文摘

世界咖啡消费增长的欣赏口味和它对健康有益。咖啡的残余生物量,起源于食品行业从咖啡豆中提取石油之后,咖啡豆残余滤饼,吸引了兴趣与抗氧化活性的化合物。这项研究调查了水提取物的化学成分的咖啡豆残余滤饼(AE),它们的抗氧化活性,以及局部施用的影响在皮肤伤口愈合,在动物模型中,包含AE的水凝胶,绿原酸(注册会计师),尿囊素(积极的控制),和羧乙烯聚合物(负控制)。治疗方法的性能是通过测量伤口面积的减少相比,以精良的结果()绿色咖啡AE(78.20%)对烤咖啡AE(53.71%),尿囊素(70.83%),和羧乙烯聚合物(23.56%)。海巡署水凝胶显著减少伤口面积大小的炎症阶段,这可能与众所周知的抗氧化和抗炎化合物的行为。咖啡的主题使用AE研究改善皮肤伤口愈合和指出了一个有趣的生物技术应用的咖啡豆残余滤饼。

1。介绍

生产活性氧化剂之间的不平衡和生物系统的能力以应对反应中间体导致氧化应激。形成的活性氧化剂在正常生理过程或在压力条件下能破坏生物系统1]。

咖啡(Coffea阿拉比卡l .) bean滤饼是一个残余生物量从咖啡豆采油过程中,自称是富含生物活性化合物对人类健康和化妆品。有相当大的强调植物的恢复来自食品行业为了目标其他行业(2),最终增加价值和减少环境破坏。从这个意义上说,大量的c·阿拉比卡豆子在巴西生产产生一定数量的生物不能接受的饮料市场,但有一个重要的潜在的其他产品如化妆品的发展。

咖啡一直视为一种功能性饮料作为人类饮食中抗氧化剂的重要来源,特别是由于大量的酚类化合物和咖啡因。阿拉比卡咖啡的化学成分包括酚类化合物及其衍生物(如绿原酸)、生物碱(特别咖啡因),二萜醇类(如咖啡醇kahweol),碳水化合物,脂类,挥发性和杂环化合物(3]。绿原酸(注册会计师)的酯反式肉桂酸(4)的大量绿色咖啡在焙烧过程中显著降低(5]。在过去的几十年中,多酚类化合物已经被提议作为一个食品和饮料中最有效的功能成分,具有抗衰老的特性,能够中和氧化损伤皮肤的影响,例如,(6]。研究c·阿拉比卡提取了一组重要的生物活性,例如,抗菌(7],抗病毒[8,抗炎9,10),抑制金属蛋白酶表达的活动(11,减少氧化损伤大分子(12]。除了酚类化合物,咖啡是被认为是一个丰富的生物碱、尤其是咖啡因。等次生代谢物提出了相关的生物活性,例如,刺激中枢神经系统,利尿,周围血管收缩(13]。咖啡因是咖啡豆的主要生物碱存在及其内容与饮料的质量,也导致了啤酒苦味[14]。

皮肤作为环境保护性的屏障,也在体内平衡维护中起着基础性作用[15]。皮肤完整性的丧失导致身体损伤可以导致严重的承诺如果没有修理。组织病变引起了细胞内的反应,协调组织的完整性和体内平衡的恢复。损伤的反应能力和组织修复是多细胞生物的基本属性。皮肤组织通过组织再生修复发生,与组织的恢复功能,或治疗,恢复组织内稳态(16]。

伤口愈合是一个复杂的生物过程在受伤后。这个过程可以理解为三个典型的阶段:炎症、扩散和重构。炎症阶段开始后立即组织的损伤和炎症持续3天左右。随后,细胞增殖,迁移不同的细胞类型,血管生成,和细胞外基质成分的生产,尤其是胶原蛋白。扩散阶段可能持续2到10天的迁移和分化的特点是各种细胞类型,是最丰富的成纤维细胞。装修阶段的第三和最后阶段修复。2到3周后开始伤害和持续大约一年或更多。myofibroblasts大部分的内皮细胞,巨噬细胞凋亡所摧毁,这些变化导致伤口收缩和疤痕形成16]。炎症和氧化应激在伤口处是密切相关的考虑到大量中性粒细胞和巨噬细胞产生活性氧和氮。活性氧和氮物种参与氧化还原调控的细胞功能和日益被视为一个主要上游组件的信号级联参与炎症反应和粘附分子的刺激和化学引诱物的生产(15]。氧自由基吸收能力试验测试的咖啡浆果优于常见的抗氧化剂如绿茶提取物、石榴提取物、维生素C和维生素e .聚合酶链反应微阵列分析人类培养成纤维细胞治疗与多个剂量的0.001%的咖啡浆果透露upregulation几个胶原蛋白和结缔组织生长因子基因表达的差别,对这些金属蛋白酶(17]。

众所周知,老化的影响导致时间延迟伤口愈合,但并不是一个实际的损伤的愈合的质量(18,19]。延迟伤口愈合的年龄与炎症反应有关,如延迟t细胞渗透到伤口区域与趋化因子改变生产和减少巨噬细胞吞噬能力(20.]。弱智reepithelialization、胶原合成和血管生成也被观察到具有年龄小鼠与年轻人相比(21]。

抗氧化化合物在皮肤的局部管理是获得突出在皮肤科医生,因为他们的抗炎和抗癌的活动(22]。在这种背景下,声称可以帮助伤口修复过程局部管理抗氧化分子可能控制氧化应激(23]。酚类化合物被显示是积极通过阻碍胶原蛋白对皮肤组织的破坏和胶原酶激活(24]。事实上,注册会计师可以加速皮肤伤口愈合和烧伤治疗由于其抗氧化,清除自由基,抗炎,辐射防护,antiulcerogenic和镇痛属性(10,25- - - - - -29日]。重要的是,修复皮肤组织中的多酚类的有效性是最初由其物理化学性质和能力克服表皮屏障达到适当的受体(6]。

在这个意义上,本研究的假设是基于一个假设,即生物提取兼容,也就是说,咖啡豆残余滤饼的AE,富含多酚类化合物,局部受损的皮肤组织管理将改善伤口愈合过程。因此,植物化学的概要文件和咖啡豆的AE(的抗氧化活性c·阿拉比卡l .)确定残余滤饼。在第二个方法中,在活的有机体内影响局部管理水凝胶含有AE和绿原酸在伤口愈合过程是调查使用皮肤切除伤口模型在瑞士白化病老鼠。

2。材料和方法

2.1。咖啡样品,化学品和细胞系

绿色(即样品。,nonroasted beans) and roasted coffee beans press cake residual were supplied by Cooxupé (Regional Cooperative of Coffee Growers Ltda, at Guaxupé, Minas Gerais State, southeastern Brazil). Green and roasted coffee bean press cake samples were obtained after mechanically pressing the beans for the extraction of the oil fraction. After extraction, the residual biomass was packed in polyethylene bags, with silica sachets, and stored at −20°C for further analysis. Analytical grade methanol, ethanol, hydrochloric acid, sodium chloride, and hydrogen peroxide were purchased from Vetec (Rio de Janeiro, Brazil). The Folin-Ciocalteu reagent, sodium dodecyl sulphate (SDS), dimethyl sulfoxide (DMSO), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), (±)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (Trolox), potassium phosphate buffer (TPK), Tween® 20, Bradford reagent, bovine serum albumin (BSA), methionine, riboflavin, nitrotetrazolium blue chloride (NBT), neutral red (NR), and the analytical reference standards (chlorogenic acid, gallic acid,p羟基酸、阿魏酸、咖啡酸、syringic酸,p -香豆酸、咖啡因、茶碱、可可碱、葫芦巴碱、尿囊素)从Sigma-Aldrich购买(密苏里州,美国)。羧乙烯聚合物940 NF聚合物,乙二胺四乙酸二钠(EDTA)和氨甲基丙醇(AMP)从制药公司获得萨·诺斯特拉(巴西坎皮纳斯)。小鼠成纤维细胞L929细胞株购买从里约热内卢细胞库(BCRJ),杜尔贝科的修改鹰的介质(DMEM),胎牛血清的边后卫,青霉素,链霉素获得Sigma-Aldrich(密苏里州,美国)。

2.2。水提取物的制备绿色和烤咖啡豆残余滤饼

AE提取微生物的研究是根据冷萃取法获得从巴西药典30.),与修改。样品(4 g,干重)被加入100毫升EtOH溶液70% (v / v)在室温下,紧随其后的是磁搅拌在1 h,免受光线,并保持18 h下制冷(2 - 8°C)。纤维素的提取被过滤恢复支持减少压力,其次是集中在一个旋转蒸发器(60°C, 82 rpm)。干提取物在10毫升resuspended distilled-deionized水、离心机(10分钟,4000 rpm,转子半径13.7厘米),和收集的上清液进行进一步分析。

2.3。制备治疗局部的应用在皮肤伤口愈合

羧乙烯聚合物水凝胶制备含有1% (w / v)羧乙烯聚合物940,0.1% (w / v)的EDTA, 0.5% (w / v)氨甲基丙醇,和水(60毫升)。羧乙烯聚合物水凝胶被用作车辆基地和治疗准备如下:AE羧乙烯聚合物基+ 10% (v / v)绿色咖啡,AE羧乙烯聚合物基+ 10% (v / v)烤咖啡、羧乙烯聚合物基础+ 3% (v / w)绿原酸,羧乙烯聚合物基+ 1% (v / w) allantoin-positive控制,和羧乙烯聚合物base-negative控制。水凝胶中绿原酸的浓度(3%,w / v)根据这种化合物的内容被选中的AE绿咖啡滤饼之前由高效液相色谱分析。

2.4。总酚含量测定

总酚含量的AE使用Folin-Ciocalteu试剂测定,根据Randhir et al。31日]。为此,1毫升AE在9毫升distilled-deionized水稀释。稀释样本(40µL)添加到3.16毫升distilled-deionized水和200年µL Folin-Ciocalteau试剂,漩涡,搅拌1分钟,之后,600年μL碳酸钠溶液(20%,w / v),添加了漩涡,孵化2 h。空白溶液制备如上所述,通过替换测试样本distilled-deionized水。吸光度测量在750年η使用紫外分光光度计(贝尔LGS 53岁的贝尔工程,蒙扎,意大利)和分析进行了一式三份。结果表示为均值(毫克当量没食子酸/ g生物质)±标准平均误差(sem),基于一个没食子酸(100 - 700年的校准曲线µg·毫升⁻¹,,)。

2.5。产物的分析酚酸和生物碱

反分析是改编自罗德里格斯和Bragagnolo32),建议同时测定咖啡因和绿原酸。AE整除(60µL)注入液相色谱仪(高效液相色谱法热科学最终3000 RS双系统)配备一个反相柱(热科学使用C18, 250毫米×4.6毫米,Ø0.5µ米粒子,35°C)和二极管阵列检测器操作在240海里,260 nm、280 nm和320 nm。生物碱和酚类化合物是量化在280 nm和320 nm,分别根据以前的记录。移动阶段由盐酸酸化Milli-Q水(pH值2.3洗脱液)和甲醇(洗脱液B),梯度的色谱条件如表所示1。

流速度1毫升/分钟和50分钟的运行时间。此外,AE在10毫升80%甲醇和可溶性稀释9:1 (v / v)之前注射。酚类化合物的量化是基于集成领域和校准曲线峰值的绿原酸(检测范围10 - 400µg·毫升⁻¹,= 0.99,)。同样,大量的生物碱测定的基础上,集成领域和校准曲线峰值的咖啡因(检测范围100 - 1000µg·毫升⁻¹,= 0.99,)。分析进行了一式三份。结果表示为(mg·g⁻¹)±标准差(sd)。

2.6。DPPH自由基清除活性测定

AE是首先冻干、加权和resuspended 95%甲醇(v / v)为最终浓度为10毫克/毫升AE干质量。抗氧化活性的绿色和烤咖啡AE决心通过测量他们的清除能力的2,2′-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)激进的如前所述和改编莫利纽克斯(33]。(±)6-hydroxy-2 5 7 8-tetramethylchroman-2-carboxylic酸(Trolox)是作为积极控制和甲醇- 1。28岁的数量µ(70 L DPPH methanolic解决方案µ米)与972年孵化µ(从1到30 L样本测试µg / mL)为20分钟,25°C (n= 3)。DPPH清除活动,表现为吸光度下降,为517 nm的紫外可见分光光度计(uv - 2000 Instruterm)。DPPH自由基清除活性(%)计算如下:

实验进行了一式三份和数据表示为平均值±标准偏差(sd)。

2.7。在体外细胞生存能力

AE在细胞生存的影响决定在体外根据建立的协议ICCVAM [34),与修改。该方法是基于评估细胞的生存能力在体外暴露在AE后,测量溶酶体中性红染料的吸收。为此,小鼠L929成纤维细胞在96孔板(镀1×10⁴细胞/)和孵化期间24小时(37°C,湿度95%,和5%的公司₂)。这段时间后,细胞用磷酸盐缓冲盐水洗净(PBS)和处理浓度增加咖啡AE(3、10、30、100、300、1000、3000年和10000年µg / mL),在24小时(37°C,湿度95%,和5%的公司₂)。蛋白质变性剂SDS,在同一浓度的咖啡AE,作为积极的控制。治疗时间在流逝,细胞被洗PBS和孵化的中性红染料(25µ3 h g / mL DMEM) (37°C,湿度95%,和5%的公司₂)。随后,细胞被洗PBS和中性红染色使脱色的解决方案是添加(1%乙酸:50%乙醇:49%的蒸馏水,v / v / v)。吸光度测量在540 nm使用标(SpectraMax范式多模微型板块美国读者,分子器件、桑尼维尔)。细胞生存能力表示为基于控制细胞的增长比例和浓度的测试样本显示,50%抑制细胞生长(IC50)表达在mg AE /毫升的结果。计算结果根据以下方程: 在哪里是细胞生存能力(%),是平均每个样品浓度的吸光度,是空白的平均吸光度,是控制的平均吸光度。

2.8。在活的有机体内皮肤伤口愈合化验

瑞士白化雄性老鼠(亩骶),40 - g, 9个月大(试验1),和2个月大(实验2),从中央Biotery圣卡塔琳娜州的联邦大学(弗洛,圣卡塔琳娜州州,巴西南部)是适应了实验室条件下测定前,有免费的食物和水。10%的动物麻醉使用腹腔内注射氯胺酮(75毫克/公斤)和2%甲苯噻嗪(10毫克/公斤)。切除伤口模型实现了根据弗兰克和奋斗》(35]。短暂,胸背表面的地区与碘化酒精trichotomized和清理。10毫米直径的皮肤伤口是在无菌条件下用剪刀援助。水凝胶(0.1 g /动物)是局部使用和日常。羧乙烯聚合物水凝胶(1%,w / v)作为消极的控制,如羧乙烯聚合物水凝胶含有尿囊素(1%,w / v)被选为积极的控制,因为公认的杀菌作用和促进细胞增殖和伤口愈合能力的化合物(36]。伤口收缩是评估和伤口面积测量的实验期间,也就是说,14天。实验协议是经伦理委员会批准使用的动物(圣卡塔琳娜州联邦大学的,PP0957)。

2.8.1发布。评估伤口愈合1:治疗包含绿色和烤咖啡豆AE的水凝胶

这个实验的目的是确定局部治疗的效果与AE绿色和滤饼烤咖啡豆的皮肤伤口愈合。本次调查采取了在活的有机体内试验和9个月大的老鼠,为了验证伤口愈合的潜力AE在动物新陈代谢推迟,由于先进的年龄。最初,24岁男性,40 - g瑞士白化小鼠,随机分为4组()根据治疗与水凝胶丰富(1)AE绿色咖啡,(2)AE烤咖啡,(3)尿囊素(积极的控制),和(4)羧乙烯聚合物凝胶(负控制)。动物被关在单独的笼子里14-day-long实验段。病变位于后面的动物每天观察和治疗手术后检查reepithelialization过程。伤口愈合和治疗的疗效进行评估,评估伤口面积的百分比减少实验时间。伤口面积使用数字卡尺测量的开始和结束时实验周期,计算损伤减少百分比。伤口被记录和表达为减少原来的伤口面积百分比根据方程: 在哪里伤口收缩比例(%)伤口面积“0”和天伤口面积“天。”

2.8.2。伤口愈合2:评价治疗水凝胶含有绿原酸和绿色咖啡豆AE

在第二个实验方法中,局部的有效性管理水凝胶含有绿原酸或AE的绿色咖啡决定皮肤伤口愈合,使用瑞士白化小鼠2个月大。共有96名男性,40 - g瑞士白化小鼠随机分为3组();考虑不同采样时间(3、7和15天)。随后,每次组分为4组()根据与水凝胶治疗如下:(1)AE绿色咖啡,排气口(2),(3)尿囊素(积极的控制),和(4)羧乙烯聚合物凝胶(负控制)。动物被关在单独的笼子里15-day-long实验段。每天病变观察和治疗手术后检查reepithelialization过程。皮肤伤口被拍到使用数码相机放置在一个标准的距离病灶,手术后,在3日,7日,15天。伤口愈合过程是评估通过评估伤口的大小减少每个采样时间。伤口面积测量通过使用软件扫描照片ImageJ®。结果记录和表达为测量伤口面积。数据表现为伤口面积(cm的手段²)±标准错误(sem)。

2.9。测定氧化应激标记

皮肤伤口的第二个实验样本收集方法生化分析协议后Bagdas et al。37和佩雷拉38]。皮肤伤口立即样本收集和动物的牺牲。样本在0.9% (w / v)生理盐水洗,立即冻结在−80°C到使用。组织样本被切成块和均质(ULTRA-TURRAX均质机)2毫升磷酸钾缓冲溶液(20毫米,pH值7.4)和渐变®20(1%)和生理盐水(150毫米)。样本10年代和涡离心机(4000 rpm, 15分钟,4°C)和上层的恢复进行进一步分析。根据布拉德福德蛋白质含量测定方法(39]。过氧化氢酶(CAT)活性测定spectrophotometrically (λ= 240海里),下面描述的方法,佩雷拉(38]。测试,25岁µ上层清液添加到240 LµL(磷酸钾缓冲(50毫米,pH值7.0),补充了双氧水(10毫米)。过氧化氢的分解速率测量顺序在间隔20年代,直到10分钟。结果表示为更易·分钟⁻¹/毫克的蛋白质。超氧化物歧化酶(SOD)活性评估方法的基础上Giannopolitis和里斯40]。确定认为酶抑制氯化nitrotetrazolium蓝色的光致还原作用的能力(电视台)。活动确定添加25μL样品240μL在96孔酶标解决方案工作。解决方案准备工作13毫米蛋氨酸,75μM电视台、100 nM EDTA和2毫米核黄素在磷酸钾缓冲(50毫米,pH值7.8)。反应是由照明的微型板块室组成的日光灯(15 W),在室温下。结束5分钟孵化后,催化被迫中断的光。蓝色化合物的内容(甲瓒)由电视台的光致还原作用是测量spectrophotometrically 560海里。相同的反应是准备从光和保护。一个单位的草皮被定义为50%所需的酶活性抑制电视台光致还原作用。计算酶的特定活动,它被认为是酶抑制的百分比,样品体积,样品蛋白浓度(μg蛋白)。结果表示为U /μg蛋白。酶实验意识到一式三份和数据表示为±标准差(sd)。

2.10。统计分析

数据收集和统计分析后总结使用单向方差分析和图基的测试。时被认为具有统计学意义的结果< 0.05。的值被表示为平均数±标准差或±sem,字幕显示在表。

3所示。结果和讨论

在这项研究中,AE的残余生物量中绿色和烤咖啡石油工业是化学特征和进一步调查来确定水凝胶的有效性包含AE和绿原酸在皮肤组织修复过程。

3.1。总酚含量

表2提供绿色的总酚含量AE和烤咖啡滤饼显示明显的和统计上的不同()大量的次生代谢物的样本。最高浓度的酚类化合物被发现在绿色咖啡AE。因此,我们可以推测,提取无极的分数的滤饼(即绿色咖啡豆。,石油馏分)允许获得高产的酚类化合物的AE残余生物量。众所周知,咖啡豆中的酚含量可能不同很大程度上根据物种,品种,成熟程度,采后加工、烘焙。沿着咖啡豆收获和加工后,一些酚类化合物可以使异构化,水解或降解为低分子量化合物。咖啡烘焙过程的高温降解酚类化合物(的一部分41]。实际上,低量(的酚类化合物被发现在烤咖啡豆的AE样本相对nonroasted,证明内容上的烘焙过程的负面影响生物活性的化合物。

3.2。定量的酚酸和生物碱

使用液相色谱梯度洗脱系统包含酸化水和甲醇作为流动相通常是在酚类化合物的分析42]。然而,适应在这个试验的方法,同时测定酚醛塑料和生物碱类,允许两组识别分析物的化合物。结果显示绿原酸(11.11 mg·g⁻¹)和咖啡因(4.5 mg·g⁻¹AE)是专业的化合物的绿色咖啡样品(表3)。这一发现与先前的结果是一致的咖啡豆所提到的几位作者41,43- - - - - -45]。再次,考虑到酚酸及其衍生物可以退化在高温下,可以推测,这些酸的浓度最低的烤咖啡滤饼样品结果的热处理,在焙烧过程中生物质。生物碱的内容显示重要的大量的咖啡因和葫芦巴碱在这两个样品,但是茶碱浓度较低。烤咖啡样品显示优越的咖啡因含量相对其他研究样本。可可碱没有检测到。此外,研究样本似乎相当矛盾的生物碱含量,表明不同电位有关他们的生物效应。大量的咖啡因的咖啡提取物负责几位生物活性46]。

3.3。抗氧化潜能:DPPH实验

活性氧(ROS),活性氮物种(RNS)和活性硫物种(RSS)可能与脂质反应,蛋白质和DNA导致炎症、癌症、和缺血。DPPH是一种稳定的自由基的备用电子的离域分子作为一个整体,所以分子不dimerise,将大部分的自由基。DPPH自由基,显示吸收在517海里,被用作一种方便的工具彻底清除试验,这是独立于任何酶活性(33]。DPPH自由基清除活性(%)AE的研究中,计算孵化20分钟后,显示最大活动达到30μg AE /毫升,类似于积极的控制(Trolox)活动(表4)。酚类化合物和生物碱样品的定量揭示存在的次生代谢产物与抗氧化能力有关,例如,咖啡因和绿原酸。它早已知道焙烧过程降解酚类化合物;然而生物碱耐更稳定,咖啡因被证明存在表达抗氧化活性(47]。这里需要注意的是,该方法用于测量总酚类化合物,也就是说,Folin-Ciocalteau,基于一个氧化还原反应可以被认为是一个评估的抗氧化活性48]。氧化平衡生理系统是由内生和外生机制的过剩自由基与许多疾病(49,50]。控制过度的氧化分子包括摄入或局部应用外源性抗氧化剂分子甚至可以刺激内源性抗氧化剂(12]。因此,咖啡豆提取物的抗氧化活性与多种天然成分的存在和化合物在处理过程中形成的,例如,咖啡因(51)、绿原和hydroxycinnamic酸(52- - - - - -55,美拉德反应等产品类黑色素(54,55]。

3.4。细胞生存能力概要

细胞生存能力下降只是在细胞治疗烤咖啡AE检测3 mg·毫升⁻¹,IC50值4.88 mg·毫升⁻¹和一个LD50 = 2482.00 mg·kg⁻¹作为显示在图1。虽然细胞生存能力下降完全10 mg·毫升⁻¹,LD50值特征AE是无毒的,因为细胞毒性是LD50值低于2000毫克公斤⁻¹。此外,绿色咖啡AE导致细胞生存能力没有降低浓度等于或低于10毫克/毫升。传统上,在体外测定细胞生存能力概要和化合物的毒性作用是第一个生物试验执行针对人类健康的进一步应用,例如。如果没有证明分子的毒性,它可以继续下一步,在活的有机体内化验。实验,这是由计数活细胞染色后用一个至关重要的染料。中性红试验系统是一种测量活细胞的吸收至关重要的中性红染色(56在这项研究中所采用。如前所述Triglia et al。(1991),中性红染料通过完整的细胞膜,成为集中在可行的细胞的溶酶体。测试代理,破坏细胞表面和溶酶体膜抑制红色染料的公司和被细胞量,因此,可行的数量成正比的。中性红试验是由Borenfreund和Puerner57),利用广泛研究一系列化合物的毒性作用在不同的细胞类型生长在单层文化,L929细胞用于这项研究。虽然细胞生存能力减少显示,烤咖啡提取,所有这些测试的提取物浓度测定显示noncytotoxic。

3.5。影响绿色和烤咖啡豆的AE滤饼在伤口愈合

绿色咖啡的水凝胶含有AE显示最好的结果减少伤口(78.20%),类似于积极控制(70.83%),可以指出在图2。在其转,烤咖啡水凝胶似乎不是很有效改善伤口愈合(53.71%)相对绿色咖啡AE。伤口面积的减少可以忽略消极的控制检测(23.56%),统计学上不同于其他治疗方法。因此,可以认为,水凝胶富含AE的咖啡豆滤饼改善伤口愈合过程,揭示了积极的对皮肤组织再生的影响。事实上,可以说包含绿色咖啡提取的水凝胶的性能优越在伤口愈合的结果根据植物化学的最高浓度的酚类化合物的分析。以前的在活的有机体内检测小鼠的影响咖啡提取物在皮肤伤口愈合过程中没有发现到目前为止在文学。在目前的研究中,值得一提的是,通过使用9个成年老鼠,通常不同于其他实验方法在年轻的动物已经使用(5814天),在流逝的时间并不足以实现完整的伤口愈合,尽管所有治疗显著降低伤口面积相对消极的控制。事实上,有实质性的差异在年轻人和成年人之间的伤口愈合反应,一般在成年人持续时间更长。在伤口修复老化的不利影响是众所周知的,抵消治疗加速伤口关闭(59,60]。先前研究Bagdas et al。25)报道,系统注册会计师应用在皮瓣手术可以加速愈合,皮瓣存活动物糖尿病伤口愈合延迟的情况。还建议,排气口局部软膏有刻意的伤口愈合影响大鼠(26]。因此,我们的研究结果与先前的报道是一致的文学。从这个意义上说,这些发现是相关的,因为它可以认为,即使是成年个体皮肤损伤的治疗与咖啡豆滤饼中提取真正有效的增加的生理反应,明显改善皮肤的再生过程。

3.6。绿原酸对伤口愈合的影响

绿原酸水凝胶的日常应用在皮肤上的伤口似乎明显减少伤口面积大小在炎症阶段(例如,第三天)可以与它的抗氧化和抗炎活动相关。事实上,水凝胶包含注册会计师(0.57厘米²±0.06 sem)类似的效应对于积极的控制(0.55厘米²±0.06 sem),可以在表5。相反,postpressing绿色咖啡AE化验在相同条件下不显示相同的性能(0.75厘米²±0.06 sem)第三天,特别是考虑到伤口面积实验开始时是0.72厘米²sem±0.02。所有的治疗取得了类似的性能7天后,和15天就足以实现完整的伤口愈合。可以认为年轻小鼠的生理反应是决定性的伤口愈合完全考虑的在流逝时间15天。在第三天的显著差异可以归因于治疗的炎症反应的影响开始后立即组织损伤,持续3天左右。炎症与激活免疫系统细胞的组件可以帮助伤口愈合,凝血级联,细胞因子,氧化应激(16]。研究Moreira et al。9)显示,AE的绿色咖啡有抗炎作用由于抗炎和抗氧化化合物的存在。绿原酸的使用改善皮肤伤口愈合可能源自其影响炎症介质参与此响应及其抗氧化能力。

3.7。氧化应激的标记

抗氧化防御系统被开发的生物为保护机制对活性氧的形成。最报道内源性抗氧化系统酶SOD和CAT的活性。伤口愈合抗氧化剂之间需要一个良好的平衡活动因为活性氧对细胞和组织在皮肤损伤(60]。有趣的是猫的活动的显著增加愈合组织相比,未治愈的(表6)。除此之外,猫活动提高组织在所有治疗组在治疗伤口愈合过程。可能增加可以归因于ROS水平越高产生的创面炎症反应,细胞信号通路,避免感染,招聘不同种类的细胞,促进细胞分裂。CAT酶活性的增加在包含注册会计师的绿色咖啡AE和水凝胶治疗似乎增加了3天(炎症阶段),减少后的第七天在细胞增殖阶段,与一个强大的扩充,直到15天。有趣的是,阳性对照组也显示类似猫的活动,除了在实验周期结束后,在15天。重要的是,无论治疗结果显示优越的猫的活动沿着伤口愈合过程相比,基础水平(0),这表明猫活动积极调制在受损的皮肤组织。最后,有意义的差异(为每个采样时间)被发现在所有治疗,表明猫的典型标准活动似乎并没有发生。

SOD测定显示更高的活动愈合的早期阶段(第三天)绿咖啡AE CGA-treated组,其次是逐步减少。此外,猫活动相反,SOD降低在所有实验波形基线组在实验结束时,表明这种酶氧化应激反应似乎不相关的皮肤细胞再生。

4所示。结论

化学分析显示绿色的咖啡是一种原材料丰富比烤的绿原酸。目前的研究表明,绿原酸和咖啡豆的每日局部应用滤饼AE增强皮肤伤口愈合在小鼠模型中,尤其是后一个更快的伤口面积减少。考虑植物提取物的实验研究,也就是说,化学复杂的矩阵,这里假设的影响最终结果的描述组件的协同行动。我们建议的最高数量的海巡署和咖啡因的提取咖啡滤饼对伤口修复提出了有益的影响其抗氧化潜能,增强生理反应实现关闭伤口。形成的活性氧自由基(ROS)可以在延迟伤口愈合起着重要的作用。抗氧化剂可以帮助控制伤口氧化应激与ROS生成,从而加速伤口修复。

最后,据我们所知,这是第一个研究调查的影响AE咖啡豆滤饼的皮肤伤口愈合,显示有益对伤口修复的影响。抗氧化剂和游离基清除剂活动的咖啡豆滤饼AE和注册会计师可以改善伤口愈合来控制过度的氧化应激在伤口床上。咖啡豆滤饼已经显示出较低的商业价值;然而它可能获得价值看作一个有价值的生物来源的生物活性化合物为人类健康有趣的用法。事实上,剩余咖啡生物量中研究能够提高损伤皮肤组织的再生,使新产品开发cosmetical和制药行业。

相互竞争的利益

作者声明没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢FAPESC (Fundacao德帕罗尽管e Inovacao Estado de圣卡塔琳娜州,巴西)和Cooxupe(咖啡种植者合作)财政支持。研究奖学金从CNPq代表后来作者承认。