文摘

我们已经表明,神经祖细胞(npc)保护内皮细胞氧化应激(ECs)。因为液(练习)可以表达父母的利益细胞通过他们进行小分子核糖核酸(大鹏)和mir - 210与通用的函数表达,我们调查mir - 210的作用在NPC-EXs对氧化应激的影响和ECs功能障碍。npc与控制和mir - 210转染争夺抑制剂/模拟生成NPC-EXs^反对,NPC-EXs^sc,NPC-EXs^{反- mir - 210},NPC-EXs^{mir - 210}。各种NPC-EXs血管紧张素ⅱ的影响——(Angⅱ)诱导活性氧(ROS)生产过剩,细胞凋亡,功能障碍,以及Nox2失调,ephrin A3, VEGF和p-VEGFR2 / VEGFR2 ECs的评估。结果表明(1)Ang II-induced ROS生产过剩,增加细胞凋亡,并减少管形成能力,伴随着Nox2 upregulation并减少p-VEGFR2 / VEGFR2 ECs。(2)与NPC-EXs相比^反对或NPC-EXs^sc,NPC-EXs^{反- mir - 210}较低而NPC-EXs^{mir - 210}更有效的在衰减引起的这些不利影响和ECs II。(3)NPC-EXs这些影响^{反- mir - 210}和NPC-EXs^{mir - 210}与mir - 210的变化有关,ephrin A3, VEGF和p-VEGFR2 / VEGFR2 ECs的比率。总之,在盎II-induced NPC-EXs内皮损伤的保护作用通过mir - 210控制Nox2 / ROS和VEGF / VEGFR2信号进行了研究。

1。介绍

氧化应激是众所周知的发挥至关重要的作用在一个多样的心血管疾病包括高血压、糖尿病血管病变,高胆固醇血症和动脉粥样硬化1- - - - - -3]。的确,生产过剩的活性氧(ROS)已被证明诱导功能障碍,促炎和凋亡内皮细胞死亡(ECs) [4- - - - - -6]。因此,一个高效的抗氧化防御系统,以防止保护血管内皮功能障碍是至关重要的。

最近,神经嵴干细胞促进神经元的生存已报告在正常和氧化应激条件下神经元在超氧化物歧化酶2突变细胞系(7]。作为一种大脑中的干细胞,神经祖细胞(npc)居住在subventricular区直接联系血管和并列ECs (8]。这两种类型的细胞相互作用通过与潜在的直接身体接触或通过旁分泌机制不同的生物效应。在我们先前的研究显示[9),npc可以减少缺氧/ reoxygenation-induced ROS对ECs生产过剩。然而,npc对抗氧化应激的确切机制尚不清楚。液(练习),大多数细胞,分泌小泡正在成为信息通信介质。他们可以把货物转移等小分子核糖核酸(大鹏)和蛋白质遥远/附近的细胞,从而调节受体细胞功能(10- - - - - -12]。练习干细胞已被证明转达父母细胞[的好处13- - - - - -17]。例如,内皮祖细胞衍生囊泡可以保护ECs对缺氧/复氧损伤[16]。间充质干细胞练习能促进功能恢复和卒中后神经可塑性在老鼠mir - 133 (13),提高细胞生存在肾损伤(17]。最近,我们的团队表明,内皮祖细胞衍生囊泡从健康对照组对内皮祖细胞的功能有保护作用从糖尿病患者通过mir - 126 (14]。为了探索npc保护ECs免受氧化应激的机制,我们调查是否练习释放npc (NPC-EXs)可以保护ECs免受氧化应激和功能障碍的Ang II-induced损伤模型。

mir - 210是广泛表达于多种细胞,如诱导多能干细胞和骨髓干细胞,和通用的功能18]。据报道,mir - 210是一个至关重要的元素的ECs应对缺氧大大影响内皮血管生成能力(19]。更多的研究已经证明,mir - 210不仅影响细胞的生存对凋亡基因(20.- - - - - -22),但也显示抗氧化作用通过减少线粒体ROS生产(23- - - - - -25]。最近,王等人报道,练习源自诱导多能干细胞可以交付mir - 210的心肌细胞,保护心肌细胞对H₂O₂全身的氧化应激(15]。然而,没有研究调查mir - 210是否参与保护NPC-EXs对ECs对氧化应激的影响。

在这项研究中,我们说明了mir - 210是否参与保护NPC-EXs对衰减的影响和II-induced ROS生产过剩和ECs功能障碍。

2。材料和方法

2.1。细胞培养的npc和ECs

人类npc买来写明ATCC®(ATCC-BYS012;美国弗吉尼亚州马纳萨斯)和培养根据制造商的协议。短暂,NPC在完成培养生长介质包括DMEM / F12补充与人大扩张增长工具包(写明ATCC acs - 3003;美国弗吉尼亚州马纳萨斯)。每隔一天中被改变。人类大脑ECs买来电池系统(美国佤邦·柯克兰)和培养与CSC完全培养基(细胞系统)含10%血清,2%的人类重组生长因子,和0.2%的抗生素溶液标准细胞培养条件下(5%的二氧化碳,37°C)。媒介改变了两次一个星期。

2.2。过度的npc mir - 210

npc扩展,用于转染,或表达下调mir - 210 (19]。短暂,npc培养60 - 70%融合和转染mir - 210模拟,mir - 210抑制剂,或控制(SC)的争夺(40 nM, Exiqon沃本,MA)通过使用lipofectamine 2000(24小时表达载体,卡尔斯巴德,CA)根据制造商的指示。npc转染mir - 210 SC,抑制剂,或模仿被表示为npc^sc,npc^{反- mir - 210},或者npc^{mir - 210},分别。npc的完全培养基作为控制(npc^反对)。这三种类型的npc被用于生产相应的练习。所有转染进行了一式三份。

2.3。准备和练习释放npc的集合

从无血清培养基收集练习的协议被报道在我们之前的研究26]。简单地说,npc^反对,npc^sc,npc^{反- mir - 210},或者npc^{mir - 210}在无血清培养基培养释放练习被表示为NPC-EXs^反对,NPC-EXs^sc,NPC-EXs^{反- mir - 210},NPC-EXs^{mir - 210}。24小时后,在300年中收集和离心机15分钟去除死细胞。上层清液离心机在200030分钟去除细胞碎片,紧随其后的是离心,享年20000岁170000年70分钟和超速离心法90分钟球练习。的颗粒状NPC-EXs^反对,NPC-EXs^sc,NPC-EXs^{反- mir - 210},或者NPC-EXs^{mir - 210}与磷酸盐resuspended (PBS)和纳米粒子跟踪分析整除(NTA)和coculture实验。PBS是20纳米过滤器过滤(绘画纸、匹兹堡、PA)。

2.4。纳米颗粒NPC-EXs的跟踪分析

的NanoSight NS300(英国莫尔文仪器,莫尔文)是用于检测练习,因为我们之前报道(26]。简单地说,700年μl稀释悬浮液含NPC-EXs加载到样品室和相机水平维持在10光散射模式进行样本分析。通常30秒的持续时间被三个视频,每秒30帧的帧速率。数据分析了NTA 3.0软件(英国莫尔文仪器,莫尔文)一帧一帧的基础上。实验重复了四次。

2.5。标签的NPC-EXs

NPC-EXs都贴有红色荧光染料PKH26(西格玛奥德里奇,密苏里州圣路易斯)我们之前报道16]。总之,NPC-EXs孵化了2μM PKH26染色在PBS rt,同等体积的5分钟的边后卫了停止染色。然后,NPC-EXs被超速离心法颗粒状,与培养基resuspended coculture实验。

2.6。AngⅱECs的损伤模型

ECs被播种在12-well板块(5×10⁴在对数生长期细胞/)。70 - 80%汇合的达成时,这些细胞被孵化与Angⅱ(0到10⁻⁶M;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州)24小时(27]。coincubation后,介质代替新鲜培养基。ECs被用于coculture实验或收集的各种分析。

2.7。Coculture NPC-EXs ECs

进一步阐明影响NPC-EXs ECs, ECs被分成五个coculture组:汽车(仅coculture介质),NPC-EXs^反对,NPC-EXs^sc,NPC-EXs^{反- mir - 210},或者NPC-EXs^{mir - 210}。短暂,NPC-EXs贴上PKH 26 resuspended CSC介质和添加到培养基的ECs受到Angⅱ受伤。NPC-EXs(50的浓度μg / ml)确定基于我们之前的研究(16]。的合并后24小时coculture NPC-EXs ECs是观察到荧光显微镜(evo;热费希尔科学)。分析了水平细胞荧光强度ImageJ (NIH)根据指令和一个以前的报告28]。ECs的培养基是收集测量VEGF通过ELISA的浓度。ECs被用于细胞凋亡、管的形成和ROS生产化验。ephrin A3, mir - 210水平Nox2,和p-VEGFR2 / VEGFR2 ECs被定量rt - pcr和免疫印迹分析,分别。ECs正常条件下培养被用作控制。实验重复了四次。

2.8。ECs的细胞凋亡检测

coculture之后,ECs分离的细胞凋亡测定用FITC膜联蛋白V凋亡检测工具(BD生物科学,CA) [9]。简单地说,细胞用PBS, resuspended 100μ与5 L 1 x annexin-binding缓冲区,孵化μL FITC-conjugated膜联蛋白V和5μL propidium碘(PI) 15分钟在黑暗中,然后通过流式细胞术分析。凋亡细胞被定义为膜联蛋白V + /π−细胞。凋亡细胞的比例计算如下:膜联蛋白V + /π−细胞/总×100%。实验重复了四次。

2.9。ROS测量

细胞内的活性氧产量取决于dihydroethidium(她)(σ)染色。简而言之,与2细胞被孵化μM她解决方案在37°C 2小时。与PBS细胞被洗两次,荧光显微镜下拍摄图像(evo、生命科学)。分析了水平细胞荧光强度ImageJ (NIH,马里兰州贝塞斯达)根据以前的报告(29日]。数据表示为褶皱的荧光与控制。ECs与CSC培养基培养被用作控制。

2.10。定量rt - pcr分析

转染后细胞与PBS洗两次。大鹏展翅的npc及其释放的练习,以及ECs cocultured各种NPC-EXs提取使用mirVana microrna的隔离设备(试剂盒、希尔登,德国)。检测mir - 210水平,逆转录(RT)反应是由使用mirVana存在microrna的检测工具和hsa - mir - 210中存在从Ambion引物组。RT引物5′-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTG GATACGACGACTGT-3′。mir - 210的正向引物5′-CACGCAGTCGTA TCCAGTGCAGG-3′。mir - 210的反向引物5′-CCAGTGCAGGGTCCG AGGTA-3′。U6作为内生的表达控制每个样本。U6正向引物的5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,和反向引物U6 5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。每个基因的相对表达水平是规范化U6和计算使用2^−ΔΔCT方法。实验重复了四次。

2.11。酶联免疫吸附试验

VEGF水平与NPC-EXs ECs cocultured的培养基^反对,NPC-EXs^sc,NPC-EXs^{反- mir - 210},或者NPC-EXs^{mir - 210}以酶联免疫吸附试验(ELISA)根据制造商的指示(研发系统,明尼阿波利斯,美国)。VEGF浓度计算作为培养基的pg / ml。每组是一式三份。实验重复了四次。

2.12。ECs的管形成试验

管的形成进行了分析通过使用体外血管生成试验装备(Chemicon Rosemont, IL)。首先,ECMatrix解决方案与ECMatrix融化和混合稀释剂。ECMatrix混合物是放置在一个96孔细胞培养板在37°C 1小时允许矩阵解决固化。ECs (1×10⁴细胞/)被播种到凝固矩阵和孵化常规细胞培养条件(5%的二氧化碳,37°C)。24小时后种子期后,2μg / ml钙黄绿素(费舍尔科学、汉普顿,NH)直接添加到文化,孕育了20分钟前成像在倒置荧光显微镜下观察。管被定义为一个管结构表现出长度4倍的宽度(30.]。管每个字段的数量确定。5个随机微观领域进行评估。五个字段表示一组的平均数量。

2.13。免疫印迹分析

24小时的治疗后,蛋白质提取不同群体ECs的细胞裂解缓冲(热费希尔科学、沃尔瑟姆,MA)补充完整的迷你蛋白酶抑制剂平板(罗氏、巴塞尔、瑞士)。然后,蛋白质溶解产物通过sds - page凝胶电泳和转移到PVDF膜。膜被封锁的5%脱脂牛奶1小时在室温下和孵化主要抗体ephrin A3 (1: 500;Abcam、剑桥、马),Nox2 (1: 1000;Abcam、剑桥、马),VEGFR2 (1: 1000;Abcam、剑桥、马),p-VEGFR2 (p-Flk1;1:1000;Abcam、剑桥、MA)或β-actin (1: 4000;σ,圣路易斯,密苏里州)一夜之间在4°C。第二天,膜清洗和孵化horseradish-peroxidase-conjugated anti-rabbit或anti-mouse免疫球蛋白g (1: 40000; Jackson Immuno Research Lab, West Grove, PA) for 1 hr at room temperature. Blots were developed with enhanced chemiluminescence developing solutions, and images were quantified under ImageJ software. The experiment was repeated four times.

2.14。统计分析

所有的实验都重复了四次。数据表示为±SEM。多重比较分析了由一个——或者双向方差分析LSD事后考验紧随其后。采用SPSS 17.0统计软件分析数据。对所有测量,被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。转染mir - 210模拟和抑制剂改变mir - 210的水平在npc和NPC-EXs

从NTA获得分析结果(表1),调制mir - 210并没有改变的大小和浓度练习从npc(与NPC-EXs发布^反对或NPC-EXs^sc,)。如图1(一)转染,mir - 210模拟显著增加npc mir - 210水平。正如所料,mir - 210水平在NPC-EXs更高^{mir - 210}比NPC-EXs^反对和NPC-EXs^sc。相反,mir - 210抑制剂显著降低的水平在npc mir - 210及其释放的练习。

3.2。NPC-EXs^{mir - 210}显著调节mir - 210的水平和表达下调Ephrin ECs A3水平

如数据所示1 (b)和1 (c)的细胞质,PKH26-labeled NPC-EXs观察ECs coculture 24小时后,指示练习被ECs实验。没有显著差异,不同群体之间的荧光强度。

为了评估与NPC-EXs coculture是否可以改变ECs mir - 210的水平,我们进行了定量rt - pcr确定后,ECs mir - 210的水平不同的治疗方法。如图2(一个)和二世表达下调的mir - 210水平ECs(与控制,)。治疗组,coculture NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc独自显著调节ECs(与车辆,mir - 210水平)。NPC-EXs^{反- mir - 210}没有明显改变的mir - 210水平Ang II-injured ECs(与车辆,),而NPC-EXs^{mir - 210}显著提高了ECs的mir - 210水平(与NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc或NPC-EXs^{反- mir - 210},)。这些数据表明,NPC-EXs可以交付mir - 210体外ECs。我们也决定ephrin A3的蛋白质含量,mir - 210的目标基因,ECs coculture之后。我们的数据(图2 (b))表明,ephrin A3级调节和II-injured ECs(与控制,),它被NPC-EXs表达下调^反对或NPC-EXs^sccoculture(与车辆,)。NPC-EXs^{反- mir - 210}没有明显影响,而NPC-EXs^{mir - 210}调节的ephrin A3 Ang II-injured ECs。这些结果反映NPC-EXs NPC-EXs^{mir - 210}可以转让mir - 210 ECs调节目标基因的表达,ECs ephrin A3。

3.3。NPC-EXs^{反- mir - 210}少,而NPC-EXs^{mir - 210}更有效的降低和II-Induced凋亡,ROS生产过剩,和Nox2 Upregulation ECs吗

核实和II-induced EC损伤的模型,我们进行了流式细胞仪和她染色评估凋亡率和活性氧产量,分别。我们的结果(图3)表明,Angⅱ显著增加的百分比ECs凋亡早期阶段和ROS水平生产(与控制,)。

确定的影响NPC-EXs对Ang ECs II-induced氧化应激损伤,我们用各种NPC-EXs cocultured盎II-injured ECs。我们的数据表明,与NPC-EXs coculture^反对或NPC-EXs^sc就可以减少Ang II-induced细胞凋亡和ROS生产过剩(与车辆,)。NPC-EXs^{反- mir - 210}Angⅱ可以减少这些不利影响,但还不到NPC-EXs吗^反对和NPC-EXs^sc(与NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc,)。NPC-EXs^{mir - 210}最影响减少Ang II-induced细胞凋亡和ROS ECs NPC-EXs的四种类型之一的生产。

此外,我们分析的表达在ECs Nox2 cocultured NPC-EXs不同。我们的免疫印迹结果(图4)表明,Angⅱ调节Nox2表达ECs(与控制,)。与NPC-EXs Coculture^反对或NPC-EXs^sc独自显著下调Nox2表达式(与车辆,)。NPC-EXs^{反- mir - 210}可以表达下调Nox2表达式,但效果不如NPC-EXs多少^反对和NPC-EXs^sc(与NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc,)。同样,NPC-EXs^{mir - 210}最影响减少Ang II-induced Nox2 ECs的表达式。

总的来说,这些数据表明,mir - 210保护作用的发挥作用NPC-EXs对Ang ECs II-induced氧化应激,外生mir - 210可以提高抗氧化剂和antiapoptosis NPC-EXs引发的影响。

3.4。NPC-EXs^{反- mir - 210}少,而NPC-EXs^{mir - 210}更有效的在增加VEGF分泌和改善ECs的管形成能力吗

为了评估NPC-EXs是否可以改善内皮血管生成函数被盎二世,我们分析了培养基和VEGF水平管形成ECs的能力。我们的数据表明,培养基中VEGF的水平减少ECs受伤Angⅱ(与控制,)。治疗组,coculture NPC-EXs^反对和NPC-EXs^scVEGF水平增加(与车辆,),而NPC-EXs^{反- mir - 210}不如NPC-EXs效应^反对和NPC-EXs^sc(与NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc,)。同样,NPC-EXs^{mir - 210}最影响移植VEGF的分泌ECs NPC-EXs的四种类型(图5(一个))。

同样,ECs的管形成能力是受到盎II(与控制,)。与NPC-EXs Coculture^反对或NPC-EXs^sc仅管形成能力的显著提升ECs受到盎II(与车辆,)。NPC-EXs^{反- mir - 210}显示效果比NPC-EXs少^反对或NPC-EXs^sc所做的。有可能的是,NPC-EXs^{mir - 210}最影响促进管形成(图5 (b))。总的来说,这些结果表明,mir - 210参与NPC-EXs引发的效果在改善和II-injured ECs的血管生成功能。

3.5。NPC-EXs^{反- mir - 210}少,而NPC-EXs^{mir - 210}更有效的在移植p-VEGFR2 / VEGFR2 ECs的表达吗

如图6,p-VEGFR2 / VEGFR2 ECs的比例减少了Angⅱ(与控制,)。治疗组,coculture NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc增加了磷酸化VEGFR2(与控制或车辆,)。NPC-EXs^{反- mir - 210}还提高了表达比p-VEGFR2 / VEGFR2,但是效果还不到NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc(与NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc,)。同样,NPC-EXs^{mir - 210}对移植的影响最强烈的比率p-VEGFR2 / VEGFR2 ECs受到Angⅱ损伤与NPC-EXs^反对,NPC-EXs^sc,或者NPC-EXs^{反- mir - 210},)。

4所示。讨论

在目前的研究中,我们已经证明NPC-EXs对盎II-induced氧化应激保护作用,细胞死亡,ECs和血管生成障碍,至少部分是通过Nox2 / ROS和VEGF / VEGFR2信号通路调节mir - 210。

氧化应激是内皮功能障碍的主要原因与各种血管疾病(31日]。Angⅱ已经有据可查的触发ROS生产过剩,降低ECs的生产/一氧化氮的生物利用度,从而导致内皮功能障碍(32,33]。在这项研究中,我们使用和二世建造一个EC氧化应激模型。如同意先前的报道(27,34],Angⅱ导致细胞凋亡的增加,生产过剩的活性氧,和损伤的血管生成函数(管形成能力和VEGF分泌),连同upregulation Nox2水平的差别,对这些p-VEGFR2 / VEGFR2 ECs的比率。

我们之前证明npc可以减少细胞凋亡和活性氧过剩在缺氧/ reoxygenation-injured ECs (9]。支持我们的研究最近的一份报告显示,神经嵴干细胞促进神经元的生存在正常和氧化应激条件下突变体神经元细胞系(7]。然而,这种现象的潜在机制需要进一步调查。目前,练习正在成为信息的传播者。越来越多的证据表明干细胞练习港父母细胞的好处,可以改变受体细胞的功能13,16,17]。例如,间充质干细胞细胞外囊泡可以提高细胞生存在肾损伤17)和促进功能恢复和卒中后神经可塑性在老鼠13]。我们已经表明,内皮祖细胞衍生囊泡可以保护ECs对缺氧/复氧(16]。在这项研究中,我们调查了NPC-EXs能否抢救受伤ECs后使用Angⅱ直接氧化应激损伤模型。为了测试我们的假设,我们cocultured NPC-EXs^反对与Ang II-injured ECs,发现NPC-EXs^反对可以通过ECs实验,可以减弱Ang II-induced凋亡,ROS生产过剩,Nox2 upregulation。此外,管形成能力和VEGF分泌能力受到盎二世也被NPC-EXs救出^反对。所有的这些发现表明NPC-EXs可以保护ECs Angⅱ,随后与Nox2表达式的抑制和抑制ROS生产过剩。

有趣的是,我们还发现,mir - 210水平的提高与NPC-EXs ECs coincubation之后。这提高了假设NPC-EXs的保护作用和II-induced ECs可能与mir - 210。先前的研究已经表明,mir - 210是广泛表达于多种细胞和显示的功能,如抗氧化应激(15,25,35,36)和细胞凋亡防御(20.- - - - - -22]。封锁mir - 210的成肌细胞极大地提高成肌细胞细胞对氧化应激和线粒体功能障碍(25]。mir - 210的超表达增强氧化应激的间充质干细胞的生存环境(35),减少ROS生产过剩以及心肌细胞死亡反应hypoxia-reoxygenation [36]。最近,王等人报道,练习源自诱导多能干细胞可以交付mir - 210对H心肌细胞,保护他们₂O₂全身的氧化应激(15]。为了调查的潜在机制,我们测试我们的假设,mir - 210调节的有利影响表现出NPC-EXs盎II-injured ECs。首先,我们在npc或下调mir - 210,发现mir - 210水平平行提高或降低相应的练习,NPC-EXs^{mir - 210},NPC-EXs^{反- mir - 210}。这表明,npc由打包成NPC-EXs mir - 210。接下来,我们cocultured NPC-EXs^{mir - 210},NPC-EXs^{反- mir - 210},他们的控制(NPC-EXs^sc),Ang II-injured ECs。我们的数据表明,NPC-EXs^sc和NPC-EXs^{mir - 210}增加了ECs mir - 210水平。与此同时,我们发现的蛋白质水平ephrin A3目标基因mir - 210 (19),被NPC-EXs显著下调^{mir - 210}在Ang II-injured ECs。这些结果反映出NPC-EXs可以交付mir - 210 ECs。此外,我们发现NPC-EXs^{mir - 210}有最强的影响减少Ang II-induced细胞凋亡和ROS生产,表明mir - 210可以提高保护NPC-EXs对ECs的影响。最突出的血管来源的活性氧(37),Nox2水平也被评估。我们找到了ECs Nox2水平被NPC-EXs明显减少^{mir - 210}的抗氧化作用,这表明NPC-EXs可能与Nox2 / ROS信号相关。相比之下,NPC-EXs^{反- mir - 210}部分减少了NPC-EXs的保护作用,这进一步证实了mir - 210的重要作用NPC-EXs保护ECs的Ang II-induced受伤。这些数据还表明,蛋白质和细胞因子等其他货物由NPC-EXs也可能参与保护事件。

正如我们所知,VEGF是[proangiogenic因素38)可调制通过ephrin A3 (39]。在目前的研究中,我们的数据表明NPC-EXs^{mir - 210}可以减少ephrin A3级而增加VEGF水平ECs的培养基,表明ephrin A3连接mir - 210和VEGF在ECs。结果显示VEGF水平的增加与NPC-EXs是连贯的^{mir - 210}提高管形成ECs受到盎II的能力。VEGF VEGFR2负责大部分下游血管生成的影响(40]。绑定的VEGF VEGFR2可以激活下游生存和迁移涉及pi3激酶/ Akt通路和粘着斑激酶,分别为(41]。为了确定VEGF水平的增加可以激活VEGFR2信号,我们使用西方墨迹评估VEGFR2及其信号蛋白磷酸化的变化。我们发现的总表达VEGFR2 ECs NPC-EX治疗后没有改变,尽管p-VEGFR2的表达显著增加了NPC-EXs^{mir - 210},表明VEGF / VEGFR2信号的激活。与此同时,我们的数据表明NPC-EXs^{反- mir - 210}同时调节磷酸化VEGFR2,尽管在较少的程度上比NPC-EXs^反对或NPC-EXs^sc了。这种效应可能导致其他货物,如蛋白质和细胞因子由NPC-EXs^{反- mir - 210}。总的来说,这些数据反映出,mir - 210可以调节第二NPC-EXs对ECs受到的影响和伤害通过激活VEGF / VEGFR2信号。

5。结论

我们的结果表明,mir - 210可以调节的影响NPC-EXs保护ECs从Ang II-induced氧化应激,主要通过Nox2 / ROS和VEGF / VEGFR2信号。

的利益冲突

没有利益冲突。

作者的贡献

华刘、王Jinju和Yusen陈了同样工作。

确认

这项工作是由美国心脏协会(16 sdg26420078)、湖北省自然科学基金(2015 cfa084),优秀青年科技创新团队在湖北省的学院和大学,中国(T201523),和支持的科研项目武汉体育大学(2014 qz07 2016 xh24)。