假阴性细胞游离DNA在新生儿筛查结果三倍体13

文摘

背景。无创性产前筛查(少量)是革命性的产前筛查结果的增加敏感性,特异性。捏分析胎儿游离DNA (cffDNA)循环在母亲的血浆检测胎儿染色体异常。然而,cffDNA源于凋亡胎盘滋养层;因此cffDNA并不总是代表胎儿。尽管发表了少量的测试数据表明当前技术确保高敏感性和特异性非整倍性检测,假阳性可能是由于孤立的胎盘镶嵌性,双胞胎或cotwin灭亡消失,染色体异常和孕产妇或恶性肿瘤。结果。我们报告一个假阴性的无细胞DNA (cfDNA)筛查胎儿胎盘镶嵌性。婴儿与负面cfDNA筛查结果出生与多个男性先天性异常。产后染色体和鱼类血液标本研究发现三倍体13在20/20中期和100%的间期核,分别。鱼分析组织收集分娩后显示胚胎外的镶嵌性。结论。胚胎外的组织镶嵌性可能是负责假阴性cfDNA筛选结果。这种情况说明了一个负面的结果并不排除胎儿的可能性影响三染色体细胞,cffDNA来源于胎盘,因此可能不能准确地代表了胎儿的遗传信息。

1。背景

胎儿游离DNA (cffDNA)循环在母亲的血浆最初确定大约二十年前;然而,cffDNA检测胎儿染色体异常的实验室使用直到2011年才可用(1]。cfDNA筛查(也称为捏,NIPT)分析cffDNA循环在母亲的血浆。临床利用cfDNA筛查已经迅速融入产科实践,因为它提供了改进的敏感性,特异性,PPV相比一线和中期筛选。然而,cfDNA筛查也有局限性。cffDNA来源于凋亡胎盘滋养层细胞(2];因此,cffDNA可能并不总是代表胎儿的染色体组成。尽管胎盘和胎儿组织的遗传因素在绝大多数的怀孕是一样的,假阳性或假阴性结果可能是由于胎儿胎盘镶嵌性。在几个报告的病例中,后续羊膜穿刺术基于积极cfDNA筛查结果已经确认正常核型,表明假阳性cfDNA筛选结果(3- - - - - -8]。虽然公布的数据表明高灵敏度(≥99%称21三体综合症,≥92%为三倍体18,三倍体13和≥87%)和特异性(≥99%称21三体综合症,18岁,和13)用于非整倍性检测(9),假阳性结果已报告在胎盘镶嵌性,双胞胎或cotwin灭亡消失,胎儿染色体重排,和孕产妇染色体异常或恶性肿瘤10- - - - - -14]。根据一些报道,假阴性结果胎儿非整倍性比假阳性(不常见4- - - - - -6,15,16]。人们普遍认为假阴性cfDNA筛查结果主要是由于低水平的cffDNA分数在母亲的血浆,因此可以克服技术改进(17]。然而,除了技术原因,数量有限的假阴性cfDNA筛查病例由于胎儿胎盘镶嵌性和/或结构染色体重排也被报道(13,18]。

2。案例展示

19岁,孕妇2,帕拉1,女性接受产科超声在19岁5/7周的妊娠,这确定了多个胎儿异常包括左心房发育不良、双边唇裂,双边回波的肾脏肾盂积水,回波的肠道,右股骨鞠躬。提供遗传咨询和风险,福利,和备选方案的进一步遗传评估,包括羊膜穿刺术和cfDNA筛选,进行了讨论。病人的风险表示担忧关于入侵检测和选择继续cfDNA筛查。综述了cfDNA在此设置的局限性。cfDNA筛选了20周的胎龄。负面cfDNA染色体筛查结果发布13日,18日,21日,X, y尽管胎儿分数(胎儿DNA的比例在所有DNA在母亲的血浆)不包含在最终报告,后来调查测试实验室显示胎儿分数的8.5%。遗传咨询提供给病人在24-5/7周的妊娠期,在此期间与细胞遗传学分析进一步探讨羊膜穿刺术。病人再次拒绝侵入性测试。后引产术由于多个胎儿异常,一个男婴儿是顺产38-4/7周的胎龄。阿普加分数8、7和9日在一个,五个,分别为十分钟。 Physical examination revealed multiple anomalies including cutis aplasia on the scalp, cleft lip and palate, polydactyly, and cryptorchidism; postnatal echocardiogram confirmed hypoplastic left heart. The newborn also had respiratory insufficiency and was intubated due to signs of airway obstruction. A peripheral blood specimen was collected at birth and sent to the Cytogenetics Laboratory for postnatal evaluation.

20中期染色体分析,确定额外染色体13在每个中期(47,XY, + 13),表明nonmosaic三倍体13(图1(一))。鱼也进行分析,和100%的核表示三个信号的13号染色体探针,也符合nonmosaic三倍体13(图1 (b))。不幸的是,婴儿在出生后4天去世了。

我们建议不整合cfDNA和产后由于胎儿胎盘镶嵌性细胞生成的结果。为了验证这个假设,我们进一步评估胚胎外的组织样本。胎盘的正常体重(588克)和总出现胎盘和脐带正常妊娠38周的。绒毛膜绒毛显示轻微的绒毛状肿大和水肿增加Hofbauer细胞,但没有其他形态学异常。羊膜脐带的代表区域,绒毛滋养层,从胎盘绒毛间质,中间滋养层标识部分为非整倍性分析鱼。如图1 (c),所有五种胚胎外的组织展示了不同级别的胚胎外的镶嵌性的三倍体13(58%,57%,32%,46%,和64%的核与三倍体13脐带,羊膜,绒毛滋养层,绒毛间质,和中间滋养层,分别地。、数据表中列出1)。这些结果表明,镶嵌性的胚胎外的组织负责假阴性cfDNA筛查结果在这种情况下。

3所示。材料和方法

3.1。G-Banding

外周血淋巴细胞培养了72 h在PB-Max加多余的胸苷和收获根据标准细胞发生的协议。中期下降在Thermotron室和烘烤1小时30分钟100°C。G-banding根据执行标准的细胞遗传学方法使用胰蛋白酶和全新污渍。二十GTL-banded中期评估。

3.2。荧光原位杂交(鱼)

初始鱼新生儿非整倍性检测进行外周血样本。额外的产后鱼分析非整倍性检测在福尔马林固定石蜡包埋组织进行。我们使用鱼杂交的探针X着丝粒(DXZ1), Y着丝粒(DYZ3), 13 q14 (Rb1), 13 q34 (LAMP1), 18个着丝粒(D18Z1)和21的时候(D21S341)。细菌人工染色体(BACs)位于上面列出的关键区域被用于鱼类探测器的发展。简而言之,每个BAC提取大肠杆菌使用试剂盒质粒马克西装备根据制造商的指示,然后贴上SpectrumOrange SpectrumGreen或SpectrumAqua(雅培分子)使用尼克翻译工具包(雅培分子)根据制造商的指示。鱼类调查工作方案是由增加3μL (BAC - 7的标签μL LSI /航空®杂交缓冲(雅培分子)。幻灯片是根据标准预处理细胞遗传学协议应用3紧随其后μL解决杂交工作的调查网站。幻灯片在75°C变性5分钟和杂化37°C 70 h接着洗2分钟在72°C 0.4 x saline-sodium柠檬酸(SSC)和冲洗NP-40/2xSSC 0.1%在室温下1分钟。10μL复染色(10% 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)添加到杂交区域。一百核得分为每个标本的非整倍性检测。

4所示。讨论

cfDNA筛查是革命性的产前筛查结果与增加的健壮的测试性能检测的敏感性和特异性常见的常染色体非整倍性(预断13、18和21)相对于其他非整倍体产前筛查方法。临床问世以来,曾有一些报道说cfDNA性能的高危人群(由先进的母亲的年龄,表示屏幕积极的在第一次——或中期血清生化检查、超声检查胎儿异常的存在,或个人或家庭成员的一个染色体异常),以及在低风险人群(大众)4,5,9]。在高危妊娠,cfDNA筛选PPV为常见的常染色体非整倍性变化基于不同的研究从90.9%降至100%,而NPV仍然是99.9% -100%4,5,9]。在低风险妊娠,PPV为常见的常染色体非整倍性已被报道为85.3%与99.9% NPV基于146958怀孕4]。因此,尽管cfDNA筛查的临床性能被广泛接受和理想的筛查工具,它不适合作为诊断测试。

一些假阳性的原因和负面cfDNA筛查结果包括胎儿胎盘镶嵌性、消失的双胞胎/ cotwin灭亡,孕产妇染色体异常,和孕产妇转移性疾病。几个发表的报道假阳性和假阴性的cfDNA筛查病例涉及胎儿胎盘镶嵌性(3,8,13,18]。最常见的一种fetal-placental镶嵌性,在胎盘镶嵌性(CPM),是一个概念与正常胎儿和胎盘马赛克染色体异常(19]。然而,假阴性cfDNA筛查结果不能用CPM来解释。相反,它可能是由于另一种类型的胎儿胎盘镶嵌性,有一个受影响的胎儿(可能nonmosaic)和马赛克或正常的胎盘。虽然假阴性cfDNA筛查结果三倍体13至少报告一次,致病机制的假阴性的结果是不确定的时间20.]。这是第一次报告的案件与假阴性cfDNA筛查结果为三倍体13,是由胎儿胎盘镶嵌性引起的。预断18和21,这最近描述机制。假阴性三倍体18 cfDNA筛查结果由于48,XXX, + 18胎盘镶嵌性和假阴性2例已报告称21三体综合症由于胎盘镶嵌性(3,13]。胎儿胎盘镶嵌性的不和谐的潜在贡献cfDNA筛查结果报告;本研究建议cfDNA筛查的敏感性和特异性永远不会达到100%由于胎儿胎盘镶嵌性的本质。

这份报告描述了一个假阴性的情况下cfDNA三倍体13由于胎儿胎盘镶嵌性的结果。细胞遗传学分析表明,婴儿是三倍体13 nonmosaic三倍体13的胎盘组织马赛克。这种镶嵌性是在至少五个不同的胚胎外的组织包括脐带、羊膜、绒毛滋养层,绒毛间质,中间滋养层。在这种情况下,各种组织调查的三倍体13镶嵌性水平从32%到64%不等。胎儿所需分数健壮的检测水平的商业提供者之间的预断略有不同但通常是在4%的范围内。这里介绍,8.5%的胎儿分数的比例来自三倍体13积极胚胎外的组织很可能不到一半,从而减少功能胎儿分数小于所需的水平。类似的模式镶嵌性已报告与假阴性病例cfDNA筛查结果(3,13,18]。这种类型的胎儿胎盘从CMP镶嵌性是不同的,这是更常见的病因不整合cfDNA婴儿和胎儿/细胞生成的结果。细胞遗传学分析婴儿脐带血以及婴儿体检建议nonmosaic三倍体13。然而,因为我们的研究仅限于单个标本类型的婴儿,我们不能排除这样一种可能性,即婴儿可能有镶嵌性在其他组织。这种情况下,连同其他的报告不整合cfDNA筛查结果,表明供应商应该理解和病人应建议关于cfDNA筛查的局限性。设置的一个积极cfDNA筛查结果,证实诊断测试是强烈推荐。这个案例报告还强调了诊断测试的重要性设置的多个负cfDNA胎儿异常的结果。预处理和后续测试的遗传咨询是重要的在这种情况下教育的好处和局限性cfDNA筛选,确保患者能够做出明智的决定。

5。结论

在这里,我们报告一例与消极cfDNA筛查结果,产后诊断测试nonmosaic三倍体13的结果。鱼分析胎盘组织揭示胚胎外的三倍体13镶嵌性,可能负责假阴性cfDNA筛选结果。这个案例说明了cfDNA筛查的限制,如胎儿游离DNA来自胎盘,因此不能准确反映胎儿的遗传信息。因此,在设置多个胎儿异常与消极cfDNA筛查结果,诊断测试建议。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

引用

1. r·w·k·赵r . Akolekar y . w . l .郑et al .,“非侵入性产前评估称21三体的多路复用产妇血浆DNA测序:大规模的有效性研究”英国医学杂志文章ID c7401卷。342年,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. e . Flori b . Doray大肠Gautier et al .,“循环胎儿游离DNA孕产妇血清似乎源自表示细胞和syncytio-trophoblastic细胞。病例报告。”人类生殖,19卷,不。3、723 - 724年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. 朱j . y . Wang, y . Chen等人“两例胎盘T21镶嵌性:具有挑战性的非侵入性的产前测试的检测极限,”产前诊断,33卷,不。12日,第1210 - 1207页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 张h . y .高飞,江et al .,“无创产前检测预断21日18和13-clinical经验从146958年怀孕,”超声在产科和妇科,45卷,不。5,530 - 538年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. p . j . Willems h . Dierickx大肠Vandenakker et al .,”第一个3000非侵入性产前测试(NIPT)和谐测试在比利时和荷兰,”事实、观点和职业愿景》第六卷,没有。1、7 - 12,2014页。视图:谷歌学术搜索
6. t·k·刘,s . w .张,p . s . Lo et al .,“非侵入性产前检测胎儿染色体异常的信号低母体血浆DNA的全基因组测序:回顾1982例连续在一个单一的中心,“超声在产科和妇科,43卷,不。3、254 - 264年,1982页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 江崔h·t·k·刘,f . m . et al .,“胎儿非整倍体筛查孕妇血浆DNA测序:“假阳性”由于在胎盘镶嵌性,”产前诊断,33卷,不。2、198 - 200年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. a . l .大厅,h . m . Drendel j·l·Verbrugge et al .,“积极的胎儿游离DNA测试三倍体13显示在胎盘镶嵌性,”医学遗传学,15卷,不。9日,第732 - 729页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. r·p·Porreco t . j . Garite k Maurel et al .,“非侵入性产前筛查胎儿预断21日18日13和常见的性染色体非整倍性使用大规模并行从母体血液基因组DNA测序,”美国妇产科杂志》上,卷211,不。4、365. e1 - 365页。e12汽油,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. t . Futch j .、Bhatt, e . de Feo说,r·p·Rava和a·j·Sehnert”最初的临床实验室经验无创产前检测胎儿从母体血浆DNA样本非整倍性,”产前诊断,33卷,不。6,569 - 574年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. h .姚明,l . Zhang h . Zhang et al .,“无创产前基因检测胎儿非整倍性检测孕产妇三倍体X,”产前诊断,32卷,不。11日,第1116 - 1114页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. e·c·m·奥斯本Hardisty, p .德弗斯斯et al .,“不和谐的无创性产前测试结果在随后一个病人被诊断患有转移性疾病,”产前诊断,33卷,不。6,609 - 611年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. y高,d . Stejskal、f .江和w·王,“假阴性称18三体非侵入性产前测试结果由于48,XXX, + 18胎盘镶嵌性,”超声在产科和妇科,43卷,不。4、477 - 478年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. m .锅f·t·李,李y . et al .,“胎儿核型分析和非侵入性的产前测试之间不和谐的结果产妇血浆测序的单性生殖的二体性21由于三染色体的救援,”产前诊断,33卷,不。6,598 - 601年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m·史密斯,k·m·刘易斯,A·霍姆斯和j . Visootsak”的假阴性NIPT下来syndrome-lessons了解,“案例报告遗传学文章ID 823504卷,2014年,3页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. t . j . c . Wang Sahoo, s勋伯格et al .,“不和谐的无创产前检测和细胞遗传学结果:109例连续病例的研究,“医学遗传学,17卷,不。3、234 - 236年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. j . a . Canick g . e . Palomaki e·m·克洛萨g . m . Lambert-Messerlian j . e . Haddow一起喝,”母亲的血浆DNA的影响胎儿分数共同胎儿非整倍性,下一代测序检测”产前诊断,33卷,不。7,667 - 674年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. 问:潘,b .太阳,黄x et al .,”一个产前情况非侵入性产前测试和胎儿遗传试验结果之间不一致的,”分子细胞遗传学第四十八条,卷。7日,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. d . k . Kalousek和f . j .莳萝、“染色体镶嵌性局限于胎盘在人类观念,“科学,卷221,不。4611年,第667 - 665页,1983年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. r . Hochstenbach g . c . Page-Christiaens a·c·范Oppen et al .,“原因不明的假阴性结果的无创性产前测试:两个案件预断13 - 18日”案例报告遗传学ID 926545条,卷。2015年,7页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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