文摘

目标。观察刺五加治疗效果和3-methyladenine对重症急性胰腺炎(SAP)。方法。钠taurocholate-induced SAP老鼠同样随机分为一个SAP组,刺五加群和3-methyladenine组。血清淀粉酶水平ELISA测定;蛋白质和信使rna表达水平的核核转录因子(NF -κBκB) p65,轻链3 ii (LC3-II)和Beclin-1 mRNA表达水平的第三类磷脂酰肌醇3-kinase (PI3K-III)在胰腺组织中检测到免疫印迹和定量实时PCR,分别;死亡率和胰腺的病理变化观察到3日,12日和24 h后操作。结果。的死亡率没有显著区别SAP组和治疗组()。血清淀粉酶水平、蛋白质、和信使rna表达水平的核NF -κB p65、LC3-II Beclin-1蛋白质,PI3K-III mRNA表达水平,胰腺的病理评分治疗组明显低于在SAP组操作(12和24小时后或0.01)。胰腺腺泡细胞的自噬小体的数量和autophagolysosomes两治疗组在SAP组小于12和24小时。结论。刺五加和3-methyladenine有类似的针对SAP大鼠疗效。异常的机制可能是通过抑制自噬的激活胰腺腺泡的细胞。

1。介绍

重症急性胰腺炎(SAP)是一种常见的临床急救特点是急性发作,迅速发展和演变和多个并发症,导致20 - 30%的死亡率和双方家庭和社会带来沉重的负担1]。然而,在SAP的致病机制并不完全清楚。SAP的发病率近年来趋于上升,但临床治疗措施在SAP不够有效,部分原因是难以捉摸的SAP的发病机理。

目前,胰腺腺泡的细胞自噬在SAP中引起了广泛的关注和兴趣,知道胰腺腺泡细胞的自噬是SAP的早期事件普遍存在于真核生物作为一种程序性细胞死亡(2,3]。自噬发生时,双层膜囊泡称为自噬小体是在细胞质中形成的。他们包裹细胞质和细胞器的碎片和发送他们为消化和溶酶体降解由多种酶。此外,他们提供能源和小分子细胞内循环(4]。增加数量的研究胰腺腺泡的细胞自噬在SAP在SAP中显示不正常的胰腺腺泡细胞的自噬相关酶前体的激活。

3-Methyladenine是磷脂酰肌醇3-kinase (PI3K)抑制剂,会影响自噬小体的形成,进一步抑制自噬(5]。目前,这是一个成熟的自噬抑制剂。元等。6)报道,3-methyladenine可以抑制不正常的胰腺腺泡细胞的自噬通过抑制P13K /蛋白激酶B (PI3K / Akt途径和改善的严重性SAP-induced急性肺损伤(ALI)在某种程度上。

提取刺五加注射液刺五加根和根状茎(五茄科)。其主要有效成分是总类黄酮。刺五加能抵抗炎症和氧化,清除自由基,抑制白细胞的大幅增加,抑制血小板血栓形成,扩张血管,改善微循环,增强免疫力(7- - - - - -14]。之前的研究表明,刺五加注射液是有效治疗SAP (15,16]。我们先前的研究表明,刺五加保护效应对SAP-induced脑损伤大鼠(17]。和其他先前的研究结果表明,刺五加能显著抑制核转录因子(NF -κBκB)信号通路,但靶细胞尚不清楚。PI3K / Akt信号通路是一个重要的调节自噬途径(18),和更多的研究表明,PI3K / Akt和NF -κB信号通路相关(19]。激活的NF -κB信号通路异常可能会刺激胰腺腺泡细胞的自噬诱导过程中SAP (20.]。因此,我们推测,刺五加抑制自噬的胰腺腺泡细胞的影响。刺五加比3-methyladenine更广泛的应用范围。它也更便宜。因此,它可能是一个有前途的代理治疗SAP,因此需要进一步的研究。

在目前的研究中,我们首先建立了一个模型,SAP大鼠钠引起的牛磺胆酸盐,然后用它来观察和比较刺五加的作用和3-methyladenine抑制不正常的胰腺腺泡细胞的自噬和他们对SAP的治疗效果使用定量实时聚合酶链反应(存在),免疫印迹,透射电子显微镜(TEM),为了提供有用的实验线索对刺五加的应用SAP的临床治疗。

2。材料和方法

2.1。动物

特定病原体的自由——(SPF)年级健康男性Sprague-Dawley (SD)大鼠年龄在10 - 12周,体重250 - 290克所提供和维护在南通大学医学院动物实验中心12 h光/暗周期和免费获取标准实验室饲料和水。研究机构动物使用和保健委员会批准南通大学医学院(南通,中国)按照美国国立卫生研究院1996年指导的护理和使用实验动物。

2.2。刺五加注射液的制备和3-Methyladenine

0.2%刺五加注射液(包含总黄酮类化合物2毫克/毫升)购买从黑龙江乌苏里江制药有限公司有限公司(中国;批准文号Z23021162),这种注射内毒素免费使用。从Sigma-Aldrich 3-Methyladenine购买(美国)和100 nmol /μL 3-methyladenine解决方案准备如下:0.009 g 3-methyladenine(分子量149.15)粉末溶解在600μL双蒸馏水,然后放置在50°C浴水。

2.3。实验模型和组

所有老鼠都禁食12 h和免费使用水之前操作。麻醉后腹腔内(i.p)注入2%戊巴比妥钠(0.25毫升/ 100克),他们和固定在桌子上,经常剃,消毒和覆盖。引起的大鼠SAP模型0.1毫升/分钟的速度均匀逆行注入刚做好的3.5%牛磺胆酸盐钠溶液(美国Sigma-Aldrich 0.1毫升/ 100克)在胆胰管剖腹手术后(21]。相同体积的生理盐水溶液代替3.5%牛磺胆酸盐钠溶液在sham-operation(所以)对照组。与连续3-0-silk缝合切口关闭,和2毫升/ 100克盐水注入皮下注射,以弥补损失的液体。180只老鼠被随机分为四组:(1)刺五加治疗组(Aca集团)大鼠注射0.2%刺五加注射液剂量为3.5毫克/ 100克3 h建模通过腔caudalis一旦成功之后,知道这个剂量是有效证明在我们先前的实验(17];(2)3-Methyladenine治疗组(3-Methyladenine集团)的老鼠注射100 nmol /μL 3-methyladenine溶液剂量为1.5毫克/ 100克3 h建模通过腹腔内路线一旦成功之后,知道这个剂量是有效证明文献[6];(3)SAP模型组(SAP组,),这些老鼠收到同等体积的生理盐水代替刺五加注射液通过腔caudalis建模成功后3小时以内一次;(4)集团(控制,),这些老鼠收到同等体积的生理盐水代替刺五加注射液3 h成功通过腔caudalis sham-operation后一次。45动物同样的四个组随机分为3、12、24 h组术后观察。

2.4。死亡率

老鼠死亡率估计3、12、24小时四组。

2.5。血液和组织准备

幸存的老鼠牺牲通过血液通过心脏穿刺在3、12、24小时四组。对离心法收集血液样本,血清是储存在−20°C。新的大鼠胰腺组织被立即在磷酸盐4%甲醛固定组织病理学观察和另一个新鲜的大鼠胰腺组织立即删除并切成1米的大小³和固定在2%戊二醛对TEM观察。其余部分胰腺组织立即冻结在液氮和存储−80°C的测定。

2.6。分析血清淀粉酶(AMY)水平

血液样本在3000转离心10分钟,保持在−20°C到化验。血清艾米水平决定了酶联免疫吸附测定(ELISA)根据使用说明鼠血清艾米酶联免疫试剂盒(英国Abcam)。

2.7。组织学检查

组织学分析,formaldehyde-fixed嵌入石蜡标本,切片在4μ米厚,和对待hematoxylin-eosin(他)染色。光显微镜下部分进行评估(奥林巴斯光学有限公司、日本)。根据施密特的胰腺的严重程度评分标准22),大量的水肿(0,缺席;1,小叶间septae的焦扩张;1 + 2,一样小叶间septae的弥漫性扩张;2 + 3,一样扩散扩大intra-acinar septae;3 + 4,一样分散细胞间隙扩张),炎症(0,0 - 1 intralobular或血管周的白细胞/高通滤波器(大功率领域);1,6 - 10 intralobular或血管周的白细胞/高通滤波器;2、16 - 20 intralobular或血管周的白细胞/高通滤波器;3、26 - 30日intralobular或血管周的白细胞/高通滤波器;4 > 35白细胞/高通滤波器或汇合的微小脓肿)、腺体细胞坏死(0,缺席;1、1 - 4坏死细胞/高通滤波器; 2, 5–10 necrotic cells/HPF; 3, 11–16 necrotic cells/HPF; 4, >16 necrotic cells/HPF), and hemorrhage (0-1 point) of the pancreatic tissue were recorded. For each pathological section, 10 visual fields under a high-power microscope (×200) were randomly selected and scored by two independent pathologists who were blind to this experiment. The mean score of the 10 visual fields of one pathological section was calculated as the pathological score. For TEM observation, rat pancreatic tissue specimens were fixed in 2% glutaraldehyde for 24 h, stained with acetic acid dioxygen oil and lead citrate, and finally observed under a TEM (JEM-1230, JEOL Ltd., Japan) by an expert who was blind to this experiment.

2.8。免疫印迹分析

胰腺核NF -κB p65、LC3-II Beclin-1蛋白表达水平3、12、24小时在四组被检测到免疫印迹分析。细胞核蛋白提取利用核细胞溶质萃取设备(Applygen技术有限公司,中国),其次是制造商的指示。蛋白质由布拉德福德评估方法与牛血清白蛋白标准。40毫克的蛋白质样本在8%十二烷基硫酸盐钠聚丙烯酰胺电泳(sds - page)凝胶和转移到硝化纤维膜。膜被封锁阻止缓冲区(TBS含有5%脱脂奶粉,0.1% Tween-20)在室温下2小时。细胞核蛋白与主要的兔单克隆抗体孵化anti-rat NF -κB p65抗体(1:1000)和β微管蛋白抗体(1:1000,细胞信号技术,美国)。此外,总蛋白质与主要的兔单克隆抗体孵化anti-rat LC3-II抗体(1:1000),Beclin-1抗体(1:1000),和β肌动蛋白抗体(1:1000)在一夜之间在4°C。兔单克隆anti-rat NF -κB p65 LC3-II Beclin-1,β肌动蛋白抗体都从Abcam购买,英国。膜是用TBST (Tween-20 TBS含有0.05%),然后用辣根peroxidase-conjugated孵化山羊anti-rabbit二级抗体(皮尔斯生物技术1:5000年,美国)1 h在室温和开发使用ECL试剂(美国西部合止动剂基质,密理博公司)和感光成像胶片捕捉到了(美国柯达)。蛋白质的乐队是量化微(量一个4.5.0软件;Bio-Rad实验室、美国)。使用β微管蛋白作为参考,细胞核NF -κB p65蛋白和β微管蛋白比例计算。使用βLC3-II蛋白质和肌动蛋白参考β肌动蛋白比例和Beclin-1蛋白质β肌动蛋白比例计算。

2.9。存在分析

胰腺核NF -κB p65 LC3-II Beclin-1, PI3K-III mRNA表达水平在四组被检测到存在。隔离核采用蔗糖高速离心的方法。首先,胰腺组织是均质,那么原子核释放组织匀浆,然后执行蔗糖密度梯度离心法,细胞核被沉淀,然后核NF -κB p65信使rna检测。存在过程如下:胰腺组织的总RNA提取或核使用试剂盒RNA提取试剂(美国生活技术)和reverse-transcribed cDNA (PCR主混合设备,Toyobo有限公司,日本)。每个基因的引物设计使用底漆总理5.0(美国国务院总理Biosoft)根据cDNA序列从国家生物技术信息中心获得。引物序列和扩增子大小如下所示。参考GAPDH基因上游引物TGATTCTACCCACGGCAAGTT;下游引物是TGATGGGTTTCCCATTGATGA;和产品是77个基点。基因NF -κB p65上游引物是CATGGATCCCTGCACACCTT;下游引物是CTCAGCATGGAGAGTTGGCA;和产品是134个基点。基因LC3-II上游引物ACTGCCGCCCTAAAGGTTAC;下游引物是CGAGGTCCAACCCACAAAGA;和产品是82个基点。基因Beclin-1上游引物CGGCTCCTATTCCATCAAAA;下游引物是AACTGTGAGGACACCCAAGC;和产品是111个基点。基因PI3K-III上游引物CTTCAAGCATGGGGACGACT; downstream primer was GCTTCCCTCCGTGTCAAGAA; and the product was 196 bp. qRT-PCR was performed using SYBR Green Premix Ex Taq in a Mastercycler ep realplex instrument (Eppendorf AG., Germany). The PCR protocol was as follows: predenaturation for 20 min at 95°C followed by denaturation for 30 s at 95°C, annealing for 30 s at 54-55°C, and extension for 40 s at 72°C for 40 cycles. Using GAPDH as internal reference, the nucleus NF-κB p65 mRNA和GAPDH比率,Beclin-1 mRNA和GAPDH比率,LC3-II mRNA和GAPDH比,PI3K-III mRNA和GAPDH比率计算。

2.10。统计分析

所有实验值表示为平均值±标准偏差值。后输入到Excel表,编制数据读入SAS 8.1进行进一步分析。方差分析及两两比较中使用的正常数据,其中克鲁斯卡尔-沃利斯测试是用于成对比较和Mann-Whitney测试多个比较。准确的测试是用来比较两组之间的死亡率。使用斯皮尔曼等级相关系数的相关性进行了测试。一个值小于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。刺五加注射液和3-Methyladenine不能降低SAP大鼠的死亡率

死亡率在SAP组3、12、24 h为0%(0/15),6.67%(1/15)和46.67%(7/15),分别为0%(0/15),0%(0/15),刺五加组和26.67%(4/15)和0%(0/15),0%(0/15)和26.67%(4/15)在3-methyladenine组,分别。所以组中的所有动物幸存的三个时间点。没有显著区别SAP组和刺五加和3-methyladenine组()。

3.2。钠Taurocholate-Induced SAP由刺五加注射液和3-Methyladenine治疗缓解

光显微镜观察如下。在SAP组中,建模后的病理变化随时间增加。3 h组,胰腺腺泡的水肿、脂肪液化,间质充血、水肿,间质增宽,小叶差距扩大,炎性细胞浸润,局灶性坏死,间质出血观察(图1(一),他×200)。在12 h和24 h组,腺泡的消失,和脂肪液化,间质水肿、出血、炎症细胞浸润、出血、坏死和小叶轮廓与时间(图伤害增加1 (b),他×200)。这样组,胰腺的组织学结构保持正常(图1 (c),他×200)。胰腺组织的病理变化在刺五加和3-methyladenine组好过那些在12和24小时(SAP组数据1 (d)和1 (e),他×200)。刺五加和3-methyladenine的胰腺组织损伤组相比显著增加,所以组在24 h(图1 (f),)。

这些结果显示,胰腺病理评分和SAP组明显高于血清艾米水平所以组3、12和24小时(),他们两人逐渐增加为12,24小时在SAP组(或0.01),这表明SAP大鼠模型成功建立。胰腺病理评分和血清艾米3-methyladenine水平明显下降,刺五加组比SAP组在12和24小时(或(图0.01)2),这表明3-methyladenine和刺五加扮演了一个角色在减轻SAP大鼠的胰腺损伤。

3.3。胰腺腺泡细胞的自噬抑制了刺五加注射液和钠Taurocholate-Induced 3-Methyladenine治疗SAP

通过TEM如图所示,有许多自噬小体和autophagolysosomes胰腺腺泡的细胞;吞下了重要的内容是退化在大多数自噬小体;观察线粒体肿胀在SAP组(图3 h3(一个)×15000);更多的自噬小体和autophagolysosomes胰腺腺泡细胞,线粒体肿胀,腺泡的核染色质着边,和核凝结和解散被观察到在这个组(图12和24小时3 (b)×15000)。相比之下,一些自噬小体和autophagolysosomes胰腺腺泡的细胞被观察到3,12日和24 h组(图3 (c)×15000),表明自噬的胰腺腺泡细胞参与了SAP的发生和发展。我们的研究结果表明,在透射电镜下,胰腺腺泡细胞的自噬小体数量和autophagolysosomes 3-methyladenine和刺五加组小于在SAP组在12和24小时而其他表演在胰腺组织中温和(数字3 (d)和3 (e)×15000),表明3-methyladenine和刺五加的作用抑制不正常胰腺腺泡细胞的自噬。

3.4。PI3K / Akt信号通路抑制了刺五加注射液和3-Methyladenine钠Taurocholate-Induced SAP

LC3-II自噬囊泡膜是一种通用标记(23]。用作自噬小体的标志,和它的水平在某种程度上反映了自噬小体的数量(24]。Beclin-1参与降解途径的自溶酶体,自噬起始的标志(25,26]。在这项研究中发现的相对表达水平LC3-II Beclin-1蛋白质,LC3-II, Beclin-1,和胰腺组织PI3K-III mRNA在SAP组明显高于组3,12和24小时(),他们逐渐增加为12,24小时在SAP组(),和他们的相对表达趋势符合胰腺病理评分和血清艾米的水平,表明PI3K / Akt信号通路与SAP的发生和发展有关。本研究的结果表明,LC3-II的相对表达水平,Beclin-1, PI3K-III mRNA在胰腺组织显著降低3-methyladenine和刺五加组比SAP组在12和24小时(或0.01)(数据4(一),4 (b),4 (c)),这表明3-methyladenine和刺五加抑制PI3K / Akt信号通路的影响。此外,免疫印迹分析表明,蛋白质含量LC3-II和Beclin-1显著减少刺五加和3-methyladenine组相比在SAP组12和24小时(或0.01)(数据5(一个),5 (b),5 (c))。

3.5。NF -κB信号通路抑制了刺五加注射液和3-Methyladenine钠Taurocholate-Induced SAP

我们的研究结果表明,核NF -的相对表达水平κB p65蛋白和核NF -κB p65 mRNA在胰腺组织SAP组明显高于所以组3、12和24小时()。他们逐渐增加3 12和24 h在SAP组(),和他们的相对表达趋势符合胰腺病理评分和血清艾米的水平,这表明NF -κB信号通路与SAP的发生和发展有关。这些结果表明NF -核的相对表达水平κB p65 mRNA和NF -核κB p65蛋白在胰腺组织显著降低3-methyladenine和刺五加组比SAP组在12和24小时()(数据6(一)和6 (b)),这表明3-methyladenine和刺五加的作用抑制NF -κB信号通路。

3.6。刺五加和3-Methyladenine组之间比较的所有索引3、12、24小时

没有显著差异在刺五加和3-methyladenine团体之间的所有索引指定时间点()。

3.7。相关分析

3、12和24小时胰腺病理评分在治疗组血清艾米水平呈正相关,核NF -κB p65 LC3-II Beclin-1蛋白质相对水平,核NF -κB p65 LC3-II Beclin-1, PI3K-III mRNA在胰腺组织中相对水平()。

4所示。讨论

通过胆胰管注射牛磺胆酸盐钠是一种常用的方法建立SAP大鼠模型(21]。多项研究表明,该模型可用于研究SAP的发病机理由于良好的重复性和可比性27]。Ohmuraya和Yamamura28和桥本等。29日)发现,当Atg 5基因被淘汰,鼠标美联社被caerulein诱导,从而减少ATG5胰腺腺泡细胞的自噬^−−/老鼠和胰蛋白酶原的激活。因此,美联社的严重程度明显降低。Mareninova et al。30.]发现实验AP诱发时,液泡膜出现在胰腺腺泡的细胞是一个双膜和自噬LC3-II标志存在于液泡膜。因此,他们认为,这些来自自噬空泡。他们还发现,半消化状态的细胞内容和胰蛋白酶原存在在这些空泡,这进一步证实了胰蛋白酶原激活可能与异常有关胰腺腺泡细胞的自噬。有三种可能的原因解释不正常的胰腺腺泡细胞的自噬发生在美联社(31日]。(1)在早期阶段,自噬是出于某种原因过度激活。因此,大量的自噬小体不能及时清除,导致异常积累。(2)后期的自噬,自噬体与溶酶体不能融合和自噬体不能及时清除由于溶酶体功能障碍,导致异常积累。(3)后期的自噬,自噬体与溶酶体融合形成autophagolysosomes,但不同类型的溶酶体水解酶活动的数量减少。因此,这种物质在autophagolysosomes退化不能被清除,导致异常autophagolysosomes积累。证实,美联社的严重程度是通过阻止或减轻抑制大量自吞噬泡的形成(20.,29日,32]。杨et al。20.)发现,当NF -κB通路抑制,美联社的严重程度减轻,Beclin-l LC3-II水平和自噬空泡的形成减少。他们推测,美联社的严重性是缓解由于抑制胰腺腺泡细胞的自噬。冯et al。32)使用白介素(il - 22生成22日)转基因小鼠和野生型老鼠注射il - 22生成重组腺病毒引起的建立AP模型caerulein,发现美联社的严重程度明显降低。他们认为,这可能是因为bcl - 2家族蛋白可能会阻止胰腺腺泡细胞的自噬体的形成结合Beclin-1。总之,异常引起的胰腺腺泡细胞自噬过度自噬或堵塞的自噬途径的激活可以促进美联社的发生和发展,而胰腺腺泡细胞的自噬抑制通过各种各样的方式,这在一定程度上改善异常自噬,胰蛋白酶原激活异常,减少和减轻美联社在某种程度上的严重程度。本研究的结果显示,胰腺腺泡的细胞自噬异常参与SAP的发生和发展,这是符合上述文学。

Lupia et al。33)使用淘汰赛PI3K伽马基因的老鼠准备AP模型,发现胰腺腺泡细胞的损伤和坏死明显减少。贾和太阳34)发现,当PI3K伽马基因被淘汰,老鼠美联社诱导胰腺腺泡细胞的液泡,LC3-II粒子的数量,和胰蛋白酶原的活性显著降低,表明PI3K增强胰腺腺泡的细胞自噬,促进激活纤溶酶原,物,进一步加速细胞死亡。这一现象表明,PI3K / Akt信号通路调节自噬是一个重要的途径。在这项研究中发现PI3K / Akt信号通路与SAP的发生和发展,这是符合上述文学。

Djavaheri-Mergny et al。35]表明NF -κ肿瘤坏死因子- B信号通路抑制自噬诱导α。Schlottmann et al。36发现,典型的NF -κB信号通路可以抑制自噬的表达水平下调Atg5 Beclin-1,促进细胞凋亡和炎症消退。大鼠AP模型,Beclin-1蛋白质的表达水平增加时,NF -κB信号通路被激活(37]。宫等。19)报道,PI3K / Akt信号通路激活在SAP的早发性。通过提高NF -的磷酸化κ(我κB)抑制剂,Akt可以减少我的激活κB蛋白质合成,进一步激活NF -κb .同时,Akt也可以由NF -κB,形成一个积极的反馈。我们的研究结果表明,NF -κB信号通路与SAP的发生和发展有关。因此,我们推断,PI3K / Akt信号通路时同时抑制NF -κB信号通路抑制。

3-Methyladenine PI3K抑制剂。自噬体的形成和代PtdIns3P取决于PI3K-III。PtdIns3P可以增加蛋白质的水平包含基因序列FYVE或细胞质中的PX autophagosomal膜的形成。与Beclin-1 PI3K-III可以结合形成一个复杂的参与在自噬体的形成38]。因此,它是目前成熟的自噬抑制剂。元等。6)表明,相比SAP组在同一时间点,胰腺Beclin-1蛋白质的表达水平和肺组织减少,病理改变减轻,艾米和血清炎性细胞因子il - 1的水平β在3-methyladenine治疗组下降,这表明3-methyladenine可能抑制胰腺腺泡细胞的自噬通过抑制PI3K / Akt途径和在一定程度上缓解SAP-induced阿里的严重程度。

刺五加注射液可以上调一氧化氮含量和超氧化物歧化酶活性和表达下调血清艾米的水平,因此扮演着重要的角色在减轻胰腺的病理损伤SAP大鼠(16]。范et al。39]发现刺五加可以通过阻止NF -减弱急性肺部炎症κB信号通路。干预的NF -κB信号通路已被证明是一个目标AP的治疗(40]。陈(41)估计,刺五加对SAP-induced ALI大鼠具有保护作用通过抑制NF -的表达κ我们以前的研究表明,刺五加可能通过抑制NF -发挥影响κB信号通路,进而抑制炎症反应,减轻SAP-induced脑损伤的老鼠,因此防止老鼠SAP-induced脑损伤(17]。

本研究的结果表明,3-methyladenine和刺五加的作用抑制自噬的胰腺腺泡的异常细胞,也有抑制PI3K / Akt的影响和NF -κB信号通路。这一现象表明以下。(1)3-Methyladenine抑制自噬激活胰腺腺泡细胞的异常可能通过抑制PI3K / Akt信号通路或抑制NF -κB信号通路。NF -κB信号通路时同时抑制PI3K / Akt信号通路抑制。(2)刺五加可能抑制自噬激活胰腺腺泡细胞的异常通过抑制NF -κB信号通路或抑制PI3K / Akt信号通路。PI3K / Akt信号通路时同时抑制NF -κB信号通路抑制。研究结果进一步表明,PI3K / Akt和NF -κB信号通路都是相互关联的,而不是互相独立的。在SAP的发生和发展,NF -κB LC3-II Beclin-1, PI3K Akt可能不是一个简单的上游和下游的关系;其他信号通路和监管机制也可能参与,如mTOR通路、钙、和氧自由基。一些细胞因子的共同参与下,信号通路之间的过境点存在,他们甚至可能构成一个非常复杂的循环网络。当然,需要进一步的研究来证实这一假定。

相关分析的结果和TEM结果进一步证明刺五加和3-methyladenine可能发挥他们的治疗效果通过抑制PI3K / Akt或NF -κB信号通路,抑制自噬的激活胰腺腺泡的异常细胞在SAP。刺五加治疗效果是类似3-methyladenine治疗SAP。

我们的研究结果表明,刺五加和3-methyladenine没有影响在降低死亡率,表明治疗SAP是一个全面和个性化的过程。我们推测,刺五加和3-methyladenine极限值在大鼠死亡率却改变胰腺损伤。此外,简单的药物可能是效率不及联合医药集团。例如,重复应用高剂量脂多糖的老鼠可能导致胰腺组织损伤本身;然而,它不能诱导SAP (42]。应用caerulein和脂多糖结合治疗大鼠可以成功产生SAP (43]。治疗剂量的刺五加和3-methyladenine不够可能是一个不利的死亡率的另一种解释。

总之,3-methyladenine和刺五加对SAP大鼠的治疗作用。刺五加优于3-methyladenine的便宜的价格,方便管理,广泛的药理作用,和一些不良反应。我们相信,刺五加对SAP大鼠的治疗效果是值得进一步临床应用。

相互竞争的利益

作者没有利益冲突。

作者的贡献

萧红王设计的研究;萧红Wang Guoxiong周、刘Chun Ronglong魏、和顺兴朱镕基进行研究;顺兴竺Yuefen徐、吴Mengjie和清苗导致实验测定;萧红王、清苗进行统计分析;萧红王先生和吴Mengjie写道。

确认

这项工作是在南通大学实验动物中心的支持下,南通大学的神经再生重点实验室和病理学系,南通大学附属医院。这项研究是由江苏省中医药管理局(没有。YB2015149)。