VEGF对间充质干细胞细胞介导降级iPS细胞衍生Nor1-Dependent肥大的心肌细胞

文摘

心肌肥厚是心脏出现在许多疾病,代表不良心血管结果的重要因素。关于治疗干预,间充质干细胞(msc)建议大大降低心脏肥大和发展为心力衰竭。预处理的msc以前证明高度提高旁分泌活动导致调制的免疫反应和疾病的进展。在这里,我们研究了骨骨髓来源预处理msc对过分生长的影响诱导多功能干细胞心肌细胞(iPS-CM),也试图识别MSC-derived antihypertrophic分子。去氧肾上腺素(PE)被用来诱导小鼠iPS-CM肥大,和肥大的标志是由微阵列分析。小鼠与干扰素- msc治疗γ和il - 1β以提高其旁分泌活性和转录分析是由微阵列分析。过分生长iPS-CM随后cocultured预处理msc和MSC-conditioned中等(CM),分别。影响过分生长iPS-CM量化细胞区域,研究了实时聚合酶链反应和免疫印迹。在一些实验中,细胞被孵化的分数MSC-CM通过超滤或MSC-CM补充与抑制性抗体。细胞内和细胞外的血管内皮生长因子(VEGF)水平进行评估通过免疫印迹和ELISA。iPS-CM PE-induced肥大是相关的upregulation neuron-derived孤儿受体(Nor1)表达式,Akt激活,抑制iPS-CM强烈阻止肥大感应。VEGF分泌预处理msc引起肥大iPS-CM回归,和之间的负相关Nor1表达式可以证明和肥厚性增长。我们的研究结果表明Nor1表达强烈支持iPS-CM肥大。此外,检查参与组成分泌腺的肥大的预先处理这些msc触发回归iPS-CM VEGF-dependent的方式。我们建议的交付检查参与组成分泌腺MSC-derived可能代表限制心脏肥大的治疗策略。然而,额外的在活的有机体内需要研究来证明这一假设。

1。介绍

左心室肥厚(LVH)是一种常见的心脏疾病的多种形式的表现,包括心肌梗塞、高血压(1]。人们普遍认为是发展的一个主要危险因素心脏衰竭和心脏猝死代表一个确定的心血管发病率和死亡率的预测。LVH是一个复杂和多因子的条件包括一个自适应重构的过程,这通常是一种代偿机制,以应对增加血流动力学负荷(2]。虽然称为补偿性,延长肥大增加的风险发展为心力衰竭失代偿性肥大。LVH是伴随着各种心脏和分子变化,包括增加蛋白质合成、细胞大小和炎症和纤维发生的反应导致心肌重塑和随后的心室功能障碍(1]。LVH的炎症被证实是一个突出的特点在动物(3和人类研究4]。增加墙应力与LV过载促进改造过程表现为促炎细胞因子表达增加,白细胞浸润,心肌的破坏。因为各种各样的信号通路已经被证明参与心脏肥大的发展(5),理解机制的发展心脏肥大治疗心血管疾病至关重要。因此,逆转心肌肥厚的被认为是一个治疗策略,减少不良改造和预防心脏衰竭(6]。

NR4A孤儿核受体亚由高度同源受体Nur77 (NR4A1) Nurr1 (NR4A2)和Nor1 (NR4A3)可由各种刺激,包括生长因子、激素、和炎症信号。最近,有很多关注这些受体在心血管系统的功能7]。Nor1显示调节的基本生物过程包括炎症(8,已经提供了第一个证据prohypertrophic属性(9,10]。治疗策略针对肥厚性标记抑制炎性反应可能持有承诺LVH的有益的干预。在这种背景下,巨噬细胞表型的调制提出了作为一种新的治疗方法,当这些细胞被认为是心血管疾病的关键球员。心肌炎症加剧了由促炎的microrna表达M1 - 155巨噬细胞诱导心脏肥大和失败,以应对压力过载(11]。反过来,微rna - 155击倒在巨噬细胞,但在心肌细胞,显著减少炎症,肥大,功能障碍在压力超负荷。最近,回归干细胞移植的心脏肥大和随后的巨噬细胞极化对抗炎M2表型是证明(12]。此外,干细胞疗法目前被认为是治疗心脏衰竭。一些研究,包括临床研究,表明,间充质干细胞(msc)移植可能增强组织灌注、血管生成和保存或重新生成心肌组织(13- - - - - -16]。在这种背景下,我们小组的先前的研究已经表明,来源于msc的骨转移的小鼠心肌提高全局函数和改造(17]。msc能分泌细胞因子,生长因子、小分子核糖核酸,和液有效改善新生血管性形成、衰减炎症和不良重塑,诱导内源性心脏再生。相反,检查参与组成分泌腺的骨骨髓来源msc被发现支持一个免疫抑制环境(18- - - - - -20.]。目前,msc仍然是最适合临床治疗(21]。预处理的msc高度增加其功效在体外和在活的有机体内,从而防止损失的生物功能,提高其生物活性,为临床使用和代表一个更有吸引力的战略(22]。

在这项研究中,我们已经建立了一个在体外心脏肥大模型小鼠心肌细胞“诱导多能性”细胞衍生的基础上(iPS-CM),研究了肥厚性反应。我们进一步研究了预处理msc是否会扭转iPS-CM肥大和确定VEGF MSC-mediated肥大回归的主要因素。

2。材料和方法

2.1。小鼠iPS-CM和肥大细胞培养条件归纳

分化,nonproliferative小鼠iPS-CM请提供的库尔特博士Pfannkuche(科隆大学神经生理学研究所)。这些细胞表现出自发性收缩和正常生理功能就是明证动作电位,功能激素调节和敏感性离子通道阻滞剂(23]。细胞被播种fibronectin-coated文化菜(2.6μ克/厘米²)和培养与GlutaMAX IMDM介质(Gibco), 20% FCS (PAN),不必要的氨基酸(Gibco) 1%, 0.1毫米2-mercaptoethanol (Gibco)、青霉素、链霉素和100 U /毫升(Sigma-Aldrich)。中每天都是新的。诱导肥大,细胞被饿死在IMDM介质与GlutaMAX补充1% FCS 24 h和进一步处理L-phenylephrine (PE、100μ米,Sigma-Aldrich)额外的24小时。在一些实验中,过分生长iPS-CM培养在培养基补充MSC-conditioned介质(CM)或从MSC-CM和PE(100分数μ米)多克隆山羊anti-mouse VEGF的存在与否_164年(研发系统)的抗体。

2.2。隔离、表征和激活骨骨髓来源msc

隔离和表征的老鼠骨骨髓来源msc以前我们小组报告的细节。细胞阳性古典MSC标记包括本来CD49e, CD44, CD29,没有表达CD45和CD11b,分别。证实了MSC表型分析其潜在分化为软骨细胞,脂肪细胞,成骨细胞(20.]。对于实验,msc刺激了30 ng / ml重组小鼠干扰素-γ(PeproTech)和3 ng / ml重组小鼠il - 1β(PeproTech) MSC培养基(Pan-Biotech)补充2.5 ng / ml人类基本的纤维母细胞生长因子FGF (FGF-b PeproTech), 100 U /毫升青霉素和10μg / ml链霉素(Sigma-Aldrich) 24 h。预处理msc具有抗炎和免疫调节能力20.)和用于coculture实验。

先决条件获得MSC-CM, msc进一步采用无血清培养IMDM介质稳定谷氨酰胺(Gibco)额外的24小时。然后,上层的收集和储存在-80°C,直到进一步的处理。证明如果msc保留它们的免疫调节特性血清饥饿后,亚硝酸盐含量文化上层的量化使用修改后的格里斯试剂(Sigma-Aldrich)已经描述(20.]。上层清液含有高浓度的亚硝酸盐,指示调节伊诺表达式,用于实验。

2.3。Coculture条件

coculture实验,过分生长iPS-CM的先决条件是间接cocultured msc(5: 1比例)IMDM中补充FCS和100年的1%μM PE 24 h。为此,条件msc被transwell插入在0.4μ米孔隙大小(康宁)来避免直接的细胞间的相互作用。

2.4。免疫荧光分析

iPS-CM ( )被种植在fibronectin-coated 12-well板盖玻片,饥饿24 h,并处理100μM PE FCS的1%。预先处理,细胞被cocultured msc MSC-CM处理或分次上层清液,分别在体育的存在。24小时后,细胞被固定为4%多聚甲醛0.1% 20分钟和permeabilized Triton x - 100,和非特异性结合位点被封锁使用1% BSA在PBS稀释。细胞进一步孵化Alexa萤石®555 phalloidin(热科学)f -肌动蛋白阻止20分钟解决方案污点,其次是与DAPI对比染色。盖玻片被清洗和安装在玻璃幻灯片。荧光图像获得使用尼康Eclipse Ti-U倒置显微镜(Eclipse Ti-U 100、尼康、德国)使用软件NIS-Elements 3.00版。细胞表面区域(μ米²)100或更高的细胞/随机选择的10个领域里的测量条件。

2.5。实时聚合酶链反应

总RNA从iPS-CM孤立使用RNeasy迷你包(试剂盒)和反向转录与高容量cDNA逆转录工具包(应用生物系统公司)。目标基因被实时PCR扩增使用StepOnePlus或QuantStudio 3实时PCR系统(应用生物系统公司)和电力SYBR绿色PCR反应混合液(应用生物系统公司)。以下Nor1引物被使用::5 - - - - - -AGACGCCGAAACCGATGT-3牧师:5 - - - - - -TCGGACAAGGGCATTCA-3 。基因表达是规范化18 s rRNA。所有样品都是一式三份。褶皱表达式计算使用方法。

2.6。微阵列分析

RNA提取使用RNeasy迷你包(试剂盒),已经没有DNA和DNA被污染的细胞工具(Ambion)。过分生长的基因表达分析iPS-CM使用GeneChip老鼠基因组430.2执行预先处理和msc (Affymetrix)或Clariom年代化验(热费希尔)基因表达Affymetrix设施由教授Agapios Sachinidis(分子医学中心,科隆)。RNA从3 - 5个独立实验使用。

2.7。核转染

来击倒Nor1表情,iPS-CM被播种在6-well盘子或者涂盖玻片在IMDM 12-well盘子和培养介质+ 1% FCS。转染已经使用OptiMEM执行媒介(Gibco)和Lipofectamine RNAiMAX试剂(英杰公司)根据制造商的指示。细胞转染为5.5 nM消音器选择Nor1核小干扰rna (Ambion)和消音器选择消极的控制,分别和孵化24小时37°C和5%股份有限公司₂。然后,100年μM PE是额外添加和细胞培养24小时。转染效率被实时PCR验证。盖玻片上培养的细胞用于immunofluorescent分析。

2.8。免疫印迹

细胞细胞溶解在缓冲区里帕补充蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒(细胞信号技术)和用,和蛋白质浓度被使用皮尔斯BCA量化分析工具(热费希尔科学)。蛋白质混合物是由sds - page分离和转移到硝酸纤维素(0.2μ米)。膜被封锁与阻断缓冲区和进一步孵化一夜之间在4°C以下抗体:兔子anti-mouse phospho-Akt (Ser473), NF -κB p65, pNF——虽然κHIF-1 B p65 (Ser536)α(细胞信号技术)、多克隆兔anti-mouse Nor1 (Abcam)和多克隆山羊anti-mouse VEGF_164年抗体(研发系统)。孵化后,HRP-conjugated山羊anti-rabbit (Dako)或马抗体(向量实验室)二级抗体膜开发与UptiLight合污点化学发光ECL衬底(Uptima)。规范化蛋白表达,屁股被剥夺,reprobed GAPDH或β肌动蛋白和Akt,分别使用鼠标anti-GAPDH抗体(罗福斯生物)和anti-mouseβ肌动蛋白和兔anti-mouse Akt抗体(细胞信号技术)。

2.9。ELISA

VEGF水平的量化通过使用鼠标DuoSet ELISA包根据制造商的指示(研发系统)。

2.10。超滤

超滤单元与各种达标(Vivaspin 6 20,缝匠肌、德国)首次通过离心法纯水清洗膜。然后分析离心机中 直到上层清液达到初始体积的十分之一,集中上层清液和滤液收集分数在塑料管和用于实验。

2.11。统计分析

数据分析与GraphPad棱镜5软件。实验数据与平均数标准误差表示为手段(SEM)。未配对的两组数据进行了分析使用未配对 - - - - - -测试。的一个示例 - - - - - -测试时使用的样本相对于参考控制样本(设置为1)。正态分布未配对数据分析了多个组的使用单向方差分析与Newman-Keuls事后测试。一个值不到0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。肥大的识别标记PE-Stimulated iPS-CM

心脏肥大是由众多转录、生化和结构转换包括增加细胞大小,增强蛋白质合成和肌动蛋白细胞骨架的改建。然而,一个在体外基于小鼠iPS-CM肥大模型到目前为止没有描述。因此,我们第一次开始识别基因标记iPS-CM监管的PE肥厚性物质。通过执行微阵列分析,我们发现154个基因是调控(褶皱变化表达式2 >或< PE(表2)1,图1(一))。在46调节基因,基因Nr4a3,编码neuron-derived孤儿受体1 (Nor1),被发现是最调节基因(~ 3年来感应)PE-treated iPS-CM。Upregulation额外的基因参与肥厚性细胞生长,如Nppb(法国),Myh7(βmhc),Gja1(Cx43),Nppa(ANP) [24相比),较低Nor1 / Nr4a3表达水平(图1 (b))。在这些结果的基础上,我们决定使用Nor1作为一个有价值的iPS-CM肥厚性细胞生长状态的标志。证实了PE的upregulation实时PCR(图1 (c))。此外,Nor1蛋白质在整理iPS-CM显著增加,并增加激酶Akt的活动,但不是兵,可以发现(图1 (d))。Nor1表达式显示正相关的细胞表面积iPS-CM肌动蛋白染色和免疫荧光(图证明了这一点1 (e))。

3.2。Nor1表达和Akt激活是强制性的iPS-CM PE-Induced肥大

证明如果Nor1表达和Akt激活对肥厚性细胞生长很重要,我们压制Nor1表达和Akt活动利用gene-specific siRNA或pI3激酶抑制剂渥曼青霉素,分别(图S1a-b),治疗前与体育的细胞。肥厚性细胞生长不可能在没有Nor1(图中被观察到2(一个))以及抑制Akt的活动(图2 (b))表明Nor1所需和Akt激活肥大iPS-CM感应。不影响细胞的生存观察(数据没有显示)。

3.3。检查参与组成分泌腺的msc诱导肥大回归的PE-Treated iPS-CM

刺激骨骨髓来源与干扰素- mscγ和il - 1β伴随着的激活增加NF -κB以及可见的,但不显著,增加细胞内HIF-1α水平(图S2a-b)。NF -κB代表主要的转录因子控制伊诺表达对il - 1的回应β刺激,亚硝酸盐水平量化文化上层清液验证msc预处理[20.]。激活NF -κB通常会导致upregulation基因参与细胞凋亡、炎症和细胞粘附等(25]。进一步查明预处理msc (acMSCs)影响iPS-CM肥大,PE-treated iPS-CM的先决条件是cocultured msc使用transwell系统,防止直接和信息交互。细胞面积iPS-CM coculture后显著降低了预处理msc、和类似的结果MSC-conditioned介质(图中补充后20%3(一个))。值得注意的是,检查参与组成分泌腺的观察效果MSC对肥大细胞被发现存在剂量依赖的相关性为中等补充条件培养基为10%或更少并没有导致肥大回归(图S3)。这些结果表明,肥大的回归是由MSC-derived溶性因素。值得注意的是,肥大回归Nor1蛋白质的差别,对这些基因的表达在iPS-CM(图3 (b))。

我们下一个旨在识别MSC-derived分子参与肥大的回归。为此,我们进行了微阵列分析封闭基因受干扰素-γ和il - 1β。共有2026个不同的调节基因被确定;其中,1037是调节和989年下调(数据4(一)- - - - - -4 (c))。前100名的列表显著调节基因(> 2倍;< 2倍变化)在表S1。除了许多趋化因子基因编码,伊诺和il - 6排名前30名的调节基因(图4 (b)),支持MSC激活和免疫调节因子的表达。基因本体论(去)富集分析Metascape被用来调节基因网络的分类预处理msc(图4 (c))。结果表明所确定的基因主要参与细胞反应β干扰素,移行细胞,细胞因子生产,cytokine-mediated信号通路。此外,一些基因的参与凋亡通路的调节,调节dna结合转录因子的活动,和骨髓白细胞激活。

进一步确定MSC-derived分子可能参与肥大回归,将上层清液的预处理msc集中和分级利用Vivaspin离心设备的分子量截止30 kDa, 50 kDa, 100 kDa。集中和滤液,含有小分子,被用来探索对整理iPS-CM的影响。组织学分析显示,所有集中用于实验显著逆转iPS-CM肥大。反过来,在滤液处理细胞保护作用明显降低(图5(一个))。Nor1表达iPS-CM表现出良好的相关性与细胞区域与分数包含当细胞治疗 (30 kDa滤液)和相应的集中,即蛋白质表达的差异没有显著改变(图4 (b))。

3.4。VEGF分泌的预先处理这些msc逆转肥厚PE-Treated iPS-CM,会使Nor1基因表达

VEGF分泌骨骨髓来源msc是最近报道逆转肥厚性细胞生长26,27]。有发现分子参与减少肥大似乎大于30 kDa,我们下一个决心,如果事先已经msc代表VEGF的潜在来源。重大upregulation的5.8倍Vegfa表达MSC预处理后可以检测到微阵列分析(数据未显示)。VEGF水平明显升高的上层清液预处理msc 24小时和48小时后细胞因子刺激。此外,VEGF是所有超滤浓缩(图中发现6(一)),以前发现诱导肥大回归iPS-CM(图5(一个))。MSC-conditioned介质抗心肌肥厚的影响以及含有介质的零头 强烈降低VEGF失活后VEGF-neutralizing抗体(图6 (b))。VEGF中和MSC-conditioned中增加Nor1iPS-CM表达式,虽然显著增加Nor1蛋白质含量不能检测到(图6 (c))。

这些结果不排除这种可能性,VEGF可能来自整理iPS-CM本身,我们进一步测试如果VEGF表达iPS-CM成为受MSC-conditioned介质。如图6 (d),可以检测到细胞内VEGF蛋白在msc和iPS-CM;但是,没有在iPS-CM MSC-conditioned介质对VEGF表达的影响可以观察到。此外,无论是PE治疗还是文化MSC-conditioned介质的存在引起了由iPS-CM VEGF分泌增加(图6 (e)的先决条件),这表明msc代表VEGF的主要来源。

4所示。讨论

在这项研究中,我们首次展示,Nor1代表一个重要分子iPS-CM肥大感应。进一步,我们的数据表明,VEGF分泌预处理小鼠骨骨髓来源iPS-CM msc是有效减少肥大。VEGF-mediated肥大与减少回归强烈相关Nor1基因的表达。因此,交付MSC-conditioned介质以及内在的镇压Nor1策略表达式可能代表合适,无细胞逆转心脏肥大。

在这项研究中,我们建立了一个在体外心脏肥大模型小鼠iPS-CM的基础上。刺激细胞肥厚性物质PE增加细胞大小和诱导的重要upregulation核受体Nor1。然而,其他关键的upregulation肥大基因Nppa(曾帮工,心房利钠因子),Nppb脑利钠肽(BNP),Gja1(联接蛋白43)Myh7(β肌凝蛋白重链)弱得多,这表明Nor1代表了最可行的肥大iPS-CM标记。一些报道认为Nor1参与心脏肥大,心脏衰竭的病理生理学,尽管很少有人了解底层的分子机制。Nor1击倒的报道,以防止isoprenaline-induced在大鼠心肌细胞肥大,而Nor1过度恶化心脏肥大在体外和在活的有机体内(9,10]。在这方面,假设Nor1上调肥大标记和另外的表达促进PARP-1激活,导致功能障碍和心脏肥大,心脏衰竭的进展9]。虽然我们没有调查的机制在iPS-CM Nor1调节肥大,我们发现,沉默的Nor1表达式由核完全抑制肥大感应pI3K抑制剂渥曼青霉素以类似的方式。因此,Nor1表达式以及pI3K / Akt激活是肥厚性细胞生长的基础虽然额外因素的介入可以预期。

在过去的十年里,msc被认为代表一个最有前途的细胞治疗心血管疾病由于他们长期的方式自我更新能力和分化成不同的专门的细胞类型的能力。此外,有大量的证据表明,msc分泌多种生物活性分子如生长因子、趋化因子、细胞因子(28]。

msc预处理,大大提高了他们的增殖,分泌,迁移能力和区分的能力(22]。这里,我们目前的数据来源于msc的预先处理证明骨以及MSC-conditioned媒介促进iPS-CM肥大回归表明这种效果是完全依赖于可溶性介质。重要的是,最初的实验表明,msc没有预处理不间接coculture后导致iPS-CM肥大回归。干扰素- MSC预处理γ和il - 1β导致重大upregulation NF -κB,因此诱导upregulation超过1000个基因,他们中的大多数编码趋化因子和细胞因子。因此,il - 1β和干扰素-γ据报道促进NF -κB-dependent HIF-1积累α在常氧条件下(29日,30.]。当我们进一步发现这些分子的分子量似乎大于30 kDa,我们进一步得出结论,大部分的调节趋化因子(分子量~ 10 kDa)可以排除作为保护作用的介质。事实上,许多因素如CCL-2 CCL-3, CCL-5,其基因表达的先决条件是高度增加msc、患者被报道是调节结构重构包括肥大和充血性心脏病(31日]。此外,它曾被发现HIF-1荣格等人α参与调节VEGF通过路径依赖NF -κB (29日]。

VEGF在心脏肥大的作用是有争议的是讨论。一方面,VEGF是证明开心脏肥大(32),另一方面,VEGF-mediated肥大回归在很大程度上归因于它能够增加心脏血管生成(33,34]。尽管msc产生显著的VEGF (26,35,36),VEGF分泌显著调节MSC预处理。所有集中MSC-conditioned介质包含VEGF在iPS-CM逆转肥厚,表明VEGF诱导肥大回归。然而,应该注意的是,VEGF被确认在所有集中虽然集中器与不同的短裤被用于这项研究。这些结果可以解释为蛋白质的吸光度膜或塑料表面的装置。的基础上生成的结果,我们不能排除其它MSC-derived可溶性分子可能施加antihypertrophic协同或添加剂与VEGF的交互影响。

VEGF中和减毒MSC-conditioned介质的保护作用,以及upregulationNor1可以发现在同一时间。此外,我们的数据不支持蔡等人的研究结果描述了协同增加细胞外后VEGF coculturing肥大心肌细胞和骨骨髓来源msc (26]。细胞内VEGF在iPS-CM upregulation和增加VEGF分泌检测治疗后细胞与MSC-conditioned介质或间接coculture后,分别。这些观察结果表明,预处理msc似乎代表了主要来源供抑制VEGF进而逆转肥厚Nor1在心肌细胞表达。

在这方面,在促进新血管的形成,VEGF另外一直描述诱导巨噬细胞M1转向一个平方米表型(37和减弱心脏肥大26,38]。因此,VEGF的有利影响在活的有机体内预计将歧管包括直接antihypertrophic影响心肌细胞,巨噬细胞transpolarization为抗炎表型(37),和血管生成33]。根据这些结果,细胞因子预处理应该考虑一个工具来增加骨骨髓来源msc的治疗效果。

然而,在目前的研究有一定的局限性,需要解决。首先,我们的研究是有限的使用成人骨骨髓来源msc减少自我更新和分化能力,高不同批次之间的差异,和进步的细胞衰老39- - - - - -41]。第二,检查参与组成分泌腺的msc似乎也显著不同,根据主人的年龄,健康状况,壁龛细胞所在。此外,NF -κ以前曾有报道称,B是至关重要的细胞因子和生长因子的分泌,msc、和一些研究提出,基因改造的msc可以提高NK -κB信号和旁分泌活动(42,43]。尽管我们为NF -提供了证据κB活化预处理msc、NF -κB激活可能显著不同MSC制剂之间的不同。进一步,我们没有考虑检查参与组成分泌腺MSC的复杂性包括微泡,小分子核糖核酸,液,和线粒体转移等44]。限制可能很大程度上忽略了更有吸引力的发展策略的基础上,“诱导多能性”细胞衍生msc。这些细胞被证明有更高的增殖能力,较高的端粒酶活性,细胞衰老低于骨骨髓来源msc使一代的高度同质的人群没有损失质量功能(39,45]。

总之,我们的研究结果表明,从干扰素-条件培养基γ- - - il - 1β刺激msc可能代表一个适当的治疗方法治疗LVH。然而,还需要进一步的研究来描述预先处理这些iPS细胞衍生msc和检查参与组成分泌腺的有效性和安全性评估组件用于治疗心脏肥大在活的有机体内。

5。结论

预处理与il - 1骨骨髓来源mscβ和干扰素-γ大力提高旁分泌的行动。此外,VEGF分泌msc逆转Nor1-dependent iPS-CM肥大。,交付MSC-conditioned介质可能代表一个有前途的治疗方法治疗游离LVH虽然在活的有机体内疗效需要进一步调查。

数据可用性

数据集支持本文的结论可以从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

丹尼斯·菲利普和米歇尔Holthaus贡献同样这项工作。

确认

我们感谢纳塔莉亚Mierau, Sabine施密特和艾伦Veit优秀的技术援助。本研究在一定程度上支持德国心脏研究基金会的资助(A.P.G.和t。w。,# F / 06/16)和德国研究基金会的资助(陷入)。

补充材料

补充图S1:补充图显示抑制Nor1表达和抑制Akt小干扰rna转染和渥曼青霉素治疗活动,分别。补充图S2:补充图显示NF -κB激活和HIF-1αupregulation先决条件在msc。补充图S3:补充图显示肥大与不同浓度的回归在孵化后iPS-CM MSC-conditioned媒介。补充表S1:补充表显示前100名的先决条件——和表达下调基因在msc由微阵列分析。(补充材料)

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