文摘

CCL2是一种重要的炎症趋化因子参与单核细胞发炎组织招聘。细胞外核苷酸信号分子通过P2Y2 UTP和ATP受体已知诱导CCL2在巨噬细胞分泌。我们确认这个在人类THP-1单核细胞的细胞系表明UTP一样高效LPS诱导CCL2在早期时候点(2 - 6小时)。表达式和钙动员实验证实的存在功能性P2Y2 THP-1受体细胞。UTP刺激人类的外围CD14 +单核细胞显示低反应有限合伙人(4小时刺激),但显著增加背景治疗后6小时以上。UTP的响应变量,需要人类单核细胞刺激> 6小时。这样的变化响应我们寻找单核苷酸多态性P2RY2可能影响功能响应。测序的P2RY2 THP-1细胞显示单核苷酸多态性的存在改变从312氨基酸精氨酸,丝氨酸(rs3741156)。这种多态性是相对常见的频率0.276 (科目)。最后,我们研究了CCL2分泌以应对有限合伙人或UTP人类巨噬细胞表达312 arg-p2y2或312 ser-p2y2只有后者表现出显著的UTP-induced CCL2分泌(捐助者/组)。

1。介绍

CCL2 / CCR2介导单核细胞的招募是必要的对抗感染的微生物(1]。趋化因子信号轴也被卷入一些炎性疾病,单核细胞浸润是一个关键因素,如动脉粥样硬化,多发性硬化症,风湿性关节炎(2]。因此理解这一重要的趋化因子的细胞调节的关键理解一些炎性疾病的早期病理生理学。

P2Y受体metabotropic家族成员purinergic受体属于g蛋白耦合受体的大家庭。八个亚型的P2Y date-P2Y1已确定,P2Y2, P2Y4, P2Y6, P2Y11, P2Y12, P2Y13, P2Y14-with差异在药理学和下游信号通路(3,4]。P2Y2广泛分布在体内包括胶质细胞表达,一些神经细胞,内皮细胞,许多组织的上皮细胞,免疫细胞和骨髓单核细胞、巨噬细胞和树突细胞(5- - - - - -10]。许多研究已经证明了激活P2Y2诱发钙瞬变响应(11,12),但不太了解趋化因子和细胞因子的调节生产。我们以前的工作是第一个展示角色CCL2分泌物P2Y2受体调控的肺泡和腹膜巨噬细胞10]。P2Y2和UDP-responsive P2Y6受体信号也可以其它趋化因子产品包括CXCL8(引发)和CCL20 (MIP-3α)[9,13,14]。基因敲除小鼠的研究表明,P2Y2防御肺部感染中起着重要的作用铜绿假单胞菌(15]然而,它也可以扮演一个角色在各种模型(过敏性肺部炎症16,17]。

细胞外核苷酸诱导细胞表达P2Y2 CCL2可能是一个重要的触发的初始招聘单核细胞炎症的网站。许多抗病诱导剂已确定CCL2包括脂多糖(LPS),生长因子,如血小板衍生生长因子(PDGF)和肿瘤坏死因子α等细胞因子(TNF -α),综述了(18]。后组织/细胞损伤或调节核苷酸释放细胞或神经终端,P2Y2激活的细胞外核苷酸可以打开CCL2的快速生产。虽然这可能是有利于启动修复受伤的网站,不受控制的或慢性核苷酸释放可能是有害的,导致过度的组织炎症。ATP和UTP都是已知的危险信号,作为免疫调节信号报警消息进行通信的免疫细胞。

本研究的目的是研究细胞外nucleotide-induced趋化因子在人类生产与强调CCL2巨噬细胞和单核细胞。首先我们想确认我们之前发现啮齿动物肺泡巨噬细胞使用人类单核细胞/巨噬细胞细胞系,其次我们要比较P2Y2诱导CCL2分泌与有限合伙人,一个已知的细菌CCL2的诱导物。最后我们想执行一个试点研究,以确定我们是否可以测量nucleotide-induced CCL2分泌物主要人类细胞和评估响应P2Y2受体激动剂和有限合伙人。

2。材料和方法

2.1。材料

UTP, ATP,苏拉明,有限合伙人(菌株055:B5)来自Sigma-Aldrich(澳大利亚莱德)。2-thio-UTP和UTPγ年代来自Tocris生物科学(英国布里斯托尔)。干扰素γ(IFN -γ从罗氏诊断)。MwoI限制性内切酶是来自内布拉斯加州

2.2。细胞培养

的THP-1单核细胞的细胞系是维护在RPMI 1640媒体(生命技术)含10%胎牛血清(美国起源,Lonza), 2毫米谷酰胺,100 U /毫升青霉素,100μg / mL链霉素(所有生命技术)和生长在湿润条件下有限公司5%₂孵化器。细胞通常通过每2 - 3天。细胞分化为巨噬细胞,THP-1镀在1×10⁶细胞/ 500年24-well板块μL完全培养基和1000 U /毫升IFN -刺激γ和100 ng / mL有限合伙人48小时。

2.3。人类单核细胞的准备

外周静脉血液收集肝素锂管(Becton Dickinson)健康志愿者与知情同意(研究批准Nepean蓝山当地卫生服务人类伦理委员会)。单核细胞被Ficoll-Paque孤立(通用电气医疗集团)梯度离心法和单核细胞分离使用CD14微和LS列midiMACS系统(Miltenyi生物技术,德国)按照制造商的指示。CD14单核细胞分解动作的纯度是经常通过流式细胞术> 90%。

对巨噬细胞实验,外周血单核细胞被镀完全RPMI 1640介质密度2.5×10⁶细胞每口井。细胞培养2小时37°C为了坚持塑料,不依从细胞移除,和附着PBMCs培养过夜1毫升完整的媒体,第二天洗一次,培养6天。

2.4。钙的测量

THP-1细胞收获从烧瓶,颗粒状×300 g, resuspended Fluo-4 NW分析缓冲区(生命技术)。镀THP-1细胞密度的2×10⁵细胞/进入一个96孔板涂有poly-D-lysine(默克密理博),加载30分钟37°C。人类单核细胞被镀在2 - 4×10⁵细胞/好,准备以同样的方式。使用Fluostar钙测量进行最适条件板与激发读者(BMG Labtech) 485 nm和排放在520海里。所有测量都是在37°C使用40%的增益设置。

2.5。ELISA实验

在1×10 THP-1细胞被镀⁶细胞/ 24-well板在RPMI 1640媒体含1%血清(0.5毫升)。刺激进行复制。有限合伙人(1或10μg / mL)或核苷酸(不同浓度)被直接添加到媒体2,4,6,或者24小时。后刺激媒体从井中删除到埃普多夫和离心机删除任何污染细胞。上层清液被转移到新鲜的埃普多夫和冻结在−80°C。新人类外周血CD14孤立⁺单核细胞被镀在5×10⁵细胞/在RPMI媒体含1%血清。刺激进行复制/一式三份至于THP-1细胞和胞外4或6小时后上层清液收集。

九十六孔板(NUNC)被涂上一层anti-MCP-1捕获抗体(克隆10 f7, BD生物科学)的浓度为2μ在碳酸钠缓冲pH值9.5 g / mL。样品和标准(重组人类MCP-1)被稀释在媒体。检测抗体,anti-MCP-1-biotin(克隆5 d3-f7 BD生物科学)为0.5μg / mL,其次是streptavidin-HRP 1μ克/毫升。TMB-Ultra (PerBioscience)被用于可视化和1 M H₂所以₄被用来阻止解决方案。吸光度在450 nm使用BMG Labtech Optima板读者阅读。标准曲线符合回归系数。

2.6。实时聚合酶链反应

细胞被刺激如上所述,收集到RNA保护试剂(试剂盒),存储在−80°C。细胞处理提取总RNA使用RNEasy迷你包(试剂盒)。RNA浓度测定用分光光度计使用吸光度在260海里(卡里)。1μg RNA是使用在泰特罗cDNA反向转录合成装备(Bioline)按照制造商的指示。

为实时PCR引物浓度范围(0.125的优化μ米1μ米)和底漆效率测定。引物序列β肌动蛋白向前5′GCC CTG GCA CCC AGC ACA在3′和反向5′GGA GGG GCC GGA CTC GTC 3′, GAPDH向前5′CGA手枪CCC太极拳AAA ATC AA-3′和反向5′TTC ACA CCC ATG ACG AAC 3′, CCL2向前5′CCC CAG柠檬酸有条件现金援助GCT GTT 3′和反向5′GAG TTT GGG TTT GCT TGT CC-3′, CCL20向前5′亚美大陆煤层气有限公司TTG TCT GTG TGC GCA AAT CC-3′和反向5′CCA TTC CAG AAA AGC CAC AGT TTT-3′, CCL3向前5′法TTG AGA CGA GCA GCC AGTG-3′和反向5′TTT CTG广汽CCA CTC CTC ACTG-3′, CXCL8向前5′GAG AGT手枪TGA GAG TGG ACC AC-3′和反向5′CAC AAC有条件现金援助CTG CAC CCA GTT条t - 3′。定量实时PCR进行使用Sensimix SYBR绿色没有火箭mastermix (Bioline)和0.75μ刚做好的cDNA每个引物。使用2000 Rotorgene PCR进行了一式三份(Corbett)研究和分析使用0.003确定Ct阈值。数据分析使用方法。

2.7。流式细胞术

一百万THP-1或外周血单核细胞染色/流管。细胞被固定为2%多聚甲醛缓冲20分钟在冰上和permeabilised皂素在PBS为0.1%。兔免疫球蛋白作为消极的控制和anti-P2Y2(σ)是用于1:100稀释。主要抗体孵化30分钟在PBS / 0.1%皂苷含5%人类AB血清。细胞与鼠标反co-stained CD14-FITC(1: 100稀释)。PBMCs洗了PBS /皂素和孵化与山羊anti-rabbit IgG-Alexa 647 1: 100稀释30分钟在冰上。与PBS /皂素最终清洗后,细胞resuspended PBS和30000年收购事件在BD FACSCalibur流式细胞分析仪。单核细胞CD14表达和情节被确定的p2y2 - alexa - 647染色使用黄鼠狼流式细胞仪软件生成(WEHI)。

2.8。基因分型

从全血基因组DNA制备如前所述[19−80°C)和存储。P2Y2基因放大使用0.025 U /毫升重组TaqDNA聚合酶(表达载体),1.5毫米MgCl₂,100年μ0.4 M核苷酸,μ每一个正向和反向引物。引物序列向前5′ctt TTG 20柠檬酸太极拳TTG TCT-3′和反向5′猫CTC GGG CAA AGC GTA-3′产生328个基点的产物。使用以下循环条件:初始变性(95°C 3分钟),紧随其后的是40周期的变性(45秒95°C),退火30秒(55°C),和扩展(30秒72°C)在ptc - 200珀尔帖热循环(MJ研究,沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)。样本然后在4°C冷却10分钟。

限制试验旨在确定1269核苷酸序列,G,或者从G > C C突变引入了额外的限制酶MwoI cut-site。P2Y2 PCR产品孵化和3 U MwoI 1小时60°C。基因组DNA携带G 1269核苷酸将减少2位置产生3 195个基点的碎片,130个基点,3 bp。基因组DNA携带C 1269核苷酸将减少3位置产生4 181个基点的碎片,130个基点,14 bp, 3 bp。分析区分了乐队的195个基点和181个基点使用3%的琼脂糖凝胶。使用商业高通量基因分型结果验证了方法测定rs3741156 (AGRF、布里斯班)。

2.9。统计分析

数据绘制意味着±SEM的三到四个实验。图表和统计分析进行使用GraphPad棱镜版本5 (GraphPad软件公司,拉霍亚,CA,美国)。

3所示。结果

3.1。P2Y2调节THP-1 CCL2生产单核细胞

它已经证明了其他THP-1细胞表达P2Y2受体(13,20.]。我们确认P2Y2表情THP-1使用流式细胞仪(图1(一))和使用功能测量P2Y2受体的胞内钙测量一系列P2Y2核苷酸受体激动剂,ATP, UTP, 2-thio-UTP, UTPγ年代,和UDP(数字1 (b)和1 (c))。量效曲线对THP-1 UTP-induced钙反应生成细胞(图1 (d))。钙反应减少在苏拉明(100μ米),广泛的P2受体拮抗剂已知块P2Y2反应(图1 (b))。

然后我们刺激与核苷酸UTP THP-1细胞ATPγ年代刺激P2Y2或有限合伙人(1 - 10μg / mL)诱导CCL2生产和分泌趋化因子。我们确定的CCL2分泌量在三个不同的时间点:2小时,6小时,24小时(图2)。我们发现UTP和ATPγ年代是一样有效的LPS刺激后CCL2分泌2小时。6小时后UTP或ATPγS-induced CCL2分泌仍上升高于基底有限合伙人没有明显不同。然而,24小时后的刺激有进一步增加LPS-induced CCL2分泌,而UTP或ATPγS-induced CCL2分泌仍低(图2)。我们决定研究两个小时计算,进一步调查nucleotide-induced CCL2分泌。一系列不同的核苷酸受体激动剂进行了测试和许多增加CCL2水平高于背景水平(图3)。然而,我们发现,只有UTP或有限合伙人疗法相比显著差异了基底(单向方差分析与Dunnett事后测试,实验)。UTP信号没有被苏拉明,UTP的特性还观察到当浓度高于100海里被用于钙反应THP-1细胞(数据未显示)。使用THP-1细胞系我们看CCL2 UTP相比LPS诱导的基因的作用。我们使用定量实时PCR和CCL2相对测量β肌动蛋白基因的参考与LPS刺激后在2小时,UTP, UDP,单独或媒体。我们发现UTP诱导增加8.8倍CCL2表达upregulation CCL2的回应,“碳足迹”的11倍相比,有限合伙人(图4)。相比之下UDP没有引起很大upregulation CCL2水平(图4)。正如所料,LPS诱导其它趋化因子CCL20(459倍以上媒体控制)和CXCL8(1121倍以上媒体控制)THP-1细胞,而UTP治疗诱导upregulation CCL20的4.1倍和2.3倍upregulation CCL3关于如果细胞。UTP诱导一些upregulation CXCL8表达式(61倍),但这是只有5%的有限合伙人响应(1121倍)。

3.2。CD14 CCL2生产⁺主要人类单核细胞

后我们的观察,UTP可能诱发类似CCL2分泌水平有限合伙人在THP-1单核细胞的细胞系,我们想地址是否人类单核细胞这也是主要的一个特征。我们探索CD14-positive PBMCs P2Y2表达,发现显著的标签相对于非特异性免疫球蛋白控制(图5(一个))。评估的功能P2Y2受体磁分离单核细胞CD14积极我们在Fluo-4AM加载细胞钙进行测量。UTP在10μ米和100μ米诱导大瞬态钙反应主要单核细胞(图5 (b))。

我们刺激人CD14⁺单核细胞与媒体,UTP (10μ米)或有限合伙人(100 ng / mL)为4小时(不同的捐助者)。分析数据作为集体时,我们发现了一个小CCL2增加反应有限合伙人(的意思pg / mL)以上背景CCL2分泌仅在媒体(的意思pg / mL)。10以上背景,没有区别μM UTP治疗(平均pg / mL)(图5 (c))。当看着每个人捐赠我们可以看到4的11学科UTP CCL2高于媒体单独治疗细胞增加。减去背景CCL2浓度显示UTP响应平均23 pg / mL (主题,范围8-49 pg / mL)。

然后我们决定是否延长培养时间6小时会揭示UTP CCL2分泌反应增加。在分析数据作为一个集体,我们发现显著增加CCL2针对有限合伙人(的意思pg / mL,捐助者、单向方差分析与Dunnett事后测试)相对于背景(的意思pg / mL,捐助者)。治疗10μM UTP(平均pg / mL)或100年μUTP (pg / mL,捐助者)没有明显不同于背景CCL2水平(图5 (d))。再次,当看着每个主题我们可以看到,所有5捐助者回应100μUTP CCL2水平从19到129 pg / mL以上基础分泌的平均值76 pg / mL。

确定我们是否可以测量CCL2基因诱导主要人类单核细胞由UTP qPCR CCL2基因的分析归纳执行(100μM)和LPS刺激长达6个。我们发现变量感应CCL2和CCL20 UTP或有限合伙人(图6,捐助者)。

3.3。做P2Y2 CCL2人类巨噬细胞分泌发挥作用?

如此小的反应UTP单核细胞和如果THP-1单核细胞的细胞,我们决定使用干扰素-区分THP-1 macrophage-like细胞γ和有限合伙人20.]。我们之前的工作是使用一个肺泡巨噬细胞细胞系和腹膜巨噬细胞和测量健壮CCL2生产10]。干扰素-γ/有限合伙人分化THP-1细胞(48小时治疗)与LPS刺激,UTP,或媒体控制和CCL2测量在上层清液收集在6 - 24小时。更高的基础分泌CCL2测量相比,如果THP-1但有限合伙人和UTP可能进一步增加CCL2分泌在两个时间点(图7)。

开始地址变化反应观察原发性单核细胞在P2Y2我们专注于产生的单核苷酸多态性。有三个已知的人类P2Y2 snp可能影响功能反应(21,22]。我们第一次测序P2Y2基因从THP-1单核细胞,发现几个同义SNP和一个产生的SNP (rs3741156)改变从312氨基酸精氨酸(R)丝氨酸(S)(数据没有显示)。我们开发了一个内部的基因鉴定与MwoI基于限制性内切酶分析。1269 G或C的存在位置(NM_002564)与一个cut-site酶。野生型个体携带G在这个位置会显示3片段195年130年和3 bp,而多态个人携带在这个位置会显示4 C片段PCR限制分析的181年,130年,bp(图14,和38(一个))。我们使用这个分析基因型P2Y2在健康志愿者和基因分型结果证实了使用自定义高通量SNP检测(澳大利亚基因组研究设施)。从基因分型结果共有404名受试者rs3741156我们确定一个等位基因频率为0.276 (科目)。

然后我们进行了初步研究探讨基因型对趋化因子的分泌的影响使用个人携带野生型(WT) P2Y2或312 s-p2y2受体(5科目/基因型)。我们从WT - 312彩色PBMCs s-p2y2主体上P2Y2 CD14阳性细胞的表达水平,发现平均荧光强度无显著差异(捐助者/基因型)(图8 (b))。我们培养附着PBMCs在7天来区分单核细胞巨噬细胞与媒体、巨噬细胞和刺激细胞10μM UTP,或1μg / mL有限合伙人为4小时(每个基因型组捐助者)。上层清液被ELISA检测CCL2,结果如图9作为一个散点图。有限合伙人(平均响应pg / mL)和UTP(的意思pg / mL)在WT-P2Y2巨噬细胞小而不明显不同于背景CCL2(的意思pg / mL,捐助者)。相比之下,对有限合伙人(的意思pg / mL)和UTP(的意思pg / mL)是从背景CCL2(意思是明显不同的pg / mL,捐助者、单向方差分析与Dunnett事后测试)在312年s-p2y2表达巨噬细胞。

4所示。讨论

本研究首次探讨UTP从THP-1细胞诱导趋化因子的分泌和初级人类单核细胞和巨噬细胞。我们的主要发现表明,UTP可以引起类似的CCL2级别与细菌产品在THP-1 LPS刺激细胞。我们还发现巨噬细胞产生更多的CCL2比单核细胞即使在核苷酸水平的P2Y2表达式是相似的。

众所周知在文献中,单核细胞和巨噬细胞表达P2Y2在其他P2Y受体和P2X受体(3,4,11,13]。我们确认的表达P2Y2 THP-1细胞用流式细胞术和细胞内钙测量的间接测量G protein-coupled受体激活(图1)。这种受体的药理学与其他purinergic相比相对贫穷的受体。一些证据表明THP-1 UTP-induced反应细胞是由于P2Y2激活。UTP只是激活P2Y2, P2Y4, P2Y6受体(23),其中,只P2Y2 ATP受体响应。ATP和UTP P2Y2受体和EC均等的₅₀UTP和ATP-induced钙响应值纳米和海里,分别在THP-1细胞。苏拉明可以抑制UTP ATP-induced UTP引发的钙反应以及反应γ年代(图1)。然而,苏拉明没有P2Y2-selective受体激动剂诱导的抑制反应2-thio-UTP(图1)。此外,我们发现苏拉明不能抑制钙反应引起的高浓度(> 1μ米)的核苷酸,因此我们没有使用苏拉明在随后CCL2实验。

钙实验作为表明功能P2Y受体存在于THP-1细胞和我们发现P2Y6受体激动剂UDP也引起了suramin-sensitive THP-1钙反应细胞(图1)。同时P2Y6可能表达THP-1细胞由Yebdri et al .(如图所示13CCL2分泌),实验表明UDP没有显著的影响(图3)。此外,UTPγ(P2Y2和P2Y4选择性受体激动剂)和2-thio-UTP (P2Y2选择性)可以诱导CCL2分泌高于基底的水平而不是一样的学位UTP在P2Y2(完全激动剂)。

本研究的主要目的是比较nucleotide-induced趋化因子分泌到一个已知的有限合伙人等促炎的信号。我们选择了THP-1细胞系进行这些实验限制变化反应。的LPS-induced CCL2 THP-1单核细胞分泌反应很低(< 100 pg / mL)在早期时间点如2和6小时,但增加的24小时治疗期(图2)。的结构性产物CCL2 THP-1细胞在我们的手中是类似于衡量Steube et al。24]。Steube等人观察到一个低水平的CCL2 THP-1分泌物,以应对有限合伙人相比其他myelomonocytic细胞行(24]。这种低本构CCL2分泌非常不同于高水平的本构CCL2表达式NR8383肺泡巨噬细胞在我们先前的研究中发现(10]。

我们比较了LPS-induced CCL2应对UTP和ATPγ年代在已知浓度诱导大钙反应(10μ米)在THP-1细胞。在早期的计算,2小时,nucleotide-induced CCL2分泌是与LPS-induced CCL2分泌(图2)。然而,nucleotide-induced响应2和6小时之间保持稳定和稳步LPS-induced响应随时间增加。在初级人类单核细胞和巨噬细胞的动力学CCL2生产似乎慢响应有限合伙人或UTP(数字5和9)。4 - 6小时后刺激LPS-induced CCL2反应变得显著高于背景CCL2分泌,而整体UTP-induced反应仍然没有明显高于基础水平升高(图5)。因此在人类单核细胞主要我们观察到一个大P2Y2-induced响应和LPS-induced响应之间的区别。几个因素可能影响这些数据包括膜受体的遗传差异,在质膜受体的表达水平和细胞内信号的差异或CCL2 mRNA的稳定性。然而,在人类monocyte-derived巨噬细胞UTP-induced响应又类似于LPS-induced响应(图9),这也是真正的干扰素/有限合伙人分化THP-1后巨噬细胞(图6小时7)。

我们调查是否核苷酸也可以诱发其他炎症趋化因子如CCL20的生产(MIP-3α),CCL3 (MIP-1α),CXCL8(引发)。Nucleotide-induced CCL20生产已经证明了人体树突状细胞(UDP和ATPγS) (9在单核细胞[],CXCL8生产13在啮齿动物,CCL3生产小胶质细胞(UTP, UDP) [7]。使用定量PCR我们发现有限合伙人调节CCL20和CXCL8 THP-1细胞;然而UTP CCL3没有显著影响,CCL20, CXCL8生产(图4)。有限合伙人主要人类单核细胞显著诱导CCL20基因表达在所有4捐助者增加(42 - 427倍)。UTP和UDP核苷酸相比没有显著诱导CCL20 (捐助者)。我们的数据表明,人类CD14 CCL2感应在初级⁺单核细胞是在响应变量有限合伙人或UTP(图6)在蛋白质分泌实验证实了我们的可变性。

发现UTP P2Y2受体的刺激可以引起类似CCL2趋化因子LPS刺激的TLR4与潜在的相关性是一个新奇的发现和炎症。UTP是一种已知的危险信号,类似于ATP,可能会出现在地区组织损伤而感染除了感染的网站。这些核苷酸可能在无菌炎症和驱动因素可能导致疾病相关的慢性炎症状态。同样重要的是要设定为何核苷酸可能诱发CCL2。除了CCL2作为免疫细胞的趋化因子的作用,这可能是释放机制移植等受体P2X4受体,最近被Toyomitsu et al。25]。CCL2可能因此作为自分泌因子单核细胞/巨噬细胞进一步'炎性信号。

本研究的第二个主要目的是调查P2Y2诱导趋化因子在主要生产人类单核细胞和巨噬细胞。我们从外周血分离出单核细胞数量的捐助者确定nucleotide-induced CCL2反应检测。我们的数据表明本构的变化程度和诱导的分泌CCL2从单核细胞和巨噬细胞。这种类型的变化之前已经观察到的有限合伙人,不同的个体可以分为高或低反应(26)和其他研究已经证明了变量LPS-induced反应包括白介素1β(il - 1β)分泌27)和CCL20从人体树突状细胞和单核细胞趋化因子的分泌9]。我们之前和其他人也可变性il - 1所示β分泌对P2X7激活(19,28]。这种变化反应的一个来源是遗传变异形式的单核苷酸多态性和三个单核苷酸多态性在人类已确定P2RY2基因(21,22]。测序确定一个SNP, rs3741156出现在THP-1细胞系和其他研究已经证明,这种突变改变氨基酸312可以影响UTP-induced钙反应在转染细胞(21]。其他的研究也表明,P2Y诱导钙信号打开CCL2生产中最重要的是骨髓细胞(7]。Monocyte-derived巨噬细胞从个人携带312 ser-p2y2变异显示一个重要CCL2分泌反应相比,个人表达312 arg-containing受体(图9)。因此,P2Y2 snp可能在响应与变化。未来的研究将调查中如果其他snp基因和他们是否有功能影响受体的信号。

5。结论

核苷酸是有效的抗病诱导剂的趋化因子CCL2 THP-1单核细胞的细胞株与脂多糖相似。人类主要巨噬细胞显示一个更健壮的核苷酸CCL2反应比人类单核细胞。的一些变化CCL2应对核苷酸可以解释P2Y2遗传变异的基因突变改变氨基酸312展示增加趋化因子的反应。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这个项目是由一个机构礼物从克莱夫和维拉Ramaciotti基金会的资助,澳大利亚(l .斯托克斯)和Nepean医学研究基金会项目拨款(l .斯托克斯)。作者感谢所有为这个项目志愿者捐献的血液和承认由于女士的帮助下,女子名Loza-Diaz和利亚太太Lownds进行静脉穿刺。作者感谢克里斯蒂Skarratt夫人和太太Phuong Dao-Ung技术援助。