在小鼠炎症模型中，Bergapten可减弱过敏性航空过敏症

摘要

Bergapten(5-甲氧补骨脂素，5-MOP)是一种植物衍生的呋喃香豆素，已证明具有抗炎作用。本研究通过肥大细胞脱颗粒的两个相关途径研究其对过敏性炎症的影响。用化合物48/80和脂多糖(LPS)激活ige不依赖途径，牛血清白蛋白(BSA)作为ige依赖途径的过敏原。研究了bergapten对肥大细胞脱颗粒、中性粒细胞外渗、蛋白浓度、肺组织病理学和氧化应激的调节作用。在10点，30点和100点进行Bergaptenμg/ml for 15 min stabilized mast cells in rat mesenteric tissue from disruption体外当管理体内分别是3 10和30毫克kg⁻¹for 1 h protected mice from fatal anaphylaxis induced by compound 48/80. Similarly, treatment of LPS-challenged mice with bergapten (3, 10, and 30 mg kg⁻¹)for 24 h significantly decreased neutrophil infiltration into bronchoalveolar lavage fluid, mean protein concentration, and inflammatory cell infiltration of pulmonary tissues when compared to the saline-treated LPS-challenged control. In addition, lung histology of the bergapten-treated LPS-challenged mice showed significantly less oedema, congestion, and alveolar septa thickening when compared to the saline-treated LPS-challenged disease control. LPS-induced oxidative stress was significantly reduced through increased tissue activities of catalase and superoxide dismutase and reduced malondialdehyde levels on treatment with bergapten. In the triple antigen-induced active anaphylaxis, daily administration of bergapten at 3, 10, and 30 mg kg⁻¹分别对致敏小鼠和致敏小鼠进行10天的过敏性休克保护。总的来说，我们的研究证明了bergapten在小鼠炎症模型中减弱过敏性航空过敏症的能力，提示在这种情况下它可能具有治疗作用。

1.介绍

过敏是人类的常见病之一，也是致死率和致死率最高的疾病之一。过敏性疾病，如过敏反应、哮喘、鼻炎和特应性皮炎的发病率近年来有所上升，尽管人口的总体健康状况有所改善[1,2]。

过敏反应是一种I型超敏反应，是由肥大细胞和嗜碱性细胞在激活时释放化学介质而引发的急性过敏反应[3.]。一种被称为肽能途径的肥大细胞激活途径不依赖于ige，它被碱性分泌因子激活，这些碱性分泌因子是多阳离子化合物，包括化合物48/80 [4]。间在肥大细胞中表达的几个表面受体是该抗体的免疫球蛋白E（IgE）的高亲和性受体。该受体，也称作为Fc小量RI（的FcεRI），介导肥大细胞活化的IgE的途径[5,6]。由任一的IgE无关的或IgE依赖性机制肥大细胞的刺激触发的信号转导途径的激活其引发生化事件的级联，导致炎性介质的快速释放。这些包括组胺，蛋白酶，类花生酸和细胞因子如肿瘤坏死因子α（TNF_α）和白介素（IL-6，IL-8，IL-4，和IL-13），分别。总之，这些预制和新创合成介质引起过敏性炎症和过敏反应[7]。

目前可用的过敏性疾病治疗方案包括吸入皮质类固醇，如氟替卡松，肥大细胞稳定剂如内多克罗米，白三烯抑制剂如zileuton和zafirlukast，以及长效药物β₂-肾上腺素能激动剂，如沙丁胺醇不幸的是，治疗成功控制这些过敏状况的局限性主要与药物的副作用有关[8- - - - - -12，因此寻找副作用少或没有副作用的其他疗法势在必行。自然资源的替代品已成为当前研究的焦点。其中一种从植物中提取的产品是bergapten(5-甲氧补骨脂，5-MOP)，一种糠醛香豆素，用于化妆品和制药行业治疗皮肤病，如牛皮癣和白癜风[13,14]。实验和临床研究的证据已报道其抗炎作用[15,16,抗增殖17]，和抗癌作用[18,19]。鉴于其已经建立的抗炎作用，我们试图研究bergapten在小鼠炎症模型中治疗过敏性超敏反应的潜在好处。

2.材料

2.1。动物

雄性C57BL / 6小鼠(25 - 30 g)和雄性sd大鼠中(250 - 300 g)从野口购买纪念医学研究所,加纳大学Legon,和安置标准实验室条件下(温度25±2°C 12 h光暗周期)动物屋的药理学、药学和制药科学学院KNUST,加纳。实验动物的处理符合动物福利条例(美国农业部1985年;美国代码，42南加州大学§289d）和人文关怀和实验动物的使用）的公共卫生服务政策（PHS 2002年。实验动物使用是经药学系的伦理审查委员会和制药科学，KNUST。

2.2。药物和化学品

佛手内酯（5- methoxypsolaren，5-MOP），化合物48/80（C2313），脂多糖（LPS）;大肠杆菌、血清型(O55:B5)和地塞米松购自Sigma-Aldrich(美国圣路易斯)。牛血清白蛋白(BSA)从PAA购买实验室(德国马尔堡),破伤风白喉百日咳(DPT)疫苗免疫接种单位,获得南Suntreso政府医院(加纳库马西),三氯乙酸(TCA),硫代巴比土酸(稍后通知),重铬酸钾,钠碳酸氢盐,正磷酸盐二氢钠一水合物,氯仿,磷酸氢二钠是从BDH采购化学品(英格兰,全蛋白酶抑制剂鸡尾酒片购自Santa Cruz Biotechnology(美国达拉斯)。

3.方法

3.1。化合物八十零分之四十八诱导的肥大细胞脱颗粒在大鼠肠系膜组织体外

Kaley和Weiner的方法[20.之后，又做了一些轻微的修改。处死一只斯普拉格道利大鼠，切除肠系膜组织并收集到6个不同的培养皿中，每个培养皿中含有10 ml Ringer-Locke溶液。放入各自的培养皿(I-VI)， 100个μ中加入下面的的升：我:Ringer-LockeII:生理盐水(0.9% w/v NaCl)III:色甘酸二钠(10μg ml⁻¹)IV-VI：佛手内酯10，30和100 μg ml⁻¹分别

Samples were incubated for 15 min at 37°C. Test tissues with the exception of the Ringer–Locke-treated naïve control were further incubated for 10 min with 1 μ克C48 / 80。All tissues were immersed in formaldehyde solution (4%) containing toluidine blue (0.1%, pH 2.5) for 30 min and transferred through acetone and xylene twice for fixation and staining of mast cells, respectively. Tissues were mounted on slides and observed under a high power light microscope (Leica DM2500 M) at ×40 magnification. Mast cells were counted and the percentage protection from degranulation was calculated in five randomly selected fields.

3.2。复方48/80诱导小鼠全身过敏反应

采用Choi等人先前描述的方法诱发全身过敏反应[21]的方法稍加修改。C57 BL/6 mice (25–30 g) were randomized into 5 groups (ñ= 5)，并给予下列处理之一:组(幼稚对照组):生理盐水10ml kg⁻¹,口服第二组(阳性对照):色甘酸二钠50 mg kg⁻¹,i.p。Groups III–V (test groups): bergapten 3, 10 and 30 mg kg⁻¹,口服分别

小鼠接受C48/80 (8 mg kg)⁻¹,i.p。)1 h later and monitored for death due to anaphylactic shock within 1 h. Total number of deaths in each group was expressed as percentage mortality using the following formula:

3.3。脂多糖诱导的肺部炎症

Lowry的修正方法[22)之后。C57BL/6小鼠(25-30 g)随机分为6组(ñ= 5)，并给予下列处理之一:组(幼稚对照组):生理盐水10ml kg⁻¹,i.p。第二组(疾病控制):生理盐水10ml kg⁻¹,i.pIII组(阳性对照):地塞米松10mg kg⁻¹,i.p。Groups IV–VI: bergapten 3, 10, and 30 mg kg⁻¹,口服分别

测试小鼠用LPS攻击（大肠杆菌， O55:B5, 0.5 mg ml⁻¹)雾化30分钟，同时用盐处理的幼稚对照组小鼠接受10 ml kg的PBS⁻¹,i.p。只)。24 h后处死颈椎脱位。

3.3.1。支气管肺泡灌洗液的收集和分析

The trachea was carefully exposed through a midline incision, and the lungs were washed 3× with 1 ml of cold normal saline avoiding contamination of luminal contents with blood and damage to the lung tissues. The trachea was cannulated, and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was collected by aspiration with a Pasteur pipette into Eppendorf tubes and used for neutrophil count, and protein content estimation is as follows:

(1)中性粒细胞计数。在中性粒细胞计数恢复的BALF用自动分析仪（希森美康KX-21N，希森美康美国公司，伊利诺伊州，美国）以一式三份进行，在每个样品上。

(2)总蛋白质含量。支气管肺泡灌洗液在258离心（Wagtech，C257-120，UK）×在4℃下放置10分钟。使用自动临床分析仪(Flexor Junior, Vital Scientific B.V.，荷兰)，将细胞游离上清用于三次试验中总蛋白浓度的测定。

3.3.2。肺组织和肺细胞浸润的组织学

每个肺的左叶被小心地切除，并立即用10%缓冲福尔马林固定。肺组织在自动组织处理器(TP 1020，徕卡生物系统，Wetzlar，德国)中处理，使用徕卡EG 1160包埋机(徕卡生物系统，Wetzlar，德国)进行连续乙醇脱水，二甲苯清洗，石蜡包埋。横截面为3μ米用切片机（RM 2155个RTS，徕卡生物系统公司，韦茨拉尔，德国）制造。将组织用苏木精和曙红（H＆E）染色，固定在载玻片上和数字光显微镜下观察（DM 750，莱卡微系统，韦茨拉尔，德国）配有数码相机（ICC 50 HD，莱卡微系统，韦茨拉尔，德国）。以盲方式进行观察的组织病理学发现。用ImageJ的分析工具（版本1.50i）进行定量分析。一种方法，通过扎雷等人描述。[23]与修改用于评估肺细胞浸润的程度。的评分系统如下：0，无细胞;1，少数细胞;2,a ring of cells 1 cell layer deep; 3, a ring of cells, 2–4 cell layers deep; and 4, a ring of cells >4 cell layers deep in the peribronchiolar and perivascular regions. Alveolar cell infiltration was assessed as follows: 0, no cell infiltrates or widen septa; 1, few infiltrates with widen septa; 2, cell infiltrates with widening septa; and 3, filled alveolar air spaces with thickened septa. Scores for peribronchiolar, perivascular, and alveolar cell infiltration were summed into 11–point composite score.

3.4。测定氧化应激标记物

采用改良的Lowry法用LPS诱导C57BL/6小鼠全身炎症反应[22]如前所述。每个肺的右叶用PBS洗涤，并迅速储存在-80℃直至使用。The frozen lungs were thawed and homogenized in ice-cold buffer (Triton X-100 (1%), protease inhibitor cocktail, Tris HCl (150 mM), NaCl (150 mM), and glycerol (10%), pH 7.4) to obtain a 10% w/v homogenate. The homogenate was centrifuged (Wagtech, C257-120, UK) for 20 min at 6440 × 。上清蛋白量采用Bradford法定量。上清液小心地移入干净的Eppendorf管中，并保存在−80℃。在3个重复中，使用Synergy H1杂交多模式酶标仪(BioTek Technologies, Winooski, VT, USA)对上清进行生化分析，以检测以下氧化应激标记。

3.4.1。过氧化氢酶(CAT)

辛哈法[24用轻微修饰的方法测定过氧化氢酶的活性。其原理是基于过氧化氢酶水解过氧化氢(H₂O₂) to water(水₂O)和分子氧(O₂)。简单地说，到100μl aliquot of tissue supernatant, 1 ml phosphate buffer (0.01 M, pH 7.0) and 400 μl H₂O₂增加(1.18 M)混合物在室温下孵育5分钟。加入2 ml(3:1)冰醋酸和重铬酸(5%)的混合物，在620 nm处测定吸光度。过氧化氢酶活性的一个单位，定义为能降解1 mmol H的酶的数量₂O₂以其摩尔消光系数39.4 M表示⁻¹厘米⁻¹。

3.4.2。超氧化物歧化酶(SOD)

采用Misra和Fridovich描述的方法测定超氧化物歧化酶的活性[25)，只作轻微修改。简单地说,500年μl组织上清加入150μ升冰冷氯仿和750 μl ethanol (96% v/v), vortexed for 1 min, and then centrifuged (Wagtech, C257-120, UK) at 716 ×for 20 min. To 500 μl得到的上清是500μ加入l EDTA (0.6 mM)和1ml碳酸氢盐缓冲液(0.1 M, pH 10.2)。反应是由加50引起的μl adrenaline (1.3 mM). Absorbance was measured at 480 nm against a blank. Activity of SOD, measured as the quantity of the enzyme required to inhibit the auto-oxidation of adrenaline, was calculated using the following equation:

SOD活性以每mg蛋白的单位表示，其中1单位酶活性为25℃下防止肾上腺素自氧化所需的酶量，计算公式为:

3.4.3。脂质过氧化和丙二醛(MDA)

该方法通过Heath和封隔器[描述26]被用来测量丙二醛(MDA)，作为脂质过氧化的一个指数。简单地说，将1 ml组织提取物加入2 ml三氯乙酸(TCA, 20%)和1 ml硫代巴比妥酸(TBA, 0.5%)的混合物中，在95℃加热30分钟，迅速冷却，4472倍离心(Wagtech, C257-120, UK)10分钟。200年一式三份,μl aliquot of supernatant was pipetted into 96-well plates and absorbance read at both 532 nm and 600 nm, respectively, to correct for nonspecific absorbance. MDA concentration (nmol/mg protein) was calculated with its molar extinction coefficient of 1.56 × 10⁻⁵米⁻¹厘米⁻¹:

3.5。三重抗原诱导的活性过敏反应

在本研究中，Gohil等人描述的方法[27)之后。C57BL/6小鼠(25-30 g)单次注射致敏500只μl牛血清白蛋白(0.5 mg ml)⁻¹南卡罗来纳州），和500 μl三联抗原10⁷的百日咳杆菌,i.p。小鼠随机分为5组(ñ= 5)并给予下列治疗之一，持续10天:组(幼稚对照组):生理盐水10ml kg⁻¹,口服第二组(阳性对照):强的松龙10 mg kg⁻¹,口服III-V组(试验组):bergapten 3、10、30 mg kg⁻¹,口服分别

老鼠被挑战250μl牛血清白蛋白(0.5 mg ml⁻¹, )最后一次治疗2小时后。第二次抗原注射后1小时内死亡率按公式计算:

3.6。统计分析

用GraphPad for Windows版本6.01（的GraphPad Prism软件，圣地亚哥，USA）进行数据分析。结果were presented as mean ± standard error of the mean (SEM), and the statistical differences between treatment groups compared using one-way analysis of variance (ANOVA), followed by Dunnett’s post hoc test for multiple comparisons, with a 95% confidence interval. The log-rank (Mantel–Cox) test was used to analyze Kaplan–Maier survival curves.被认为是统计显著。

4.结果

4.1。Bergapten对复方48/80诱导大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒的影响

显微镜观察和随后的大鼠肠系膜组织切片的肥大细胞计数显示紫色的完整的肥大细胞(1)和脱粒的肥大细胞(2)(图)1(一)和1 (b))。C48/80处理肠系膜组织后，肥大细胞明显脱颗粒(图)1 (b))，与Ringer-Locke幼稚对照组的完整肥大细胞组织学比较(图)1(一))。在(10,30,100)时服用μg ml⁻¹），佛手柑内酯显著抑制肥大细胞脱粒（图1（d）- - - - - -图1（f）)与经盐碱处理的c48 /80损伤肠系膜组织比较(图)1 (b))。当定量时，在盐水处理的C48/80挑战肠系膜组织中有87.98±2.45%的肥大细胞脱颗粒，而在ring47 - locke初始对照组中则有4.47±0.98%(图)图1（g）)。与c48 /80刺激组相比，上述剂量的bergapten显著降低了肥大细胞脱粒率，分别为27.20±1.89%、16.73±2.78%和9.71±2.34%(图)图1（g）)，从而使肥大细胞分别稳定60.78±0.56%、71.25±0.33%和78.27±0.11%。与盐处理的c48 /80挑战组相比，cromoglycate二钠显著降低肥大细胞脱粒程度至22.44±2.69%(图)图1（g）)，使肥大细胞具有65.54±0.24%的稳定性。

4.2。Bergapten对复方48/80诱导小鼠全身过敏反应的影响

采用复方48/80诱导全身过敏反应模型研究bergapten的抗过敏活性。腹腔注射C48/80可在10分钟内诱导对照组小鼠100%致死性休克(图)2)。死亡由于过敏性休克相比盐水处理的对照组时被显著在所有的佛手内酯治疗组延迟。Bergapten at 3–30 mg kg⁻¹与盐处理组相比，小鼠的死亡潜伏时间分别延长至15、30和35分钟(图)2)。Similarly, treatment with disodium cromoglycate delayed death of mice to 26 min when compared to the saline group (Figure2)。

4.3。lps诱导小鼠肺部炎症

4.3.1。Bergapten对BALF中性粒细胞外渗及总蛋白的影响

LPS雾化后，中性粒细胞外渗到支气管肺泡灌洗液(BALF)增加。中性粒细胞水平明显升高，为10.83±0.83×10^3.细胞/μ升在盐水处理的LPS激发的疾病控制时相比，盐水治疗的幼稚控制其值均低于可检测水平（图图3（a）)。Bergapten给药剂量分别为3,10,30mg kg⁻¹BALF中性粒细胞浸润显著降低至5.00±1.44×10^3.细胞/μl, 4.17 ± 0.83 × 10^3.细胞/μl, 2.33±0.17×10^3.细胞/μ与盐处理lps刺激组比较(图)图3（a）)。Similarly, dexamethasone significantly reduced neutrophil infiltration to 4.17 ± 0.83 × 10^3.细胞/μ升时相比，疾病控制（图图3（a）)。

lps诱导的肺部炎症导致蛋白渗漏到支气管肺泡灌洗液增加。BALF总蛋白显著升高至4.23±0.23 g l⁻¹与未处理组相比，盐处理lps激发的疾病控制为0.40±0.31 g l⁻¹(图图3（b）)。All doses of bergapten 3–30 mg kg⁻¹导致平均蛋白浓度显著降低2.47±0.15 g l⁻¹， 1.77±0.33 g l⁻¹,和0。73.± 0.27 g l⁻¹，与盐水处理的lps刺激对照组进行比较(图)图3（b）)。地塞米松如预期的那样显著降低蛋白浓度至2.27±0.15 g l⁻¹(图图3（b）)。

4.3.2。Bergapten对lps诱导的肺损伤和炎症细胞浸润的影响

进行肺组织病理分析，以评估佛手内酯的对LPS诱发的肺部炎症的效果。盐水处理天然对照组中观察到肺正常架构。肺泡空间是很少或根本没有周围细支气管细胞堆积（图清晰4(一))。在盐水处理的lps挑战疾病控制中，炎症细胞向间质和肺泡浸润增加，细胞分布在支气管周围、血管周围和实质区域。肺泡气隙明显减少，血管充血和水肿明显(图)4 (b))。Bergapten(3、10、30 mg kg⁻¹)与盐水处理的lps挑战的疾病控制相比，这些病理改变减轻，产生轻度、中度和显著的病理改变，水肿、充血和肺泡间隔增厚减少(图)4 (d)- - - - - -4 (f))。地塞米松同样可以减轻LPS引起的病变(图)4 (c))。Zare等人先前描述的方法[23被用来量化这些影响，形成一个复合炎症评分。原始盐水对照组的细胞浸润评分为0.22±0.11，而盐水对照组的细胞浸润评分为3.67±0.33(图)4 (g))。与盐度处理的lps刺激组相比，在3 mg kg、10 mg kg和30 mg kg时，Bergapten可显著降低细胞浸润分数为1.81±0.29、0.89±0.29和0.44±0.11⁻¹(图4 (g))。地塞米松显著减少细胞浸润到1.63±0.32，相对于对照（图4 (g))。

4.4。Bergapten对氧化应激标志物的影响

脂多糖诱导了实验动物的氧化应激，抗氧化酶水平的测定证明了这一点。与初始对照组(16.75±0.60 mU/mg)相比，经盐渍处理的疾病控制组组织上清中的CAT活性显著降低至5.67±0.63 mU/mg蛋白(图)5(一个))。Bergapten给药剂量为10和30mg kg⁻¹与盐处理LPS的疾病控制相比，CAT活性显著提高至9.45±0.83 mU/mg蛋白和15.11±0.37 mU/mg蛋白。随着3 mg kg的添加，蛋白含量增加到6.54±0.55 mU/mg⁻¹佛手内酯的剂量虽然无关紧要获得（图5(一个))。Dexamethasone significantly elevated CAT activity to 9.13 ± 0.88 mU/mg protein relative to the saline-treated LPS challenged disease control (Figure5(一个))。

SOD activity in supernatant was reduced to 6.62 ± 1.70 U/mg protein in the saline-treated LPS challenged disease control as compared to 30.25 ± 1.23 U/mg protein in the naive control (Figure5 (b))。Administration of bergapten at 3, 10, and 30 mg kg⁻¹与盐处理的脂多糖刺激的疾病控制相比，SOD活性分别提高到12.38±1.05 U/mg蛋白、16.78±1.83 U/mg蛋白和24.75±1.52 U/mg蛋白(图)5 (b))。Dexamethasone as expected significantly increased the activity of SOD to 18.06 ± 1.21 U/mg protein compared to the LPS-challenged disease control (Figure5 (b))。

Unlike the decreased activities of CAT and SOD, there was significant increase in MDA levels to 68.79 ± 2.48 nmol/mg protein in the saline-treated LPS-challenged disease control compared to 12.38 ± 1.70 nmol/mg protein in the saline-treated naïve control (Figure5 (c))。Bergapten给药剂量分别为3,10,30mg kg⁻¹与盐碱处理LPS胁迫下的疾病控制相比，MDA水平显著降低至44.79±5.18 nmol/mg蛋白，31.17±3.42 nmol/mg蛋白，20.86±1.78 nmol/mg蛋白(图)5 (c))。与盐碱处理的LPS挑战疾病控制相比，地塞米松显著降低MDA水平至43.48±5.18 nmol/mg蛋白(图)5 (c))。

4.5。佛手柑内酯三重影响抗原诱导主动过敏反应

腹腔注射牛血清白蛋白(BSA)致敏和致敏小鼠引起过敏性休克，盐处理的原始对照组小鼠死亡率为100%(见表)1)。Bergapten给药剂量分别为3,10,30mg kg⁻¹，分别对致敏和致敏小鼠有剂量依赖性的保护，与原始对照组相比，存活率为40%、80%和100%(表)1)。同样，与原始对照组相比，强的松龙在致敏和受到刺激的小鼠中有80%的存活率(表)1)。

5.讨论

我们探讨在肥大细胞脱粒的两个相关的途径上的过敏性炎症佛手内酯（5-MOP）的效果：其中，分别，化合物48/80和脂多糖（LPS）来诱导炎症的IgE依赖性途径和IgE的依赖性途径，其中使用牛血清白蛋白作为变应原的来源（BSA）。前者是通过与巨噬细胞和嗜碱细胞的主要途径的IgG的相互作用介导的，而后者是由结合到高亲和力的IgE受体的聚集引起（FCε在肥大细胞和嗜碱性细胞表面[28]。

机械上，化合物48/80刺激肥大细胞并启动信号转导通路的激活，导致肥大细胞脂质双层膜的通透性增加，导致干扰。化合物48/80刺激磷脂酶C (PLC)的释放，最终导致磷脂酰肌醇4,5 -biphospahte (PIP)的水解₂)，导致肌醇1,4,5-三磷酸(IP)的生成_3.）和二酰基甘油（DAG）[29]。IP_3.与受体结合的细胞内钙离子存储位点释放钙离子的[Ca^{2 +}]。另一方面，DAG激活蛋白激酶C (PKC)，通过释放引起过敏性炎症和过敏反应的促炎介质来刺激转录因子[29]。虽然经确定组胺在该过敏性休克牵连，有趣的是，相对于组胺到自然过程[从肥大细胞中化合物48/80触发器高达约90％的释放30.]。本实验采用复方48/80大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒模型，研究了bergapten对肥大细胞的直接保护作用和稳定作用。从显微镜观察和随后肠系膜组织切片的肥大细胞计数可以看出，bergapten抑制了肥大细胞的脱颗粒。我们的发现表明bergapten可能稳定脂质双分子层膜和/或通过阻止化合物48/80结合抑制组胺释放，这可能导致膜通透性增加和干扰。在全身性过敏性休克模型中，bergapten通过显著延迟过敏性休克的死亡来保护肥大细胞免于脱颗粒。

脂多糖诱导的炎症是一种标准化模型，主要用于研究系统性炎症反应中炎症通路的激活机制。在我们的研究中，与盐水对照组相比，经盐水处理的LPS组蛋白浓度增加，中性粒细胞外溢进入BALF。lps诱导的肺部炎症导致巨噬细胞活化，随后嗜中性粒细胞增多，蛋白质渗漏到间质和肺泡中[31]。肺泡上皮细胞，间质，和微血管内皮变得肺部炎症过程中受到损害[32,33]。研究还证实，脱细胞旁中性粒细胞迁移途径机械增大，细胞毒性和凋亡介质释放，通过与邻近上皮细胞的相互作用导致溃疡性病变[34]。一个良好的抗炎剂，因此，应该能够抑制炎性细胞浸润到肺组织。佛手内酯既嗜中性粒细胞外渗显著还原成BALF和蛋白质浓度。这是由肺组织病理学发现其显示降低的细胞浸润的数量支撑。在唯一的盐水治疗组相比，具有增加的渗透和在支气管周，血管周围和内部的薄壁区域的小区分配的LPS激发的组观察到了正常的肺结构。佛手内酯减毒这些有害的病理变化，并相比于生理盐水处理的LPS激发的组时表现出轻度至中度至明显改善了肺结构。

LPS诱导的全身性炎症和氧化应激之间显著相关已经建立[35,36]。因此，需要抗氧化剂来应对这些氧化性损伤的威胁[37]通过转移的极大产生的自由基，并转换成更小的活性中间体[38]。从研究中，佛手内酯抑制氧化应激在肺组织上清液。标记物，例如CAT和在组织上清液SOD在盐水处理的LPS激发的动物中降低显著相比于盐水治疗的动物。抗氧化防御酶如超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）作用于时产生，从而保护细胞免受活性氧的有害反响自由基。丙二醛的组织水平（MDA），脂质过氧化反应的产物和氧化应激的阳性指标[39,40与盐处理lps挑战的动物相比，bergapten处理的动物显著减少。bergapten这种明显的抗氧化作用与之前的一些研究一致，这些研究将其抗氧化活性归因于其酚含量的存在[41- - - - - -44]。

在活性过敏模型中，还研究了ige依赖性肥大细胞脱颗粒的参与。三联抗原与牛血清白蛋白(BSA)共同诱导的活性过敏反应是研究I型过敏症状效果的关键模型。在这项试验中，bergapten对之前致敏并受到抗原刺激的小鼠产生了40%到100%的存活率来对抗活性过敏反应。牛血清白蛋白的球蛋白部分是引发过敏反应的过敏原。BSA致敏小鼠的过敏反应由介导短潜伏期反应的免疫球蛋白G (IgG)和介导长潜伏期反应的免疫球蛋白E (IgE)介导[45,46]和沉淀其在初次致敏所产生并出现在血液的抗体。I型超敏反应是由肥大细胞释放组胺介导的。从三重抗原诱导的过敏性反应活性，佛手内酯可能可能抑制组胺从肥大细胞中释放。

6.结论

总之，本研究揭示了佛手柑内酯的在炎症的小鼠模型中证明其能力减弱过敏性气道引起的过敏性管理过敏相关的炎症性疾病的潜在益处。

数据可用性

由这一特殊研究产生的数据包含在手稿中。所有数据都存放在加纳库马西的夸梅·恩克鲁玛科技大学的研究仓库。如提出要求，作者将考虑访问这些数据。

的利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

致谢

作者非常感谢药理系，药学院和制药科学，健康科学学院，科学与技术的克瓦米·恩克鲁玛大学，库马西，加纳的所有技术人员。这项研究形成佛手柑内酯上一个更大的研究的一部分，导致哲学，哲学硕士硕士奖。

参考

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