文摘
食源性细菌,抗生素耐药性的高度,扮演着重要的角色在全球胃肠疾病的发病率和死亡率。在250个致病细菌,金黄色葡萄球菌是食物中毒的主要原因之一,和它的抗多种抗菌素仍是重要的问题。奶酪通常是污染当适当的卫生程序不跟随在其生产和销售。这项工作旨在评估巴氏杀菌的微生物质量白奶酪在巴拿马城商业化。奶酪从五个不同的品牌在当地的超市销售的选择来确定的金黄色葡萄球菌以及它的抗生素耐药性。结果显示显著的污染金黄色葡萄球菌的几何平均样本104-10年7CFU / g。4的5(4/5)奶酪品牌分析提出了食物中毒的风险超过了允许范围的消费与几何平均样本1,8×1061、4×107CFU / g。14个不同抗性表型被发现。百分之五十五(55%)的分析菌株对红霉素耐药。数据确认一个相对较高的患病率和高水平的金黄色葡萄球菌在巴拿马,最有可能是在处理城市零售市场。还需要进一步的研究来减少细菌污染,减少食物中毒的风险的巴氏杀菌奶酪。
1。介绍
奶酪,特点是它的雪白的颜色,易碎的材质,腌味是巴拿马的菜肴的一个重要组成部分。奶酪富含营养物质,包括维生素、蛋白质、乳糖、脂肪、矿物质和水。因此,奶酪有利于肠道病原体如细菌的生长和存活单核细胞增多性李斯特氏菌(l . monocytogenes),沙门氏菌,志贺毒素的产生大肠杆菌(STEC),金黄色葡萄球菌(金黄色葡萄球菌)[1- - - - - -4]。手操纵加工奶酪加上其高含水量和几乎酸性pH值因素导致食源性病原体的存在和发展(5,6]。在巴拿马,奶酪是直接卖给批发商或终端消费者,通常在小市场和/或通过上门服务,使用没有标签和接受最低食品安全预防措施在其运输和存储5,7,8]。缺乏危害分析和关键控制点(HACCP)或良好生产规范(GMP)和良好的卫生习惯(GHP)加工厂,连同手操纵人员,增加奶酪污染的风险(9,10]。
金黄色葡萄球菌是一种重要的食源性病原体引起广泛的感染人类,从轻微皮肤感染、菌血症、系统性疾病,或骨髓炎更危及生命的感染,如中毒性休克综合征和葡萄球菌食物中毒(SFP) [11,12]。金黄色葡萄球菌是一个主要的病原体与奶酪消费相关的SFP (13]。在美利坚合众国(美国)和最后的报告称从2017年开始,每年的发病率是841年导致14481年的食源性疾病暴发的疾病,包括827住院和20例死亡,其中2报告为SFP(暴发14]。估计有7700万人在美洲遭受一集的食源性疾病,每年在5岁以下儿童占40%,每年有125000人死亡(15]。例如,在厄瓜多尔,2019年报告了19487例,其中12203是由细菌引起的,即使特定病原体并不表示除了沙门氏菌和志贺氏杆菌暴发(16]。在巴拿马,2019年报告了277286与食源性病原体相关疾病(17]。但是,没有更新数据的微生物负责这些暴发可自2002年以来,当百分之二十八(28%)的调查食源性暴发SFP相关,大肠杆菌负责百分之六十二(62%)18]。
抗生素耐药金黄色葡萄球菌已经从牛奶和奶酪孤立在世界的许多地方19- - - - - -23]。加剧的食品安全漏洞金黄色葡萄球菌在奶酪,一些菌株能够躲避抗生素治疗。这些菌株,通常称为抗生素耐药菌株,表明多种抗生素耐药性模式(21,24]。这抵抗多种抗生素组可以由细菌染色体,基因质粒、转座子或磁带,纳入整合子(25,26),从而使细菌菌株的基因转移在一个容易的过程。抗生素耐药性细菌中是一个重要的公共卫生问题由于其持续的流通环境和奶酪的顺向污染(27]。除了抗生素耐药性的监测金黄色葡萄球菌在奶酪,重视预防耐多药菌株的传播,这可能有多个不良后果。因此,本研究的目的是评估金黄色葡萄球菌浓度水平及其抗生素耐药模式,在当地生产和商业化巴氏杀菌在巴拿马城奶酪。
2。材料和方法
2.1。研究区和样本收集
共有五个品牌的巴氏杀菌新鲜的白奶酪在巴拿马城销售进行了分析。五个样品每个巴氏杀菌的新鲜白奶酪品牌从不同的独立收集当地的超市,所有这些奶酪包装和冷藏状态下保存在4°C。样本集合进行连续五实地考察并被置于无菌袋、编号,冷链的实验室实验和应用微生物学(LAMEXA)大学的巴拿马和储存在4°C到处理。分析进行24 h内集合。
2.2。分离和鉴定金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌是孤立和计算使用细菌分析方法中描述的方法(28]。短暂,25 g的每个样品的重量无菌无菌兜包袋(西沃德医疗兜包袋©苏厄德、德国)包含消毒225毫升的0.1% (w / v)蛋白胨水(Difco,墨西哥城,墨西哥人)和均质2分钟,其次是连续10倍稀释直到1×10−6。
细菌的分析是由电镀0.1毫升每个稀释成一式三份Baird-Parker琼脂(BP, Oxoid贝辛斯托克,汉普郡,英国),补充了蛋黄亚碲酸盐乳剂(Oxoid,贝辛斯托克,汉普郡,英国)。所有的分析都是在无菌条件下进行的。镀文化被孵化在37°C 48 h。殖民地,表现出的特点金黄色葡萄球菌形态学(与一个不透明的区域在一个圆形黑色殖民地外清除区)被认为是进一步确认。
2.3。凝固酶试验和枚举金黄色葡萄球菌
假定所有金黄色葡萄球菌隔离受到凝固酶试验所描述的Koneman et al。29日]。的数量金黄色葡萄球菌据报道作为测试样本的CFU / g,考虑总菌落数(TC), coagulase-confirmed殖民地(CC)的数量,选择的假定的殖民地(SC),稀释(D),接种量(V)到BP琼脂。使用的公式是
2.4。巴氏杀菌的微生物质量评估奶酪
根据制定的指导方针在食品微生物学实验室方法(LMFM) [30.),巴氏杀菌的微生物质量奶酪可以分为两个不同的类别根据细菌计数的金黄色葡萄球菌:(1)可接受的和(2)接受/潜在危险。一个奶酪样例与金黄色葡萄球菌数,大于或等于1×103CFU / g,被认为是为人类食用不健康;因此,它符合类别(2)。
2.5。抗生素敏感性测试
Coagulase-confirmed金黄色葡萄球菌殖民地检测敏感性不同的抗生素,使用disk-agar扩散方法根据临床和实验室标准协会(31日]。剂从每个金黄色葡萄球菌隔离种植在5毫升的耗氧Muller-Hinton肉汤(Bioxon,墨西哥城,墨西哥人)和孵化在37°C到浊度等于MacFarland 0.5标准。Muller-Hinton琼脂板表面接种了金黄色葡萄球菌文化用无菌棉签,抗生素浸渍磁盘(双相障碍诊断,墨西哥城,墨西哥人)放在接种琼脂板的表面。一个参考的金黄色葡萄球菌(写明ATCC 6538)是用作控制。抗生素红霉素(测试E(15)µ(30克)、四环素(TE)µ(10 g)、庆大霉素(宝石)µ(30 g),万古霉素(VA)µ(1 g)、新青二(牛)µ背影)(g)、氯霉素(30µ(2 g)、克林霉素(CC)µ(5克)、氧氟沙星(OFX)µg)和利福平(RA) (5µg),盘子在37°C孵化18 - 24 h,并测量抑菌圈的大小。隔离被归类为耐药、中间或受某种特定抗生素在临床和实验室标准协会标准(31日]。在这项研究中使用的抗菌素的细节给出了表1。
2.6。统计分析
统计差异取决于执行差异分析与0.05%的显著水平。软件SPSS统计22 (32)是用于分析、和值≤0.01被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。细菌数量和微生物质量的巴氏杀菌奶酪
总共25巴氏杀菌奶酪样本来自五个不同品牌(五个样本/品牌)的筛查金黄色葡萄球菌(图1)。所有的怀疑金黄色葡萄球菌殖民地受到凝固酶试验确认。Coagulase-positive菌落数,每个品牌的污染水平测定,给下面的结果:五个样品分析从品牌1阳性的存在金黄色葡萄球菌平均6×10的价值3CFU / g;两个正样本中发现品牌2(2×10的平均值4CFU / g);四个正样本品牌3(平均值为1.6×104CFU / g);品牌5和1阳性样本(平均3.6×10的价值4CFU / g)。因此,根据食品微生物学实验室方法,这四个品牌的巴氏杀菌为人类食用奶酪被认为是令人不满意的。另一方面,品牌4没有任何污染金黄色葡萄球菌消费,因此,它是安全的。
3.2。抗生素的敏感性金黄色葡萄球菌隔离
九兽医和人类健康相关的抗菌药物,从不同的抗生素类,进行了测试。总共有一百金黄色葡萄球菌隔离对抗菌药物敏感性进行了分析。49人抵抗抗生素的至少一个测试。的百分比的摘要金黄色葡萄球菌菌株,对这些抗生素,在表提供1。检查的品牌,我们可以检测到金黄色葡萄球菌隔离显示以下六个抗生素:对一些宝石,弗吉尼亚州,牛,OFX, TE和RA(表1)。相比之下,百分之五十五(55%)金黄色葡萄球菌隔离测试显示没有对大肠中间电阻的背影和CC中观察到百分之五十一(51%)和隔离的37例(37%),分别为。然而,一个重要的抵抗CC在35 (35%)金黄色葡萄球菌隔离(表1)。虽然它不是遇到的阻力水平最高的国家之一在这项研究中,结果仍然是惊人的,考虑CC最常见的抗生素用于治疗nonlife-threatening人类感染金黄色葡萄球菌。
对两个或两个以上的九个抗生素检测的百分之四十二(42%)金黄色葡萄球菌49岁的隔离(21)。总共14个不同的抗生素multiresistance概要文件被发现(表2)。模式显示4表型资料两个抗生素(A1-A4)和表达的7株(14%):A1和四个隔离展示E-TE阻力;模式B1-B6显示抗三种抗生素(20%,9/49)包括CC的电阻剖面;模式C1、C2和D1展出阻力四个抗生素(4%,2/49)和五个抗生素(2%,1/49),分别。一个49金黄色葡萄球菌隔离显示抗八的九抗生素被测试。结果表明多药耐药性概要文件超过两个代理在20个不同的抗生素类金黄色葡萄球菌隔离的49岁占百分之四十二(42%)。多药耐药性是经常发现在人类起源的菌株,而在兽医,偶尔报道(33,34]。最高的品牌抗生素耐药性资料是2(8抗生素抗性)和5(6电阻),其次是1和3 2 5和抗生素抗性,分别。
4所示。讨论
金黄色葡萄球菌食源性病原体,与各种类型的食源性暴发有关消费的奶酪,造成对健康产生巨大的影响,经济和贸易问题。对于分析五巴氏杀菌奶酪品牌,其中四个是不适合人类消费由于高水平的细菌(35),根据制定的指导方针在食品微生物学实验室方法(LMFM) [30.]。一个奶酪样例与金黄色葡萄球菌数,大于或等于1×103CFU / g,被认为是不健康的对人类消费,认为只有品牌4符合标准。凝固酶试验是一个歧视的工具葡萄球菌病原物种(36]。在目前的研究中,coagulase-positive葡萄球菌的总患病率为百分之八十(80%)。污染率高于观察的调查Normano et al。27],奶制品中的coagulase-positive葡萄球菌的总患病率仅为17.3%。Nusrat et al。37奶酪)显示,百分之四十七(47%)的样品存在金黄色葡萄球菌。coagulase-positive的存在葡萄球菌奶酪的分析在这项研究中,阐述了巴氏杀菌奶,可能是一个表明卫生缺陷产品的存储和零售业(27]。另一方面,它已经证明了金黄色葡萄球菌可以进入通过受污染的原料奶由于奶牛隐性乳房炎,由于食品处理不当,它可能促进其殖民统治整个加工厂,因此污染最终产品(9,38,39]。的鲁棒性金黄色葡萄球菌食品会增加生产葡萄球菌肠毒素的风险,因为细菌只能通过热过程被消除,但毒素依然存在,可能导致SFP (40,41]。SFP的诊断标准是基于1×10的检测和恢复5CFU /克金黄色葡萄球菌(11,42]。Coagulase-positive菌落数是6×103CFU /品牌1和3.6×10 g4CFU / g品牌5(图1),因此,SFP符合诊断标准是基于检测和恢复的小于1×105CFU /克金黄色葡萄球菌。然而,由于价值很高,尤其是对品牌5,这将是值得分析的金黄色葡萄球菌毒素,代表了对公共卫生风险。缺乏生产过程中的关键控制点的奶酪也可能导致病原体的生存和副产物(10),虽然我们不能排除在超市级别处理条件可能也产生影响。因此,这些结果表明迫切需要实现食品卫生标准的食品行业。
另一方面,抗生素的使用和不合适的处方在公共,私人和农业部门被认为是细菌耐药性的增加的主要因素(43,44]。高水平的抗生素耐药性在这项研究中被发现。观察耐红霉素的比例很高,这可能归因于其频繁使用在人类感染的治疗。事实上,鼻和手污染食物与抗多种抗菌素的食品操作者和毒性金黄色葡萄球菌已经被报道。例如,抗生素耐药和肠毒素gene-positive金黄色葡萄球菌从鼻拭子和孤立的手指纹的食物处理程序在伊朗中部,香港、葡萄牙、马来西亚(45- - - - - -48]。
接触电阻的金黄色葡萄球菌克林霉素、氯霉素可以由于其在兽医使用。Rivera-Salazar et al。21高频率的报道金黄色葡萄球菌抗生素耐药性(隔离)的56%来自委内瑞拉的巴氏杀菌和未经高温消毒的奶酪样本。苯唑西林青霉素(44%)、(20%)、四环素(12%)、红霉素(8%)、阿米卡星(8%)、卡那霉素(4%)、环丙沙星(4%)、克林霉素(4%)与我们的结果一致。另一方面,Nusrat et al。37发现高水平的金黄色葡萄球菌苯唑西林耐甲氧西林(58.8%)和从孟加拉国奶酪样品(100%)。本研究的结果表明金黄色葡萄球菌隔离在巴拿马的巴氏杀菌奶酪市场大环内酯类的耐抗生素类。这些结果与蒙托亚的协议49),显示金黄色葡萄球菌耐红霉素等大环内酯类、克林霉素lincosamide类。多药耐药性是百分之四十二(42%)的观察金黄色葡萄球菌隔离,包括目前的研究中使用的所有抗生素类(表2),据Rivera-Salazar et al。21]。是否抗生素耐药性的差异报告的概要文件中观察到我们的工作与Nusrat et al。37)是由于不同的奶酪特征(湿度或酸性),制造,分销,或处理不能解决,因为作者不描述这些数据。这将是有趣的研究如果抗生素耐药性的概要文件金黄色葡萄球菌隔离从食品操作者的传播会解释这些地区之间的差异。
5。结论
的发生金黄色葡萄球菌在巴氏杀菌奶酪在巴拿马城的零售销售市场具有风险对消费者的食品。巴氏杀菌的低微生物质量奶酪在巴拿马城市场表明,细菌可能会发现其他巴拿马市场具有类似甚至卫生条件较差,证明worker-vendor培训和进一步研究病原体的持久性,以及在市场层面的应用有效的纠正措施。因此,连续监测金黄色葡萄球菌在巴拿马的零售市场将帮助确定致病来源,促进更好的发展实践加工和销售食物。它还应该完善立法框架,控制食品中病原体的存在。最后,这些数据证实,良好的卫生习惯和温度控制是至关重要的金黄色葡萄球菌控制和预防食品零售市场。
数据可用性
没有数据被用来支持本研究。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这部分工作是支持Sistema Nacional de Investigacion (SNI) Secretaria Nacional de Ciencia Tecnologia e Innovacion(巴拿马)。作者还要感谢哈辛托阿里尔·佩雷斯数据统计分析中对他的支持。