研究植物化学的成分、抗氧化和抗炎作用两个撒哈拉沙漠以南的植物:Piliostigma reticulatum和Piliostigma thonningii

文摘

本研究的目的是执行的叶子的植物化学的筛查Piliostigma reticulatum和Piliostigma thonningii、确定酚类、黄酮类、单宁和糖methanolic提取内容,评估他们的抗氧化活性用DPPH和abt测试,并测试其抗炎作用在体外使用燥热引起白蛋白变性抑制方法。植物化学的筛查发现茶多酚和生物碱在植物的叶子。收益率的提取研究范围从7%到18%p . reticulatum为16%和4%p . thonningii。酚醛内容methanolic提取的p . reticulatum是74.66±1.76μGAE g / mL,显著高于p . thonningii(56.54±1.24μGAE g / mL)。这两种植物表现出良好的抗氧化活性。事实上,DPPH测试的IC50值为8.88±0.11μ克/毫升p . reticulatum和17.64±0.68μ克/毫升p . thonningii。abt化验,IC₅₀值的两个工厂,分别为9.78±1.83μg / mL和13.47±2.62μg / ml,统计比较,明显高于IC₅₀标准的30.76±0.18μ克/毫升。叶提取物对白蛋白热变性越小植物都有效。的活动p . reticulatum的确是相当的标准和一个集成电路吗₅₀值为121.43±1.55μg / mL和更高的比p . thonningii与集成电路₅₀值为170.15±1.09μ克/毫升。这些结果表明,植物表现出显著的抗氧化和抗炎活动。因此,他们的化合物可以作为抗氧化剂和抗炎药物潜在的应用。

1。介绍

氧化应激时细胞接受过度生产的含氧自由基超过他们的抗氧化能力1]。氧化应激可导致炎症在许多情况下,如温度和辐射过剩但通常其结果(2]。含氧自由基是炎症介质,在吞噬或干预保持炎症状态(3- - - - - -5]。事实上,超氧化物离子(O₂^{- - - - - -})是与成纤维细胞的增殖,过氧化氧(H₂O₂)行为激活的转录因子,如NFkB和一氧化氮(NO)干预血管张力的调节(6]。氧化应激和炎症之间的关系或许可以解释为什么分子抗氧化作用使适合使用抗炎治疗(7]。本研究抗炎活动的兴趣是由于炎症是一个重要的组件的慢性疾病,有越来越多的证据表明过度炎症有很大的影响与压力相关的疾病的生理病理学,今天是75%到90%的人类疾病(8]。自古以来,植物起到了重要的作用在许多疾病的治疗。在这项研究中,我们的目的是比较两个非常相似的抗氧化和抗炎活动和广泛使用的撒哈拉以南的尝试:Piliostigma reticulatum和Piliostigma thonningii。这些植物属于石莲子的家人和塞内加尔和苏丹之间存在整个地区(9]。形态,这两种灌木高度达到5 - 10米(10),看起来很相像,很容易混淆尤其是在塞内加尔;它们有相同的方言的名字“Nguiguis”[11]。然而,p . thonningii可以区分一个铁质软毛豆荚和树叶,不分裂,大比p . reticulatum(8- - - - - -12]。在传统医学中,所有使用这些灌木。树叶含精油的抗菌效果非常相似(8],他们使用的输液或煎煮非常有效的几种疾病与炎症背景如腹痛、风湿、头痛、和伤害(10]。在目前的研究中,对酚类和糖含量这两种植物的叶子,甲醇提取物的抗氧化和抗炎作用进行评估,以阐明其治疗属性。

2。材料和方法

2.1。准备的提取

的叶子Piliostigma reticulatum和Piliostigma thonningii收集逃往植物园的安踏迪奥普大学在达喀尔。他们干在树荫下两周,粉,然后重提取。我们使用不同的溶剂极性增加:石油醚(PE)、二氯甲烷(DCM),二氯甲烷/甲醇(80/20)和甲醇。20 g的每个植物和200毫升的浸渍溶剂四天在室温下不断搅拌。获得提取过滤然后集中在旋转蒸发器压力下干燥。原油提取被储存在4°C为进一步使用。

2.2。植物化学的初步筛选

定性测试协议之前所描述的Kwaji et al。13,14)被用来检测生物碱的存在或缺乏(Dragendorff,梅耶和瓦格纳试剂),类黄酮(Mg-HCL测试),单宁(氯化铁试剂),萜类化合物(氯仿和集中HSO汽车贸易公司₄)、固醇(利伯曼的反应)和saponosides。

2.3。总酚含量测定(TPC)

甲醇叶提取的两种植物被用来确定协议后的酚的浓度含量Folin Ciocalteu试验(15用细微的修改。解决甲醇制备的粗提取液稀释浓度的1000μg / mL,另外两个稀释准备:500μ克/毫升和250年μ克/毫升。0。5毫升的浓度和2.5毫升的Folin-Ciocalteu试剂(10%)和4毫升的Na₂有限公司₃(7.5%)。30分钟后孵化45°C, 765海里的吸光度测定。值比较一个空白样品。结果表示为没食子酸(GAE)μ克/毫升。标准曲线绘制绘制吸光度对没食子酸的浓度。一式三份的样品进行了分析。

2.4。总类黄酮含量测定(交通)

类黄酮的含量是由使用氯化铝(比色法15]。0.5毫升的稀释methanolic提取的植物(1毫克/毫升)和3.2毫升蒸馏水和150年μL纳米₂(5%)。5分钟后,150年μL (AlCl₃(10%)添加,然后6分钟后,1毫升氢氧化钠(1米)补充道。30分钟后孵化在室温条件下,溶液的吸光度是阅读510海里。量化的交通是基于槲皮素溶液的标准曲线。类黄酮含量被表示为槲皮素等效μ克每毫升的提取。一式三份的样品进行了分析。

2.5。总单宁含量测定(TTC)

修改后的布罗德赫斯特和琼斯法(15]之后确定单宁含量两种植物甲醇叶提取物,用儿茶素作为参考化合物。100年μL的提取(1毫克/毫升)添加到3毫升的香草醛溶液在甲醇(4%)和1.5毫升的浓盐酸。2分钟后孵化默默无闻,吸光度是阅读在500海里。TTC计算的儿茶素的校准曲线。单宁内容表示为儿茶酸当量μ克每毫升的提取。一式三份的样品进行了分析。

2.6。总糖含量测定(TSC)

硫acid-phenol方法(16)是用来确定总糖含量p . reticulatum和p . thonningii甲醇提取物。1毫升的提取(1毫升/ mg)添加到1毫升的苯酚(5%),然后添加5毫升浓硫酸(H₂所以₄)。经过10分钟的搅拌和孵化的30分钟30°C,吸光度是阅读在488海里。葡萄糖的TSC决心使用校准曲线。糖被表示为内容G相当于μ克每毫升的提取。一式三份的样品进行了分析。

2.7。抗氧化活性

2.7.1。DPPH测试

提取的反激进主义的活动进行了测试使用2.2 -diphenyl-1-picryl-hydrazyl (DPPH)和抗坏血酸作为一个积极的控制(17]。0.5毫升的DPPH (79μg / mL)添加的浓度范围提取(5 - 100μg / mL)。30分钟的反应是培养在室温下默默无闻。当DPPH减少抗氧化剂分子,其紫颜色变成黄色。吸光度是阅读在517 nm和清除活动估计比例使用以下方程:

集成电路₅₀估计使用自由基清除对提取的图像和标准浓度。浓度测试三次,平均计算。

2.7.2。abt的文章

测试是基于一种抗氧化剂的能力稳定蓝颜色的阳离子自由基abt⁺(2,2 - azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfate)捕获一个质子,并将其转变为无色abt⁺(18]。

abt的溶液(7毫米)是由混合72毫克的abt 13.24毫克的过硫酸钾(2.45毫米)在20毫升蒸馏水。混合物在黑暗中孵化了16个小时。abt - +解决方案(7毫米)和蒸馏水稀释到0.7±0.02在734 nm的吸光度。1.9毫升的这个解决方案添加到600μL提取溶液在不同浓度(5 - 100μg / mL) (19]。孵化后7分钟在室温下,吸光度测量在734海里。

空白是由用甲醇代替提取解决方案。清除活动估计比例使用以下方程:

集成电路₅₀估计使用自由基清除对提取的图像和标准浓度。浓度测试三次,平均计算。

2.8。抗炎活性

评估的抗炎活性p . reticulatum和p . thonningii叶子,燥热引起的抑制蛋白质变性协议(20.,21)之后,一些细微的修改。双氯芬酸钠药物被用来作为参考。0.05不同浓度(40毫升μ克/毫升到1000μg / mL)的提取和引用混合0.45毫升的牛血清蛋白(BSA)(5%)和pH值与1固定在6.3 N盐酸。

混合管是在37°C孵化20分钟;然后,温度是提高了20分钟57°C。2.5毫升的磷酸缓冲溶液(PBS) (pH = 6.3)被添加到每个反应管和吸光度测量660海里。控制试管中蒸馏水和BSA;包含的产品控制试管蒸馏水和提取。抑制的百分比计算使用以下公式:

所有的浓度进行了测试三次,平均使用。

2.9。统计研究

总phenolic-sugar内容、抗氧化剂和体外抗炎活动分析结果显示为意味着±SD(一式三份的读数n= 3)。数据分析与GraphPad棱镜6版本6.01和评估使用一个未配对t以及和单向方差分析方差分析之后,图基的多重比较测试。被认为是具有统计学意义的差异 。

3所示。结果与讨论

3.1。产量和植物化学的筛选

四个提取不同的颜色和每个工厂方面均获得。在图提取收益率1。收益率范围从7%到18%p . reticulatum为16%和4%p . thonningii。对于每个溶剂,之间没有显著差异的收益率两个植物提取精华。溶剂的极性越高,提取的收益率越高。因此,收益率methanolic提取植物来说都是更重要的。

植物化学的初步筛选结果分组表1。这两个p . reticulatum和p . thonningii叶含有多酚、单宁、黄酮和生物碱。类固醇只发现在石油醚和二氯甲烷p . thonningii叶萃取精华,DCM /甲醇和DCM提取物中萜类化合物的存在p . reticulatum。只有p . thonningii叶子含有皂苷。提取溶剂的DCM /甲醇和甲醇有更高的植物化学物质的浓度比其他溶剂。

3.2。总酚、类黄酮、丹宁酸和糖含量

考虑到植物化学的化合物更集中在甲醇提取物,我们选择使用它们来继续我们的学习。总酚含量(TPC)估计没食子酸的校准曲线表明,甲醇提取物的两家工厂p . reticulatum和p . thonningii包含74.66±1.76 GAEμGAE g / mL和56.54±1.24μ分别g / mL。总类黄酮(交通),使用槲皮素作为标准,计算表明,类黄酮的浓度p . thonningii甲醇叶提取高(21。59±0。75年的量化宽松政策μg / mL)比较p . reticulatum甲醇叶提取物(13.57±0。92年的量化宽松政策μg / mL)。根据儿茶素的校准曲线,p . reticulatum甲醇叶提取物含有更多的单宁(58.29±0.94μ比的g / mL)p . thonningii提取(33.87±1.09 CEμg / mL)。总糖的浓度p . reticulatum甲醇叶提取高(71.79±2.57通用电气μg / mL)比较p . thonningii甲醇叶(13.34±1.82通用电气μg / mL)(表2)。

3.3。抗氧化活性

3.3.1。DPPH测试

DPPH的清除能力的结果p . reticulatum和p . thonningii叶子呈现在图2。对于植物,观察DPPH减少从最小的浓度。10点μg / mL,甲醇的叶子中提取的p . reticulatum和p . thonningii开始出现显著的清除能力,分别达到了57.25%和49.75%。抑制持续上升到100年的浓度μg / mL达到85.89%p . reticulatum80.98%,p . thonningii。的集成电路₅₀值p . reticulatum和p . thonningii甲醇叶子提取物分别为8.88±0.11μg / mL和17.64±0.68μ分别g / mL。这些值在统计上低,抗坏血酸相比,集成电路₅₀(1.74±0.28μg / mL)(表3)。然而这些结果并不矛盾,植物都有很高的抗氧化作用。

3.3.2。abt化验

abt的清除能力的结果p . reticulatum和p . thonningii叶子呈现在图3。两种植物的抗氧化活性是注意到所有浓度。在25岁μg / mL,甲醇的叶子中提取的p . reticulatum和p . thonningii开始出现显著的清除能力,分别达到了68.21%和60.13%。抑制不断上升,达到87.42%p . reticulatum83.63%,p . thonningii在100年的浓度μ克/毫升。的集成电路₅₀值p . reticulatum和p . thonningii甲醇叶子提取物分别为9.78±1.83μg / mL和13.47±2.62μg / mL,分别在统计学上比较,明显高于IC₅₀Trolox (30.76±0.18μg / ml)(表3)。

3.4。体外抗炎活性

热诱导的抑制蛋白质变性协议被用来评估提取物的抗炎作用。为此,不同浓度(40到1000μg / mL)的两种植物甲醇叶提取物是与相同浓度的参考药物相比,双氯芬酸钠,呈现在图4。在最低浓度,p . thonningii抑制作用最高,达到37.68%。从120年开始μg / mL,标准显示其抗炎活性显著增加。增加最大浓度达到72.82%,超过了两个工厂的活动(为58.69%p . reticulatum67.39%,p . thonningii)。的动力学之间没有统计上的显著差异p . reticulatum和双氯芬酸,而活动的p . thonningii相对较低。标准的高集成电路₅₀值(116.4±0.73μg / mL)相比p . reticulatum(121.43±1.55μg / mL)p . thonningii(170.15±1.09μg / mL)(表4)。

4所示。讨论

许多植物产生大量的次生代谢产物,以确保他们的保护,交流和适应环境。这些代谢产物的多样性,具有结构性变化,负责许多这些植物的生物活性属性(22]。本研究着重于两个撒哈拉沙漠以南的植物的药用价值;p . reticulatum和p . thonningii,特别是在于其丰富的次生代谢产物。事实上,所有的植物部分(根、树皮、豆荚和树叶)似乎因此被用于传统医学治疗属性。在目前的研究中,p . reticulatum和p . thonningii进行评估的酚类和糖含量、抗氧化活性和抗炎作用。两种植物的叶子被晒干,然后提取使用增加极性的溶剂(石油醚、二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇(80/20),和甲醇);四种提取不同的收益率和颜色。植物化学的筛选进行了揭示分子家属中包含两种植物的叶子。methanolic提取被选中作进一步测试。多酚的测定和糖浓度首次进行,其次是评价抗氧化剂和抗炎活动。收益率两植物叶的提取物为每个工厂在统计上具有可比性。Methanolic提取代表植物的产量最高。的确,溶剂的提取功率对收益率有重要影响(23]。这个结果可以解释,甲醇是一种极性溶剂允许与离子和极性固体相互作用,从而促进他们的解散24]。这也可以证实了植物化学的筛选的结果,强调了丰富的植物的叶子在不同极性分子主要是单宁、黄酮和生物碱。这些结果后,methanolic提取物被选为研究的延续。丰富的植物化学的实验证明这两种植物的叶多酚这解释了他们的药用价值。实际上,黄酮醇和oxychromonol隔绝的叶子p . reticulatum显示一个有趣的抗菌和抗真菌活性25]。此外,C-methylflavonols隔绝p . thonningii表现出很强的消炎和抗菌效果(26]。DPPH测试和abt试验被用来评估叶提取物的抗氧化活性的植物。本研究的结果显示显著差异的两个植物的反激进主义的权力,所以p . reticulatum最高的活动。单宁的抗氧化能力是证明,通过沉淀浓缩单宁的植物中包含(27]。然而,的抗氧化活性p . thonningii仍然是重要的。事实上,体内抗氧化作用的研究p . thonningii叶子已经表明,他们能够保护肝脏免受四氯化碳引起的氧化损伤通过清除自由基和脂质过氧化反应的行为(28]。测试我们的提取物抑制潜在的燥热引起变性的蛋白进行了评估他们的抗炎效果。事实上,C-methylflavonols孤零零的p . thonningii叶子,已经被证明是比阿司匹林更有效对抗前列腺素的体外生产(22),他们还能防止蛋白质变性证实了相似的抗炎作用方式非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)20.]。事实上,非甾体抗炎药可以抑制,不仅促炎前列腺素的合成,而且蛋白质变性(29日),如白蛋白变性,从而防止自身抗原的生产。的抗炎作用p . reticulatum树皮对carrageenan-induced水肿鼠后肢最近被评估,和methanolic分数水杨酸(一样的效果30.),这表明这种植物的抗炎效果并不局限于它的叶子。

5。结论

因为丰富的类黄酮和单宁,p . thonningii和p . reticulatum发现一个非常有趣的抗氧化和抗炎可能使这些植物显著适合传统医学。我们的研究结果是有前途的,鼓励我们深化调查进行体内和毒性测试更好的理解这些植物提取物作用方式和可能限制他们的使用。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果可按照客户要求定制。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

引用

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