文摘

牛奶的微生物质量是一个重要的参数在确定其安全性。过程,如巴氏灭菌法是为了确保牛奶是安全的消费;然而,postpasteurization活动可能会导致牛奶污染,因此威胁消费者的健康。本研究试图确定微生物安全的牛奶从自动售货机位于内罗毕的研究和Dagoretti北非正式定居点。37牛奶样本收集储罐和自动售货机位于研究区微生物安全使用横断面设计和测试。数据被记录在数据表,并使用频率和分析t以及借助社会科学统计软件包的软件。牛奶样品测试可接受水平的pH平均值为6.75;然而,样本自动售货机的pH值低于样本储罐。牛奶样品的自动售货机有高水平的可行的总数(日志4.7028 cfu /毫升)以81%的样本数量超出了可接受的标准。高水平的金黄色葡萄球菌(日志2.5485 cfu /毫升)也发现51%的样本。大肠杆菌27%的牛奶样品中检测到自动售货机,在吗沙门氏菌种虫害没有检测到。有一个可行的计数(总额的数量显著增加 ),金黄色葡萄球菌( ),和大肠杆菌( )牛奶样品的自动售货机相比,样本储罐。研究结果表明,牛奶从自动售货机在内罗毕的选择非正式定居点是高度污染,可以给消费者带来健康风险如果没有任何进一步的热处理。牛奶自动售货机处理程序应该被训练实践,保证牛奶的质量和安全。公众意识也应该上创建的一般安全牛奶从自动售货机,以保护消费者健康造成潜在危害饮用受污染的牛奶。

1。介绍

牛奶的微生物质量是一个重要的参数,通常用于确定牛奶的安全1]。牛奶危害不断用作牛奶质量由于潜在水平的主要决定因素的威胁,他们对消费者如果出现在牛奶。牛奶是一个复杂的生物液体是高营养,因此为各种微生物提供了一个有利的发展环境。污染的牛奶通常发生在价值链三个preconsumption点:在生产过程中,当它被运输,在零售阶段(2]。先前的研究表明,巴氏杀菌奶的质量和安全是高度妥协零售点(3]。牛奶是否适合消费研究发现牛奶中病原微生物,储存零售(4),而另一项研究评估巴氏杀菌奶发现的微生物质量高可行的数量和总大肠菌群在巴氏杀菌奶5]。

微生物的主要贡献者是食源性疾病特别是在发展中国家(6牛奶中,他们的存在,尤其是巴氏杀菌奶,威胁消费者的健康。一些常见的微生物污染物贫穷造成的牛奶牛奶处理实践包括大肠杆菌群,致肠病的大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,沙门氏菌spp。单核细胞增多性李斯特氏菌,蜡样芽胞杆菌等(7]。大肠杆菌群微生物指标可能显示潜在的排泄物污染的牛奶。大肠杆菌是致病微生物污染物产生的粪便污染,和其在牛奶消费时可能导致食物中毒。金黄色葡萄球菌也会导致食物中毒。这是现成的环境中,特别是在表面,和可怜的牛奶处理实践可能导致微生物污染的牛奶。沙门氏菌种虫害构成普通牛奶污染物引起沙门氏菌病和牛奶中可能发生由于postpasteurization污染。单核细胞增多性李斯特氏菌是另一个严重的牛奶和奶制品污染物导致李氏杆菌病,和其在牛奶通常是可怜的巴氏灭菌过程的结果或postpasteurization污染(8]。如果存在于牛奶,这些病原体提供一个公共卫生问题考虑到各级牛奶是高消耗的社会。

肯尼亚的非正式市场发挥重要作用的牛奶零售行业超过80%的牛奶达到当地市场分发通过非正式渠道(9]。对牛奶的需求的增加导致了牛奶的采用和广泛使用自动售货机,因为他们提供更好的存储的牛奶在零售阶段和为消费者提供价格的灵活性10]。牛奶自动售货机是紧凑复杂设备由一个筒,坐落在机器内部存储牛奶、一个搅拌器,冷却系统,分发牛奶的喷嘴。机器、功耗和一些有自动清洗系统保持干净和电子支付系统,用来决定分发牛奶的体积。高涨的牛奶自动售货机在内罗毕的非正式定居点提出关注安全的牛奶从自动售货机由于可疑处理实践供应商考虑到牛奶供应商的实践是至关重要的在确定微生物安全的牛奶卖给消费者。而自动售货机增加了牛奶零售的便利,他们处理可能危及安全的牛奶销售。研究微生物的牛奶质量从自动售货机在斯洛文尼亚表示,大部分牛奶从自动售货机不满足hygienic-technical要求按照欧盟规定(11]。

本研究试图确定牛奶从牛奶的微生物安全自动售货机研究和Dagoretti北非正式定居点内罗毕,肯尼亚。

2。材料和方法

2.1。研究网站

研究进行了非正式定居点的内罗毕,肯尼亚。肯尼亚首都内罗毕是和有17个县下人口超过400万人(根据2019年的人口普查报告12]。大多数的这些人都是低收入者居住在非正规住区分布在这些县下。本研究两县下有目的的选择;这些包括研究和Dagoretti北部。的领域是有目的的选择,因为他们包含了一些最大的非正式定居点县人口密度高。

图1显示了研究和Dagoretti北的位置。研究位于内罗毕市西南约12.1公里²和人口约178000人。Dagoretti内罗毕北部位于西部的城市,它是大约29公里²人口约181000人。这两个地区的区域特点是无计划的定居点,房屋质量差,获得安全饮用水和卫生设施不足,可怜的排水系统。

2.2。研究设计

横断面设计与分析组件是用来进行研究,数据收集在一个给定的时间点的研究。分析元素继承牛奶样品的实验室分析收集来确定牛奶中的微生物污染水平的自动售货机。这个设计研究是恰当的,因为它使人们有可能估计牛奶中微生物污染的程度,也使许多人的评估结果在一个合理的时间内(13]。

2.3。研究背景

研究的非正式定居点和Dagoretti北代表的设置研究。在研究中,研究四个病房有目的的选择;这些包括Makina Laini萨巴,林迪城区和Sarang 'ombe。在Dagoretti北部,两个病房有目的的选择;这些包括Kawangware和Gatina病房。这些区域是由非正式定居点和结构特征主要驻扎的牛奶自动售货机。自动售货机中随机分布的地区,没有任何特定的顺序。实验室分析的样品进行了内罗毕大学的食品微生物实验室。

2.4。研究人群

研究人口由牛奶供应商和牛奶自动售货机位于研究和Dagoretti北的非正式定居点。内previsit进行研究建立的总数可用牛奶自动售货机和操作。牛奶自动售货机作为抽样单位。

2.5。样本大小

详尽的采样可用牛奶的自动售货机进行了研究地区根据抽样框架见图2。一共有37个牛奶自动售货机,和来自北方Dagoretti 20人,而17来自研究。牛奶自动售货机确认都包括在这项研究。牛奶样品收集(250毫升)的复制可用牛奶自动售货机进行实验室分析。

2.6。抽样程序

抽样的牛奶进行了自动售货机的实验室分析一段时间内两个月2020年8月和9月的几个月里,开始Dagoretti北,然后研究。个月取样的选择并不是基于任何因素。抽样是每个抽样日期上午完成的。牛奶样品(250毫升)的收集罐位于机器通过选定的自动售货机的喷嘴使用无菌取样瓶和根据ISO 707: 2010牛奶样本集合。类似从储罐取样量一直保持与自动售货机用牛奶等待加到自动售货机罐。每个样本对应一个唯一标识代码代表一个样本单位。收集到的样本被保存在绝缘冷却器后2小时内框和运送到实验室的第一个样品实验室分析的集合。

2.7。数据收集

确定微生物安全的牛奶从牛奶自动售货机涉及的牛奶样品交付坦克和自动售货机,然后带他们进行实验室分析;抽样的样本进行了分析在24小时内。在实验室里,牛奶样品收集第一次测试的pH值来确定其质量。牛奶中的微生物污染水平的样本分析,和结果记录集监管标准对不同微生物为了确定牛奶从自动售货机的安全。

研究工具用于收集的数据包括取样瓶收集牛奶样品,标签识别样本,温度计测量温度、码头18岁冷却器盒存放牛奶样品在运输期间,冰箱储存样品在实验室,实验室玻璃器皿样品制备、起动器2100 - f排开酸度计,培养皿接种的样本,Memmert孵化器模式100 - 800培养微生物,一个SC6PLUS菌落计数器枚举的殖民地,和SICCLCA-01高压蒸汽灭菌媒体和微生物培养物。实验室测试的结果被记录在数据表进行分析。

2.8。道德的考虑

本研究由国家科学委员会批准,技术和创新的肯尼亚牌照号码NACOSTI / P / 20/5347。

2.9。同意从参与者

之前样品收集在每一个采样单元,受访者为研究目的,采集的样本被要求签署一份同意书表示数据的目的和机密性。

2.10。分析方法

2.10.1。牛奶pH值的确定

牛奶是第一次测试的pH值到达实验室使用起动器2100 - f排开pH计美国制造。牛奶样品,得到20毫升,转移到无菌烧杯。酸度计电极然后用蒸馏水冲洗,用纸巾擦了擦,下降到20毫升牛奶样品。牛奶的酸度的要求阅读计当时拍摄和记录数据表之前清洗电极和返回到它的缓冲区。这是重复了两次,对每一个牛奶样品测试。

2.10.2。枚举的可行的计数

总活菌计数的牛奶样品进行测试/ KS ISO 4833 - 1分析方法。牛奶样品进行分析是由传输10毫升的一个给定的样本为90毫升无菌稀释剂(Oxoid缓冲蛋白胨水)和混合彻底形成主稀释。连续稀释是由无菌转移1毫升的主稀释到另一个9毫升无菌稀释剂使用无菌吸管。进一步稀释被转移准备1毫升的每个连续的进一步稀释成9毫升的稀释剂第四稀释。

使用无菌吸管,1毫升的每个选择稀释转入标记无菌培养皿开始最稀溶液的稀释准备。大约15毫升Oxoid标准平板计数琼脂VWB-6水浴炼,然后添加每个接种无菌培养皿中。培养皿的内容然后混合后立即倒顺时针旋转盘子,逆时针方向,横盘整理。固化后,培养皿被孵化在倒置的位置的温度72小时Memmert孵化器在德国(图3)。

72小时后孵化器,标准平板计数琼脂板取出来检查发现了殖民地的增长(总活菌计数)枚举用菌落计数器和表达的菌落每毫升(cfu /毫升)。

2.10.3。枚举的金黄色葡萄球菌

Coagulase-positive金黄色葡萄球菌牛奶中的测试样本按照KS ISO 6888 - 1的分析方法。牛奶样本由给定样本10毫升的移植到90毫升无菌稀释剂(Oxoid缓冲蛋白胨水)和混合彻底形成主稀释。连续稀释是由无菌转移1毫升的主稀释到另一个9毫升无菌稀释剂使用无菌吸管。进一步稀释被转移准备1毫升的每个连续的进一步稀释成9毫升第三稀释的稀释剂。

从最高稀释镀,0.1毫升的样品稀释悬挂无菌转移到事前准备的Oxoid Baird帕克媒体板。然后培养液是分布在琼脂板的表面使用无菌玻璃撒布机,和盘子被晾干。接种板块被倒置和孵化48小时。

Baird帕克盘子然后删除了黑色或灰色的闪亮的殖民地被清除区;这是典型的coagulase-positive增长特征金黄色葡萄球菌殖民地Baird帕克媒体。确认测试是通过革兰氏染色法进行菌落特征的存在革兰氏阳性球菌菌株出现在集群被确认。凝固酶试验也执行,殖民地coagulase-positive金黄色葡萄球菌。

2.10.4。检测大肠杆菌

牛奶样本检测的存在大肠杆菌从HiMedia使用HiCrome显色琼脂。牛奶样本由给定样本10毫升的移植到90毫升无菌稀释剂(Oxoid缓冲蛋白胨水)和混合彻底形成主稀释。连续稀释是由无菌转移1毫升的主稀释到另一个9毫升无菌稀释剂使用无菌吸管。进一步稀释被转移准备1毫升的每个连续的进一步稀释成9毫升第三稀释的稀释剂。接种当时由转移0.5毫升的样品稀释到快餐店的表面HiCrome显色琼脂使用无菌吸管。琼脂板上的培养液当时传播使用无菌玻璃撒布机和晾干。接种板块被倒置和孵化24小时,然后检查的存在大肠杆菌。

24小时后的孵化器,蓝色/紫色殖民地HiCrome显色琼脂板被选为大肠杆菌菌落特征。殖民地被进一步证实大肠杆菌通过一个吲哚试验检测的能力大肠杆菌分解色氨酸的吲哚并形成一个红色的圈和科瓦奇试剂反应。

2.10.5。检测沙门氏菌仕达屋优先计划

检测沙门氏菌种虫害的牛奶样品是根据KS ISO 6579 - 1分析方法。25毫升牛奶样本准备转移的分析一个给定的样本为225毫升无菌稀释剂(Oxoid缓冲蛋白胨水)和混合彻底形成preenrichment阶段。内容被孵化为24小时。选择性浓缩阶段是随后,0.1毫升preenrichment文化被转移到10毫升Rappaport-Vassiliadis大豆蛋白胨肉汤(旅游房车)Oxoid和孵化为24小时。其次是镀在选择性培养基;循环完整的选择性浓缩肉汤被裸奔到表面的亚文化快餐店木糖赖氨酸脱氧胆酸盐(XLD)琼脂板从Oxoid和孵化为24小时。

孵化24小时后,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐(XLD)琼脂板检查了殖民地的存在与一个黑色中心,略透明带红色;这是增长的特征沙门氏菌种虫害XLD琼脂。这些殖民地进一步测试使用生化测试证明沙门氏菌种虫害首先通过裸奔净化他们的殖民地在营养琼脂和孵化特征24小时然后裸奔纯殖民地三糖铁尿素(TSI)琼脂,琼脂Oxoid。

TSI,沙门氏菌种虫害产生酸(黄色)对接和碱性(粉红色)倾斜,变黑的媒体由于生产硫化氢和裂缝媒体由于天然气生产。在尿素琼脂,沙门氏菌种虫害urease-negative因此没有颜色变化预计尿素琼脂沙门氏菌种虫害的殖民地;如果积极反应,尿素水解,释放氨和改变媒体淡粉红色的颜色。

2.10.6。数据分析

pH值和微生物的牛奶质量数据的自动售货机使用社会科学统计软件包分析软件(IBM SPSS 25节)。总活菌数和微生物分析金黄色葡萄球菌,菌落的数量每毫升(cfu /毫升)出现在样品被记录在数据表和数据表进行了分析。为大肠杆菌和沙门氏菌给出一种虫害的测试中,一个点每个样本的微生物的存在和零分样本的两个测试微生物缺席。这是因为大肠杆菌和沙门氏菌种虫害是病原微生物的检测,只有牛奶中存在与否。牛奶pH值和数据总活菌数和的数量金黄色葡萄球菌牛奶中储油罐和自动售货机的统计,和他们相比平均计算,然后使用配对t以及。为大肠杆菌和沙门氏菌种虫害的测试中,所有的分数是否存在的微生物样本使用频率统计和总结,然后计算百分比。统计学意义是水平 。

3所示。结果

3.1。牛奶pH值

牛奶样品从自动售货机(N= 37)平均pH值为6.83,最高的pH值为7.02,最低,为6.51。的平均pH值样本储罐(N= 37)是6.94最高的pH值为7.09,最低,为6.65。pH值之间的差异的牛奶样本储罐和自动售货机是非常重要的 )。图4显示变化的意思是,中位数,和pH值范围的牛奶样品进行了分析。

3.2。总活菌计数

图5显示可行的总数的增长(TVC)殖民地标准平板计数琼脂作为孤立的牛奶样品的研究。

92%的牛奶样品选择从自动售货机(N= 37)有可行的计算总平均的日志4.7028 cfu /毫升。这些样本,这些来自北方Dagoretti平均总活菌计数的日志4.7155 cfu /毫升,从研究的平均的日志4.6832 cfu /毫升。牛奶样品选择的储罐(N= 37),89.2%的人完全可行的计算平均4.4377的日志cfu /毫升。有显著性差异( )之间的总可行的统计样本的储罐和自动售货机。图6显示变化的意思是,中位数,和范围值TVC的牛奶样品进行了分析。

当测试当前的可接受标准可行的计数在巴氏杀菌奶总日志cfu /毫升(4.477114),81%的牛奶取样从牛奶自动售货机在本研究可行的数量超过总推荐的标准。

3.3。金黄色葡萄球菌牛奶中

图7显示coagulase-positive的增长金黄色葡萄球菌殖民地Baird帕克琼脂作为孤立的从牛奶样品在这个研究。

51%的自动售货机的样品(N= coagulase-positive 37)是积极的金黄色葡萄球菌平均2.5485的日志cfu /毫升。这些样本,来自Dagoretti北有一个平均的日志2.5832 cfu /毫升,而的研究有一个平均的日志2.5128 coagulase-positive cfu /毫升金黄色葡萄球菌。从储油罐牛奶样品的选择(N= 37),41%的人被发现coagulase-positive金黄色葡萄球菌平均1.6483的日志cfu /毫升。有显著性差异( )coagulase-positive的数量之间的关系金黄色葡萄球菌在牛奶从储罐取样和采样的自动售货机。图8显示变化的意思是,中位数,和范围值金黄色葡萄球菌数量的牛奶样品进行了分析。

3.4。大肠杆菌牛奶中

图9显示的增长大肠杆菌殖民地在HiCrome显色琼脂作为孤立的牛奶样品研究和殖民地的吲哚阳性反应。

27%的自动售货机的样品(N= 37)是积极的大肠杆菌。这些样本,从Dagoretti北是积极的,25%的人在研究期间,29%的阳性样本大肠杆菌。从储油罐牛奶样品的选择(N= 37),这些阳性大肠杆菌是8.1%。有显著性差异( )之间的数量大肠杆菌阳性样本储罐和自动售货机(图10)。

3.5。沙门氏菌牛奶中。

图11显示了增长的特征沙门氏菌种虫害殖民地在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐(XLD)琼脂和消极的生化结果沙门氏菌种虫害殖民地作为测试三糖铁尿素(TSI)琼脂,琼脂。

牛奶样品分析在这项研究从自动售货机和储罐都为阴性沙门氏菌spp。虽然一些样品菌落生长在有选择性的媒体(XLD)的特征沙门氏菌spp, TSI和尿素琼脂生化测试证实了殖民地沙门氏菌spp。

4所示。讨论

平均pH值范围为牛奶样本储罐和自动售货机在可以接受的范围之内,巴氏杀菌奶的pH值(14]。牛奶中的明显降低pH值在样本储罐的自动售货机相比显示牛奶中微生物活动的增加由于细菌负荷增加样本的自动售货机。pH值的下降源于微生物分解牛奶成分,导致酸度增加缓慢发酵过程的结果明显相似的研究(15]。

总数量的可行的数量的增加,在牛奶样本储罐的自动售货机相比,样品可能是由于断裂的冷链储存牛奶或不良卫生行为的处理的牛奶自动售货机研究中明显。当牛奶处理设备不是立即清洗或牛奶后30分钟内删除,牛奶残留坚持牛奶接触表面粘附和干燥的残留物增加随着时间很难充分清洁机器,因此牛奶中微生物生长提供营养支持(16]。储存条件也可能导致总数量的可行的数量的增加,从自动售货机在牛奶;长期存储的牛奶在自动售货机内温度,有利于微生物增长增加牛奶的可行的计算总数量(17]。奥康奈尔等的研究。18]证实上面的总存储在牛奶中的细菌含量存储的时间增加而存储在牛奶中的细菌含量和不会增加随着储存时间的增加。

总活菌计数的数量的牛奶样品自动售货机可接受的水平的显著不同的监管标准确认81%牛奶自动售货机在这项研究不适合人类食用。一项由Wanjala [19在巴氏杀菌奶发现牛奶样品的微生物质量有一个可行的总数超过10⁶cfu /毫升,宣布消费牛奶的质量不满意,我们的发现是一致的。另一项研究评估巴氏杀菌奶的微生物质量在孟加拉国(5]发现牛奶高总可行的计算,从而为人类消费呈现牛奶不满意。

金黄色葡萄球菌的牛奶样品中检测出的储罐和自动售货机。有显著增加的数量金黄色葡萄球菌从自动售货机相比,从牛奶中储油罐。金黄色葡萄球菌表面上是常见的环境污染物,而且可能造成不良的卫生习惯如不恰当的清洁的表面或使用受污染的水进行清洗。当在一个给定的表面环境,金黄色葡萄球菌形成生物膜,增强坚持设备表面,很难消除(20.]。可怜的清洁和维护的牛奶自动售货机维持的可能存在金黄色葡萄球菌在设备表面;牛奶的营养特性和良好的温度可能是一个因素的增加金黄色葡萄球菌牛奶样品的自动售货机。类似的研究筛选细菌负责变质的牛奶证实的存在金黄色葡萄球菌在巴氏杀菌奶21]。金黄色葡萄球菌能产生热稳定肠毒素,可以承受热处理和通常负责食物中毒22]。的数量金黄色葡萄球菌存在于牛奶从自动售货机在这项研究中威胁消费者的健康。

的存在大肠杆菌在一些牛奶样品的自动售货机在牛奶或粪便污染的指示性由于不卫生的处理实践23]。牛奶样本的数量的增加呈阳性的自动售货机大肠杆菌是一个令人担忧的迹象的卫生状态的机器可能污染的水源,用于清洁自动售货机和残留大肠杆菌被冷藏链的断裂传播期间存储的牛奶。虽然巴氏灭菌牛奶可以帮助消除病原体大肠杆菌,postpasteurization污染可能出现由于糟糕的处理行为。一项由Vahedi et al。24报告的存在大肠杆菌生和巴氏杀菌奶和将此归因于污染废水和粪便的材料。另一项研究微生物质量的牛奶从自动售货机大肠杆菌在33.3%的样品(11]。病原微生物,任何数量的的存在大肠杆菌牛奶使牛奶不适合人类食用。

沙门氏菌种虫害中没有检测到牛奶样品分析在这项研究中,从储罐和自动售货机。这些发现与这些类似的研究沙门氏菌种虫害在巴氏杀菌奶样本被发现(25]。增长殖民地特点是负面的沙门氏菌种虫害生化测试后可以其他肠道细菌的生长与选择性琼脂中的相似的形态特征。

5。结论

牛奶从内罗毕非正式定居点的自动售货机不适合人类食用的高水平的可行的总数,金黄色葡萄球菌,大肠杆菌污染。牛奶自动售货机的一个潜在来源的牛奶污染明显显著增加牛奶中的微生物负载后存储在机器,因此他们是一个迫切需要解决的安全问题。

供应商行为影响微生物安全的牛奶,牛奶和改善实践的自动售货机处理程序通过常规培训和敏化可以帮助改善牛奶安全和减少对消费者的健康风险。牛奶的作用自动售货机的污染牛奶应该在更广泛的范围内去理解审计风险,这些机器对牛奶的安全。需要公众意识上的微生物质量的牛奶从自动售货机通过随机抽样和测试的监管机构,以保护消费者健康。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者欣然承认内罗毕大学的食品科学、营养、提供实验室服务和技术,和主管技术人员为他们的援助。作者还要感谢牛奶自动售货机处理程序参加本研究。