文摘
猴头菌属erinaceus是一种珍贵的食用和药用真菌营养价值高。它有很多功能,比如增强免疫力,抗肿瘤抗氧化作用,抗高血糖药,antihyperlipidemic,保护胃粘膜。然而,很少有研究的h . erinaceus化合物。摘要ultraperformance液相色谱串联高分辨率质谱(UPLC-Q-exactive-MS / MS)被用来分离和鉴定的化合物h . erinaceus。102种化合物被确定h . erinaceus通过比较与标准数据库如MZVault MZCloud,和华大基因研究院图书馆(自建标准库由华大基因研究院有限公司),包括类黄酮、萜类、酚酸、糖类,类固醇,有机酸,氨基酸。
1。介绍
猴头菌属erinaceus是一种珍贵的食用和药用真菌,它被列为中国的“四大菜系”,加上熊的爪子,海参,鱼翅1];已经使用了很长一段时间在中国传统医学(2]。研究表明,化学成分h . erinaceus包括萜类、酚醛树脂、类固醇、吡喃酮脂肪酸,和生物碱;大约80小分子化合物分离和鉴定h . erinaceus(3]。萜类化合物在h . erinaceus主要是与cyathane二萜骨架。萜类化合物在h . erinaceus第一次被孤立,被之一,从菌丝等人的h . erinaceus名叫Erinacines a - c [4]。随后,之一,等人孤立和确定Erinacines d, Erinacines J, Erinacines K的菌丝h . erinaceus(5- - - - - -7];李等人孤立和确定Erinacines H和Erinacines我从菌丝h . erinaceus(8];Kenmoku等人孤立和确定Erinacine P和Erinacine Q的菌丝h . erinaceus(9,10]。大多数的二萜化合物刺激器的神经生长因子综合法。酚醛塑料的主要成分h . erinaceus。8酚醛树脂分离和识别果期的尸体h . erinaceus由之一,团队在1990年至1993年之间,名叫Hericenone a - (11- - - - - -13]。之后,三个酚醛树脂被孤立,被Arnone et al。14]5′-羰基取代了5′-亚甲基,名叫Hericenes得了。随后,两个新酚醛树脂分离得到果期的尸体h . erinaceus由马et al。15),名叫Hericenone我和Hericenone D;它们有相同的脂肪酸链。一个新的骨架酚类化合物被隔离在果期的尸体h . erinaceus由李等人。16),名叫Erinacene d .除了萜类和酚醛树脂化合物,h . erinaceus丰富的类固醇,6个新的(erinarols f),和五个已知ergostane-type甾醇脂肪酸酯类孤立子实体的吗h . erinaceus;erinarols A和B显著激活的转录活动PPARs, PPARα,PPARγ(17]。以前的药理研究表明,h . erinaceus有很多药理作用,如调节免疫(18,19),神经保护(20.,21),抗抑郁药(22,23),抗氧化剂(24,抗肿瘤25],降糖药[26),和antihyperlipidemic属性(27),和保护胃粘膜28,29日]。
高效液相色谱串联质谱(质/ MS)技术的优势化合物的快速识别。质/ MS技术的成熟,越来越广泛应用于食品和药品领域的(30.- - - - - -35]。在这项研究中,ultraperformance液相色谱串联高分辨率质谱(UPLC-Q-Exactive-MS / MS)结合标准物质数据库用于快速识别的化学成分h . erinaceus。
2。材料和方法
2.1。仪器
质实验是由ultraperformance液相色谱(2 d UPLC水域,美国)和高分辨率质谱(美国热问Exactive)。海波西尔金aQ列(100毫米2.1毫米,1.9μ美国美元)购买从热费希尔科学。5430年低温高速离心机(离心机)是购自埃普多夫。涡流仪(ql - 901)从Qilinbeier购买仪器制造有限公司有限公司纯水仪(Milli-Q)从积分购买密理博公司,美国。
2.2。试剂
d3亮氨酸,13C9苯丙氨酸、d5色氨酸,13C3孕酮作为内部标准。甲醇(A454-4)和乙腈(A996-4)都在大规模光谱年级,从热费希尔科学购买,美国。甲酸铵(17843 - 250克)是获得霍尼韦尔丙烯酰胺,美国。甲酸(50144 - 50毫升)从DIMKA,美国。
2.3。材料
果期的尸体h . erinaceus得到来自河南龙凤实业有限公司,有限公司标本(2020-09-09)被保存在国家食用菌加工技术研发中心,河南大学。
2.4。准备样品
根据我们的团队常用的方法,干燥果期的尸体h . erinaceus被磨碎机。100克的h . erinaceus粉沉浸与50%乙醇(1000毫升)在室温下2次,每次3天。滤液集中获得48.6 g提取。50毫克的提取h . erinaceus被称重,然后800μL的解决方案以70%甲醇:内部标准( = 85:1)添加到样本。两个小钢珠子被添加到样品和地面组织磨床(50赫兹,5分钟),超声波在4°C水10分钟,和示例1 h−20°C。之后,15分钟的样本离心机在4°C, 25000 rpm, 500年μL的上层清液过滤96 -滤板,和滤液被用来检测。
2.5。色谱条件
质实验进行海泼斯尔合金金问列(100毫米2.1毫米,1.9μ米),流动相为0.1%甲酸的酸水(液体)和0.1%甲acid-acetonitrile(液体B)。洗脱梯度是如下:0 - 2分钟5% B;2-22分钟5% - -95% B;27分钟95% B;27.1 -30分钟5%流量为0.3毫升/分钟,列温度是40°C,和注射量是5μl
2.6。质谱条件
女士和女士2数据收集的Q Exactive质谱仪。的范围米/z150 - 1500年的70000号决议,女士和AGC是1吗e6,最大注射时间是100 ms。根据离子女士的力量,超越被选中来确定2碎片。的女士2分辨率是35000,AGC是2e5、最大注射时间是50 ms和分散能源被设置为20,40和60 eV。离子源(ESI)参数如下:鞘气体流速是40,辅助气体流量是10,喷涂电压(| KV |)正离子模式是3.80,喷涂电压(| KV |)负离子模式是3.20,毛细管温度为320°C,和辅助气体加热器温度为350°C。
2.7。数据分析
高分辨率质谱仪(美国热费希尔科学问Exactive)被用来收集数据在积极和消极离子模式,分别提高化学成分的报道。质/女士收集的原始质谱数据导入到复合发现者3.1(美国热费希尔科学)进行数据处理。它主要包括峰值提取、保留时间校正内和组间,添加剂离子合并,缺失值填充,背景峰标签和代谢物鉴定。最后,分子量、保留时间、化合物的峰面积,和识别结果。
3所示。结果
3.1。总离子色谱图
的总离子色谱图h . erinaceus如图1。
3.2。化合物的鉴定结果
的化合物h . erinaceus分析质/女士;结构的识别是基于保留时间,数据,女士和女士2数据与标准数据库。确定化合物分为三个等级(1级、2级和3级)根据比较结果,有,级别2的基础上确认女士数据,女士2数据、和属性的化合物和三级数据和女士女士被确认的基础上2数据。信誉序列如下:级别1 > 2 > 3级。具体结果如表所示1。102种化合物被初步确定h . erinaceus与鉴定等级1级和2级,包括31个有机酸、10个核苷酸类似物,8个氨基酸,碳水化合物6和衍生品,5个黄酮类化合物,3不饱和脂肪酸,3个萜类化合物,3个酚酸,1 phenylpropanoid 1类固醇,32其他化合物。大多数类黄酮和有机酸很容易deprotonated和负离子的反应模式。大多数核苷化合物容易使质子化和反应在正离子模式。一些化合物的识别过程如下。
复合49,C15H10O6,很容易在负离子模式下deprotonated产生离子米/z285年[M−H]−然后RDA裂解得到2碎片离子米/z133 (C8H6O2- H]−和米/z151 (C7H4O4- H]−。复合49被确认为木樨草素相比,数据库和引用(36]。的女士2谱图所示2。
化合物60产生离子米/z283年[M−H]−,然后失去了甲基,268离子[M H−−CH3]−,加上保留时间,数据,女士和女士2数据、复合60被确认为acacetin comparin与数据库和引用(37]。的女士2谱图所示3。
化合物62很容易质子化了的在正离子模式下产生离子米/z249年[M + H]+,然后失去了羟基,得到了离子米/z231年[M + H - H2O)+第三、复合62年被确认为atractylenolide通过比较与数据库和引用(38]。的女士2谱图所示4。
4所示。讨论和结论
在这项研究中,102个化合物初步确定h . erinaceus,包括有机酸、核苷酸类似物,氨基酸,碳水化合物和衍生品、黄酮类化合物、不饱和脂肪酸、萜类、酚酸、phenylpropanoid和类固醇。它表明化合物h . erinaceus是不同的。先前的研究表明,化学成分h . erinaceus包括萜类、酚醛树脂、类固醇、吡喃酮脂肪酸,和生物碱;其中,对萜类化合物及酚醛树脂的报道h . erinaceus更有(3- - - - - -16]。萜类化合物和酚醛树脂更少的在这个研究;部分的原因可能是不同的材料,不同的起源,不同的品种,不同的提取方法,等等。此外,核苷酸的主要成分h . erinaceus。燕et al。39研究了五个核苷的含量h . erinaceus通过高效液相色谱法从不同的栖息地;结果表明,不同的起源h . erinaceus有相同的核苷成分,如胞嘧啶、肌苷、腺苷、肌苷和腺苷的含量h . erinaceus是更高的。在这项研究中,确定了10个核苷酸类似物,包括腺,腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、鸟嘌呤、尿苷。
大部分的化合物h . erinaceus有一个很好的生物活性;对多糖的研究多,各种各样的抗菌等药理作用,抗糖尿病的,和降压的1]。小分子化合物分离h . erinaceus也有许多生物活性。中二萜h . erinaceus可以促进神经生长因子的合成,如Erinacines, Erinacines B, Erinacines C, Erinacines D, Erinacines E, F Erinacines, Erinacines G, Erinacines H, Erinacines我(4- - - - - -6]。酚醛树脂化合物h . erinaceus还可以促进神经生长因子的合成,如Hericenone C, Hericenone D, Hericenone E, Hericenone H (12,13]。Hericenones A和B显示细胞毒性对海拉细胞(11]。此外,Hericenone B被发现一个潜在的抗血小板聚集剂(40]。类固醇在h . erinaceus可以激活的转录活动PPARs, PPARα,PPARγ,如erinarols A和b erinarols。此外,核苷和黄酮类化合物可能的主要活性成分h . erinaceus。核苷成分有许多生物活性,如抗肿瘤、抗病毒、和基因治疗。研究已经表明,腺苷酸、肌苷、鸟苷有多种药理作用,如调节免疫,神经保护和治疗心血管疾病的41]。类黄酮也有多种药理作用,如神经保护、antimyocardial缺血,低血压,改善学习和记忆,antigastric溃疡、保护生殖组织,抗炎,抗肿瘤42]。
总之,h . erinaceus具有较高的营养价值和药用价值。目前,它已经发展成各种功能食品,包括健康酒,健康饮料,健康的酸奶,茶,醋罐,和健康(2),化学成分的研究具有重要意义h . erinaceus。在这项研究中,102种化合物被初步确定的后续研究提供参考h . erinaceus。
数据可用性
数据用于支持本研究中可用的文章。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关这项研究。
确认
这项工作得到了中国国家重点研发项目(2018 yfd0400200),河南省主要的公共福利项目(201300110200),和关键项目河南省科学技术振兴机构(192102110214和192102110214)。