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《食品质量
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《食品质量/2021年/文章

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体积 2021年 |文章的ID 6621811 | https://doi.org/10.1155/2021/6621811

佩特拉HlasnaČepkova Jagr米甲,达格玛Janovska,瓦茨拉夫•Dvořaček安娜Kotrbova科扎,Iva Viehmannova, ”全面质量光谱分析蛇的水果:萨拉卡(Salacca zalacca)”,《食品质量, 卷。2021年, 文章的ID6621811, 12 页面, 2021年。 https://doi.org/10.1155/2021/6621811

全面质量光谱分析蛇的水果:萨拉卡(Salacca zalacca)

佩特拉HlasnaČepkova,1 米甲Jagr,2 达格玛Janovska,1 瓦茨拉夫·Dvořaček,2 安娜Kotrbova科扎克,2 和 Iva Viehmannova3

1基因库、作物研究所,Drnovska 507/73, 161 06布拉格Ruzyně,捷克共和国

2工厂的产品质量、作物研究所Drnovska 507/73, 161 06布拉格Ruzyně,捷克共和国

3的热带作物科学和农林AgriSciences,捷克布拉格大学的生命科学,Kamycka 129, 165 21布拉格,捷克共和国

学术编辑器:堡埃尔南德斯
收到了 2020年11月11日
修改后的 2021年2月26日
接受 2021年3月10
发表 2021年3月23日

文摘

蛇水果(Salacca zalacca(Gaert)。沃斯)是一种水果品种传统栽培在印尼和其他东南亚国家。的可食用部分水果含有一定量的总酚、类黄酮,和monoterpenoid化合物,证明他们是完美的来源。这项工作的主要目的是检测、量化,并确定各种酚类化合物存在于蛇果肉。超高液相色谱法耦合Q-Orbitrap串联质谱仪可以检测19萨拉卡纸浆的酚类化合物,包括5黄烷醇、酚酸,2黄酮醇,1黄酮,也大概5新酚类化合物。中发现的化合物11首次被报道和量化萨拉卡纸浆。绿原酸是目前最主要的酚类化合物。下一个蛇水果相对丰富的化合物表儿茶素,isoquercetin,新绿酸、阿魏酸、没食子酸和procyanidine B2(水平ca 5 - 10μ在甲醇提取g / g), ca syringic酸和咖啡酸(水平1μ在H g / g2O提取)。一个重要的总酚含量(257.17μL /毫升(10.56)和抗氧化活动μ果肉的M TE / g)测定。总之,美国zalacca水果有潜力作为自然的酚类化合物与抗氧化活动来源可能与他们的健康福利。

1。介绍

现在水果消费与生活质量改善由于其高含量的维他命,矿物质和抗氧化化合物(1]。特别是水果和蔬菜是人类饮食中的抗氧化剂的重要来源。大量的临床和流行病学研究支持的假设消费水果有利于与年龄相关的疾病,一些癌症,心脏病等。2]。最著名和食用水果的大规模种植,工业化,销往世界各地。异国情调的水果通常是本地水果已知,根据消费文化实践(1]。其他许多热带水果,热带地区已经众所周知,现在出现在大温和的城市市场3]。

热带水果之一是蛇fruit-salak (Salacca zalacca(Gaert)。沃斯)。萨拉卡是一个热带棕榈的家庭棕榈科,棕榈树的家庭。萨拉卡最初被称为蛇水果和它来自印尼和其他东南亚国家4]。手掌繁荣在潮湿的热带低地条件下每年1700 - 3100毫米的降雨和温度范围的22-32°C。许多品种的雌雄异体的性质导致广泛的表型变化,所以营养繁殖是用于生产合适的克隆(3)所需的水果质量(5,6]。

萨拉卡是种植的水果,球状的核果椭圆体(7]。最明显的特征是美国众多黄色到棕色鳞片,结束在一个小棘和覆盖的皮肤(3]。可食用的部分是nonfibrous,甜味和清爽的质地颜色从黄色白色,棕色8]。生果肉酸,有辛辣味由于单宁酸的存在。然而,成熟果肉脆软,甜味增加了一个独特的和令人愉快的香味9]。水果已经吃新鲜水果在东南亚很长一段时间。它还可以蜜饯、腌制和干燥,用新鲜的生水果制成沙拉(8]。

的内容基本营养成分(纤维、粗蛋白和粗脂肪)在蛇的果实是高于猕猴桃和高含量的矿物质也证实在萨拉卡(10]。蛇水果是一种热带水果与总糖的最高水平(17.4克/ 100克可食用部分)(11]。以前的研究证实,萨拉卡水果显示抗氧化活性高217毫克/ 100克和260毫克/ 100克可食用部分(4,12),甚至高于猕猴桃为8.42至10.24μM TE / g (10]。负责抗氧化性质的化合物被确定为绿原酸,儿茶素,表儿茶素(−),以及各种原花青素(13]。因此,60% ethanolic提取的水果萨拉卡是用于治疗6周和监测肥胖型糖尿病大鼠的代谢变化。作者观察到显著偏差的血糖水平和规范化的血液血脂在这些动物。提取的水果萨拉卡也能降低酮体,改善能量代谢。描述本研究的发现支持传统的水果萨拉卡在糖尿病管理(14]。

本研究的目的是为了全面调查一群有趣的生物活性酚类化合物存在于萨拉卡果肉。超高液相色谱(UHPLC)耦合Q-Orbitrap被用来分析methanolic和/或水提取蛇果肉和探测、识别、和量化的化合物存在于样品。应用高效的和敏感的方法促进了几个可能的新化合物的识别在萨拉卡水果。

2。材料和方法

2.1。标准样品准备和孤立

成熟的水果萨拉卡(Salacca zalacca)是常见的印尼市场购买的。果实在成熟阶段适合消费去皮,果肉是切成一小部分(ca 100 g)冷冻,然后冻干,最后地面得到淡黄色的粉末。粉是存储在黑暗中进一步处理之前−18°C。

准备参考股票的解决方案,个人参考标准的酚类化合物(芹黄素;咖啡酸;儿茶素;绿原酸;表儿茶素;阿魏酸;没食子酸;isoquercetin;柚苷配基;新绿酸; procyanidines B1, B2, and B3; syringic acid) were dissolved in MeOH to obtain a stock solution of 0.5 mg/mL and stored at −18°C. The stocks were further diluted with methanol to 1–500,000 ng/mL to create calibration curves for phenolic compound quantification. Probenecid was dissolved in MeOH at 0.5 mg/mL to prepare a stock solution of the internal standard. Probenecid was then added to individual reference standard solutions or test samples to the final concentration of 100 ng/mL.

冻干样品成熟果肉水果萨拉卡(0.1 g) 2毫升离心管三个提取1毫升的萃取溶剂与丙磺舒添加一个内部标准c= 100 ng / mL。三个各种礼仪的提取进行了测试:(1)纯甲醇;(2)水甲醇80%;和(3)水。提取每个样品进行两次30分钟在室温下使用超声波浴。然后,样本离心机(15分钟;13500转;25°C)和相应的上层清液结合,透过0.2μ米尼龙注射器过滤器(热科学、Rockwood TN,美国)。提取存储在−18°C之前超高液相chromatography-electrospray ionization-tandem质谱仪(UHPLC-ESI-MS / MS)分析。

2.2。化学物质和植物材料

标准的酚类化合物芹黄素、儿茶素、绿原酸、表儿茶素、阿魏酸、没食子酸,isoquercetin,柚苷配基,新绿酸,原花青素(B1, B2, B3) syringic酸、芦丁、内部标准盐酸probenecidverapamil购买的西格玛奥德里奇(圣路易斯,密苏里州,美国)。甲醇(质等级≥99.9%)来自里德尔de Haen (Seelze,德国)。甲酸(质级,99%)从VWR购买(比利时鲁汶)。纯水是获得Milli-Q净化系统(微孔,贝德福德,妈,美国)。

2.3。UHPLC-ESI-MS / MS仪器

色谱系统(Dionex终极3000 UHPLC系统,Dionex Softron GmbH,德国)由一个二进制泵(高压天然气- 3400 - rs),一个autosampler (wps - 3000 - rs),设备(阶跃恢复二极管- 3400)和柱温箱(苑- 3000 - rs)。检测了四极离子阱/轨道问exactive质谱仪(美国加利福尼亚州圣何塞Themo费舍尔科学、)。分析物在反相分离C18泰坦列(2.1×100毫米,1.9μ米)从Supelco(美国宾夕法尼亚州Bellefonte)。质系统配备了加热elecrospray电离源(HESI-II)和Xcalibur软件4.0版。

2.4。UHPLC-ESI-MS / MS分析

色谱分离进行了使用梯度洗脱和水作为溶剂,0.2%的甲酸和甲醇0.2%甲酸为溶剂B LC梯度是如下:0分钟:98%的溶剂+ 2%的溶剂B;2分钟98% + 2% B;11分钟5% + 95% B;12分钟B的100%;14分钟98% + 2% b列保持在40°C 0.35毫升/分钟的流量和注射量是1μl

MS / MS条件类似我们之前研究中使用(15]。短暂,电离是积极的还是消极的电喷雾电离(ESI)模式。喷涂电压维持在3.5 kV在正离子模式和−2.5 kV负离子模式。鞘气流是49任意单位,辅助气体流速保持在12任意单位,和尾气流是2任意单位。毛细管温度为259°C。氮作为鞘、辅助和扫气。加热器温度保持在419°C。S-lens射频水平50正离子模式和30负离子模式。质谱仪是通常在平行反应监测(人口、难民和移民事务局)模式。前体离子包含列表中被孤立在保留时间窗口±20年代,过滤在四极隔离窗(目标m / z±1.0阿姆河),分散在一个碰撞HCD单元。产品离子收集C-trap在17500号决议应用,2×10的AGC目标值5和最大注入100毫秒的时间。规范化的碰撞能量为每个化合物(指标)进行优化。前体和女儿离子监测、保留时间和不错的值如表所示1。的准确性和校准问Exactive Orbitrap质/女士检查使用参考标准从热费希尔科学获得的混合物。全/质量进行评估的数据浏览器Xcalibur软件,4.0 v。
酚类化合物 元素组成 Rt(分钟) [M + H) + (M / z)测量 典型的碎片离子(积极的模式中,m / z),片段的元素成分,质量精度(ppm)
Procyanidine B1 C30H26O12 5.15 579.1497 20. 427.10242 C22H19O9 (0.14 ppm);409.09189 C22H17O8 (0.23 ppm);291.08594 C15H15O6 (−1.30 ppm);127.03896 C6H7O3 (−0.06 ppm)
Procyanidine B2 C30H26O12 5.62 579.1496 20. 427.10220 C22H19O9 (−0.36 ppm);409.09128 C22H17O8 (−1.26 ppm);291.08597 C15H15O6 (−1.19 ppm);127.03893 C6H7O3 (−0.36 ppm)
(3:可能有的procyanidine异构体 C30H26O12 5.04 579.1499 20. 427.10225 C22H19O9 (−0.41 ppm);409.09130 C22H17O8 (−1.14 ppm);127.03895 C6H7O3 (−0.10 ppm)
Procyanidine B3 C30H26O12 5.04 579.1499 20. 427.10214 C22H19O9 (−0.51 ppm);409.09137 C22H17O8 (−1.04 ppm);127.03892 C6H7O3 (−0.46 ppm)
Syringic酸 C9H10O5 5.20 199.0601 25 155.07005 C8H11O3 (−1.40 ppm);123.04406 C7H7O2 (0.03 ppm);95.04945 C6H7O (3.29 ppm)
芦丁异构体(可能有的) C27H30O16 5.73 611.1606 20. 300.02673 C15H8O7 (0.54 ppm);271.02441 C14H7O6 (0.98 ppm);255.02959 C14H7O5 (1.54 ppm)
酚类化合物 元素组成 Rt(分钟) [M−H]−(m / z)测量 典型的碎片离子(消极的模式中,m / z),片段的元素成分,质量精度(ppm)
没食子酸 C7H6O5 1.80 169.01425 45 125.02322 C6H5O3 (−0.10 ppm);97.02815 C5H5O2 (−0.25 ppm)
新绿酸 C16H18NO9 4.72 353.0878 40 191.05516 C7H11O6 (0.76 ppm)
儿茶素 C15H14NO6 5.30 289.0717 30. 245.08122 C14H13O4 (1.58 ppm);203.07039 C12H11O3 (0.58 ppm);125.02337 C6H5O3 (0.38 ppm);109.02823 C6H5O2 (−1.63 ppm)
阿魏酸 C10H10O4 5.40 193.05063 45 134.03600 C8H6O2 (0.23 ppm);178.02608 C9H6O4 (0.01 ppm);137.02319 C7H5O3 (−0.12 ppm)
(1:可能有的绿原酸异构体 C16H18NO9 5.64 353.0878 40 191.05506 C7H11O6 (0.25 ppm)
绿原酸 C16H18NO9 5.75 353.0878 40 191.05504 C7H11O6 (0.13 ppm)
(。2:可能有的绿原酸异构体 C16H18NO9 6.02 353.0878 40 191.05514 C7H11O6 (0.64 ppm)
咖啡酸 C9H8NO4 5.80 179.0350 20. 135.04391 C8H7O2 (−1.04 ppm)
表儿茶素 C15H14NO6 5.98 289.0719 30. 245.08121 C14H13O4 (1.51 ppm);203.07028 C12H11O3 (0.06 ppm);125.02325 C6H5O3 (−0.59 ppm);109.02833 C6H5O2 (−0.72 ppm)
Isoquercetin C21H20NO12 7.49 463.0882 30. 301.03427 C15H9O7 (−0.03 ppm);300.02667 C15H8O7 (0.73 ppm);255.02887 C14H7O5 (0.27 ppm);151.00255 C7H3O4 (−0.24 ppm)
柚苷配基 C15H12NO5 8.33 271.0612 40 151.00249 C7H3O4 (−0.65 ppm);119.04897 C8H7O (−1.41 ppm)
(。4:可能有的柚苷配基异构体 C15H12NO5 8.33 271.0612 40 151.00250 C7H3O4 (−0.60 ppm);119.04894 C8H7O (−1.35 ppm)
芹黄素 C15H10NO5 9.02 269.0456 50 151.00266 C7H3O4 (0.46 ppm);11.03336 C8H5O (−1.09 ppm)
:规范化的碰撞能量。
表1
质谱数据(积极的和消极的电离)酚类化合物中发现Salacca zalacca果肉UHPLC-HRMS / MS分析。
2.5。萨拉卡样品中测定酚类化合物浓度和统计分析

萨拉卡纸浆样品中酚类化合物的识别是基于他们的保留时间相对于真实的标准和质量光谱数据(准确质量测定生成元素组成和分裂分子离子)的模式获得的质,与先前的研究中描述(9,13]。校准曲线为复合量化由绘制峰面积(调整丙磺舒作为内部标准)和浓度相关的参考标准。

2.6。化学分析
2.6.1。Folin化验

总酚含量(TPC)决心spectrophotometrically Folin-Ciocalteau试剂不久就像我们之前所研究[16]。的修改方法Holasova et al。17使用了)。两个克冻干样本提取20毫升的80%甲醇60分钟的离心管。管子被铝箔免受阳光。结果提取(0.5毫升)用移液器吸取到50毫升容量瓶,用蒸馏水稀释。然后,2.5毫升Folin-Ciocalteau试剂(五、捷克共和国)和7.5毫升20%碳酸钠溶液搅拌后添加。2 h后站在黑暗中在实验室温度下,在波长吸光度λ= 765 nm对照空白在分光光度计Genesys 10紫外线(美国热科学)。结果量化使用没食子酸标准(默克公司、德国)和表达为没食子酸当量(GAE)。DPPH实验:自由基清除能力(RSC)决定在甲醇提取物的微量滴定板使用稳定的激进的2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)。短暂,20毫升的甲醇加入1 g的示例和动摇90分钟时免受光铝箔。二十μL与150年提取反应10分钟μL DPPH解决方案最初的吸光度一个= 0.6在550海里。反应发生在黑暗中,吸光度在550 nm阅读之后使用分光光度计(日出吸光度读者、Tecan、瑞士)。清除DPPH自由基的能力是决定使用标准曲线得到Trolox(西格玛奥德里奇,德国)的范围从0.0到0.2更易与L。结果表示为Trolox等效(TE)抗氧化活性(AA)。

2.7。统计分析

所有样品都分析了一式三份,并表示平均值±标准偏差。Statistica 12中执行数据分析软件(美国TIBCO软件,帕洛阿尔托,CA)和检测异常值(Grubb测试)。单向变异分析(方差分析)应用于比较意味着事后图基紧随其后的检验的显著性水平 。

3所示。结果与讨论

3.1。化学分析

有一些可用的信息总酚含量高(TPC)受到蛇水果的成熟阶段(15)这是伴随着更高的抗氧化活性与山竹果相比,芒果,rambai在先前的研究4]。

在我们的研究中,高总酚含量257.17±1.62毫克/ 100克GAE决心美国zalacca。类似的水平也之前报道美国zalacca与TPC高于其他水果种类(18,19),比得上沙棘的果实(沙棘l .) [18]。萨拉卡纸浆的样品在我们的研究显示抗氧化活性(AA)的10.56±4.20μ摩尔TE / g,这与先前发表的结果(20.),它是AA与黑桑(相当桑属黑质l .) [21]。

3.2。从萨拉卡浆提取酚类化合物

许多研究人员使用水或酒精溶剂(主要是水甲醇或EtOH各种有机浓度)对酚类化合物提取(9,13,14,22]。乙酸乙酯也被用于提取协议(23]。根据先前的研究,我们决定用三种提取溶剂不同的亲油性(甲醇、80%甲醇和水)披露尽可能多的不同的酚类化合物。利用超声波浴提取复苏增强。三抽30分钟25°C终于妥协似乎是最好的选择来获得提取酚类化合物产量最高的解决方案。

3.3。生物活性酚类化合物的分离和鉴定萨拉卡浆质/ MS

最近,分离从萨拉卡分离的化合物的水果通常是通过高效液相色谱或质配备了C18柱从不同的制造商(13,23,24]。同时,gc - ms分析分析derivatized或自然挥发性化合物从蛇的水果9,25,26]。我们成功地使用了泰坦C18 10厘米长列充分分离的各种尺度的酚类化合物,总共只有14分钟(图分析1)。好解决人口、难民和移民事务局色谱得到所有酚类化合物研究在本专栏:从早期筛选了没食子酸(tR= 1.80分钟),通过新绿酸(tR= 4.72分钟)和isoquercetin (tR= 7.49分钟),最新芹黄素tR= 9.02分钟。化合物的身份发现(图1和补充图1)被证实通过比较他们的保留时间和MS / MS分裂行为标准化合物。

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(一)
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(b)
图1
酚类化合物的分析Salacca zalacca果肉UHPLC-HRMS / MS和MS / MS光谱仪在人口、难民和移民事务局(平行反应监控)运营模式。注意:每个人口、难民和移民事务局过渡相应化合物的名称和描述的特征是它的保留时间,和m / z产品各自的前体离子和离子的价值观。(。)未知化合物。 阳性的电离; 负离子化。

我们分析了methanolic, 80%甲醇和水提取水果萨拉卡纸浆的UHPLC其次是积极的还是消极的,8经电离(π或镍)/女士(数字1和2和补充图1)。电离的模式进行优化用于研究化合物。一些化合物提供更高的信号(高灵敏度)后π。另一方面,其他化合物最好是倪后电离。因此,π是优先用于分析原花青素和syringic酸。倪是用于分析其他化合物,因为它提供了一个略高总离子信号对这些化合物。表1和2总结,8经/ MS数据基本评估所有化合物的分析研究是适合他们的身份后π或者倪模式。


图2
检测rutin-like复合(Rt = 5.73分钟)Salacca zalacca果肉和芦丁标准(Rt = 6.09分钟)UHPLC-HRMS与MS / MS / MS光谱仪在人口、难民和移民事务局(平行反应监控)运营模式与积极的电离。人口、难民和移民事务局过渡相应化合物的名称和描述的特征是它的保留时间,和m / z产品各自的前体离子和离子的价值观。
群多酚 复合一个 极性 酚类化合物在Salacca zalacca水果b,HESI电离
甲醇提取 80%甲醇提取 H2O提取
黄烷醇 表儿茶素 − 13.77±0.46 12.82±0.20 0.41±0.02
儿茶素 − (2.96±0.11)10−1 (2.97±0.14)10−1 留言。
Procyanidine B1 + (5.81±0.17)10−1 (4.71±0.08)10−1 (1.29±0.08)10−2
Procyanidine B2 + 9.64±0.31 11.51±0.23 (2.26±0.32)10−2
Procyanidine B3 + (4.42±0.19)10−1 (4.92±0.11)10−1 (1.20±0.09)10−2
酚酸 咖啡酸 − (1.51±0.03)10−2 (1.49±0.03)10−2 1.20±0.16
绿原酸 − 476.94±8.39 450.08±6.65 32.69±1.73
阿魏酸 − 11.72±0.36 10.61±0.40 0.38±0.04
没食子酸 − 7.45±0.15 7.17±0.18 0.18±0.02
新绿酸 − 9.39±0.29 7.07±0.15 0.13±0.01
Syringic酸 + (0.86±0.02)10−1 (0.84±0.03)10−1 1.25±0.07
黄酮醇 柚苷配基 − (8.54±0.90)10−2 (9.64±0.40)10−2 (0.43±0.04)10−2
Isoquercetin − 6.85±0.18 6.59±0.11 0.20±0.01
Flavons 芹黄素 − (1.32±0.66)10−1 (0.31±0.01)10−1 (0.05±0.01)10−1
一个化合物是按字母顺序排列。b活性化合物的浓度。所有的值表示为μg / g干重。酚类化合物含量和报道用平均值±标准偏差表示。
表2
个人酚类化合物决定的内容Salacca zalacca果肉。留言。:not determined.

有趣的是,在某些情况下,我们发现几个山峰截然不同m / z值相关的分子离子也提供相同的碎片m / z在MS / MS谱值。特别是我们观察到这一事实的原花青素(4峰值)、绿原酸和新绿(4山峰),儿茶素,表儿茶素(2峰),和柚苷配基(2峰(图)1)。新绿(tR= 4.72分钟)和绿原酸(tR= 5.75分钟)可以很容易地检测到人口、难民和移民事务局过渡从分子离子[M−H]−在m / z= 353.0878片段m / z= 191.0551(表1)。但另两座山峰也发现这个人口、难民和移民事务局过渡tR= 5.64和6.02分钟。山峰(名为“(。1”和“(。2”在图1)不匹配任何商用标准与绿原酸(例如,新绿酸或cryptochlorogenic酸)。因此,我们可以假设两个未知的化合物可能是一些新的位置异构体的绿原酸。(化合物”。2” was more abundant than compound neochlorogenic acid and the area of its peak was on the average about 20% of the area for chlorogenic acid. Unfortunately, any corresponding standards for these novel compounds are not available at this time; thus, their structure cannot be fully confirmed. Procyanidines afforded a molecular ion [M + H]+在m / z= 579.1497,形成特定的片段m / z= 427.102、409.091和127.038 MS / MS谱相关。人口、难民和移民事务局从四个峰出现m / z= 579.1497到409.0919(或427.102和127.038,分别)。三个峰很容易识别,通过比较他们的分析数据与相应的合成和行为标准,procyanidine B1 (tR= 5.15分钟),procyanidine B2 (tR= 5.62分钟)和procyanidine B3 (tR= 5.04)。剩下的第四峰tR= 5.52(复合”(。3”图1)也提供同样的MS / MS波谱特性是前面提到的原花青素。因此,我们可以推测化合物”。c3” could be a positional isomer of some procyanidine compound. Moreover, the peak of compound “u.c3” was relatively high, its area was repeatedly about 80% of the area of the most abundant procyanidine B2, and it was much larger than the area of less abundant procyanidines B1 and B3. A similar situation was also observed for naringenin, where a small additional peak was observed attR= 8.51分钟。这个未知的化合物(“u.c4”)有相同的MS / MS波谱特性是柚苷配基(tR= 8.33分钟);因此,我们可以假设它是最有可能一些新奇的位置异构体的黄酮类柚苷配基。有趣的是,我们也发现一个新的未知化合物tR= 5.77分钟的分子离子和MS / MS波谱特性相同的芦丁标准(tR= 6.09分钟)(图2)。这两种化合物可以明显区分,即使萨拉卡提取与芦丁标准上升(图2底部)。这可能是解释这个新颖的化合物存在于萨拉卡芦丁的提取可能是一个新颖的位置异构体。通过我们的,8经/ MS分析方法,不能准确区分所有的小说同分异构体的结构;这就是为什么未来核磁共振研究新准备相关的酚酸和类黄酮标准将不得不解决这个问题。

3.4。定量分析个体的酚类化合物在萨拉卡水果UHPLC-ESI-MS /女士

萨利赫et al。9,14]显示黄酮类化合物的存在,酚醛树脂苷,一些挥发性和芳香化合物的成熟水果萨拉卡。然而,到目前为止,很少有下列化合物的信息内容发表在蛇的水果。在这项研究中,确定了酚类化合物和黄酮类化合物被人口、难民和移民事务局UHPLC-HRMS / MS分析量化,如图1和表2。分析物的量计算的基础上相应的外部校准曲线生成的分析标准。最高水平的分析化合物中观察到纯甲醇提取,其次是80%甲醇提取(表2)。绿原酸在萨拉卡报告首次作为一个主要的抗氧化剂,在一起(−)表儿茶素和proanthocanindines13]。绿原酸也发现萨拉卡皮尔在大量23]。绿原酸和咖啡酸表现出较高的抗氧化性能,此外,他们报道的抑制剂α淀粉酶和α葡糖苷酶酶。这个活动可能是可能的机制的一部分的酚酸发挥其抗糖尿病的影响(27]。这里,绿原酸是最丰富的酚类化合物的水果肉发现水平约450的范围μ在480年甲醇提取和g / gμg / g 80%甲醇提取。此外,另一个酚醛acid-neochlorogenic酸存在于高浓度9.39μ弗兰克-威廉姆斯的g / g。两种酚酸浓度高于中确定猕猴桃arguta水果(28]。绿原酸也出现在大量的果汁其它不太常见的水果,比如莓(音乐女神oleraceaEngel)(12.6毫克/公斤)和接骨木(Sambucus黑质l .)(100.9毫克/公斤)29日]。绿原酸也发现野生桑(桑属黑质l .)和树番茄(Cyphomandra betacea骑兵)。通过毛细管电泳但在显著降低水平与我们的研究(5.21相比μg / g和5.28μg / g) (30.]。绿原酸中检测出8个水果物种优秀水平,加上咖啡酸,他们还表示这些化合物的有利影响葡萄糖代谢,脂质,肿瘤抑制(31日]。Syringic酸和咖啡酸的主要黄酮类化合物检测到四种猕猴桃品种(19),他们也通常出现在许多其他的水果种类(19,32,33]。在这里,发现了两种酚酸含量较低,1.25和1.20μg / g(水提物),与前面提到的比较研究。在另一个充满异国情调的水果,mutamba (Guazuma ulmifoliLam),其他成员发现了酚酸比萨拉卡水果。例外是咖啡酸,存在于mutamba更高(5.44μ鲜重的g / g (fw)相比,水果萨拉卡(34]。特别是,绿原酸及其衍生物的浓度可能是重要的水果加工和可能影响氧化和颜色开发过程中技术处理(28]。阿魏和没食子酸也评估在水果萨拉卡(9]。水平在60% ethanolic提取不同约8.5的水平μg / 100毫克的提取。在我们的研究中,我们发现了两种酚酸水平约为7 - 11μg / g(干重(dw)。

下一个相对丰富的黄酮类化合物,萨拉卡纸浆原花青素,表儿茶素,isoquercetin (ca, 5 - 10μ在甲醇提取g / g)。观察这些化合物是密切按照数据从先前的研究22,23,35]。本研究显示原花青素二聚体B1在5.81的水平μ原花青素dw g / g和B2检测为11.51μdw的g / g。然而,苹果的这群多酚检测水平的履历。原花青素Jonagold更高的B1 (36比萨拉卡)。同样,在mutamba原花青素二聚体B2和B1的观察水平明显高于在萨拉卡水果,包括原花青素三聚物C1 [34]。负责集团的黄烷醇,其他化合物抗氧化性质这种水果,如(−)表儿茶素,主要是存在二聚体通过五个一儿茶素和表儿茶素(13]。儿茶素也被发现在其他异国情调的水果种类,如费约果(Acca sellowiana(o . Berg) Burret) (37)和kainth (Pyrus pashiaBuch.-Ham。前女友D.Don) [38]。同样,在原花青素B1和B2的情况下,检测到的表儿茶素(13.77μ和儿茶素(0.29 g / g fw)μg / g fw)在萨拉卡在这项研究中明显低于提出的研究34,36]。

我们还观察到柚苷配基在萨拉卡水果。柚苷配基存在于柑橘类水果,如柚子、柚皮苷”的活动形式,分为积极的糖苷配基形式由肠道细菌酶的作用“柚苷配基”(39),确认的一个主要黄烷酮类(40,41]。这里,发现蛇水果是无比在较低浓度(0.09μdw的g / g)。在番茄和柚苷配基的低浓度也发现他们的产品(42]。据我们所知,这种化合物尚未观察到萨拉卡果肉。

在这里,isoquercetin也首次在萨拉卡发现水果。同样,在费约果汁(确定37]。Isoquercetin和芦丁,是一个著名的主要酚类化合物的共同点和苦荞麦广泛的多样性的内容,根据基因型和收藏领域43]。在萨拉卡的情况下,芦丁不存在,但在水果肉槲皮素的浓度高(36),6.85μg / g(干重(dw)。有趣的是,在上面的文本描述,我们发现一个新的rutin-like萨拉卡提取的化合物。

子1的另一个复合观察水平μ干重是芹黄素(0.13 g / gμg / g dw)。化学称为4′,5、7-trihydroxyflavone apigeninn属于黄酮类,也就是说,一些天然苷的糖苷配基。大量的药理作用,包括抗炎、antitoxicant和抗癌,归因于芹黄素(44]。芹黄素的含量在新鲜的食物,尤其是蔬菜和香草(45),该国从0.10到0.54毫克/公斤的弗兰克-威廉姆斯和这些值与本研究中观察到的水平。芹黄素的内容呈现在新鲜的香菜45)是在特殊级别21.6毫克/公斤的弗兰克-威廉姆斯。

4所示。结论

我们的研究证实UHPLC-HRMS /女士作为一个强大的酚醛树脂化合物的分离和检测分析技术,首次允许我们揭示并量化萨拉卡水果中酚酸和类黄酮。该方法快速、灵敏、准确和良好的重复性和实验过程很简单。生物活性的化合物,总共14个酚类化合物被确定纸浆的水果萨拉卡已闻名广泛的生物学性质和与健康促进功能。11个化合物在萨拉卡纸浆首次报道。最丰富的酚类化合物是绿原酸,其次是表儿茶素、procyanidine B2,新绿酸和阿魏酸。总酚含量(257.17μL /毫升(10.56)和抗氧化活动μ果肉的M TE / g)被发现在显著水平。大变化丰富的观察其他酚类化合物在萨拉卡水果。获得的数据表明,水果萨拉卡可以被视为一个有前途的生物活性功能食品的来源。

缩写

方差分析: 方差分析
出版社: 规范化的碰撞能量
人口、难民和移民事务局: 平行反应监测
相对标准偏差: 相对标准偏差
UHPLC-MS /女士: 超高液相色谱串联质谱分析
dw: 干重
弗兰克-威廉姆斯: 鲜重
TE: Trolox
(。) 未知化合物。

数据可用性

补充图S1将提交作为一个单独的文件。

的利益冲突

所有作者声明没有利益冲突。

作者的贡献

P.H.C.和输液导致概念化;M.J.,P.H.C., and I.V. contributed to methodology; M.J., P.H.C., and A.K.K. contributed to formal analysis, validation, and data curation; P.H.C. and M.J. contributed to writing of original draft; D.J. and V.D. contributed to critically reviewing and editing the manuscript; D.J and V.D. contributed to project administration. All authors read and approved the final manuscript and agreed with the published version of the manuscript.

确认

这项工作是由农业部项目的捷克共和国(没有。RO0418),部分NAZV QK1810102国家农业部的农业研究机构捷克共和国,补贴国家计划上的植物遗传资源的保护和使用和Agrobiodiversity(没有。6.2.5/51834/2017-MZE-17253)和内部授权机构的教师热带AgriSciences捷克布拉格大学生命科学IGA(项目号20205006)。

补充材料

补充图1:酚类化合物的分析Salacca zalacca果肉UHPLC-HRMS / MS和MS / MS光谱仪在人口、难民和移民事务局(平行反应监控)运营模式。注意:每个人口、难民和移民事务局过渡相应化合物的名称和描述的特征是它的保留时间,和m / z产品各自的前体离子和离子的价值观。(补充材料)

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