文摘

的在体外抗氧化活性和抑制细胞内活性氧(ROS)和个体总数的酚类化合物从峪子7号的红薯叶进行了这项研究。甘薯叶多酚具有抗氧化活性明显高于抗坏血酸、茶多酚、葡萄籽多酚。个体之间的酚类化合物,咖啡酸抗氧化活性最高,其次是monocaffeoylquinic酸和dicaffeoylquinic酸,3,4,5-tri-O-caffeoylquinic酸显示出最小值。甘薯叶多酚能显著减少的细胞内ROS水平剂量依赖性的方式。单个酚类化合物的抑制效应的顺序在细胞内ROS水平并不是按照抗氧化活性,表明没有直接的抗氧化活性和细胞内ROS-inhibiting效应之间的关系。甘薯叶可能是一个很好的来源的生物活性多酚与多个应用程序发展的食品,保健品,药品,化妆品。

1。介绍

活性氧(ROS)是一系列代谢副产物参与了人体的退行性和病理过程(1]。生产过剩的活性氧可能扰乱细胞氧化还原平衡,导致细胞损伤或凋亡[2),进一步引发组织和器官的氧化损伤,加速发展的各种疾病,比如癌症、动脉粥样硬化、糖尿病、慢性炎症性疾病,心血管疾病,和阿尔茨海默3- - - - - -6]。尽管人类和其他生物体内源性抗氧化防御活性氧,这些系统可能有时不足以防止细胞损伤的发生(7]。

合成抗氧化剂是广泛应用于食品工业、防止生产毒性或诱变可能存在的健康危害(8]。然而,研究表明,合成抗氧化剂具有化学毒性,可增加患癌症的风险,损害肝脏9- - - - - -12]。因此,特别重要的是寻找天然抗氧化剂,可以取代合成抗氧化剂。天然抗氧化剂之一,植物多酚类物质,广泛存在于水果和蔬菜,被认为是强有力的抗氧化剂和自由径向清道夫,因此具有许多生物活性,如抗氧化、抗衰老的,和预防心血管疾病、癌症抑制作用,抗炎作用,抗病毒作用,抗菌效果,等等13- - - - - -17]。也就是说,植物多酚有潜力成为广泛使用的天然抗氧化剂在食品、化妆品、医药、和医药产品18]。

甘薯叶甘薯的地上部分(番薯甘薯l .),一年可以收获几次,但是大多数的红薯叶在中国被丢弃或用作饲料,造成严重的环境污染和资源浪费19]。在我们之前的研究中,人们已经发现,红薯叶富含多酚,内容从2.73到12.46克/ 100克干重(DW) [20.,21]。与此同时,在体外抗氧化活性的多酚类物质提取和纯化的红薯叶(品种:峪7号和Ximeng 1号)也在我们之前的研究中,调查,结果表明,甘薯叶多酚具有强在体外抗氧化活性,抗坏血酸的2倍,茶多酚、葡萄籽多酚(19]。上述结果表明,甘薯叶多酚有很大的潜力成为广泛用于食品、医疗、制药和化妆品工业。然而,对红薯叶多酚的研究只是处于早期阶段。大多数研究都集中在茶多酚的提取和纯化甘薯叶和抗氧化活性在体外(19,22]。到目前为止,还没有研究进行探讨抑制细胞内ROS。

我们之前的研究表明,抗氧化活动之间的相关系数的红薯叶和茶多酚是最高的,其次是碳水化合物。抗氧化活性之间存在着负相关系数和蛋白质,脂肪和粗纤维(20.,21]。此外,茶多酚的抗氧化活性主要取决于个人的酚类化合物成分(19]。自制et al。23)发现dicaffeoylquinic酸的抗氧化活性是monocaffeoylquinic酸的2倍。我们之前的研究表明,甘薯叶多酚类物质主要是由七个caffeoylquinic酸和少量的咖啡酸(19),类似于其他研究者的报告(24- - - - - -26]。然而,几乎没有信息不同个体的贡献率从红薯叶的酚类化合物在体外抗氧化活性和抑制细胞内ROS。

因此,在目前的研究中,photochemiluminescence (PCL)试验和氧自由基吸收能力(ORAC)方法被用来分析在体外甘薯叶多酚类物质及其抗氧化活性的酚类化合物。此外,H2O2被用来诱导,建立人类肝细胞LO2氧化应激模型,抑制细胞内活性氧的红薯叶多酚和个人的酚类化合物。目的是使在体外抗氧化活性和抑制细胞内活性氧的红薯叶多酚清晰和进一步开发利用奠定理论基础的红薯叶多酚。

2。材料和方法

2.1。材料

甘薯叶品种、峪7号(由杂交培育,而不是转基因有机体),收集研究所的甘薯的中国农业科学院(徐州,中国),这是种植标准生产实践在3月初,2015年,收集在8月中旬。然后,红薯叶洗,冷冻干燥,地面,并存储在4°C为进一步使用铝箔袋密封。直接成分和总多酚含量(TPC Folin-Ciocalteu衡量方法27,28)7号峪的红薯叶如下:水分88.16±0.51克/ 100克鲜重、蛋白质22.09±0.34克/ 100克干重(DW),脂肪2.36±0.07克/ 100克DW,膳食纤维36.52±0.75 g / DW 100克、碳水化合物50.22±0.85 g / DW 100克、总能量为421.39±1.05千卡/ DW 100克、灰8.91±0.76克/ 100克DW,和TPC 12.97±0.82 g绿原酸当量(CAE) / DW 100克。

然后,从甘薯叶多酚的提取是根据太阳等描述的方法。20.,21]),净化原油多酚提取物进行了根据该方法建立了Xi et al。19和太阳等。27]。TPC的红薯叶多酚被AB-8树脂纯化后为87.56±1.38%。

2.2。试剂

Folin-Ciocalteu试剂2 2 -azobis (2-amidinopropane)盐酸盐(AAPH)、抗坏血酸,2、5、7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic酸(Trolox),绿原酸,咖啡酸,2 ,7 二乙酸二氯荧光素(DCFDA),本人5中,甲基噻唑基四唑(MTT)、二甲亚砜(DMSO),结晶紫和色谱级乙腈和甲醇买来Sigma-Aldrich Inc .(圣路易斯,密苏里州,美国)。色谱年级caffeoylquinic酸标准(3-O-caffeoylquinic酸,4-O-caffeoylquinic酸,5-O-caffeoylquinic酸,3,4-di-O-caffeoylquinic酸,3,5-di-O-caffeoylquinic酸,4,5-di-O-caffeoylquinic酸,3,4,5-tri-O-caffeoylquinic酸)买来AMRESCO生物技术有限公司(梭伦,哦,美国)。茶多酚(TP)和葡萄籽多酚(GSP)从义购买生物技术有限公司,西安,中国。胎牛血清(的边后卫)从通用电气医疗集团生命科学HyClone购买实验室(美国犹他州洛根)。青霉素、链霉素是购自Mediatech Inc .(马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)。胰蛋白酶(1:250年,活动:250全国/毫克)购买从生命力生物科技有限公司(中国,北京)。荧光素钠、氢氧化钠、磷酸和其他分析纯试剂购自北京化学试剂有限公司(中国,北京)。

2.3。提取茶多酚的红薯叶子

提取茶多酚的红薯叶是根据太阳的描述的方法et al。20.,21])。短暂,10 g的叶粉中提取了200毫升的70% (v/v)乙醇为30分钟50°C和接受超声波治疗(59千赫)。离心后在5000 10分钟在4°C,残渣reextracted两次以70%乙醇如上所述。浮在表面的集中,集中在45°C,旋转蒸发器和冷冻乾获得粗多酚提取。

2.4。总多酚含量

总多酚含量(TPC)被Folin-Ciocalteu测量方法(27,28]。粗提物溶解在100毫升蒸馏水;一个整除(0.5毫升)与1.0毫升的Folin-Ciocalteu试剂混合,反应之前稀释10倍,并允许30分钟30°C。随后,2.0毫升的饱和Na2有限公司3(10%,w/v)被添加到混合物中。接下来的30分钟,吸光度测量在736 nm UV1101分光光度计(日立、日本)。校准曲线组成的绿原酸标准,从0.02到0.10毫克/毫升,是准备。TPC被表示为绿原酸当量(CAE)干重(DW)基础。TPC峪的7号的红薯叶为12.97±0.82 g CAE / DW 100克。

2.5。净化AB-8从甘薯叶多酚的大孔树脂

原油净化多酚提取物进行了根据该方法建立了Xi et al。19和太阳等。27]。简单,粗多酚提取物溶解在蒸馏水的粗多酚溶液CAE 2.0毫克/毫升和pH值调整到3.0使用2.0 mol / L盐酸。净化过程在一个玻璃进行列(1厘米×10厘米)湿挤满了AB-8树脂预处理。床体积(BV)树脂是10毫升(等于5克树脂)。天然多酚的解决方案是允许流过的玻璃柱1.0毫升/分钟的流量(粗多酚溶液之间的体积比和BV 5: 1)。已经达到了吸附平衡后,列是第一次用蒸馏水洗净1.0毫升/分钟的流量,直到废水是清楚的,然后筛选了70% (v/v)的乙醇溶液的流量1.0 mL / min(乙醇溶液和BV之间的体积比是3:1)。收集并筛选了解决方案集中在旋转蒸发器在45°C除去乙醇,然后冷冻乾。纯化茶多酚的总多酚含量从甘薯叶为87.56±1.38%。

2.6。量化个人酚类化合物的反相高效液相色谱(rp)

个人多酚中酚类化合物的红薯叶进行评估,rp(美国安捷伦科技,帕洛阿尔托,CA)根据太阳的描述的方法et al。27]。光谱数据从200年到800海里都被记录下来,和多酚色谱监测,326海里。3-O-caffeoylquinic酸,咖啡酸4-O-caffeoylquinic酸,5-O-caffeoylquinic酸,3,4-di-O-caffeoylquinic酸,3,5-di-O-caffeoylquinic酸,4,5-di-O-caffeoylquinic酸,和3、4,5-tri-O-caffeoylquinic酸作为标准。识别和定量分析是通过与标准进行比较。单个酚类化合物的量表示为g / 100 g的纯化甘薯叶多酚在干重的基础上(g / 100 g DW)。

2.7。抗氧化活性分析
2.7.1。Photochemiluminescence化验

Photochemiluminescence试验进行了使用一个自动化学发光照片(PCL)系统(Photochem,德国耶拿分析仪器公司AG),德国),根据Cofrades方法报道et al。29日]。简单地说,20μ样品溶液在不同浓度L(5、10和20μg / mL)是在一个商业工具用于抗氧化能力的决心。抗坏血酸作为标准。结果表示为抗坏血酸当量(ACE)相对于样品溶液体积(μg·ACE /毫升)。

2.7.2。氧自由基吸收能力测定

氧自由基吸收能力(ORAC)分析是根据太阳的描述的方法et al。27]。短暂,所有的样品和试剂在实验中被溶解和稀释磷酸盐缓冲剂(0.075米,pH值7.4)。20μL在不同浓度样品的解决方案(5、10和20μ20 g / mL)被添加到μ20 L磷酸盐缓冲剂,然后混合μL·63 nmol / L荧光素钠溶液在96孔酶标和孵化37°C,持续15分钟。然后,140年μL·18.28更易与L AAPH迅速的解决方案是添加到。荧光在485 nm激发阅读和535海里排放,直到完全灭绝。氧自由基吸收值被表示为μg·Trolox当量(TE) /毫升(μg·TE /毫升)。

2.8。抑制细胞内活性氧的红薯叶多酚
2.8.1发布。细胞培养

人类肝细胞LO2细胞获得Bioye生物技术有限公司(上海,中国)。5细胞培养在本人的培养基,含有10%的边后卫和青霉素、链霉素的1%,在37°C的氛围中5%的股份有限公司2在空气湿度控制。

2.8.2。测定H2O2浓度LO2氧化应激模型的建立

H2O25原液稀释了本人的培养基没有的边后卫在H2O2工作不同浓度的解决方案:1、5、25、50、100、200、400年、500年和1000年μm . LO2细胞被播种到96孔细胞培养板的密度5×103细胞/好然后孵化24 h。之后,96孔细胞培养板的培养基是丢弃,并与200细胞被洗一次μL PBS的好。随后,H2O2工作不同浓度溶液添加到96孔细胞培养板。孵化后6 h, h2O2解决方案是丢弃工作,100年μL FBS-free培养基的添加到每个;然后,20μ肝癌和L(5.0毫克/毫升的解决方案是添加到每个。孵化为另一个4 h后,上层清液在每个被丢弃。然后,生成的甲瓒沉淀于150年解散μL DMSO,吸光度测量在570 nm使用rt - 6000微型板块读者(Rayto、深圳、中国)。根据(细胞生存能力计算1)。H2O2浓度细胞生存能力降低到50%时被选为最优浓度建立人类肝细胞LO2氧化应激模型。 其中一个n的吸光度值H2O2治疗组和一个0空白对照组的吸光度值。

2.8.3。测定多酚的浓度范围从红薯叶子

甘薯叶多酚原液稀释了FBS-free McCoy 5培养基为甘薯叶多酚在不同浓度的解决方案:25岁,50岁,100,200,400,800,1000,1500,2000,3000μ克/毫升。LO2细胞被播种到96孔细胞培养板的密度5×103细胞/好然后孵化24 h。之后,培养基在96孔细胞培养板丢弃和细胞与200年洗一次μL PBS的好。随后,红薯叶多酚工作不同浓度溶液添加到96孔细胞培养板。孵化后24小时,红薯叶多酚工作解决方案和100年被抛弃了μL FBS-free培养基的添加到每个;然后,20μ肝癌和L(5.0毫克/毫升的解决方案是添加到每个。细胞生存能力测试是根据在上一节中描述的协议。

2.8.4。甘薯叶多酚类物质对细胞氧化应激LO2细胞的可行性

实验分为7组:空白对照组,氧化应激模型组,Trolox-pretreated氧化应激模型组,抗坏血acid-pretreated氧化应激模型组、茶polyphenol-pretreated氧化应激模型组,葡萄籽polyphenol-pretreated氧化应激模型组和甘薯叶polyphenol-pretreated氧化应激模型组。

LO2细胞被播种到96孔细胞培养板的密度5×103细胞/好然后孵化24 h。之后,培养基在96孔细胞培养板丢弃和细胞与200年洗一次μL PBS的好。随后,红薯叶多酚溶液不同浓度/工作Trolox一定浓度的溶液/一定浓度的抗坏血酸溶液/一定浓度的茶多酚溶液/一定浓度的葡萄籽多酚溶液添加到96孔细胞培养板。孵化后24小时,培养基被丢弃和细胞与200年洗一次μL PBS的好。然后,H2O2一定浓度的工作解决方案(这是用于建立LO2氧化应激模型)被添加到96孔细胞培养板。孵化后6 h,培养基被丢弃和100年μL FBS-free培养基的添加到每个;然后,20μ肝癌和L(5.0毫克/毫升的解决方案是添加到每个。细胞生存能力测试是根据在上一节中描述的协议。

2.8.5。个人从甘薯叶酚类化合物对细胞氧化应激LO2细胞的可行性

实验分为10组:空白对照组,氧化应激模型组,红薯叶polyphenol-pretreated氧化应激模型组,3-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,4-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,5-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,3,4-di-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,3,5-di-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,4,5-di-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,3,4,5-tri-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组。实验过程描述的一样在上面的段落。

2.8.6。甘薯叶多酚对细胞内活性氧的水平

实验分为7组:空白对照组,氧化应激模型组,Trolox-pretreated氧化应激模型组,抗坏血acid-pretreated氧化应激模型组、茶polyphenol-pretreated氧化应激模型组,葡萄籽polyphenol-pretreated氧化应激模型组和甘薯叶polyphenol-pretreated氧化应激模型组。

LO2细胞被播种到96孔细胞培养板的密度5×103细胞/好然后孵化24 h。之后,培养基在96孔细胞培养板丢弃和细胞与200年洗一次μL PBS的好。随后,红薯叶多酚溶液不同浓度/工作Trolox一定浓度的溶液/一定浓度的抗坏血酸溶液/一定浓度的茶多酚溶液/一定浓度的葡萄籽多酚溶液添加到96孔细胞培养板。孵化后24小时,培养基被丢弃和细胞与200年洗一次μL PBS的好。10μM H2DCF-DA被添加到每个。孵化离开光30分钟后,细胞与200年洗一次μL PBS的好。然后,H2O2一定浓度的工作解决方案(这是用于建立LO2氧化应激模型)被添加到96孔细胞培养板。避光孵化一30分钟后,荧光强度在485 nm激发阅读,使用标530海里排放(变色龙,Hidex,图尔库,芬兰)。细胞内活性氧水平的计算如下: 在FIn的荧光强度进行预处理组和FI吗0的荧光强度是氧化应激模型组。

2.8.7。影响个人的酚类化合物从甘薯叶细胞内活性氧的水平

实验分为10组:空白对照组,氧化应激模型组,红薯叶polyphenol-pretreated氧化应激模型组,3-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,4-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,5-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,3,4-di-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,3,5-di-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,4,5-di-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组,3,4,5-tri-O-caffeoylquinic acid-pretreated氧化应激模型组。实验过程描述的一样在上面的段落。

2.9。统计分析

所有上述实验进行至少三个复制。结果表示为平均数±标准差。统计分析是通过单向方差分析之后,邓肯多重比较测试与SAS 8.1版本软件(SAS研究所Inc .,卡里、数控、美国)。统计学意义是 。

3所示。结果与讨论

3.1。量化个人,rp -酚类化合物

表1显示,有7 caffeoylquinic酸和少量的咖啡酸检测从峪7号甘薯叶多酚,这是按照先前的报道(19- - - - - -21,24- - - - - -26]。三个dicaffeoylquinic酸显示最高的内容,尤其是3 5-di-O-caffeoylquinic酸(36.30±0.19%,DW),其次是3,4-di-O-caffeoylquinic酸(25.01±0.42%,DW), 4, 5-di-O-caffeoylquinic酸(21.38±0.21%,DW), 3, 4, 5-tri-O-caffeoylquinic酸,monocaffeoylquinic酸和咖啡酸。个人的红薯叶中酚类化合物的成分可能主要归因于不同的基因型和农业生态的环境30.]。但总的来说,从这一研究获得的结果对于个体的酚类化合物的组成,红薯叶可能是一个好来源的生物活性化合物与多个应用程序发展的健康产品,功能食品,药品和化妆品。然而,在追求在实际生产中的应用,有必要澄清每个酚类化合物的生物活性。

表1
单独的酚类化合物组成峪7号甘薯叶多酚。
3.2。抗氧化活性
3.2.1之上。从甘薯叶总多酚的抗氧化活性

总多酚的抗氧化活性峪7号的红薯叶表所示2。··O2−清除活动显示明显的剂量依赖性( )。在所有的测试浓度下,··O2−清除活动总多酚的红薯叶高于总从茶和葡萄籽多酚。当浓度达到20μg / mL,红薯叶总多酚显示最高的··O2−清除活动(62.71μg·ACE /毫升)总额的4.90和8.32倍,从茶和葡萄籽多酚,分别。总多酚的氧自由基吸收能力的红薯叶也表现出明显的剂量依赖性关系( )。在20的浓度μg / mL,总多酚的氧自由基吸收能力的红薯叶最高(55.68μg·TE /毫升)总额的1.28倍,从茶和葡萄籽多酚。

表2
抗氧化活性的峪7号红薯叶茶多酚,茶多酚、葡萄籽多酚。
3.2.2。抗氧化活性的酚类化合物从红薯叶子

个人的酚类化合物的抗氧化活性峪7号的红薯叶表所示3。对于·阿2−清除活动,咖啡酸(51.12显示最高的价值μg·ACE /毫升),远高于总多酚从甘薯叶片(30.56μg·ACE /毫升)。然而,·O2−清除所有单个活动caffeoylquinic酸是低于咖啡酸和总多酚从红薯叶子。其中,monocaffeoylquinic酸和dicaffeoylquinic酸没有表现出明显不同的价值观和3、4,5-tri-O-caffeoylquinic酸显示最小值(15.03μg·ACE /毫升)。

表3
抗氧化活性的酚类化合物从红薯叶子。

氧自由基吸收能力,所有单独的酚类化合物除3、4,5-CQA显示值高于从甘薯叶总多酚(33.72μg·TE /毫升)。咖啡酸(56.78显示最高的价值μg·TE /毫升),明显高于其他个体的酚类化合物( )。没有显著差异的氧自由基吸收能力monocaffeoylquinic酸和dicaffeoylquinic酸。

自制et al。23)报道,caffeoylquinic酸衍生物的自由基清除活性呈正相关,caffeoyl组织它们的分子的数量。然而,在我们目前的研究中,没有显著差异的抗氧化活动monocaffeoylquinic酸和dicaffeoylquinic酸,并没有按照报告的自制等。其中的一个可能的原因是使用的方法确定抗氧化活性不同。换句话说,不同的自由基清除活性的自制等人的研究中发现,我们的,例如,DPPH自由基清除活性检测研究自制et al .,而·O2−清除活动和氧自由基吸收能力在我们目前的研究发现。此外,Bendary et al。31日]报道,多酚的抗氧化活性主要是酚羟基的数目相关的酚羟基数量越高,能够抗氧化活性越强。mono - dicaffeoylquinic酸的分子量为354.31和516.45,分别和酚羟基数量在mono - dicaffeoylquinic酸5和6,分别。也就是说,酚羟基的数量比相同浓度的mono -本研究和dicaffeoylquinic酸是1.21,拥有小的差别。因此,在同一质量浓度,抗氧化活性没有明显不同的mono -和dicaffeoylquinic酸。此外,茶多酚的抗氧化活性不仅与酚羟基的数目也酚羟基的位置(32]。酚羟基的位置和空间构象的不同caffeoylquinic酸不同,使得它很难判断哪一种具有更高的抗氧化活性。

尽管咖啡酸具有抗氧化活性最高,其内容从甘薯叶总多酚只有0.09%。相比之下,mono - dicaffeoylquinic酸的抗氧化活性低于咖啡酸,但dicaffeoylquinic酸是主要的内容,占总数的82.69%多酚在红薯叶子。它可以因此说dicaffeoylquinic酸最有助于甘薯叶多酚的抗氧化活性。

3.3。抑制细胞内活性氧的红薯叶多酚
3.3.1。测定H2O2浓度LO2氧化应激模型的建立

MTT试验结果表明,与H的增加2O2浓度,人类肝细胞的细胞生存能力LO2细胞逐渐减少(图1(一))。当氢的浓度2O225岁μM, LO2细胞生存能力的显著低于空白控制(没有H2O2治疗)。当氢的浓度2O2达到了100μM细胞生存能力下降到50.17%。当氢的浓度2O2达到了1000μM细胞生存能力仅为29.35%。因此,以下实验与H2O2100年工作方案μM为建模的代理。

(一)
(一)
(b)
(b)
图1
H (a)的影响2O2浓度和(b)甘薯叶多酚浓度在人类肝细胞LO2细胞细胞的可行性。值意味着±SD五决定。上述不同的字母不同的酒吧意味着细胞生存能力明显不同( )。
3.3.2。测定多酚的浓度范围从红薯叶子

相对于空白控制(没有红薯叶多酚治疗),红薯叶多酚治疗25 - 800的浓度范围下μg / mL没有造成重大改变的细胞生存能力(图1 (b))。当甘薯叶多酚的浓度达到1000μg / mL,人类肝细胞的细胞生存能力LO2细胞下降到87.48%。甘薯叶多酚浓度的进一步增加,细胞生存能力进一步降低。因此,以下实验与甘薯叶多酚0 - 800的工作方案μ克/毫升。

3.3.3。总多酚的抑制细胞内活性氧的红薯叶子

总多酚的影响从甘薯叶细胞氧化应激LO2细胞的生存能力是如图2(一个)。红薯叶的总多酚能显著降低LO2细胞生存能力的下降引起的H2O2,这种作用具有剂量依赖性的方式。25、50、100、200、400和800μg / mL甘薯叶多酚工作解决方案可以恢复细胞生存能力为53.32%,59.40%,66.78%,71.67%,92.23%,和94.01%,分别。当甘薯叶多酚的浓度达到50μg / mL,对LO2细胞保护作用相媲美,100μg / mL Trolox和抗坏血酸。然而,在同一浓度(100μg / mL),红薯叶多酚的保护作用,Trolox,抗坏血酸,和茶多酚显示无显著差异,都是低于葡萄籽多酚(细胞生存能力是115.22%)。

(一)
(一)
(b)
(b)
图2
从甘薯叶总多酚的保护作用对人类肝细胞LO2氧化应激。(a)总多酚的影响从甘薯叶细胞氧化应激LO2细胞的可行性。(b)从甘薯叶总多酚的影响细胞内活性氧的水平。控制LO2细胞没有H2O2和抗氧化剂治疗;H2O2控制是LO2氧化应激模型组治疗H2O2100年μM;Trolox,抗坏血酸,TPP, GPP LO2细胞在100年进行预处理μg / mL Trolox、抗坏血酸、茶多酚、葡萄籽多酚,分别,然后到100年μM H2O2;SPLP1、SPLP2 SPLP3、SPLP4 SPLP5,和SPLP6 LO2细胞进行预处理的红薯叶多酚25岁,50岁,100年,200年、400年和800年μg / mL,分别,然后到100年μM H2O2;虚线代表空白对照组的值,实线代表的值LO2氧化应激模型组。值意味着±SD五决定。上述不同的字母不同的酒吧意味着细胞生存能力或细胞内活性氧水平明显不同( )。

总多酚的影响从甘薯叶片细胞内活性氧水平图所示2 (b)。甘薯叶多酚减少细胞内活性氧水平显著( 以剂量依赖性的方式)。甘薯叶多酚的浓度时25μg / mL,细胞内活性氧的水平下降到87.14%相比,氧化应激模型组(100%),相当于100μg / mL Trolox(82.51%)和抗坏血酸(89.30%)。当甘薯叶多酚的浓度是50和100μg / mL,细胞内活性氧的水平下降到79.19%和78.32%,分别比100年显示无显著差异μ克/毫升Trolox。当甘薯叶多酚的浓度是200年和400年μg / mL,细胞内活性氧的水平下降到67.34%和61.17%,分别达到空白控制和100年的水平μg / mL茶多酚。当甘薯叶多酚的浓度是800年μg / mL,细胞内活性氧的水平下降到51.95%,相当于100μ克/毫升葡萄籽多酚,显著低于空白控制。

3.3.4。抑制细胞内活性氧的个体从甘薯叶酚类化合物

单个酚类化合物的保护作用从甘薯叶对人类肝细胞LO2氧化应激是如图3。在相同样本浓度(100μg / mL),细胞LO2咖啡酸和3-O-caffeoylquinic酸预处理的可行性最高(95.12%和93.71%,分别地。,but no significant difference), followed by 3,5-di-O-caffeoylquinic acid (89.96%), 4,5-di-O-caffeoylquinic acid (88.79%), 3,4,5-tri-O-caffeoylquinic acid (84.41%), 5-O-caffeoylquinic acid (80.97%), 3,4-di-O-caffeoylquinic acid (78.22%), 4-O-caffeoylquinic acid (77.83%), and the total polyphenols from sweet potato leaves (66.78%) (Figure3(一个))。此外,LO2细胞生存能力的所有个体进行预处理的酚类化合物和总多酚从甘薯叶显著高于LO2氧化应激模型(50.17%)( )和细胞的可行性LO2 3-O-caffeoylquinic酸预处理,3,5-di-O-caffeoylquinic酸,和4,5-di-O-caffeoylquinic酸没有表现出显著差异与空白控制(100%)。

(一)
(一)
(b)
(b)
图3
保护作用的个体从甘薯叶酚类化合物对人类肝细胞LO2氧化应激。(a)的影响个体从甘薯叶酚类化合物在细胞氧化应激LO2细胞的可行性。(b)的影响个体从甘薯叶酚类化合物在细胞内活性氧的水平。控制LO2细胞没有H2O2和抗氧化剂治疗;H2O2控制LO2氧化应激模型组治疗H2O2100年μM;SPLP、钙、3-CQA、4-CQA 5-CQA, 3, 4-CQA, 3, 5-CQA, 4, 5-CQA, 3, 4, 5-CQA LO2细胞在100年进行预处理μg / mL红薯叶茶多酚、咖啡酸,3-O-caffeoylquinic酸,4-O-caffeoylquinic酸,5-O-caffeoylquinic酸,3,4-di-O-caffeoylquinic酸,3,5-di-O-caffeoylquinic酸,4,5-di-O-caffeoylquinic酸,3,4,5-tri-O-caffeoylquinic酸,分别,然后到100年μM H2O2;虚线代表空白对照组的值,实线代表的值LO2氧化应激模型组。值意味着±SD五决定。上述不同的字母不同的酒吧意味着细胞生存能力或细胞内活性氧水平明显不同( )。

个人的酚类化合物的影响从甘薯叶细胞内活性氧水平图所示3 (b)。所有的测试样品减少细胞内活性氧水平显著( )在同一浓度的100μg / mL;特别是咖啡酸和3-O-caffeoylquinic酸,细胞内活性氧水平下降了50.34%和48.88%的H2O2分别控制,甚至低于空白控制。细胞内活性氧水平并没有表现出显著差异在4-O-caffeoylquinic酸,5-O-caffeoylquinic酸,3,4-di-O-caffeoylquinic酸,3,5-di-O-caffeoylquinic酸,4,5-di-O-caffeoylquinic酸,3,4,5-tri-O-caffeoylquinic酸,和总多酚从红薯叶子。然而,考虑到个人酚类化合物的含量明显不同甘薯叶多酚,它可以表示,dicaffeoylquinic酸最有助于抑制细胞内活性氧的红薯叶多酚。

序列的影响个体从甘薯叶酚类化合物对细胞内活性氧水平并不是按照抗氧化活性,表明抗氧化活性之间没有直接的关系,对人类肝细胞LO2氧化应激的保护作用。据报道,提高内生的ROS-regulating能力的关键是提高抗氧化应激的能力(33]。通过调节氧化应激相关基因的表达,提高内生的ROS-regulating能力,干预氧化damage-inducing细胞凋亡的信号转导通路,和保护或修复线粒体功能,可以防止氧化应激诱导的细胞损伤有效(33]。也就是说,红薯叶多酚的预防效果对LO2细胞的氧化应激可能是由调节氧化应激相关基因的表达,而不是直接通过抗氧化作用,这需要进一步的研究验证了。

4所示。结论

甘薯叶多酚的抗氧化活性明显高于抗坏血酸、茶多酚、葡萄籽多酚。中酚类化合物存在于个人的红薯叶,咖啡酸显示抗氧化活性最高,其次是mono - dicaffeoylquinic酸和3、4,5-tri-O-caffeoylquinic酸表现出最低的抗氧化活性。甘薯叶多酚的胞内ROS-inhibiting活动是Trolox相似。单个酚类化合物的抑制效应的顺序从甘薯叶片细胞内ROS水平并不是按照抗氧化活性,表明抗氧化活性之间没有直接的关系,对人类肝细胞LO2氧化应激的保护作用。甘薯叶可能是一个很好的来源的生物活性多酚与多个应用程序在功能食品的发展,保健品,药品,化妆品。追求实际生产应用程序的其他化合物的生物活性在红薯叶子还应该调查。

的利益冲突

作者声明没有竞争的经济利益。

确认

作者感谢甘薯的研究所,中国农业科学院(徐州、中国)提供在本研究中使用的红薯叶子。这项研究受到了美国国家科学基金(31701614)、中国国家重点研发项目(2016 yfe0133600),中国农业研究系统和专项基金(CARS-10-B21)。