文摘

聚合物后的炎症反应药物洗脱支架(DES)位置最近成为一个主要问题。过氧物酶体的生物作用proliferator-activated受体-(PPAR -)活化剂thiazolidinedione (TZD)在心血管疾病仍然存在争议。在此,我们研究了吡格列酮的抗炎症作用(PIO)循环外周血单核细胞(跨国公司)患者冠状动脉支架植入后。方法和结果。28例冠状动脉疾病和DES植入被随机分配到吡格列酮(30毫克/天;PIO)或安慰剂(控制;Con)治疗除了标准的最佳疗法。12周的治疗后,血浆高敏c反应蛋白浓度(hs-CRP)、白细胞介素- 6 (il - 6)、肿瘤坏死因子-(肿瘤坏死因子-),矩阵metalloproteinase-9 (MMP-9)显著降低PIO组相比Con组(,0.011,0.008,和0.012,分别地)。DES-induced mRNA的表达il - 6、TNF -,在循环MMP-9跨国公司明显被PIO (、0.012和0.007,分别地)。此外,PIO明显抑制DES-enhanced NF -κB功能和DES-blocked PPAR -活动。机械,DES诱导PPAR -蛋白质泛素化和降解程度,这可以通过PIO完全逆转。结论。PIO治疗减毒DES-induced PPAR损失,NF -κB激活,proinflammation,表明PIO小说可能有直接的保护作用在调制proinflammation DES的时代。

1。介绍

聚合物药物洗脱(everolimus zotarolimus,西罗莫司、紫杉醇等),支架(DES)被称为标准治疗冠状动脉疾病(CAD)接受经皮冠状动脉血管成形术。尽管DES证明疗效和安全性在临床研究中,人体病理数据表示担忧长期治疗和潜在的局部炎症反应(1,2]。此外,据报道,DES与淋巴细胞相互作用引起的过敏反应,巨噬细胞,多核巨细胞,嗜酸性粒细胞和普遍的支架后炎症在动脉段通过解剖(3]。DES-induced炎症反应被发现早在植入后30天,但进展的频率和严重程度在90年180天在猪模型(1]。此外,我们先前的研究发现,DES植入诱导特定系统的炎症状态,增强NF -即可见一斑κB活性,抑制PPAR -活动,升高血浆炎症因子,而no-stent植入或裸金属支架(BMS)植入4,5]。然而,如何完善DES-induced proinflammation仍然未知。

在血管壁和动脉粥样硬化,PPAR -在巨噬细胞表达,T细胞,内皮细胞和血管平滑肌细胞(6,7]。最近的数据表明,合成抗糖尿病的thiazolidinediones噻唑烷二酮类),这被称为PPAR -活化剂,抑制炎性细胞因子生产的细胞单核/巨噬细胞系的[8]。这些催化剂部分抑制基因表达与转录因子的活动如激活蛋白1 (AP-1)和核因子-κB (NF -κB) (9,10]。一些动物的研究已经证明了antiatherogenic服用tzd的影响(11,12]。此外,吡格列酮(PIO)显著降低全因死亡率的发生,糖尿病人群的非致死性心肌梗死和中风的潜在吡格列酮的临床试验在Macrovascular事件(主动)13]和荟萃分析研究[14]。然而,在糖尿病患者的罗格列酮试验的荟萃分析显示,罗格列酮增加心肌梗死和心血管死亡(15]。在动物研究中,发现了PIO增加巨噬细胞凋亡和坏死斑块在先进病变LDLr-deficient老鼠(16]。另一种动物的研究发现,吡格列酮可诱导肝甘油三酯积累过多,增加血浆胆固醇(17]。

这些冲突和争议性的发现强调不确定性关于使用服用tzd atherothrombotic疾病治疗的有效性。PIO是否atheroprotective DES-treated CAD患者的影响仍然未知。在这里,我们进行了一个随机单盲安慰剂对照临床研究调查是否PIO DES-implanted冠状动脉疾病患者的抗炎作用。

2。方法

2.1。病人和研究设计

所有受试者连续招募从西安交通大学第一附属医院。28非糖尿病患者冠状动脉疾病(CAD)和患者接受DES植入被随机分为两组:对照组(案子,)和吡格列酮组(PIO,)。非糖尿病的状态是由消极的糖尿病史,没有抗糖尿病的药物治疗,评估空腹血糖和口服葡萄糖耐量试验(OGTT)。CAD的诊断是在符合世界卫生组织的定义。排除标准包括临床证据的急性炎症,肿瘤和风湿性疾病检查c反应蛋白升高,ESR,肝、肾疾病、严重心力衰竭(NYHA类≥2)、射血分数(EF) < 50%,吡格列酮治疗的禁忌症,患者免疫抑制剂。表1总结所有受试者的人口数据。研究药物(30毫克/天)12周了除了最优标准治疗,包括阿司匹林、氯吡格雷,受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂(acei)或血管紧张素ⅱ受体拮抗剂(arb),和他汀类药物。我们接下来4和12周后患者的两倍。吡格列酮和安慰剂被Zhongmei提供华东制药有限公司有限公司(杭州)。

我们得到了每个病人的医疗和家庭历史和一般信息如吸烟和饮酒病史面试。这项研究符合赫尔辛基宣言,和研究协议已通过西安交通大学的伦理委员会。从受试者知情同意。

2.2。单核细胞(跨国公司)隔离

外周血跨国公司样品药物和在年底前收集药物洗脱支架植入后12周。外周血跨国公司样本被标准聚蔗糖密度梯度离心法分离。包含跨国公司的上层是收获和洗汉克斯平衡盐溶液,然后用PBS。

2.3。促炎细胞因子的血浆浓度

浓度的血浆白细胞介素- 6 (il - 6)、肿瘤坏死因子-(肿瘤坏死因子-),矩阵metalloproteinase-9 (MMP-9)被ELISA化验。ELISA是由增加100μL或200μL(每个样本井在96孔板的商业化酶联免疫试剂盒(ExCell,上海)根据制造商的指示。高敏c反应蛋白(hs-CRP)化验由我们医院的临床中心实验室。

2.4。总RNA隔离和信使RNA检测

总RNA提取从跨国公司RNAfast工具包(Fastgen)根据制造商的协议,和实时逆转录-聚合酶链反应进行,像以前的报告4]。

2.5。NF -κB和PPAR -γDNA结合活性

按照制造商的指示核蛋白质提取(皮尔斯)。NF -κB和PPAR -与NF - DNA结合活性测定κB p65 / p50和PPAR -转录因子分析工具包(Abcam)根据制造商的指示。

2.6。西方墨点法

多克隆和单克隆抗体(圣克鲁斯生物技术)。微Bio-Rad分子分析软件,执行与Gapdh和纠正了所有的值加载。

2.7。统计分析

离散变量表示为数字和百分比和比较的测试。汇总值表示为±SE。倾斜的数据报告为中位数(四分位范围)。分析从基线的变化是由成对的以及。Holm-Sidak双向重复测量方差分析(TWRMANOVA)方法用于所有欺诈和PIO组之间的多重比较先前的报道(4,5]。统计显著性假设的5%错误级别()。

3所示。结果

3.1。一般临床资料

所有28个病人完成12周的随访无药物相关的副作用。患者的特点见表1。PIO和安慰剂组之间没有差异对基线特征。治疗12周后,没有明显的变化在身体质量指数(BMI),体重,腰围与臀围,血压(SBP或类似),空腹血糖和胰岛素,NT-pro BNP, EF的两组基线相比(表2)。考虑到改变体重指数、体重、腰围与臀围,NT-pro BNP和EF在两组之间,没有任何证据表明PIO增加心脏衰竭的发生在当下的研究。总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白治疗后显著降低;然而,两组之间没有差异的减少被观察到。

3.2。吡格列酮减少促炎细胞因子的血浆浓度

在对照组,血浆浓度il - 6、TNF -,MMP-9增加了138±16%,136±15%,和110±7%,分别与基线水平相比,在12周(配对以及,、0.041和0.142,分别地。,数据1(一)- - - - - -1 (c)),表明DES-related促炎的地位。在PIO治疗组血浆il - 6的浓度,TNF -,MMP-9下降了89±8%,64±16%,与基线水平相比,86±6%在12周(配对以及,、0.041和0.037,分别地。,数据1(一)- - - - - -1 (c))。与对照组相比,PIO治疗显著降低血浆il - 6、TNF -和MMP-9浓度(TWRMANOVA、0.008和0.012,分别地)。此外,hs-CRP欺诈和PIO治疗组明显减少,更大大PIO治疗组(TWRMANOVA,、表2)。

3.3。在跨国公司吡格列酮下调促炎因子的表达式

检查是否PIO的减少血浆促炎细胞因子治疗的差别可能与对这些基因的mRNA的表达促炎细胞因子,具有定量实时PCR用于计算mRNA的表达。Con组mRNA的表达il - 6、TNF -,MMP-9增加随访12周与基线相比(配对以及,、0.025和0.105,分别地。,数据2(一个)- - - - - -2 (c))。与Con组相比,PIO治疗显著降低mRNA的表达il - 6、TNF -和MMP-9 (TWRMANOVA,、0.012和0.007分别地。,数据2(一个)- - - - - -2 (c)),这表明PIO减弱DES-induced促炎因子表达式在跨国公司。

3.4。吡格列酮DES-Induced NF -监管κB / PPAR -γ不平衡体内

评估是否吡格列酮与促炎的转录因子NF -κ在跨国公司中,我们测量了核NF -κ在跨国公司(图B DNA结合活动2(一个))。如图2 (d)DES增强NF - DNA结合活性κB (),由PIO减毒(TWRMANOVA,)。

接下来,我们发现p50亚基的表达和NF - p65亚基κ在跨国公司。如图2 (e)PIO治疗显著降低DES-induced p50表达式(TWRMANOVA,),但并没有改变p65表达式。

此外,我们发现PPAR -DES组显著下降(,图3(一个)),由PIO逆转治疗(TWRMANOVA,,图3(一个)),这表明吡格列酮DES-induced NF -监管κB / PPAR -不平衡体内。

3.5。吡格列酮监管的DES-Induced PPAR -γ泛素化和退化

提炼蛋白质和mRNA的表达的变化PPAR -免疫印迹和定量实时PCR进行。如图3 (b)DES显著降低PPAR -蛋白质水平,被PIO治疗(TWRMANOVA,,图3 (b))。我们还发现PIO没有改变PPAR -信使rna表达,这表明PIO可以调节体内蛋白质的稳定性。此外,我们发现PPAR的泛素化通过免疫印迹。如图3 (d),DES显著诱导PPAR -泛素化(),它被PIO,这意味着监管吡格列酮的DES-induced PPAR -泛素化降解体内。

4所示。讨论

目前的研究清楚地表明,循环炎症反应增加DES植入后的CAD患者最佳的药物组合,被除了口服吡格列酮。通过PPAR - PIO顺序行为激活,NF -κB封锁,抑制炎性细胞因子的表达式。这些发现表明PIO可能小说直接保护作用调节促炎反应在CAD患者冠状动脉支架植入后,从而进一步优化药物治疗的患者。

血管炎症被认为是动脉粥样硬化的基础机制,和促炎介质包括il - 6、TNF -,MMP-9在动脉粥样硬化中发挥关键的作用[18]。il - 6和TNF -经典的促炎细胞因子,在血管疾病(扮演关键角色19]。过度退化和细胞外基质的重构,促进斑块的不稳定性,是基质金属蛋白酶的主要效应(如MMP-9) (20.]。一部分离开目标血管内膜部分unendothelialized维持一段(21),导致强烈inflammation-arousing血管段,可促进多种促炎因子的释放到血清,然后proinflammation。

据报道,PIO可能出现几个antiatherosclerotic影响通过多种机制,包括调制的血压、血脂浓度,矩阵重构矩阵蛋白酶激活,并最终诱导炎症(22]。在目前的研究中,我们没有观察到降低血压、血糖、胰岛素、糖化血红蛋白水平在两组。首先,不变的血压和其他代谢参数可以解释如下:第一,所有受试者的血压已经由最优控制治疗和患者纳入本研究都是刻意的。此外,据报道,PIO治疗对总胆固醇水平没有显著的影响,低密度脂蛋白和高密度脂蛋白。改善血脂和hs-CRP主要归因于标准药物治疗。

这里,我们发现一个新颖的机制,PIO增强PPAR -绑定活动虽然抑制泛素化降解,可能扮演一个关键的角色在PPAR函数体内23]。

综上所述,我们的研究表明,PIO治疗减毒促炎状态在循环跨国公司;和我们的研究结果表明,PIO治疗可以通过PPAR -按顺序行动激活,阻塞NF -κB活化,抑制炎性细胞因子的表达式。这些发现表明,PIO可能小说直接atheroprotective调制作用的地方和促炎反应患者冠状聚合物药物洗脱支架植入。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者感谢吴南平王教授和岳的深思熟虑的建议。这项研究的部分支持由中国自然科学基金会(81500219,81500219,30871043)。