文摘
抑制剂对组蛋白去乙酰酶抑制剂(hdac)被确认为表观遗传药物靶点治疗各种恶性肿瘤通过一些分子机制。本研究旨在调查机制可能的抗肿瘤效应的HDAC抑制剂chidamide (CDM)在胆管癌(CCA)。芯片的基因表达进行分析预测的表达hdac CCA, CCA患者在临床组织样本进行验证。接下来,增殖,迁移,入侵,自噬和凋亡的人类CCA QBC939 SNU308细胞测定治疗后清洁发展机制在不同的浓度。的乙酰化水平FOXO1 QBC939和SNU308细胞的细胞核和细胞质决心超表达和抑制HDAC3之后。一个QBC939-implanted异种移植裸鼠模型建立了清洁发展机制的进一步探索角色在体外。CCA HDAC3是突出表现在组织和表示CCA患者的不良预后。CDM显著抑制细胞增殖、迁移和入侵QBC939和SNU308细胞,而诱导自噬和凋亡减少HDAC3的表达。清洁发展机制促进FOXO1乙酰化作用通过抑制HDAC3,从而诱导细胞自噬。此外,清洁发展机制抑制肿瘤的生长体内通过和差别HDAC3对这些FOXO1乙酰化作用归纳。总的来说,这项研究表明,清洁发展机制可以表现出抗肿瘤效果与CCA通过促进HDAC3-mediated FOXO1乙酰化作用,从而确定新的治疗途径CCA的治疗。
1。介绍
胆管癌(CCA)是一种常见的胆道恶性肿瘤发生率增加与疑似危险因素如肥胖和丙型肝炎病毒感染(1,2]。由于目前缺乏敏感的早期生物标志物,CCA经常延迟诊断这种疾病的晚期,这样5年生存率小于10%3]。可用的治疗方法包括目标、联合化疗和免疫治疗和个性化的治疗方法,但没有治疗治疗先进的疾病。
Chidamide (CDM),一种新的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂,据报道发挥抗肿瘤作用的T细胞肿瘤通过多种机制(4]。CDM在多发性骨髓瘤细胞,细胞凋亡增长逮捕和caspase-dependent的方式(5),但CDM是仅仅研究CCA的上下文中。组蛋白去乙酰酶抑制剂(hdac)是一个家庭的酶能够催化去除乙酰基的acetyl-lysine残留在组蛋白和非组蛋白的蛋白质(6]。hdac发挥至关重要的作用在许多癌症通过调节蛋白质的表达和功能参与癌症的起始和进展7]。选择性对hdac抑制剂已被确认为治疗目标表观遗传治疗各种恶性肿瘤通过一些分子机制(8,9]。HDAC抑制剂也展示了强有力的和具体的抗癌干细胞活动;清洁发展机制可以专门促进白血病干细胞的细胞凋亡和原发性急性髓系白血病CD34(+)细胞浓度和时间的方式(10]。此外,HDAC2是一个重要的因素调节癌症干细胞表型的沉默可以促进MG63具备干细胞和Saos2细胞(11]。HDAC抑制剂可以抑制迁移和入侵CCA细胞系(12),和其他研究表明,HDAC抑制剂CG200745发挥抗肿瘤效应CCA细胞系通过microrna针对河马通路(13]。HDAC抑制剂可以作用于细胞应激反应通路,减少血管新生血管生成基因的差别通过对这些如VEGF、HIF-1,和以挪士抑制新血管的形成,结合经典化疗药物,干扰CCA细胞迁移(14]。发表研究报告,HDAC抑制剂CDM加强与利妥昔单抗抑制弥漫性大b细胞淋巴瘤的生长肿瘤通过调节CD20 [15]。CCA的潜在目标之一,FOXO1有着密切的关系,肿瘤对药物的敏感性16]。CCA的细胞之间的交互FOXO1乙酰化和Atg7调节自噬流量,促进细胞凋亡,而会产生一个抗肿瘤效应(17]。二甲双胍促进自噬通过AMPK / SIRT1-FOXO1通路在糖尿病肾病,这表明FOXO1在自噬的参与18]。通过促进SIRT1-FOXO1-ATG14 axis-dependent自噬,芍药醇防止十六段的脂质代谢障碍HepG2损伤(19]。然而,迄今为止没有CDM在CCA的报告。在这项研究中,湿着手探索CCA清洁发展机制能否发挥抗肿瘤效应细胞和测试相关的机制HDAC3-mediated FOXO1脱乙酰作用。
2。材料和方法
2.1。道德声明
当前研究伦理委员会批准的第一人民医院永康,隶属于杭州医学院,并严格按照执行赫尔辛基宣言。之前所有参与者签署知情同意文档样本集合。动物实验与实验动物机构批准执行。
2.2。细胞筛选、培养和转染
人类CCA细胞株QBC939 SNU308从Shunran购买生物科技有限公司有限公司(中国上海)在杜尔贝科的修改鹰培养基培养(DMEM) (Gibco英杰公司有限公司,美国有10%的胎牛血清(Gibco) 10μg / mL链霉素和100μ青霉素g / mL有限公司5%2孵化器在37°C。收集细胞对数生长期在6-well胰蛋白酶消化和播种后板的密度 每口井和正常培养24小时。到达大约75%融合,细胞转染的指令Lipofectamine 2000试剂(英杰公司)与sh-NC (5 - - - - - -CACCGCTTCCATTCTGAGGACTACACGAA-3 ),sh-HDAC3 (5 - - - - - -AAAAGCTTCCATTCTGAGGACTACATTCG-3 ),oe-NC(转发:CCGCTCGAGATGAGGCCGCGGCAT,反向引物:CCGCAATTCGAGTCACCFCCTCCTGT),和oe-HDAC3质粒(转发:CCGCTCGAATTCTGAGGAGCAT,相反:CCGCAATTCGAGGCCGFCCTCCTGT)。转染后48小时内,sh-HDAC3的转染效率和oe-HDAC3被西方墨点法测量。质粒是购自上海GenePharma有限公司(上海,中国)的浓度和使用50 ng / mL,而CDM (C860936 Seedior,中国上海)治疗是2.5μM (CDM低,CDM-L) 5μ米(CDM中间,CDM-M)和10μ米(CDM高,CDM-H)。
2.3。细胞计数Kit-8 (CCK-8)测定
QBC939并维持SNU308细胞在DMEM完全培养基补充10%的边后卫在37°C公司5%2孵化器。QBC939 SNU308细胞被播种到96孔板的密度 细胞/嗯,90μ每口井的L细胞悬液,而空白控制在90年被孵化μL媒介。文化后一夜之间,不同浓度的细胞治疗CDM最终浓度为0.1,0.5,1.0,2.5,5.0,10.0和20.0μm .空白的控制和控制井孵化只有10μL媒介。有六个复制井为每个治疗。48小时后,10μL CCK-8测试解决方案添加到每个培养1小时,于是吸光度测量在使用标450海里。细胞抑制率是通过公式计算 。独立实验重复了三次。
2.4。划痕试验
对数生长期BC939 SNU308细胞均匀接种到2井(70μ信用证)的密度 细胞/在scratch插入放置在一个小培养皿。一小部分血清添加到培养皿和孵化器的孵化过夜。第二天,当细胞已经坚持稳定时,划痕塞小心地删除。细胞与PBS轻轻洗两次,900年μL无血清培养基添加,然后细胞立即拍摄(0小时)。随后,100μL CDM的浓度25、50和100μM添加实验组织,100年μL培养基添加到控制菜肴。文化孵化器48小时后,这些细胞被拍照。两个洞之间的距离的插入是0.5毫米。两张照片的划痕差异价值CCA细胞的迁移距离。独立实验重复了三次。
2.5。集落形成实验
治疗CDM 48小时后,QBC939和SNU308细胞使胰蛋白酶化,播种到6-well板每)(约600个细胞,和培养14天形成克隆的殖民地。接下来,这些细胞被固定用甲醛(上海浦东Jizhihua有限公司,上海,中国),沾0.1%结晶紫(Baoman生物技术、杨浦、上海、中国),并在显微镜下计数。独立实验重复了三次。
2.6。流式细胞术
治疗CDM 48小时后,QBC939和SNU308细胞收集和PBS洗了三次。细胞在195年被停职μL膜联蛋白V绑定缓冲在黑暗中,沾染了5μL膜联蛋白V-FITC和10μLπ在五分钟内,总共20分钟。随后,样本被流式细胞仪由FlowJ流式细胞术和分析。独立实验重复了三次。
2.7。Transwell化验
欧共体人工基底膜融化在4°C在一夜之间被稀释1:9与无血清培养基的最终浓度1毫克/毫升,于是40μL的混合物添加的聚碳酸酯膜24-well预冷transwell室。然后,钱伯斯在孵化器孵化5小时包含5%的股份有限公司2在37°C到聚合欧共体人工基底膜形成凝胶。后丢弃多余的液体,纯DMEM 70剂量的称呼μL /室添加和孵化37°C 0.5小时来补充矩阵胶水和删除多余的介质下使用。去除血清24小时后,这些细胞被消化,离心机,resuspended DMEM没有最终的浓度的边后卫 细胞/毫升。接下来,200年μL细胞悬液的添加到参议院的基底膜水化,和700年μL (pre-cooled DMEM含有10%的边后卫是添加到众议院。孵化后37°C, 5%的股份有限公司2湿度孵化24小时,商会被室的细胞和基底膜擦了棉花花蕾。商会与甲醇固定30分钟,然后沾0.1%结晶紫为20分钟。最后,美国商会倒置晾干,在倒置显微镜下观察、拍照。我们清点的数量细胞通过五个随机选择的视觉领域的膜和平均。
2.8。西方墨点法
胰蛋白酶消化后收集细胞和细胞溶解增强里帕缓冲区包含蛋白酶抑制剂(Boshide有限公司,武汉,中国),和蛋白质浓度是由BCA蛋白分析工具包(Boshide有限公司,武汉,中国)。等量的蛋白质10% sds - page分离和转移到PVDF膜,其次是封锁的非特异性结合5% BSA在室温下2小时。一夜之间,随后,膜被在4°C的环境与主要兔抗体HDAC3 (Ab32369, 1: 2000年,Abcam) LC3B (ab51520, 1: 2000年,Abcam) ULK1 (ab203207, 1: 2000年,Abcam) Beclin-1 (ab207612, 1: 1000年,Abcam)和Ac-FOXO1 (AF2305, 1: 1000;亲和力生物科学、江苏、中国)。膜是孵化与HRP-conjugated山羊anti-rabbit二级抗体(ab205719 1: 2000年,Abcam)在室温1小时。发射极耦合逻辑工作解决方案(美国EMD微孔)应用可视化膜在室温下1分钟。ImageJ被用来量化每个乐队的灰色的水平,与GADPH(兔子,ab181602, 1: 10000)的加载控制。实验重复三次。
2.9。临床样本
癌症组织收集26例(16个男性和10个女性,47 - 73岁,平均年龄的 年)与CCA接受手术切除在永康第一人民医院,隶属于杭州医学院。CCA术后病理切片证实了。远处转移和恶病质患者被排除在研究之外。CCA组织获得手术后,然后用70%乙醇固定和切片观察组织学特征。在解剖过程中,受影响的区域仔细概述。此外,免疫细胞和血管渗透的地区被排除在样本以减少污染。此外,正常胆管组织26个病人胰十二指肠在永康第一人民医院,隶属于杭州医学院,收集控制(20.]。
2.10。免疫组织化学
临床组织样本脱蜡,石蜡部分患者,治疗methanol-H 3%2O220分钟。接下来,部分与0.1 PBS洗3分钟,紧随其后的是水浴抗原检索。被封锁的部分与正常山羊血清(c - 0005,上海Haoran生物科技有限公司,有限公司,上海,中国)在室温20分钟和应用主要抗体HDAC3 (Ab32369, 1: 2000;Abcam)和Ac-FOXO1 (AF2305 1: 200年,亲和力生物科学)一夜之间在4°C。第二天,与二次孵化的部分抗体山羊anti-rabbit免疫球蛋白(ab6785, 1: 1000年,Abcam) 37°C 20分钟。HRP-labeled链霉亲和素蛋白工作方案(0343 - 10000 U,一摸生物技术有限公司,有限公司,北京,中国)添加到部分为孵化37°C 20分钟。轻拍(ST033、广州Weijia科技有限公司有限公司,广州,中国)是用于开发的部分,这与苏木精复染色(PT001、上海Bogu生物技术有限公司,中国,上海)1分钟。是法蓝的部分在1%氨水,脱水,清除和安装在显微镜下观察5随机选择大功率领域从每个部分,每个字段的100个细胞数。实验重复三次。
2.11。免疫沉淀反应(IP)
细胞裂解的细胞溶解缓冲区包含50 mM Tris-HCl (pH值7.4),150毫米生理盐水、10%甘油、1毫米EDTA, 0.5% NP-40,蛋白酶抑制剂混合物,离心分离的细胞碎片被淘汰。细胞溶解产物与1然后孵化μg anti-FLAG抗体(ab125243 Abcam)和15μL蛋白A / G珠子(圣克鲁斯生物技术)2小时。广泛的洗涤后,珠被置于沸水浴5分钟。蛋白质sds - page分离,转移到硝酸纤维素(美国微孔,泰梅库拉,CA),然后受到西方墨点法评估FOXO1的乙酰化水平。
2.12。在裸鼠异种移植肿瘤
36健康裸小鼠(北京药理学研究所、中国医学科学院,北京,中国)年龄在6 - 8周分别被安置在一个SPF动物实验室湿度60 - 65%,温度22 - 25°C在12 h光/暗周期,与免费的食物和水。实验经过一个星期的适应环境。
使用慢病毒LV5 (GenePharma) QBC939细胞稳定转染HDAC3过度或过度控制构造。细胞(100μL,对 细胞)然后将皮下注射到老鼠的左肩。老鼠分为Ctrl, CDM-H(90毫克/公斤CDM的腹腔内注射),CDM-M(45毫克/公斤CDM的腹腔内注射),CDM-L(22.5毫克/公斤CDM的腹腔内注射),CDM-H + oe-HDAC3(90毫克/公斤清洁发展机制和腹腔内注射慢病毒携带oe-HDAC3),和oe-NC(注射慢病毒携带oe-NC),每组6只老鼠。政府进行每周两次总共两周。每5天,肿瘤体积计算使用公式计算: 。20天之后,小鼠安乐死,这所有的肿瘤被切除之后,体重,拍照。此外,心脏,肝脏,脾脏,肺和肾脏的老鼠在每组收集,分配比的测定了清洁发展机制在肿瘤组织和各器官在258 nm紫外线。
2.13。他走时染色
肿瘤组织样本与生理盐水冲洗,固定在4%多聚甲醛30 - 50分钟,脱水,脱蜡,嵌入在石蜡和分段。组织部分被夷为平地,贴在载玻片,干在45°C恒温器、脱蜡、水化。用蒸馏水清洗5分钟后,部分与苏木精染色5分钟,在自来水洗了3秒,分化在1%盐酸乙醇3秒,伊红和复染色5%解决方案3分钟。此后,部分脱水,清除和密封。最后,组织部分可视化荧光显微镜下。
2.14。芯片的基因表达分析
UALCAN数据库(http://ualcan.path.uab.edu/)应用于确定HDAC我的表达(HDAC1 2、3和8),二(HDAC4, 5、6、7、9和10),TCGA IV (HDAC11)和CCA的基于数据库和kaplan meier存活曲线CCA患者的基因表达。
2.15。统计分析
所有这样的测量值 和分析SPSS 21.0(美国纽约阿蒙克的IBM公司)。一个未配对- - - - - -测试是用于比较两组数据,而单向方差分析、重复测量方差分析与图基的事后测试是用于多组数据进行比较。 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。HDAC3 CCA组织中高度表达,并与患者的不良预后有关
我们第一次筛选HDAC的表达我(HDAC1 2、3和8),二(HDAC4, 5、6、7、9和10),和第四(HDAC11) CCA TCGA通过数据库。结果显示高表达HDAC3 HDAC7, HDAC10, HDAC11 CCA样本与正常样本。其中,升高降低的患者存活率CCA(图1(一))。
(一)
(b)
(c)
此外,免疫组织化学结果显示,HDAC3的积极表达显著增加CCA组织与正常胆管组织(图1 (b))。西方墨点法数据进一步表现出HDAC3癌症组织的表达高于正常胆管组织(图1 (c))。上述结果表明,HDAC3十分CCA组织和表达与患者的不良预后有关。
3.2。清洁发展机制抑制扩散、迁移和入侵,但促进细胞凋亡和自噬通过抑制HDAC3 CCA的细胞
CCK-8测试结果呈逐渐下降趋势在QBC939和SNU308细胞的增殖增加CDM浓度(0.1,0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,和20.0μ米)(图2(一个))。QBC939和SNU308计算IC50值0.4392μM和0.3655μM,分别。如数据所示2 (b)- - - - - -2 (d)、集落形成、迁移和入侵QBC939 SNU308细胞减少和CDM剂量依赖性的方式对治疗的反应。综合治疗与CDM-H oe-HDAC3导致更高的细胞集落形成、迁移和入侵比CDM-H单独治疗。此外,CDM治疗促进了QBC939和SNU308细胞的凋亡率,显示响应存在剂量依赖的相关性。然而,QBC939细胞凋亡率和SNU308细胞扩增后综合治疗与CDM-H oe-HDAC3相对于CDM-H治疗(图2 (e))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
免疫印迹结果表明LC-3 autophagy-related蛋白质的表达,ULK1, Beclin-1减少癌症组织(图2 (f)),而CDM治疗导致表达的增加存在剂量依赖的相关性。然而,ULK1 LC-3的表达和Beclin-1减少QBC939 SNU308细胞处理CDM-H + oe-HDAC3 CDM-H +氯喹(CQ;自噬抑制剂)(图2 (g))。综上所述,这些数据证实,清洁发展机制可以抑制增殖、迁移和入侵CCA的同时促进细胞凋亡和自噬通过抑制HDAC3。
3.3。清洁发展机制诱导细胞自噬通过增加FOXO1乙酰化水平
先前的研究已经报道,FOXO1乙酰化作用是参与细胞自噬18,21]。因此,我们推测CDM-induced CCA细胞自噬相关FOXO1乙酰化作用。为了测试这个预测,我们首先用免疫印迹检测FOXO1癌症组织中乙酰化水平。结果显示低乙酰化水平FOXO1癌症组织中比在正常胆管组织(图3(一个)),证明确实是CDM-induced自噬相关FOXO1乙酰化作用。
(一)
(b)
(c)
(d)
随后,我们缺乏细胞诱导自噬。与控制细胞相比,FOXO1的乙酰化水平高在ebs(饥饿治疗)细胞(图3 (b))。IP的结果还显示增加的乙酰化水平FOXO1 ebs -和CDM-H-treated细胞相对于控制细胞(图3 (c))。另外,IP结果提出更高FOXO1乙酰化水平在ebs细胞的细胞质和细胞核比在控制细胞(图3 (d))。这些数据表明,清洁发展机制可以诱导细胞自噬通过增加FOXO1乙酰化水平。
3.4。通过抑制HDAC3清洁发展机制促进FOXO1乙酰化作用
据报道,HDAC3激活的转录FOXO1 [22]。我们进行这项研究调查是否清洁发展机制诱导FOXO1乙酰化作用通过抑制HDAC3。首先,QBC939和sh-HDAC3 SNU308细胞治疗。免疫印迹结果显示,与sh-NC治疗相比,HDAC3蛋白表达减少,而FOXO1乙酰化水平是增强sh-HDAC3-treated细胞(图4(一))。此外,核和胞质分离的细胞后,FOXO1乙酰化水平在细胞核和细胞质中检测到IP。结果表明,FOXO1乙酰化水平也增加了细胞的细胞核和细胞质sh-HDAC3处理(图4 (b)),从而始终显示抑制HDAC3可以加快FOXO1乙酰化作用。
(一)
(b)
(c)
(d)
随后,QBC939和SNU308细胞转染质粒overexpressing HDAC3然后处理清洁发展机制。如图4 (c)HDAC3的蛋白表达减少,而FOXO1乙酰化水平下降与CDM-H细胞治疗。CDM-H的影响HDAC3蛋白质表达和FOXO1乙酰化水平被进一步过度HDAC3否定。核和胞质分离的细胞后,Ac-lysine收集检测FOXO1乙酰化水平。IP结果如图4 (d)表明,FOXO1乙酰化水平更大的细胞核和细胞质CDM-H-treated细胞比oe-NC-treated细胞,而相反的研究结果指出在CDM-H + oe-HDAC3的存在。这些结果作为新证据,抑制HDAC3可能是负责促进FOXO1 CDM乙酰化作用。
3.5。CDM逮捕CCA的生长通过调节HDAC3 / FOXO1轴体内
上述结果证实,清洁发展机制诱导细胞自噬通过抑制HDAC3和诱导FOXO1 QBC939和SNU308细胞乙酰化作用。接下来,我们旨在进一步研究清洁发展机制是否发挥了抗肿瘤作用裸体小鼠轴承CCA异种移植。CCA的小鼠模型建立了通过注入人类CCA QBC939细胞。三个剂量组被设置,包括CDM-L(22.5毫克/公斤),CDM-M(45毫克/公斤),和CDM-H(90毫克/公斤)。如数据所示5(一个)和5 (b)和补充表1清洁发展机制,抑制CCA剂量依赖性的方式的发展。此外,进一步分析CDM在肿瘤和主要器官的分布表明,清洁发展机制主要富集在裸体小鼠的肝脏(图5 (c)),这表明清洁发展机制主要是由肝脏代谢。此外,他走时染色结果表明肿瘤细胞的肿瘤组织控制老鼠紧密排列,大核,细胞质,细胞异型性明显。治疗后清洁发展机制,细胞数量相对减少,取而代之的是纤维组织。更多的纤维组织在场增加CDM剂量(图5 (d))。同时,免疫组织化学染色和免疫印迹结果表明下降HDAC3 CDM-treated小鼠肿瘤组织的表达,而FOXO1乙酰化水平增加剂量依赖性的方式(数字5 (e)和5 (f))。上述结果表明,清洁发展机制可以抑制CCA的生长在活的有机体内。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
最后,我们试图调查是否清洁发展机制的抗肿瘤效应在活的有机体内的监管与HDAC3 / FOXO1轴。如图6(一)CDM-H延迟治疗肿瘤的生长,而进一步HDAC3过度加速了肿瘤的生长。此外,清洁发展机制仍主要分布在肝脏的老鼠接受CDM和oe-HDAC3(图6 (b))。如图6 (c)的肿瘤组织,肿瘤细胞在oe-NC-treated老鼠紧密排列,大核,胞浆少,细胞异型性明显。CDM-H治疗后,细胞在很大程度上减少,被纤维组织取代。相反,治疗CDM-H + oe-HDAC3增加肿瘤细胞的数量和减少纤维组织的形成。此外,免疫印迹结果表明下降HDAC3 CDM-H-treated小鼠肿瘤组织的表达,而FOXO1乙酰化水平增加。进一步过度HDAC3导致相反的结果(图6 (d))。总的来说,这些证据表明CDM可能抑制HDAC3表达式和增加FOXO1乙酰化作用,从而防止CCA的增长在活的有机体内。
(一)
(b)
(c)
(d)
4所示。讨论
CCA是一种致命的疾病,手术和辅助治疗是治疗只有少数情况下(23]。CCA的搜索提高疗效治疗呼吁获得更好的理解其CCA的分子发病机制支持理性疗法的发展。在本文中,我们研究了抗肿瘤效果和潜在CDM机制CCA细胞。我们的实验结果表明,清洁发展机制引起抗肿瘤效应通过抑制HDAC3-mediated FOXO1脱乙酰作用。
根据之前的报道,清洁发展机制抑制胶质瘤细胞的增殖,肺癌,胰腺癌,骨髓瘤细胞(24- - - - - -26]。Jurkat和小屋- 78细胞,治疗与清洁发展机制(2μ米)的差别会导致对这些HDAC3表达式,从而诱导necroptosis [27]。我们目前的研究获得了类似的结果在CCA细胞,而我们的细胞迁移和集落形成实验表明,清洁发展机制抑制CCA的增殖细胞剂量依赖性的方式,也促进了细胞自噬。先前的研究已经表明,mir - 373抑制自噬CCA的细胞通过瞄准ULK1和促进细胞凋亡28]。Dihydroartemisinin,被发现在多种人类癌症有抗肿瘤活性,诱导细胞凋亡和autophagy-dependent CCA细胞的细胞死亡通过DAPK1-BECLIN1通路(29日]。使用自噬作为一种自适应机制,肿瘤细胞可以存活条件下肿瘤微环境的极端的压力,也可以促进侵袭性和抗癌药物的抵抗。CCA的初期发展,细胞自噬可以受损,和相关的积累LC3-II和p62可能反映了缺陷处理自噬小体,而不是自我吞噬率的增加。在临床前研究中,自噬调节器能促进CCA细胞死亡,减少入侵,渲染CCA细胞对化疗敏感。抑制自噬可以促进胆管的致癌性转化细胞,和受损的自噬引起的失活Beclin1可能促进CCA的恶性表型(30.]。抑制自噬也因此被认为是一个新的策略,以防止癌细胞的生长。机械的调查结果在当前的研究中表明,清洁发展机制会产生一个抗肿瘤效应通过抑制HDAC3促进细胞自噬,基于结果的表达减少autophagy-related蛋白质LC-3 Ulk1, Beclin1。CDM据报道是一个HDAC抑制剂(31日),结合利妥昔单抗可以抑制弥漫型大b细胞淋巴瘤(肿瘤的生长15]。此外,抑制HDAC3表达式可以减少骨髓瘤和CCA细胞的增殖32,33]。我们目前的结果表明,与临床CCA HDAC3有明显关联,参与细胞自噬的相关规定。
此外,当前结果CCA细胞表明CDM治疗增加FOXO1乙酰化水平,导致HDAC3活动的抑制和anti-CCA效果。作为一个潜在的治疗目标,FOXO1可以调节人类CCA细胞的自噬流量(17]。此外,FOXO1乙酰化作用与细胞自噬(密切相关18,21]。另外据报道,FOXO1发挥其抗肿瘤作用通过调节肿瘤细胞的自噬17]。因此,FOXO1脱乙酰作用促进细胞自噬(34),但抑制肿瘤细胞的自噬水平可以提高他们的化疗敏感性35- - - - - -37]。最后,我们目前发现精心制作,清洁发展机制改善CCA通过抑制HDAC3的表达,进一步促进FOXO1乙酰化作用,激活自噬CCA的细胞。
5。结论
这项研究表明CDM具有显著的肿瘤抑制效果CCA和CCA最终可能提供一种新的治疗方法。清洁发展机制抑制HDAC3表达和诱导FOXO1乙酰化作用,从而阻碍增殖,迁移,和CCA的入侵细胞,促进细胞凋亡和自噬,最终逮捕CCA的增长(图7)。我们认为,CDM可能协同作用与其他化疗药物治疗CCA。至于FOXO1,进一步的调查可以揭示FOXO1如何提高CCA的药物敏感性肿瘤和抑制,否则必然发展。
数据可用性
生成的数据集/分析在当前的研究中是可用的。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
Yongpan李娜和Jujia郑洁被视为co-first作者。
补充材料
补充表1:清洁发展机制的影响在QBC939肿瘤的裸鼠肿瘤体积和重量。一个行动:肿瘤抑制率。b数据的显示 。 在每组小鼠。 ; 相比之下,控制老鼠。(补充材料)