文摘
MAFG (v-Maf禽流感肌肉筋膜纤维肉瘤癌基因同族体G)是一种bZIP-type转录监管机构,属于小加(sMAFs)蛋白家族。通过与其他bZIP转录因子相互作用,sMAFs可以形成人类,形成管理专制或激活转录功能。Nrf2 heterodimeric伙伴,MAFG积极影响依赖抗氧化/异型生物质途径,至少在一个正确的条件MAFG: Nrf2平衡。小分子核糖核酸(大鹏)参与不同监管网络参与作为基因表达的微调监管机构。然而,细胞之间的连接监测压力由MAFG: Nrf2和米尔法规不是很好理解。在这里,我们探讨了mir - 128的影响应激反应相关基因的表达。生物信息学预测加上功能分析发现mir - 128的3′UTR MAFG结合位点。异位表达mir - 128与减少内源性MAFG-dependent基因的表达和负面影响的基于Nrf2活性分子表型。事实上,mir - 128损害redox-dependent通路诱导氧化应激反应。此外,在缺氧条件下,MAFG感应与mir - 128的水平。 This lead to increased mRNA levels of HMOX-1 and x-CT for blunting stress. Overall, these findings identify MAFG as novel direct target of miR-128.
1。介绍
氧化和异型生物质压力、细胞激活大量的防御系统相关酶和酶的活动。这些redox-related反应背后的事件是通过基因表达模式的严格监管涉及多层监管机制(1,2]。两个转录因子显示高度参与大量的抗氧化和解毒基因的调控在转录水平Nrf2[核转录因子(erythroid-derived 2)——2] [3- - - - - -5)和MAFG (v-Maf禽流感肌肉筋膜纤维肉瘤癌基因同族体G) (6]。异质二聚体的形式,特别是复杂Nrf2: MAFG结合并激活基因转录的抗氧化/异型生物质窝藏抗氧化反应(是)/亲电试剂反应元素(核心是:TGACNNNGC),位于他们的转录调控序列7,8]。
加的蛋白质家族,形容第一次原型v-Maf病毒致癌基因,转录因子,这是众所周知的参与基因表达调控9]。加家族由7成员,分为“大”(c-Maf, MafA MafB,海军研究实验室)和“小”(MafG MafK,和玛夫)加亚科,根据它们的大小(6]。我们每个成员的家庭港口basic-leucine拉链(b-ZIP)参与DNA结合域和二聚体的形成,与自己或不同的b-ZIP转录因子,特别是Nrf2 [10,11]。除了b-ZIP域之外,还拥有一个大型乘加蛋白质酸性转录激活域(少量),相反,不在小加(sMafs)。出于这个原因,小加在基因转录的监管活动可以积极或消极的,这取决于他们的特定的伙伴和启动子上下文。一般来说,为sMafs缺乏泰德(即。,MafG:MafK) repress gene transcription by binding to the Maf recognition element (MARE: TGCTGACTCAGCA) [6,12]。与帽形成“n”领(CNC)蛋白质如NF-E2下岗通知(13)或NF-E2-related因素(Nrf1, Nrf2 Nrf3) (14,15)以及巴赫(BTB和数控同源性)因素(Bach1和Bach2) (16),为不同,可以作为转录激活物或阻遏蛋白(6]。其中,如前所述,Nrf2: sMaf形成促进转录和代表最相关的方式调节多种细胞内蛋白质含量以应对氧化/亲电应力[5]。基本没有压力的条件下,Nrf2 polyubiquitinated和针对性的26 s蛋白酶体Kelch-like ECH-associated蛋白1 (Keap1) -Cul3 E3连接酶复杂[17]。压力引起的离解Keap1通过修改特定的半胱氨酸残基18]。因此,Nrf2可以迁移到细胞核,与sMaf协会,尤其是MAFG窝藏目标基因的启动子序列结合,激活他们的转录8]。
sMafs也与HIF-1交互α积极调节缺氧反应(19]。另一方面,Bach1: sMaf HMOX-1的形成作为负调节基因及其基因数据支持作用[20.]。此外,方舟子和他的同事们最近表明,高MAFG水平由BRAF (V600)招募Bach1伙伴CHD8,染色质重塑因子,种能阻碍DNMT3B和DNA甲基转移酶,引发基因的表观遗传沉默经常hypermethylated在黑色素瘤和结肠直肠癌21]。
在过去的几十年里,小分子核糖核酸(大鹏)添加一个新层复杂的基因表达调控机制(22,23]。大鹏小内生非编码rna downmodulate蛋白表达在转录后的水平。通过与特定区域相互作用,通常3本地化未翻译区(utr)成绩单、大鹏调解镇压mRNA翻译或稳定24,25]。考虑到每个单一的米尔可以目标通常多个记录和米尔调节几个目标相同的路径,他们监督细胞信号和网络参与基本的生物过程,包括应激反应(26- - - - - -28]。
众多研究表明,mir - 128参与不同的细胞过程,如分化、细胞凋亡、衰老、代谢(29日- - - - - -32]。在这里,我们调查的作用压力/抗氧化网络受heterodimeric复杂Nrf2: MAFG。我们表明,mir - 128通过瞄准MAFG影响应激反应由所依赖的基因。
2。材料和方法
2.1。细胞培养和试剂
人类胚胎肾HEK293细胞和小鼠肌原性的C2C12细胞获得美国类型文化集合(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)。在杜尔贝科修改鹰的培养基培养细胞(DMEM)(热费希尔科学、意大利蒙扎,意大利)补充了胎牛血清(的边后卫)(英杰公司)对C2C12细胞HEK293为10%和20%。C2C12细胞诱导分化,培养基代替near-confluent文化(约90%),含2%马血清DMEM(热费希尔科学)。
缺氧(2%啊2)为4 h时诱导C2C12细胞融合85%。后洗了三次磷酸盐(PBS),文化被转移到37°C孵化器内缺氧室(93% N2,5%的公司2,2%的人啊2),取代培养基的盐水缓冲prebubbled五分钟用相同的气体混合,提供平均O2压力(14.7毫米汞柱)相当于室的环境空气。
治疗与diethylmaleate(民主党)(Sigma-Aldrich、米兰、意大利)进行2 h (HEK293)或4 h (C2C12)使用最后一个200的浓度μ在完全培养基。
2.2。质粒结构和转染
质粒表达mir - 128 (pcmv - mir - 128)是通过克隆人类ARPP21 intronic地区284个基点包括pre - mir - 128 - 2序列与100年英国石油公司上游和下游侧翼序列到pRcCMVneo向量。这个片段是准备从人类IMR90 DNA聚合酶链反应使用以下寡核苷酸:5-ACgTAAAAgCTTAAgAAggCTATTgACAATCCAg-3和5分别-CgACATATCTAgATTTggTCAgCAggAATgaCAC窝藏HindIII和XbaI限制性位点。的身份克隆地区建立了消化和测序证实了。成熟的表达mir - 128是由北部污点(评估补充材料网上https://doi.org/10.1155/2017/9308310)在HEK293细胞中,mir - 128水平衡量反向transcription-quantitative实时PCR (RT-qPCR)。
荧光素酶的结构是由克隆mir - 128的3′UTR区域网站/ s的候选基因pGL3-control向量,下游萤火虫荧光素酶基因(WI Promega,麦迪逊,美国)。3′UTR MAFG碎片被放大使用人类IMR90 DNA PCR引物对包含XbaI网站:5-ATCATTCTAGAGGATCCATGCAGGCATGCTGGCTCC-3和5-ATCATTCTAGATTCAAGCTACTATCAGACAATGT-3。3′UTR Nrf2获得全长cDNA (I.M.A.G.E.:4548874)通过使用以下引物Xba网站:5-ACGTACTCAGATTTAGGAGGATTTGACCT-3和5-ACGTACTCAGATAACAGTCATAATAATCCTTTATTA-3。克隆片段的方向建立了消化和测序证实了。pGL3构造与相反的方向作为消极的控制。所有的质粒轴承3′UTR碎片在HEK293细胞中转染试剂Lipofectamine 2000(热费希尔科学)24-well板(40.000细胞/),根据制造商的指示,cotransfected合成pre - mir - 128 (ID: PM1176)或pre-miR-negative控制1号(100海里)(热费希尔科学)以及pcmv - mir - 128或pCMVneo(比1:5)。转染细胞的合成pre - mir - 128或pre-miR负控制进行如前所述[33]。
的质粒表达FLAG-tagged Nrf2和原生质GSTA1-LUC x-CT-LUC, NQO1-LUC轴承相应的基因的启动子驱动的表达荧光素酶报告基因已经被前面描述的(34,35]。
2.3。荧光素酶报告实验
的pGL3-3′UTR构造(100 ng) cotransfected Renilla的荧光素酶报告质粒(20 ng)作为内部控制使用Lipofectamine 2000(热费希尔科学)在HEK293细胞中mir - 128或者消极的控制。荧光素酶活性测定转染后24小时使用双荧光素酶报告实验(Promega)根据制造商的指示和执行20/20n光度计(特纳生物系统,桑尼维尔,美国)。相对荧光素酶活性被正常化计算Renilla发光的萤火虫发光,然后计算相对于控制。细胞C2C12细胞镀24-well板(30.000 /)是cotransfected GSTA1-LUC, x-CT-LUC, NQO1-LUC构造(500 ng)和FLAG-Nrf2或空向量(60 ng)和同时mir - 128表达质粒或空向量(500 ng)使用Lipofectamine®第试剂(热费希尔科学)根据制造商的指示。所有的转染还包含一个Renilla荧光素酶为内部构造(40 ng)规范化。转染后细胞然后收获36小时,和荧光素酶活动决心如上所述。
2.4。西方墨点法
从转染细胞总蛋白提取/细胞治疗与一个缓冲区包含0.02玫瑰(pH值7.9),0.4 M氯化钠,NP-40 0.1%, 10%v/v氟化钠甘油,1毫米,1毫米Na3一种鸡尾酒和蛋白酶抑制剂(Sigma-Aldrich)。细胞质和核蛋白质分离如前所述34)和胞质/核分数是评估使用UCHL3抗体(36]。细胞蛋白提取加载在sds - page,其次是印迹PVDF膜。在脱脂牛奶阻塞后的解决方案,探讨了膜与特定主要抗体(下图),然后孵化与辣根peroxidase-conjugated二级抗体1 h。蛋白质乐队使用ECL化学发光系统可视化(Amersham,白金汉郡,英国)。
小鼠内收肌的肌肉均质使用程序Protein_1 gentleMACS组织分离器(Miltenyi研究)(37]。短暂、组织溶解产物在缓冲区包含50 mM Tris-HCl (pH值7.4),150毫米氯化钠,NP-40 1%, 1毫米EDTA, 0.25%钠脱氧胆酸盐、氟化钠10毫米,10μ米纳3一、1毫米PMSF和蛋白酶抑制剂鸡尾酒(10 g /毫克抑肽酶,10 g / ml抑肽素,和10 g / ml亮抑酶肽)。溶菌产物离心机在14000 rpm 15分钟,和蛋白质浓度测定用Bio-Rad化验设备(Bio-Rad)和免疫印迹进行描述(38]。
从GeneTex MAFG抗体(GTX114541);HIF-1α抗体是罗福斯生物制剂(nb100 - 105)。国旗M2抗体来自Sigma-Aldrich。Nrf2抗体(sc - 13032)数量,BMI-1 (sc - 390443), HMOX-1 (sc - 136960),微管蛋白(sc - 8035), UCHL3 (sc - 100340),和vinculin (sc - 7649)来自圣克鲁斯生物技术有限公司,圣克鲁斯,加州,美国。
2.5。反向Transcription-Quantitative实时PCR (RT-qPCR)
总RNA提取使用试剂盒试剂(热费希尔科学),和互补脱氧核糖核酸合成µ使用随机引物和g的RNA iScript互补脱氧核糖核酸合成装备(Bio-Rad实验室、大力神、钙、美国)。信使rna水平量化使用智商SYBR绿色supermix (Bio-Rad实验室)CFX96实时系统仪器(Bio-Rad)。特定的引物位于不同的相同的基因的外显子是为了检测相对mRNA水平。的管家β2微球蛋白或c-ABL基因被用于内部规范化。所有PCR反应进行了一式三份,PCR产品也可视化溴化乙锭染色后琼脂糖凝胶。补充报告的寡核苷酸序列表。相对折叠变体使用2计算−ΔΔCt方法的公式:之间的区别是,ΔCt感兴趣的基因的扩增荧光阈值和内部参考基因/ s用于规范化(39]。
检测水平的成熟miR - 128,总RNA与试剂盒制备试剂(热费希尔科学)和米尔数量进行评估通过TaqMan microrna的化验设备(热费希尔科学)。规范化的RNA水平,大量的小核仁的RNA RNU6(热费希尔科学)测量39]。
2.6。动物研究
所有实验中动物是符合指南发表的实验动物保健和使用由美国国家卫生研究院(NIH出版八版,更新2011),动物福利法规批准的那不勒斯大学的费德里科•II,意大利。野生型雄性老鼠C57BL / 6(8岁9周)被包括在研究和维护在相同条件下的温度(21±1°C)、湿度(60±5%),光/暗周期和免费获取正常老鼠食物。
2.7。周边缺血过程
小鼠麻醉的腹腔内注射1毫升/公斤(50毫克/公斤)的混合物zolazepam tiletamine 50%和50%(50毫克/毫升tiletamine和50毫克/毫升di zolazepam Zoletil 100) +甲苯噻嗪5毫克/公斤(Sigma-Aldrich)。麻醉的充分性是证实了没有反射反应到脚紧缩。后肢缺血诱导如前所述(π, )[40]。简而言之,左股动脉的近端和远端部分结扎和arteriectomy是这两个网站之间进行。老鼠放在加热垫(37°C)在麻醉下,及其由激光多普勒血流测量灌注成像(美国Periscan Perimed)缺血性和非缺血型四肢0和4个小时手术后,确认后形成血管损伤过程。SHAM-operated动物经历了同样的过程没有股动脉结扎(骗局, )。所有SHAM-operated控制和老鼠受到周边缺血(PI)幸存下来。
2.8。统计分析
统计分析,学生的t以及使用;数据被认为是重大的价值 。
3所示。结果
3.1。MAFG mir - 128的是一种新型的直接目标
先前Venkataraman等人的研究报告,mir - 128促进细胞内ROS增加(31日]。鉴于Nrf2信号的主要驱动力是转录程序诱导多种抗氧化基因的表达(3- - - - - -5),我们假设mir - 128会影响监管途径。因此,我们用计算机预测程序搜索假定的目标中mir - 128 Nrf2通路的组件。TargetScan、米兰达和RNAhybrid算法预测守恒的种子区域mir - 128 / s的3′utr Nrf2和MAFG以及用x - ct检测(补充表Nrf2-regulated基因)。因为Nrf2和MAFG是转录因子,参与依赖转录的激活(8),我们对这些基因进行进一步的分析。评估是否Nrf2和MAFG mir - 128的直接目标,整个3′UTR Nrf2和地区包括mir - 128种子MAFG序列(250个基点)被克隆到pGL3-vector下游的荧光素酶基因。此外,验证特异性mir - 128与3′utr,突变体记者构造(傻瓜)窝藏同一地区克隆在相反的方向准备。图1(一)表明合成的异位表达pre - mir - 128稍微降低了荧光素酶的活动构造窝藏3′UTR区域(wt) Nrf2在HEK293细胞中。在相同的条件下,mir - 128超表达但是显著( )减少了记者的活动构造轴承野生型3′UTR (wt) MAFG相比miR-SCR-transfected细胞(图1 (b))。相反,突变MAFG构造(傻瓜)没有回应记者mir - 128增加(图1 (b))。
(一)
(b)
(c)
建立更多的生理mir - 128 hyperexpression,我们还准备了一个构造(pcmv - mir - 128)驱动mir - 128超表达ARPP21基因组区域(见材料与方法)。我们证实,mir - 128的异位表达pcmv - mir - 128(约100折叠在24 h posttransfection补充图)在HEK293细胞中事实上的荧光素酶活性降低MAFG-3′UTR记者构造虽然没有影响Nrf2-3′UTR构造,非常相似的结果合成pre - mir - 128(数据没有显示)。
验证上述结果的表达内源性MAFG蛋白质,我们接下来进行免疫印迹分析提取物HEK293细胞转染24 h与合成pre - mir - 128或pcmv - mir - 128。图1 (c)表明内源蛋白MAFG水平显著降低mir - 128超表达的条件,而负面control-transfected细胞。BMI-1的差别在相同的情况下,对这些蛋白质的水平,一个已知mir - 128的目标,也发现(图1 (c))。
我们也观察到,mir - 128(补充图差别hyperexpression与MAFG对这些年代)在生理或病理条件下,如分化鼠标C2C12成肌细胞(41,42]或萎缩性刺激分化C2C12 [43]。综上所述,上述报道的研究结果表明,mir - 128压制MAFG蛋白的表达。
3.2。mir - 128影响基底MAFG-Regulated一些基因的表达
后观察MAFG负面mir - 128规定,我们旨在测试mir - 128 MAFG-dependent转录活动的影响。为此,我们研究了各种MAFG-regulated基因的mRNA水平(15,44),如AKR1D1 ALDH3、CCDC53 HMOX-1, Nrf2, PCBD2, UCHL1 mir - 128 hyperexpression(图2(一个))。结果表明,在HEK293细胞中,基底表达式AKR1D1, ALDH3, PCBD2基因减少mir - 128超表达的条件。这些结果进一步支持的角色mir - 128规定的一组MAFG-dependent基因。
(一)
(b)
(c)
(d)
MAFG是一个已知的基本亮氨酸拉链(bZIP)蛋白质被证明与其他转录因子相互作用,特别是与Nrf2激活许多基因的表达(7,15]。此外,MAFG可以提高核保留Nrf2 [45]。因此,我们下一个决定Nrf2水平是否受mir - 128超表达的影响。Nrf2存在细胞处于非常低的水平;因此稳定水平,我们接触野生型HEK293和转染HEK293细胞低浓度diethylmaleate(民主党),谷胱甘肽消耗剂(46),在收获前2 h。免疫印迹分析用于检测内生Nrf2蛋白质含量在暴露于民主党(图2 (b))。在HEK293细胞控制,Nrf2被发现在细胞溶质,也大大增加了弱增强核的民主党曝光。在相同条件下的治疗、细胞转染和mir - 128并没有导致减少积累/易位Nrf2相比,细胞转染空载体。这些结果也符合数据通过3′UTR荧光素酶化验表明,mir - 128是没有参与Nrf2转录后的监管。
mir - 128以来网站/ s的3′UTR MAFG守恒的哺乳动物(补充表1)和目标以来,microrna的特异性,我们还研究了mir - 128的效果的表达内源性鼠标MAFG使用鼠标肌原性的C2C12细胞线。结果表明,异位表达mir - 128的差别也促进对这些MAFG蛋白质在鼠标上下文(图2 (c))。在相同的条件下,正如所料,BMI-1蛋白质水平表达下调。同时,我们评估是否观察到的变化在HEK293 MAFG-dependent基因也存在于老鼠后C2C12 mir - 128超表达。如图2 (d),ALDH3 AKR1D1的基底mRNA水平和UCHL1基因在mir - 128 hyperexpression条件降低。这些结果支持的角色mir - 128的规定MAFG蛋白质含量和MAFG-dependent基因也在鼠标上下文中。
3.3。异位表达mir - 128影响一系列相关基因的表达
MAFG bZIP蛋白质与Nrf2促进其绑定到一致的监管区域内众多cytoprotective基因。是否通过mir - 128也影响差别MAFG对这些数组的基底转录基因通常由Nrf2: MAFG异质二聚体(8,11),我们检查了代表基因的mRNA水平如GCLC GSTA-1, NQO1、讨论,和SQSTM1 C2C12细胞overexpressing mir - 128。Nrf2和p21的mRNA水平WAF1被用作控制,因为它已经证明这些基因不依赖于MAFG监管(8]。如图3(一个)GCLC的mRNA水平,NQO1、SQSTM1明显( )在C2C12细胞中表达下调,而用x - ct检测和GSTA-1等Nrf2目标基因调节。这些发现表明,蛋白质减少MAFG mir - 128后过度影响在C2C12细胞基底一些相关基因的表达。上面的结果还表明,降低基底的表达后GCLC和NQO1 mir - 128超表达可以解释所观察到的ROS增加其他作者(31日]。
(一)
(b)
水平的提高Nrf2: MAFG异质二聚体的转录激活各种基因的启动子序列包含(8]。因此,我们分析了mir - 128的能力影响Nrf2活动是监管的区域选择的基因。为了这个目标,我们使用荧光素酶记者构造,即GSTA1-LUC, NQO1-LUC, x-CT-LUC [34,35),在条件Nrf2过度强烈诱导荧光素酶活性(34,35]。因此,上面的LUC构造cotransfected在C2C12细胞以及构建表达FLAG-Nrf2或空向量,在没有或mir - 128的存在。如图3 (b)荧光素酶活动由用x - ct检测和GSTA-1基因是高度监管的区域、诱导Nrf2异位表达后,与控制向量,这些影响是完全废除mir - 128的超表达。即使Nrf2-mediated激活NQO1-LUC并不突出,mir - 128大大削弱了这个感应(图3 (b))。异位的表达Nrf2被anti-FLAG抗体免疫印迹分析验证。
这些结果表明,mir - 128抵消相关启动子的Nrf2-mediated感应MAFG downmodulation。观察之间的差异反应区域(图3 (b))和内源性的mRNA水平GSTA-1用x - ct检测(图和3(一个))可能是由于基因的贡献额外的监管区域/转录因子在染色质环境中。
3.4。mir - 128的DEM-Mediated感应干扰所依赖的基因
上面描述的影响使我们调查是否表达的内源性MAFG mir - 128的减少可能会导致失调内生应力响应。我们选择的一组基因对氧化应激引起的民主党,一个著名的诱导物的活性氧积累,利用发表的基因列表响应鼠标上下文中这个代理(8]。C2C12细胞转染和mir - 128或控制向量36 h,然后暴露于民主党。RT-qPCR分析是用来确定少量的相关基因的转录水平,即GCLC, GSTA-1, HMOX-1,用x - ct检测。NQO1、如图4民主党的治疗,内生这些基因的mRNA水平强烈诱导与CMV-neo C2C12细胞转染。在相同的治疗条件,mir - 128超表达显著减少DEM-mediated归纳上述基因,相比control-transfected细胞。总之,mir - 128的表达下调MAFG对抗所依赖的基因的表达。的mRNA水平Nrf2成绩单,用作控制基因,未受影响8]。
3.5。mir - 128 Downmodulation调节MAFG增加缺氧条件在体外和在活的有机体内
鉴于MAFG调节缺氧反应与HIF-1交互α(19),我们检查了mir - 128 mafg轴参与C2C12细胞对缺氧的反应。首先,我们估计内生mir - 128水平后暴露于低氧(2%啊2)为4 h。RT-qPCR分析成熟mir - 128数量显示显著( ),mir - 128水平下降的缺氧在C2C12(图5(一个))。测试是否观察到mir - 128变化的影响,也MAFG蛋白水平,我们进行免疫印迹分析MAFG HMOX-1, HIF-1的共同目标α和Nrf2转录因子。HMOX-1的结果表明,蛋白质含量,正如预期的那样,是C2C12细胞的诱导治疗后4小时内的低啊2。重要的是,与此同时,我们观察到增加MAFG蛋白,它与一个增强HIF-1α表达式(图5 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
由于缺氧诱导活性氧的生产,我们还测量了所选规范基因的mRNA水平用x - ct检测。如HMOX-1和在这种情况下,这些基因的mRNA水平强烈诱导后暴露的C2C12细胞缺氧(图5 (c))。这些结果表明,可能差别mir - 128对这些重要的调整MAFG HIF-1必要水平α在缺氧条件下transactivation和依赖基因诱导在体外。
最后,我们分析了mir - 128的作用——mafg轴缺血过程中体内。我们周边缺血诱导(π)为4 h股动脉结扎在C57BL / 6 j小鼠( )。Sham-operated动物( )接受相同的手术没有结扎股动脉。分析了下肢血流ecolordoppler预处理和手术后4 h(图5 (d))。免疫印迹实验表明,MAFG蛋白质水平显著诱导下肢肌肉溶解产物(图5 (e))。我们也调查了是否调节MAFG具有负相关性,mir - 128水平。RT-qPCR分析成熟mir - 128水平明显降低,mir - 128水平(图5 (f))。
整体而言,这些结果表明,mir - 128 mafg轴对缺氧的反应的一个重要因素在体外和在活的有机体内。
4所示。讨论
大鹏调节基因的表达起着至关重要的作用。大鹏被认为是蛋白质的主要监管机构“微调”活动,因此他们可以平衡抗氧化反应。最近的研究的确表明,许多大鹏叫redoximiRs可以是直接或间接的效应器redox-related通路(47]。特别是,一些证据表明,一方面,Nrf2本身可以大鹏展翅的直接目标,另一方面,Nrf2调节器,如Keap1 Bach1,可以由大鹏展翅5,48- - - - - -51]。的转录因子Nrf2参与氧化应激的适应性反应增强许多基因编码抗氧化/解毒酶的转录,和Nrf2受损功能降低耐氧化/化学侮辱[5]。
这里,我们发现了一个新的函数mir - 128 redoximiR,直接参与抑制MAFG表达式。基于互补MAFG-dependent基因筛查以及依赖通过Nrf2基因功能:MAFG异质二聚体或Nrf2-regulated基因,我们表明,mir - 128的感应干扰一组选定的基因,即GCLC, GSTA-1, HMOX-1,用x - ct检测下NQO1、氧化应激。事实上,Nrf2 MAFG充当积极的合作伙伴及其downmodulation mir - 128因此影响Nrf2 /通路。
管制氧化还原信号和减少抗氧化防御代表病理生理过程的主要原因包括心血管和神经退行性疾病、白内障、糖尿病和癌症,其中大部分是年龄相关的。因此,药理/自然策略解决增加Nrf2活动可以有利于预防氧化应激相关疾病(52- - - - - -55]。
缺氧是产生活性氧,暗示HIF-1之间的串音α和Nrf2通路(56]。自从MAFG有关这两种信号,我们也分析了mir - 128参与缺氧反应。我们的研究结果表明,mir - 128 MAFG轴显著贡献在C2C12细胞对缺氧的反应和mir - 128的减少与MAFG感应,因此可能影响MAFG-related基因用x - ct检测。如HMOX-1和值得注意的是,观察到的响应在体外也观察到缺血过程中吗在活的有机体内。
几项研究证明的参与mir - 128在不同的细胞过程,如分化、细胞凋亡、衰老、代谢(29日- - - - - -32]。此外,发现mir - 128表达下调在缺氧条件下人类滋养层(57),最近的一项研究涉及一个保护性作用在活的有机体内mir - 128抑制心肌I / R损伤(58]。我们表明,mir - 128抗氧化反应的调制在体外在缺血性疾病在体外和体内。事实上,mir - 128的镇压与MAFG增加,因此可能影响MAFG-related基因用x - ct检测。如HMOX-1和我们的研究结果进一步表明,downmodulation mir - 128可能导致协调自适应缺氧重组,和其他很多涉及基因依赖MAFG,现在被认为是监管中心众多转录因子(8,15,19]。
缺血性心血管疾病发病率和死亡率的主要原因是在发达国家59]。尽管ROS生成的有害作用在缺血表现,一种有效的抗氧化剂治疗仍有待确定。许多研究的确表明,Nrf2预防心血管疾病虽然也还原条件生成活性氧(了60,61年])。在这种背景下,我们的工作凸显了小说的可能性来管理的活动Nrf2 mir - 128信号,单独或与其他药物相结合的策略,在将来的研究中可以考虑。
发现mir - 128等离子体及其水平改变在各种病理条件62年- - - - - -64年),但还需要进一步的研究来更好的阐明mir - 128水平的潜在作用随着新的预后和/或诊断标记在心血管缺血性疾病。
缩写
| ALDH1A1: | 醛脱氢酶1 a1 |
| 是: | Antioxidant-responsive元素 |
| AKR1D1: | Aldo-keto还原酶家族成员D1 |
| ALDH3A1: | 醛脱氢酶3家人A1 |
| CCDC53: | 卷曲螺旋域包含53 |
| HMOX-1 / HO-1: | 血红素oxygenase-1 |
| PCBD2: | Pterin-4 alpha-carbinolamine脱水酶2 |
| 巴赫: | BTB和数控同源性 |
| bZIP: | Basic-region亮氨酸拉链 |
| CHD8: | Chromo-ATPase /解旋酶dna结合蛋白质8 |
| 数控: | 帽' n '衣领 |
| DNMT3B: | DNA甲基转移酶3β |
| EpRE: | Electrophile-responsive元素 |
| GCLC: | Glutamate-cysteine连接酶催化 |
| 销售税: | 谷胱甘肽S-transferase |
| HIF-1α: | 缺氧诱导因子1α亚基 |
| Keap1: | Kelch-like ECH-associated蛋白1 |
| 米尔: | 微 |
| Nrf2 / NF-E2: | 核factor-erythroid 2 |
| NQO1: | NAD (P):醌氧化还原酶1 |
| 联盟: | NF-E2 p45-related因素 |
| 聚合酶链反应: | 聚合酶链反应 |
| PVDF: | 聚乙二烯二氟化物 |
| RT-qPCR: | 反向transcription-quantitative实时聚合酶链反应 |
| ROS: | 活性氧 |
| sMaf: | 小加(肌肉筋膜纤维肉瘤逆转录病毒转化基因) |
| UCHL1: | 泛素c端水解酶L1 |
| UTR: | 未翻译。 |
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
罗科Caggiano和法比奥均造成了同样的工作。
确认
这项研究得到了Ministero戴尔'Universita e德拉Ricerca Scientifica e Tecnologica (MiUR主要2009)。