文摘
第一次,我们调查了餐后dysmetabolism和白细胞的过氧化反应之间的关系指数比(PLIR),测试测量白细胞的抗外源性氧化应激和氧化破裂在激活的功能能力。盲、安慰剂对照、随机、交叉设计,十个健康受试者摄入,在两个不同的场合,高脂肪和高碳水化合物膳食与Snello饼干(HFHCM-S)或控制饼干(HFHCM-C)。Snello cookie,功能性食品由黑巧克力和含葡甘露聚糖,菊粉,fructooligosaccharides,芽孢杆菌coagulans应变GanedenBC30,显著改善餐后代谢压力(胰岛素、血糖和甘油三酯)和减少尿酸的餐后增加。HFHCM-S PLIR改善淋巴细胞,但不是单核细胞和粒细胞。两餐增加粒细胞计数和减少了lipoperoxidation诱发外源性自由基和活性氧(ROS)氧化产生的破裂。我们的研究结果表明,研究对象的健康状况可能是限制这个试点研究PLIR评价细胞产生活性氧氧化破裂。总之,PLIR和餐后dysmetabolism之间的关系需要进一步调查。
1。介绍
餐后dysmetabolism与动脉粥样硬化和炎症(1]。因此,脂肪餐消费代表了一个模型的急性炎症反应,已经应用于研究的影响富含抗氧化剂的食物,饮料,或营养补充剂,但结果是稀缺和争议2,3]。
尽管食用高脂肪和高碳水化合物膳食(HFHCM)与氧化应激和抗氧化防御系统的下降在等离子体,等离子体的增加非酶的抗氧化能力已报告后HFHCM [4,5]。此外,在健康受试者,增加(6)和(7活性氧(ROS)生成观察外周血单核细胞(PBMC)餐后时期。
在这种情况下,虽然氧化应激参与代谢综合征,减少中性粒细胞的氧化破裂发生在某些条件下,如血胆甾醇过多(8)和非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM) [9]。
基于对代谢综合征的发病(潜在的保护效应10),功能食品含有益生菌、益生元和/或多酚市场上被放置。改善代谢,氧化应激,炎症也报道葡甘露聚糖(11,12]。
de Luis et al。13)指出,饮食疗法的一个问题是缺乏病人依从性和建议解决这个问题的一种可能性是包括功能性饼干的饮食。特别是,显著降低胆固醇和肥胖患者C反应蛋白观察α亚麻酸的消耗之后,fructooligosaccharides (FOS)提交,和inulin-enriched饼干13]。改善血糖控制和血脂已报告在主题消费glucomannan-enriched饼干后葡萄糖耐量,降低高密度脂蛋白(HDL)胆固醇、血清甘油三酯升高,和中度高血压14]。
在本试验研究中,我们旨在调查之间的关系改善餐后dysmetabolism功能性饼干,由黑巧克力含有葡甘露聚糖,菊粉,安全系数,芽孢杆菌coagulans应变GanedenBC30 [15的过氧化反应,白细胞指数比(PLIR),测试测量白细胞的抗外源性氧化应激和氧化的功能能力突然来到激活(16]。
2。方法
2.1。受试者的选择
我们招募了10个健康受试者自愿响应广告。
选择科目是根据以下条件:身体健康,年龄在25到50年,服用任何药物,补充剂,益生菌或功能食品。排除标准包括吸烟习惯和坚持特殊饮食(素食,素食)。
收缩压(SBP)、舒张压(菲律宾)、心率(HR)和测量。MEDScore [17,18)由MedDietScore计算软件(19),和身体活动计算根据“指南的数据处理和分析国际体力活动问卷”(IPAQ) [20.,21]。
2.2。研究设计和食物的成分
前2天每个喂养的研究中,受试者低抗氧化剂和低嘌呤饮食(冲洗),通过避免高的新鲜水果和蔬菜抗氧化剂的内容和他们的产品(果汁或汤)、茶、可可、坚果、咖啡和酒,肉和鱼。受试者被要求避免运动前2天学习。遵守饮食指令是通过饮食记录和评估所有受试者摄入面食(160±40克/天),白面包(160±50克/天),羊角面包或饼干(50±10克/天),鸡蛋(1/2天)、奶酪(70±20克/天),新鲜奶酪(150±50克/天),牛奶(200±50 mL / d),只有一个水果(苹果或梨)/天,不到60 g / d的蔬菜(西葫芦、菊苣或茴香)。
盲、安慰剂对照、随机、交叉设计,受试者被分配到a组()(HFHCM +控制饼干)(HFHCM-C)和B组()(HFHCM + Snello饼干)(HFHCM-S)。奶酪与焦糖和控制饼干从超市购买。Snello饼干,在意大利,市面上能买到的食品功能覆盖了黑巧克力和含葡甘露聚糖(2.4 g / 48 g),菊粉(2.3 g / 48 g),安全系数(0.2 g / 48 g)芽孢杆菌coagulans应变GanedenBC30 (终极格斗冠军赛/ g),是由Nutripharma开发。
12天之后,受试者再2天的冲刷和14天之后的第一个测试组跨越替代饼干。大量营养素组成的两顿饭,因为早餐和500毫升的水,描述了表1。
患者的冠状动脉疾病(CAD) [22)和2型糖尿病(T2D) (23),2小时早餐测试(22,23]显示降血脂的改善效果(fibrate) [22)或口头那些(mitiglinide) [23佛波醇)药物ester-activated白细胞ROS生产(22),血浆丙二醛(MDA),氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、血浆总radical-trapping抗氧化参数(陷阱),和炎性细胞因子(23]。尽管上面,伦理委员会批准了3小时测试餐考虑到ROS生成多形核细胞(中性粒细胞)达到了最高点3小时饭后在健康受试者6]。
研究的当天,一夜之后快,静脉血液样本采集前()和30分钟(),2小时(),3个小时(饭后肚子)。
2.3。临床标记
血液收集涂硅管。血清是储存在−80°C。
血清甘油三酯(TG)、血糖(GLU)、尿酸(UA)量化保持酶的使用比色包(前哨CH。SpA、意大利)。血浆胰岛素测定的酶联免疫吸附试验(ELISA)工具包(李海星开发。、意大利)。
2.4。PLIR方法
血液收集EDTA管。经过红细胞的溶解和4,4-difluoro-5——(4-phenyl-1, 3-butadienyl) 4-bora-3a 4 a-diaza-s-indacene-3-undecanoic酸(C11-BODIPY表达载体,最终浓度1μ米)染色,白血球受到如前所述[24)与佛波醇12-myristate 13-acetate (PMA,σ,最终浓度1μg / mL), 2, 2′-azobis (2-methylpropionamidine)盐酸盐(AAPH,σ,最终浓度10毫米),6-hydroxy-2, 5, 7, 8-tetramethylchroman-2-carboxylic酸(Trolox,σ,最终浓度10μ米),PMA 1μg / mL + Trolox 10μ米,或AAPH 10毫米+ Trolox 10μm . 30分钟后37°C,细胞被保存在冰,停止反应,迅速分析Accuri C6 BD血细胞计数器。
C11-BODIPY, PLIR中使用的方法,修改其荧光红(FL2)绿(FL1)由于氧化25]。治疗AAPH或PMA改变了C11-BODIPY荧光以不同的方式相比,如果细胞(图1(一)),表明氧化破裂诱导活性氧的生产只有在激活细胞(图1 (b)),而所有细胞都敏感外生(AAPH ROS损伤(图)1 (c))。Trolox并不影响荧光(图的基线水平1 (d))和PMA-induced单核细胞和粒细胞的荧光(图的变化1 (e)),但AAPH-induced改变荧光的淋巴细胞减少,单核细胞、粒细胞(图1 (f))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
FL1和FL2都高在单核细胞和粒细胞淋巴细胞相比如果样品(图1(一))。因此,为了正常的细胞结合探讨膜,数据获得血细胞计数器在FCS格式导出并分析了FCS表达软件(新创软件)的比例来计算探测器C11-BODIPY氧化(FL1 / FL2)。这个比例是独立于探针的浓度,已经被用于计算PLIR,应用前面描述的(16,24公式:
PLIR函数索引,措施抵抗外源性(Trolox之间的比例μM等价物AAPH)和抵抗内源性(TroloxμM等价物PMA) ROS损伤(16]。尽管PLIR独立于基线水平的氧化,这个函数索引敏感白细胞分离出新鲜的血液和存储之间的区别(24]。
还边撒(SS)和白细胞计数测量记录(如前所述)(26]。
2.5。统计数据
双向重复测量方差分析(重复双因素方差分析),与饼干和时间受试因素,。Student-Newman-Keuls事后分析(所有成对多重比较方法)被用来隔离组之间的差异。
所有统计评估进行使用SigmaStat和Sigmaplot软件(Jandel科学,Inc .)。
3所示。结果
3.1。学科的特点
基于排除标准,十个科目(6男4女),平均年龄的年,平均身体质量指数招募。志愿者平均稳态模型评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)和血压正常的(SBP:毫米汞柱,类似:毫米汞柱,人力资源:次/分钟)。
受试者MEDScore 35.0 /(地中海饮食依从性水平的63.6%)19)和一个适度的体力活动(MET-minutes /周)[21]。
3.2。临床标记
统计分析显示所有标记的正态分布(正常测试通过Shapiro-Wilk: GLU:;INS:;TG:;UA:)。
反映了餐后血糖和胰岛素的时间课程负荷对于健康的人。葡萄糖和胰岛素水平见顶后30分钟一餐摄入(数字2(一个)和2 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
虽然葡萄糖和胰岛素水平在一小时内开始减少HFHCM-C和HFHCM-S,他们回到基线值只与后者(数字2(一个)和2 (b))。特别是,血糖和胰岛素值显著高于HFHCM-C HFHCM-S相比后3小时(HFHCM-S与HFHCM-C:;图1(一))和2小时(HFHCM-S与HFHCM-C:;图2 (b)),分别。此外,胰岛素仍显著高于preingestion值3小时后才HFHCM-C (与基线;图2 (b))。
对脂质代谢,HFHCM-C和HFHCM-S诱导lipaemia 2和3小时;然而,TG增加后显著降低HFHCM-S HFHCM-C相比(HFHCM-S与HFHCM-C:在2小时内,在3小时内;图2 (c))。此外,HFHCM摄入导致显著增加内源性抗氧化剂UA 2小时,但后者降低了HFHCM-S HFHCM-C相比(2小时内:在3小时内:;图2 (d))。此外,只有HFHCM-C UA增加3个小时(与基线;图2 (d))。
3.3。PLIR、计数、白细胞的散射
统计分析揭示了一个正态分布为L, M, G人口(正常测试通过Shapiro-Wilk:李:;M:;旅客:)。
HFHCM-S,但不是HFHCM-C,显著降低PLIR淋巴细胞的3小时(与基线;HFHCM-S与HFHCM-C:在3小时内;图3(一个)),而减少无意义的观察PLIR单核细胞和粒细胞HFHCM-S后(图3(一个))。特别是考虑PLIR受到治疗的主要组件,与基线相比,AAPH-induced(外生)氧化后的淋巴细胞出现明显降低HFHCM-S(差异意味着比AAPH与比安斯:0.68基线,在3个小时0.29,)。
(一)
(b)
(c)
(d)
我们也分析了白细胞的计数和餐后散射。平均计数和散射从淋巴细胞和单核细胞两餐后保持不变。另一方面,餐后增加粒细胞计数与餐(HFHCM-C与基准:;HFHCM-S与基准:;图3 (b))。餐后,然而,这种增加是陪同党卫军如果样本的减少和由不同降低SS PMA-activation后(图3 (c))。
相反,增加的比率荧光PMA和AAPH治疗后粒细胞和如果样品出现低3小时后吃饭(PMA或AAPH和安斯:HFHCM-C基准:;HFHCM-C 3小时:;在基线HFHCM-S:;HFHCM-S 3小时:;图3 (d))。
同样的,无意义的效果观察单核细胞与食物。
4所示。讨论
4.1。餐后Dysmetabolism
功能性食品Snello饼干显著提高餐后代谢压力。特别是Snello饼干减少餐后TG升高。此外,葡萄糖和胰岛素水平HFHCM-S回到基线值在3小时后,但不是HFHCM-C之后。
对餐后胰岛素的影响可能是由于葡甘露聚糖的含量Snello饼干。事实上,麦卡蒂(27)建议葡甘露聚糖降低餐后胰岛素激增。此外,随机对照试验的荟萃分析的结果指出,大幅度降低TG和GLU[葡甘露聚糖11]。
相反,系统回顾研究报告评估菊粉和安全系数对葡萄糖浓度的影响在人类给对比结果(28]。另一方面,inulin-enriched面食(29日和早餐麦片含有菊粉30.TG)减少。菊粉明显增加双歧杆菌计数和粪便乳酸的浓度(30.]。乳酸杆菌乳酸参与immunomodulating效应(31日]。尽管inulin-type的生命起源以前的影响益生元,包括安全系数和菊粉,发生后长期消费(32),据报道,急性菊糖摄入增加餐后血清短链脂肪酸和减少游离脂肪酸(33,34]。
另一方面,也包含在Snello饼干巧克力可以改善餐后dysmetabolism。尽管急性可可补充没有显示出明显的整体利益在餐后GLU, INS和TG (35,36),据报道,口服补充(−)表儿茶素(巧克力中包含的主要黄烷醇)显著降低GLU和TG餐后2小时37]。
因此,餐后的整体改进dysmetabolism引起Snello饼干可能是由于其成分的协同效应。
4.2。餐后白细胞的招聘和激活
我们观察到前面描述的(38- - - - - -41)餐后增加粒细胞数在3小时的。在这种背景下,白细胞的偏移,餐后,大大降低了患者的阿卡波糖T2D和亚临床炎症(白细胞> = 6.2 gigaparticles / L) (42]。罗格列酮减少白细胞的增量曲线下的面积,由于特定的中性粒细胞减少(−39%,T2D(患者),43]。相反,伐并不影响基线增加白细胞的计数或餐后中性粒细胞的CAD患者(44]。此外,他汀类药物戒断的结果表明白细胞激活的标记的表达不受使用他汀类药物的影响(45]。然而,葡萄糖的研究调查了影响白细胞激活显示的标记冲突的结果在T2D [45- - - - - -48]。另一方面,餐后由脂质研究报道,白细胞被激活(38,49,50]。白细胞激活的标记的表达(即。,CD11b, CD11c) increased on monocytes or neutrophils after a high fat meal [50,51]。upregulation的白细胞的表达程度的激活与TG和标记是伴随着一个改变分散配置文件(50,51]。特别是,CD11b表情中性粒细胞与中性粒细胞的平均党卫军负相关,反映出粒度(50]。
在我们的研究中,增加粒细胞计数是陪同党卫军如果样本的减少和降低由不同PMA-activation后党卫军。在这种背景下,这一事实,即使白细胞的计数增加,细胞内的髓过氧物酶减少餐后2 - 4小时内,腰臀比必须考虑影响脱粒的中性粒细胞(52]。除此之外,最近的结果显示,只有肥胖受试者更高的餐后内毒素,餐后白细胞的机制激活,尽管lipaemia增加正常体重和肥胖男性饭后(53]。此外,餐后患者白细胞激活是最高T2D和hyperlipidaemia45]。因此,我们初步研究对象的主要限制是健康的,正常的体重,适度的体力活动,没有一个人提出了心血管疾病的危险因素。
4.3。PLIR和UA餐后阶段
Snello饼干PLIR改善淋巴细胞,但不是单核细胞和粒细胞。理解这个结果应该进一步考虑。
尽管PLIR函数索引是独立于基线水平的氧化,测量电阻之间的比例外生和内生阻力ROS损伤(16),这个比例计算可以掩盖食品的影响,抑制外源性活性氧损伤和氧化破裂。特别是,PLIR的计算包括PMA-induced氧化。低比例的增加荧光PMA和AAPH治疗后粒细胞和如果样本记录3小时后HFHCM-C和HFHCM-S与基线相比。然而,不变的意思是党卫军(反映粒度)饭后表明下降的比率荧光更可能是由于UA和可可黄烷醇的抗氧化效果HFHCM-C和HFHCM-S之后,分别,而不是影响氧化破裂。符合这一假说,Sodre et al。7)报道,在PBMC细胞内ROS,评估通过流式细胞术(ETH)荧光化乙锭实验,减少2和4小时后吃饭不仅在淋巴细胞,单核细胞,也不产生活性氧氧化破裂。相反,其他人(6)报道,由中性粒细胞释放超氧化物自由基,以化学发光,显著降低橙汁添加到吃饭时比水或葡萄糖添加到吃饭的时候。然而,细胞外的自由基的测量,如化学发光测定,深深受到细胞计数和生存能力。因此,餐后增加粒细胞计数(38- - - - - -41这些方法)可能的偏见。
另一方面,我们观察到UA HFHCM-C后增加。这一增加可能是由于受试者的健康状态。同意这个,陷阱和UA的增加已报告在健康受试者HFHCM后(4),尽管T2D患者餐后低陷阱值(23]。
HFHCM-S后UA的增加较低。UA抑制的增加可能是由于中包含的可可黄烷醇Snello饼干。符合这一假说,茶黄烷醇可以UA降低效应(54,55)和水果果汁饮料,提供外源性抗氧化剂,防止对HFHCM内源性抗氧化剂反应,通过抑制UA的生产(56]。
在这种背景下,UA水平可能影响PLIR在两种不同的方式:作为抗氧化剂(57]在所有白细胞和诱导氧化ROS-producing细胞破裂58]。UA取决于其浓度的影响。AAPH-induced脂质过氧化作用,体外,强烈抑制UA的浓度在50到400不等μ0.84米(-6.72 mg / dL) (57]。UA HFHCM-C后摄入的增加可以解释为何HFHCM-C PLIR没有变化。在这种背景下,有人建议,在健康人的身体回应餐后压力诱导内源性防御(4]。在膳食抗氧化剂的存在(即。,the chocolate contained in Snello cookie), the resistance to AAPH-induced oxidation is increased in lymphocytes despite the reduced UA increase.
另一方面,尽管UA浓度变得异常的水平仍然是有争议的,介于3.5和7.2 mg / dL在成人男性和绝经后妇女和绝经前妇女的2.6和6.0 mg / dL (59),一个阈值低于饱和浓度(< 6 mg / dL或< 360μmol / L),为了防止谷氨酸钠尿酸盐(MSU)晶体的形成,已经建议(59,60]。事实上,在密歇根州立大学,炎症的中性粒细胞招募网站进行氧化破裂(58]。在我们的研究中,HFHCM-C之后,UA的浓度mg / dL,价值低于6 mg / dL的阈值(59,60]。,受试者的健康状况可能是本研究的限制PLIR评价细胞产生活性氧(即。、单核细胞和粒细胞)。
5。结论
总之,功能性食品Snello饼干显著改善餐后代谢压力和减少UA的餐后增加。
HFHCM-S之后,PLIR提高淋巴细胞,但不是在单核细胞和粒细胞。
的健康状态的对象可能是一个限制这个试点研究PLIR评价细胞产生活性氧(即。、单核细胞和粒细胞)。,进一步研究受试者有心血管疾病的风险是必要的为了调查餐后dysmetabolism和PLIR之间的关系。
伦理批准
从伦理委员会获得批准这项研究是对人类临床前研究部门的生理学和药理学”V。Erspamer”、“Sapienza“罗马大学,所有程序涉及人类受试者符合赫尔辛基宣言在2000年修订。
同意
书面知情同意了所有的参与者按照意大利法律(法律数量196/2003,卫生部通知顾数量76/2008)。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
作者的贡献
Ilaria Peluso设计的研究,分析了数据,起草。Husseen Manafikhi和Raffaella Reggi进行了分析。Yaroslava Longhitano评估受试者的健康状态,MEDScore和体育活动。基督教一种敲击木琴进行血液取样。莫拉Palmery批判性回顾了纸和监督整个项目。
确认
本研究支持Nutripharma开发。意大利罗马(http://www.nutripharma.it/dettprodotti.php?idx=8&pd=2 .VboVB8sw_IU)。作者感谢基金会“恩里科·埃德·艾瑞卡Sovena”的学术贡献Husseen Manafikhi。作者还要感谢克劳迪奥·安德鲁尤文球迷对英语论文的审查。