非人灵长类动物诱导多能干细胞在再生医学

文摘

诱导多能干细胞的各种物种中派生,非人灵长类动物(额定马力)作为临床前模型有一个独特的角色。人类亲缘和类似的生理机能,包括中枢神经系统,使他们理想的转化研究。我们审查所取得的进展在推导和描述不同额定马力的诱导多能干细胞的物种。我们专注于诱导多能干细胞的绒猴,小额定马力人类疾病的几个州的建模。绒猴可以作为一个模型实施的患者自体再生医学细胞疗法。

1。诱导多能干细胞在再生医学

再生医学的目的是恢复健康的器官功能受损的疾病或衰老。一个主要问题是细胞用于再生医学的来源。通常被认为是理想的使用细胞来自患者本人,因为这是假设,以避免需要管理药物来抑制免疫排斥移植的细胞。利用特定的细胞再生医学的可能性大大扩展了发现的诱导多能干细胞(iPS细胞)(1,2]。“诱导多能性”细胞可以来自任何体细胞,但胚胎干细胞的特性。像胚胎干细胞,它们可以用于生成中可能需要的任何身体的细胞再生医学。人们普遍认为一种自体的细胞疗法将成为可能,在“诱导多能性”细胞来自患者的细胞,以提供一个来源的细胞可以被移植到心脏病人恢复功能、中枢神经系统、造血系统、或其他器官受到疾病或衰老的影响。目前的实验问题非人灵长类动物模型的开发基于iPS细胞的自体的细胞疗法。

2。自体和同种异体细胞细胞疗法

任何考虑人体的再生医学的实施必须评估细胞的来源用于治疗(3,4]。“诱导多能性”细胞的发现后,立即意识到这一发现为自体的细胞疗法开辟了道路。在2007年评论说:“如果这个方法可以被转换到人类,针对病人的干细胞可以不使用捐赠的卵子或胚胎”(5]。假设如果细胞接受为“自我”然后他们将是最好的功能移植的结果:细胞功能在自然环境中,没有引起慢性免疫或炎症反应,如果没有问题,将导致免疫抑制药物的使用。换句话说,他们的“黄金标准”的最好结果基于细胞移植疗法。虽然同种异体细胞可能对病人产生可接受的结果,自体的细胞移植提供标准的同种异体细胞可以判断的结果。

“诱导多能性”细胞的发现后不久,一个旅程中使用的技术是研究“诱导多能性”细胞来自一个人类镰状细胞性贫血小鼠模型的应变。“诱导多能性”细胞的遗传缺陷纠正他们移植回老鼠相同的应变后分化为造血干细胞(6]。治疗小鼠的症状明显改善。这是第一个示范“诱导多能性”细胞疗法的潜在力量。这些细胞是来源于,重新进入,老鼠相同的压力,他们的一个例子使用同源的细胞,而不是真正的自体的细胞。随后,另一项研究表明,同系的“诱导多能性”细胞及其细胞的后代可能,事实上,引起免疫反应(7]。这个意想不到的发现还没有获得一个令人满意的解释。在编写的日期,“诱导多能性”细胞的免疫原性和衍生品的问题只在老鼠身上得到解决,并没有更多的转化相关物种,包括灵长类动物。

将基于使用自体的细胞治疗方法值得开发和实现的相当大的努力,需要吗?目前的答案是完全未知的。首先,在缺乏合适的转化模型,或实际“诱导多能性”细胞治疗的临床试验,必须保持理论的优势。我们不知道有多好,不信,基于自体的细胞疗法是治疗相比基于同种异体细胞。可能,自体的细胞将被证明是优越,但也许会有小差异从同种异体细胞。在一些治疗,需要一个快速治疗会排除使用自体的细胞。例如,在中风,由于需要立即治疗,需要细胞“现成的”和“诱导多能性”细胞不太可能是有用的。然而,理解immune-matched与不匹配的细胞是否有优势在中风模型将具有重要意义。

第二,它是很难预测如何容易实现最终将成为“诱导多能性”细胞治疗。当“诱导多能性”细胞第一次由皮肤成纤维细胞在2006 - 2007年,重组非常低效和艰苦的。在过去的四年,取得了惊人的进展的更好,更简单的协议和增加效率(8- - - - - -11]。鉴于没有理由认为这个过程不应该继续接受这样的改善效率,很有可能创建“诱导多能性”细胞从病人的细胞会变得相当常规和廉价的在将来的一段时间。类似的戏剧性改善效率和成本已经在其他生物医学技术,例如,DNA测序。

3所示。非人灵长类动物研究在再生医学的重要性

之前有可能考虑应用自体的细胞疗法对人类患者,“诱导多能性”细胞的性质必须彻底探索合适的动物模型,以确保自体的细胞疗法是安全有效的。一般公认,临床相关的实验应该执行在一个非人类灵长类动物(额定马力)而不是一种啮齿动物。额定马力等临床前试验被认为是理想的,因为他们的亲缘对人类和他们相似的生理机能,尤其是对中枢神经系统。长期研究的移植细胞功能(> 3年)将在额定马力是可能的,但在啮齿动物是不可能的。

因此有一个清晰的路径基本在“诱导多能性”细胞再生医学转化研究在额定马力。可以使用不同的额定马力,绒猴有几个关键优势。普通狨猴(Callithrix jacchus)规模较小的优势,更多的快速繁殖,住房条件定义。与人类相比,不受控制的环境和许多并发症的混杂因素,狨猴可以安置在一个定义的环境和有一些已知的并发症12]。多种人类疾病可以建模在狨猴(13- - - - - -15]。帕金森病的chemical-induced模型也被开发在这个物种(16)和中风模型(17]了。组织学和MRI脑图谱(18]。绒猴基因组已经完成(19),绒猴是第一,到目前为止,只有灵长类动物转基因模型表明生殖系传播(20.]。尽管转基因学也被创建在恒河猕猴,他们没有通过转基因后代(21]。帕金森病的遗传模型的超表达α-核蛋白在绒猴了(20.]。最后,在绒猴脊髓损伤模型被用于测试潜在的人类神经干细胞移植治疗效果(22,23]。我们的长期目标是如图1。

4所示。额定马力iPS细胞研究的进展

尽管在再生医学额定马力的重要性,然而有相对较少的工作“诱导多能性”细胞来源于额定马力,相比的程度“诱导多能性”细胞来自老鼠和人类。第一额定马力iPS细胞来自恒河猕猴(24]。目前(2011年9月),“诱导多能性”细胞来源于五额定马力物种(表1);三种猕猴(恒河猕猴,梳辫子的猕猴,猕猴猴),普通狨猴,濒危灵长类动物,钻(24- - - - - -33]。所有额定马力报告“诱导多能性”细胞的共同特性是:推导混合物的逆转录病毒携带转录因子的互补,主要是POU5F1,SOX2,KLF4,和MYC;维护多能的特点在长期增长文化;能够分化成细胞和组织的三个胚芽层;缺乏恶性属性,尽管在免疫缺陷小鼠形成良性畸胎瘤的能力(24- - - - - -33]。

5。绒猴“诱导多能性”细胞:自体的细胞疗法的典范

我们研究的最终目标是“诱导多能性”细胞来自个人狨猴和细胞植入供体动物,后“诱导多能性”细胞的定向分化到特定的细胞谱系图1)。之前,此类研究是可行的,广泛的免疫缺陷小鼠体外调查和研究是必要的。

我们选择狨猴“诱导多能性”细胞来自皮肤成纤维细胞,因为纤维母细胞已经被广泛研究的细胞类型“诱导多能性”细胞生成,因为使用小皮肤活检作为起始物料的来源有关未来的“诱导多能性”细胞的临床应用及其衍生品。在最初的实验中,我们使用皮肤成纤维细胞来源于新生儿狨猴(25]。逆转录病毒编码的人类的互补Oct4、Sox2 Klf4,原癌基因(2]在Plat-A细胞和集中准备聚凝胺絮凝(34]。与集中病毒感染细胞后,文化是保持在正常的纤维母细胞生长条件的丙戊酸(35]。程度天后,小殖民地的形态学改变指出汇合的纤维母细胞的文化。这些殖民地由小核质比和高的快速分裂的细胞核仁。当文化包含殖民地固定和染色等碱性磷酸酶活动,大部分的小菌落形态学改变是碱性磷酸酶阳性,多能性的标志(36]。这些殖民地迅速扩大,产生非常密集的小细胞。这些细胞的形态特征之前报道人类iPS细胞(2]。

从人口的4×10⁵狨猴成纤维细胞,我们获得了~ 100年殖民地与iPS细胞样的细胞形态。殖民地被孤立和扩大支线层。孤立于纤维母细胞的这些殖民地文化,30显示持续增长,能够扩展到可以冻存的地步。其中,8选择深造。分析研究了G显带和被发现是正常的(25]。狨猴初始扩张后的“诱导多能性”细胞克隆支线层,我们调查如果feeder-free条件下细胞生长。细胞被山肩Matrigel-coated菜在介质含20%胎牛血清和40% MEF-conditioned介质并继续快速增长。细胞群扩大在这些条件下进行进一步的研究。

狨猴iPS细胞克隆表达多能性标志物水平与在人类胚胎干细胞线(16)或超过这一水平25]。在所有8狨猴iPS细胞克隆,NANOG和SOX2 mRNA水平高于16细胞,和水平的OCT4与16细胞。OCT4 mRNA水平高出> 100倍比成纤维细胞在iPS细胞克隆用于重组,NANOG水平和SOX2 >高50倍。我们评估了向量的相对水平和总mrna OCT4 SOX2,用于重组的两个因素。我们引物对特定用于重组向量(矢量序列5′底漆和编码区3′底漆)。向量OCT4 mRNA出席0.01%到0.1%的总OCT4信使rna,而向量SOX2 mRNA出席SOX2 mRNA总数的0.1%至1%。这些发现表明,病毒基因组是适当的沉默38]。

为了评估潜在的绒猴iPS细胞克隆来区分三个生殖细胞层,细胞被移植到免疫缺陷小鼠(皮下注射50%人工基底膜:39,40])。畸胎瘤的绒猴“诱导多能性”细胞包含各种各样的组织结构代表所有三个胚芽层的衍生品。因为据报道,畸胎瘤来自不完全重编程细胞形成组织的外胚层和中胚层来源而不是起源于内胚层的(38我们进行组织学研究的发展成熟的结构起源于内胚层的;我们观察到内胚层的组织,包括简单的柱状和pseudostratified上皮细胞、上皮细胞和杯状细胞,和外分泌腺结构(25]。免疫组织化学研究也执行;发展中神经外胚层的组织(组织)被存在的证明β三世微管蛋白;中胚层组织平滑肌肌动蛋白;内胚层的组织,α胎蛋白。

随后,我们调查潜在的重组(图的多顺反子向量2)。这种逆转录病毒载体的特性(一)因为表达的重组因子是由5′LTR,表达式是沉默在重组期间,如果被正确地重组细胞(38];(b)所有因素在一个向量,从而避免感染需要非常高的效率;(c)逆转录病毒载体,只被感染的细胞分裂(这并不有损于这种类型的向量的值,作为“诱导多能性”细胞必须来自细胞的细胞分裂);(d) loxP网站使未来需要切除的编码区。绒猴iPS细胞使用这种多顺反子的逆转录病毒载体表现出相同的特征“诱导多能性”细胞克隆得到了合并感染的四个因素。因此,细胞由1:1:1:1的表达四个重组因子属性基本相同派生的合并感染,的表达比四个因素不一定是平等的,几乎可以肯定不同克隆克隆。

尽管这种逆转录病毒载体的优势,很可能使用积分形式的重组病毒载体将因使用修改后的信使rna病毒的重组方法已经过时或修改蛋白质(9]。这些方法避免任何基因改造的目标细胞重编程过程中。

成功的长期扩张狨猴“诱导多能性”细胞是至关重要的任何广泛的细胞特性的研究。尽管我们确定feeder-free条件生长的细胞,这些条件需要胎牛血清和介质条件合适的细胞类型,如小鼠胚胎成纤维细胞。最近,我们已经建立了狨猴“诱导多能性”细胞可以不断成长和长期在定义中没有添加血清或介质条件的另一种细胞类型。几种类型的定义媒体支持长期的绒猴iPS细胞生长没有损失的多能性基因的表达,如NANOG和OCT4 / POU5F1。克隆得到了合并感染和克隆得到了感染多顺反子向量可能生长在定义中(图3)。

总之,标准的形态、经济增长需求,表达多能性因素,逆转录病毒沉默,并且能够产生畸胎瘤并组织的所有三个胚芽层,我们得出这样的结论:这些细胞代表善意的诱导多能干细胞。

6。神经祖细胞分化的绒猴“诱导多能性”细胞

在后续的工作中,我们研究了狨猴的潜力在体外诱导多能干细胞分化的神经细胞谱系。“诱导多能性”细胞的分化神经祖细胞(npc)已经被广泛地用作测试的多能性;例如,这种形式的定向分化在最近的测试集上面板的特点人类“诱导多能性”细胞(10,11]。协议为人大代一般有三种类型:基质细胞衍生诱导活动(SDIA),相对较差的混合特征因素由某些间充质细胞分泌,如尼龙6细胞株(2,41,42];胚状体的身体(EB)形成,紧随其后的是电镀的EBs在合适的表面存在Neurobasal介质(43,44];并使用小分子诱导,如化学抑制BMP /苯丙酸诺龙/节点信号通过SMADs [45]。我们使用这些方法在绒猴“诱导多能性”细胞,它们产生人大行(图4)。

7所示。总结

总之,“诱导多能性”细胞从额定马力有独特的重要性在临床前研究导致人类再生医学的实施病人。派生和iPS细胞特征的绒猴,小额定马力可以作为一个合适的模型涉及“诱导多能性”细胞的自体的细胞疗法。未来的研究将测试个别狨猴的自体的细胞疗法的原则。

确认

来自作者的实验室的工作是由美国国家卫生研究院(R21AG033286),由美国退伍军人事务部(I01BX001454),泰德纳什长寿基金会,和由欧文斯医学研究基金会。美国方是由格兰特T32DE014318(颅面口腔生物学生学术研究训练)。

引用

1. k .高桥和美国Yamanaka”诱导多能干细胞从小鼠胚胎和成年纤维母细胞的文化因素,定义”细胞,卷126,不。4、663 - 676年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. k .高桥k .田边m . Ohnuki et al .,“诱导多能干细胞从成人人类成纤维细胞因素,定义”细胞,卷131,不。5,861 - 872年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. Agarwal, m . w . Lensch g·戴利,“当前一代的前景不同的多能细胞从成人组织,”再生医学,卷2,不。5,743 - 752年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. c·梅森和p .达尼尔”,评估价值的自体和同种异体细胞再生医学,”再生医学,4卷,不。6,835 - 853年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. j·罗森,“干细胞:神奇的啤酒,”自然,卷448,不。7151年,第261 - 260页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. 沃尼格·m·j·汉娜,美国Markoulaki et al .,”与“诱导多能性”细胞治疗镰状细胞性贫血小鼠模型产生自体皮肤,”科学,卷318,不。5858年,第1923 - 1920页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. t·赵Z.-N。张z荣,徐y“诱导多能干细胞的免疫原性,”自然,卷474,不。7350年,第216 - 212页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. b·w·凯里s Markoulaki j·汉娜et al .,“重组小鼠和人类体细胞使用单一多顺反子向量,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷106,不。1,第162 - 157页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. l·沃伦·p·d·诺斯t Ahfeldt et al .,“高效重组多能性和定向分化的人类细胞合成改性mRNA,”细胞干细胞,7卷,不。5,618 - 630年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. g . l .筛子e . Kiskinis g·f·克罗夫特et al .,“一套功能测试特征的人类诱导多能干细胞”自然生物技术卷,29号3、279 - 287年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. c .烈性黑啤酒,e . Kiskinis g . Verstappen et al .,“人类ES和iPS细胞变异的参考地图使高通量表征多能细胞系,”细胞,卷144,不。3、439 - 452年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. d·h·艾伯特·d·k·巴内特,r·j·科尔曼m . e .山本和n . j . Schultz-Darken”方面共同狨猴的基础生物学和生命历史重要的生物医学研究,“比较医学,53卷,不。4、339 - 350年,2003页。视图:谷歌学术搜索
13. k·曼斯菲尔德“绒猴模型常用于生物医学研究,”比较医学,53卷,不。4、383 - 392年,2003页。视图:谷歌学术搜索
14. s . Tardif k .包l·威廉姆斯et al .,“准备实验室研究,新世界猴”ILAR杂志卷,47号4、307 - 315年,2006页。视图:谷歌学术搜索
15. d·希拉诺斯基“绒猴模型在中心舞台,”自然,卷459,不。7246,492年,页2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. i . h . c . h . m . Philippens b。’t哈特,g·托雷斯,”注射的MPTP药物狨猴帕金森症模型:一个多用途的非人类的灵长类动物模型对于神经退行性疾病,”药物发现今天,15卷,不。23 - 24日,第990 - 985页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. e . Bihel p . Pro-Sistiaga a Letourneur et al .,“永久慢性缺血性中风或短暂的非人类的灵长类动物:行为、神经影像学、组织学,以及免疫组织化学调查,“脑血流量和新陈代谢杂志》上,30卷,不。2、273 - 285年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. j·d·纽曼,w . m .学会主席,e . c . Aronoff n A烈性黑啤酒,m . r . Zametkin和A·c·席尔瓦”合并组织学和MRI脑图谱的常见的绒猴猴,Callithrix jacchus,”大脑研究评论,卷62,不。1队,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. r·m·库恩,d . Karolchik Zweig et al .,“UCSC基因组浏览器数据库:更新2009年”核酸的研究,37卷,不。1,D755-D761, 2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. e .佐佐木h . Suemizu a岛田et al .,“代转基因与生殖系传播非人类的灵长类动物,”自然,卷459,不。7246年,第527 - 523页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. g .查顿及其美国米塔李波夫“发育生物学:转基因灵长类动物的后代,”自然,卷459,不。7246年,第516 - 515页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. a . Iwanami金子,中村m . et al .,“人类神经干细胞移植对脊髓损伤在灵长类动物,”神经科学研究杂志,卷80,不。2、182 - 190年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. j . Yamane m .中村a Iwanami et al .,“galectin-1-expressing人类神经干细胞移植到脊髓受伤的成人普通狨猴,”神经科学研究杂志,卷88,不。7,1394 - 1405年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. f . h . Liu, j .勇et al .,“一代从成年猕猴成纤维细胞,诱导多能干细胞”细胞干细胞,3卷,不。6,587 - 590年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. y, y, a . Mishra s . d . Tardif和p . j . Hornsby”一代的诱导多能干细胞从新生儿狨猴皮肤成纤维细胞,”干细胞研究,4卷,不。3、180 - 188年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. Maeda富冈,t·h·岛田et al .,”从普通狨猴生成诱导多能干细胞(Callithrix jacchus)胎儿肝细胞使用定义的因素,包括Lin28,”基因对细胞,15卷,不。9日,第969 - 959页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. p·h·a . w . s . Chan Cheng a·诺伊曼和j·j·杨,“重组亨廷顿猴皮肤细胞多能干细胞,”细胞重新编程,12卷,不。5,509 - 517年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 钟,g . d . Trobridge x Zhang et al .,“非人类灵长类动物诱导多能干细胞的高效生成,“干细胞与发展,20卷,不。5,795 - 807年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. m . Deleidi g . Hargus哈雷特p、t·奥斯本和o . Isacson”发展histocompatible primate-induced多能干细胞的神经移植,”干细胞卷,29号7,1052 - 1063年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. f·f·朱,p . b, d . h . Zhang et al .,“代胰腺胰岛素生产细胞从恒河猴诱导多能干细胞,”Diabetologia,54卷,不。9日,第2336 - 2325页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. 钟,k·l·瓦j·l·戈里et al .,“维护非人类灵长类动物“诱导多能性”细胞与自杀基因,”分子治疗,19卷,不。9日,第1675 - 1667页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. Friedrich ben - nun, s·c·蒙塔古,m . l . Houck et al .,“诱导多能干细胞从高度濒危物种,”自然方法,8卷,不。10日,829 - 831年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. Okamoto和m .高桥”诱导视网膜色素上皮细胞从猴子“诱导多能性”细胞,”调查眼科及视觉科学,52卷,不。12日,第8790 - 8785页,2011年。视图:谷歌学术搜索
34. d . w . y . Wu梅尔顿,y,和p . j .赫恩斯比“改善合并感染与amphotropic准型逆转录病毒载体,“生物医学和生物技术杂志》上ID 901079条,卷。2009年,7页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. d . Huangfu k . Osafune r . Maehr et al .,“诱导多能干细胞主要人类成纤维细胞只有Oct4、Sox2”自然生物技术,26卷,不。11日,第1275 - 1269页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. m·d·奥康纳·m·d·卡德,即Iosfina et al .,“碱性phosphatase-positive殖民地的形成是一个敏感的、具体的和定量的指标未分化的人类胚胎干细胞,”干细胞,26卷,不。5,1109 - 1116年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. g . Malkinson和m·e·斯派拉”集群内的过度增长的资源主要生长锥构成复发”沉积的静脉曲张发展探明,“实验神经学,卷225,不。1,第153 - 140页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. s e m . Chan Ratanasirintrawoot, i . h .公园et al .,“活细胞成像部分区别真正的人类“诱导多能性”细胞重新编程细胞,”自然生物技术,27卷,不。11日,第1037 - 1033页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. t . a . Prokhorova l·m·哈克尼斯,Frandsen et al .,“畸胎瘤形成由人类胚胎干细胞是网站依赖和增强的基底膜基质,”干细胞与发展,18卷,不。1,47-54,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. h . Hentze p l .宋子文s t . Wang b·w·菲利普斯·t·c·丘比特、n·r·邓恩,“畸胎瘤形成人类胚胎干细胞:未来的安全性研究,评价基本参数”干细胞研究,卷2,不。3、198 - 210年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. 诉塔巴,g . Panagiotakos e·d·格林伯格et al .,“迁移和分化的神经前体细胞来源于人类胚胎干细胞在老鼠大脑,”自然生物技术,23卷,不。5,601 - 606年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. o .盛况Brokhman, l·齐格勒et al .,“PA6-induced人类胚胎干细胞neurospheres:人类的新来源周边感觉神经元和神经嵴细胞,”大脑研究卷。1230年,50 - 60,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. 沃尼格s . c, m, d·邓肯,o . Brustle和j·a·汤姆森“体外分化人类胚胎干细胞的移植神经前体细胞,”自然生物技术,19卷,不。12日,第1133 - 1129页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. x j·李和s c·张,“体外分化人类胚胎干细胞的神经前体细胞,”分子生物学方法卷,331年,第177 - 169页,2006年。视图:谷歌学术搜索
45. s·m·钱伯斯,c·a·法e . p . Papapetrou m . Tomishima m . Sadelain和l .、“高效神经转换人类ES和“诱导多能性”细胞的双重抑制SMAD信号”自然生物技术,27卷,不。3、275 - 280年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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