于,一连串的thiol-containing redox-response元素,redox-sensitive核factor-kappa B (NF等转录因子κB), Nrf2 FoxO3a,压力反应适配器,如伴护热休克蛋白70 (HSP70)和河畔+端依赖脱乙酰酶sirtuin-3 (Sirt3)和活化剂autolysosomal退化和线粒体重构。总体而言,这些效应系统是至关重要的维持体内平衡,改变是由于氧化损伤细胞成分(35- - - - - -46]。值得注意的是,虽然redox-induced NF的角色κB和Nrf2反应在细胞生存是有据可查,转录因子FoxO3a,线粒体自噬/ autolysosomal通路,可回复的较新球员决定涉及到自适应机制(21,30.,31日,36,37,42- - - - - -46]。

最近,我们展示了在体外msc可以雇佣ATPhG吞噬作用的大肠杆菌(11]。然而,一个机制,允许细胞避免细菌生物降解的产品的不利影响,如有限合伙人,仍不清楚。在这份报告中提供的数据显示,在体外msc的挑战与LPS inflammagen引发了一连串的反应,我们相信编排细胞的适应性改造,增加抵抗“自找的”LPS-induced氧化应激。一个模式的适应性反应包括感应redox-response NF等元素κB TRX1 Ref1, Nrf2 FoxO3a,激活ATPhG和线粒体重构。应该注意的是,尽管存在mitophagy和线粒体重塑LPS-challenged msc、没有明显改变Sirt3蛋白质的水平,这是一个主要玩家在线粒体氧化还原反应压力(35,37,46]。我们认为,这可能是因为高组成型表达的这种蛋白质在msc。同时,与Sirt3,发生显著的HO1表达,一种抗氧化剂蛋白质,利用线粒体血红素,本身芬顿类型的催化剂的反应作为必不可少的新创形成的活性形式伊诺(35,51]。总的来说,我们的观察支持一般概念存在的多种信号通路网络,使调解细胞氧化应激的适应33,35,37,40,43,50]。

免责声明

本文所表达的见解不一定代表武装部队放射生物学研究所的健康科学统一服务大学,国立卫生研究院、美国国防部。

利益冲突

没有道德和金融的冲突提出了工作。

作者的贡献

n v Gorbunov和j·g .西藏野驴了同样的工作。

确认

作者感谢Areya先生Tabatabai和琼·史密斯女士的技术支持。作者要感谢生物医学仪器中心USUHS提供共焦和电子显微镜用于这项研究。这项工作是由AFRRI校内RAB3AL j·g .西藏野驴NIAID R21/33AI080553 j·g .西藏野驴和NIAID y1 - ai - 5045 - 04 j . g .西藏野驴。

引用

  1. d . c .安格斯·w·t·Linde-Zwirble j . Lidicker g·克莱蒙特,j . Carcillo和m·r·平斯基”在美国严重脓毒症的流行病学:发生率,分析结果,以及相关的医疗费用,”危重病医学卷,29号7,1303 - 1310年,2001页。视图:谷歌学术搜索
  2. j·a·罗素“管理脓毒症”,《新英格兰医学杂志》上,卷355,不。16,1699 - 1713年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  3. j·g .西藏野驴、焦w . l·h·卡里et al .,“伤口创伤死亡率增加辐射诱导伊诺通路的激活和海拔的细胞因子浓度和细菌感染,”辐射的研究,卷173,不。3、319 - 332年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  4. j·g .西藏野驴、b·r·加里森和n . v . Gorbunov”辐射损伤:结合DNA损伤、细胞凋亡和自噬,”自适应医疗,卷2,页1 - 10,2010。视图:谷歌学术搜索
  5. m . Perl c . s .钟,r .天鹅和a . Ayala”程序性细胞死亡在脓毒症的免疫发病机理中的作用,“药物发现今天,4卷,不。4、223 - 230年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  6. p h . Krebsbach s . a .“库兹涅佐夫”·比安科和p . Gehron罗比,“骨髓基质细胞:特性和临床应用,”口腔生物学和医学的关键评论,10卷,不。2、165 - 181年,1999页。视图:谷歌学术搜索
  7. a . Friedenstein“Stromal-hematopoietic相互关系:Maximov的思想和现代模式,”血液学和输血32卷,第167 - 159页,1989年。视图:谷歌学术搜索
  8. d . w•鲍威尔诉③,j·萨达,x,和r . c .》“肠道固有层间充质细胞,”年度回顾的生理卷,73年,第237 - 213页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  9. w·m·杰克逊p·g·亚历山大,j . d . Bulken-Hoover et al .,”间叶细胞祖细胞来自创伤肌肉增强神经突生长,”组织工程和再生医学杂志》上,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  10. a . Krasnodembskaya y的歌,x方et al .,“人类间充质干细胞介导的抗菌效应分泌的抗菌肽LL-37一部分,”干细胞,28卷,不。12日,第2238 - 2229页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  11. n . v . Gorbunov b·r·加里森·m·翟et al .,“Autophagy-mediated防御反应的小鼠间充质基质细胞(msc)的挑战大肠杆菌,“在蛋白质相互作用,艾德。j . Cai 23-44页。视图:谷歌学术搜索
  12. k·勒布朗和o . Ringden”,由间充质干细胞免疫调节和临床经验,”内科医学杂志,卷262,不。5,509 - 525年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  13. j·w·李,x方:古普塔诉Serikov和m . a . Matthay“同种异体人类间充质干细胞用于治疗大肠杆菌endotoxin-induced急性肺损伤的人类肺灌注体外,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷106,不。38岁,16357 - 16362年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  14. k . Nemeth b . Mayer,大肠Mezey”调制的骨髓基质细胞功能传染病通过toll样受体配体,“分子医学杂志,卷88,不。1,5 - 10,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  15. k . s .小林m . Chamaillard y Ogura et al .,“Nod2-dependent天然免疫与适应性免疫调节肠道,”科学,卷307,不。5710年,第734 - 731页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  16. y Imai表示k .库巴地毯g·g·尼利et al .,“氧化应激和toll样受体4的识别信号作为急性肺损伤的关键途径,”细胞,卷133,不。2、235 - 249年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  17. r·吉尔a Tsung, t . Billiar“氧化应激与炎症:toll样受体”,自由基生物学和医学,48卷,不。9日,第1132 - 1121页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  18. a . Lecat j .移液管,s . Legrand-Poels”蛋白质Nod2:天生的受体比此前认为的更加复杂,”生化药理学,卷80,不。12日,第2031 - 2021页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  19. NF - h . Sebban和g .礼貌。κB和炎症基因疾病。”生化药理学,卷72,不。9日,第1160 - 1153页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  20. t·r·k·Thimmulappa h . Lee Rangasamy et al .,“Nrf2是先天免疫反应的关键调节器和生存在实验脓毒症,”临床研究杂志,卷116,不。4、984 - 995年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  21. l·默罗和j . Debnath”,自噬作为一种应激反应和质量控制机制:对细胞损伤和人类疾病的影响,“年度回顾的病理,2012卷,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  22. m·德尔珈朵辛格,s·德·哈罗德等人,“在先天免疫自噬和模式识别受体,”免疫学检查,卷227,不。1,第202 - 189页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  23. r . Brigelius-Flohe和l . Flohe”基本原则和新兴的氧化还原控制转录因子的概念,“抗氧化剂和氧化还原信号,15卷,不。8,2335 - 2381年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  24. t .阮、p . Nioi和c·b·皮科特“Nrf2-antioxidant响应元素信号通路及其氧化应激激活的,”生物化学杂志,卷284,不。20日,第13295 - 13291页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  25. 黄h .元,c·n·佩里,c . et al .,“LPS-induced自噬是由心肌细胞中的氧化信号和与cytoprotection有关,”美国生理学杂志》上,卷296,不。2,H470-H479, 2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  26. t·a·p·r·佩罗y Wang马克尔·m·王,t·拉姆和d . r . Meldrum人类间充质干细胞刺激TNF -α、有限合伙人或缺氧产生生长因子NFκB——但不是JNK-dependent机制。”美国生理学杂志》上,卷294,不。3,C675-C682, 2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  27. y, a .田中a . m . Choi和s . w .觉得“自噬蛋白:新方面的氧气悖论,”自噬,8卷,不。3、426 - 428年,2012页。视图:谷歌学术搜索
  28. s . s .艾耶大肠Torres-Gonzalez特区春节快乐et al .,“骨骨髓来源间充质干细胞对endotoxin-induced等离子体氧化半胱氨酸、谷胱甘肽在老鼠中,“干细胞国际文章ID 868076卷,2010年,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  29. m·欧文和a·j·Friedenstein“间质干细胞:骨髓来源成骨的前兆。”汽巴基础研讨会卷。136年,42-60,1988页。视图:谷歌学术搜索
  30. j·j·张,z . m .徐吡咯烷二硫代氨基甲酸c . m . Zhang et al .,“抑制核转录因子-κB途径激活,调节粘附、迁移、入侵和异位基质细胞的凋亡人类生殖的分子,17卷,不。第三条ID gaq090, 175 - 181年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  31. w·c·Burhans和n . h . Heintz”细胞周期是一个氧化还原循环:将分阶段目标细胞的命运,”自由基生物学和医学卷,47号9日,第1293 - 1282页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  32. 森古普塔,j . d . Molkentin j . h .沉重的一击,r . a . DePinho和k . e . Yutzey”FoxO转录因子促进心肌细胞氧化应激诱导后,生存”生物化学杂志,卷286,不。9日,第7478 - 7468页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  33. 马赫和m .山本,”抗氧化剂的崛起标志着进化和激效Nrf2行动,”毒理学和药理学应用,卷244,不。1,4-15,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  34. y . m, d . m . Duong j .彭和d·p·琼斯,“半胱氨酸的蛋白质功能映射到网络根据稳态水平的氧化,”蛋白质组学和生物信息学杂志》上,4卷,不。10日,196 - 209年,2011页。视图:谷歌学术搜索
  35. 诉花茎甘蓝,c·科尼利厄斯,a . t . Dinkova-Kostova et al .,“细胞应激反应,激效植物化学物质和维生食物在衰老和长寿,“Biochimica et Biophysica学报,卷1822,不。5,753 - 783年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  36. l . j .马丁“生物线粒体在神经退行性疾病,”科学的进步分子生物学和转化卷,107年,第415 - 355页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  37. j·李,美国佐丹奴,j·张,“自噬、线粒体氧化应激:相声和氧化还原信号,”生物化学杂志,卷441,不。2、523 - 540年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  38. d·p·琼斯,“狂热的自由生物氧化应激,”美国生理学杂志》上,卷295,不。4,C849-C868, 2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  39. h . c .嗯,j . h .张成泽d·h·金c·李,和y . j . Surh一氧化氮激活Nrf2通过年代亚硝基化Keap1的PC12细胞。”一氧化氮,25卷,不。2、161 - 168年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  40. a . Maruyama k . Nishikawa y Kawatani et al .,“小说Nrf2-interacting KAP1调节因素对氧化应激的敏感性,促进Nrf2-mediated cytoprotective回应,“生物化学杂志,卷436,不。2、387 - 397年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  41. n . v . Gorbunov j·e·莫里斯,j·s·格林伯格和b . d .束缚,“建立一个新的克隆小鼠骨髓基质细胞系p53反应基因毒性评价的压力,”毒理学,卷179,不。3、257 - 266年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  42. m . e . r .例诉Bocanegra, w . Manucha a·g·洛伦佐和p·g .水手Nrf2-Keap1细胞防御通路和热休克蛋白70 (Hsp70)的反应。在对抗氧化应激保护作用,在早期新生儿单侧输尿管梗阻(UUO)”细胞压力和陪伴,16卷,不。1,57 - 68,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  43. k . i Fujita d Maeda,问:小,和s . m . Srinivasula”Nrf2-mediated感应p62控制toll样receptor-4-driven aggresome-like诱导结构的形成和自噬降解,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷108,不。4、1427 - 1432年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  44. z杨和d . j . Klionsky“哺乳动物自噬:核心分子机制和信号调节,”当前细胞生物学的观点,22卷,不。2、124 - 131年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  45. f . Reggiori m .小松、k·芬利和a·西蒙森“选择性自噬类型,”国际细胞生物学杂志》上156272卷,2012篇文章ID, 2页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  46. d . a . Kubli和a . b . Gustafsson线粒体和mitophagy:控制细胞死亡的阴和阳”循环研究,卷111,不。9日,第1221 - 1208页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  47. 诉e·卡根,b . w .天,n·m·曾和n . v . Gorbunov”血红蛋白的动力学”,自然,卷383,不。6595年,30 - 31,1996页。视图:谷歌学术搜索
  48. m .龙骨和o . Trentz病理生理学多发伤。”受伤,36卷,不。6,691 - 709年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  49. j·g .西藏野驴、r . Fukumoto和n . v . Gorbunov”电离辐照后脂质过氧化作用导致细胞凋亡和自噬,”脂质过氧化作用,a . Catala Ed,页261 - 278,里耶卡,克罗地亚,2012。视图:谷歌学术搜索
  50. d . Kultz”分子和进化的基础细胞应激反应,”年度回顾的生理卷,67年,第257 - 225页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  51. c . a . Piantadosi“一氧化碳、活性氧信号和氧化应激,”自由基生物学和医学,45卷,不。5,562 - 569年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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