在慢性氧化应激加速老化:PARP-1的角色

文摘

氧化应激中起着重要作用在慢性炎性疾病的病理生理学和它也加速端粒缩短有关。端粒是专业结构线性染色体末端的保护这些结束从退化和融合。端粒缩短每次细胞分裂最终导致细胞衰老。研究表明,聚(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1)和subtelomeric甲基化在端粒稳定中发挥作用。我们假设PARP-1在加速老化过程中发挥作用的慢性炎性疾病,由于其作为共激活剂NF -的角色κb和AP-1。因此我们评估慢性PARP-1抑制的影响(通过非瑟酮和二甲胺四环素)在人类成纤维细胞(高频)培养在正常条件和慢性氧化应激条件下,诱导叔丁基氢过氧化物(t必和必拓)。结果表明,PARP-1抑制正常培养条件下加速端粒缩短的速率。然而,慢性氧化应激条件下,PARP-1抑制没有显示端粒缩短加速。我们还观察到很强的相关性之间的端粒长度和subtelomeric HF细胞的甲基化状态。我们得出这样的结论:慢性PARP-1抑制慢性氧化应激条件是有益的,但在相对正常条件下可能是有害的。

1。介绍

慢性炎性疾病折磨着世界各地数以百万计的人导致大量的社会和经济负担。仅从糖尿病,全世界3.66亿人遭受2011年(1]。据估计,到2030年这个数字将几乎翻了一倍,由于疾病的发病率快速增长造成的人口增长、老龄化、城市化和日益流行的肥胖和缺乏身体活动(2]。在糖尿病慢性炎症条件可能会导致许多严重的并发症,例如,视网膜损伤,肾功能衰竭,心血管疾病。慢性炎症和慢性氧化应激,这发生在许多慢性疾病,会引起这些疾病的进展通过加速生物老化的速度(3]。

加速生物老化与端粒缩短有关(4]。端粒是染色体年底核蛋白结构组成的重复DNA序列,TTAGGG在人类身上。他们防止染色体末端被公认为双链断裂和保护他们免受端到端融合和退化。在人类细胞,体细胞端粒缩短每一轮复制(即。,end replication problem) and cells are triggered into replicative senescence once telomeres shorten to a critical length [3,5,6]。然而,最终的复制问题并不是唯一的因素,导致端粒DNA的损失。氧化应激也扮演一个角色在端粒缩短,因为高GGG的重复,这是更容易氧化而孤独的鸟嘌呤DNA (7,8]。最近,它已被证明,端粒的地区青睐一个持久的目标基因毒性、氧化应激、引起的DNA损伤反应在体外和在活的有机体内(9]。氧化应激诱导长串直接或间接地。相比这些更有效地修复端粒DNA基因组DNA,结果,增加端粒缩短率由于不完整的复制10]。

由于氧化应激在慢性炎症性疾病中起着重要作用,端粒磨损可能参与这些疾病的病理生理学。几个研究表明端粒缩短各种慢性代谢和炎症性疾病,如动脉粥样硬化、糖尿病2型、炎症性肠病,慢性阻塞性肺病,条件都具有系统性的存在氧化应激(11- - - - - -18]。然而,确切的潜在机制的端粒缩短慢性氧化应激条件下有待阐明。

最近的证据表明,表观遗传调控端粒可能是重要的稳定。端粒缺乏CpG二核苷酸容易受到甲基化,但立即相邻subtelomeric地区有一个高密度的CpG序列(19]。在缺乏细胞DNA甲基转移酶(DNMTs)观察端粒延伸的感应与subtelomeric DNA hypomethylation [20.]。也有其他研究发现表观遗传subtelomeres地位和端粒长度之间的联系(21),这表明subtelomeric DNA甲基化在端粒稳定的作用。

核酶的活动保利(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1)也被报道在这一过程中扮演一个角色的端粒稳定。已经表明,PARP-1同事与端粒重复绑定因子2 (TRF2) telomere-specific DNA结合蛋白,保护染色体末端通过促进“封顶”状态的形成(22]。此外,PARP-1已经涉及到多个生理细胞功能的调节DNA修复、基因转录、细胞周期进展,细胞死亡,染色质功能和基因组的稳定性23,24]。PARP-1可能影响端粒稳定条件下慢性氧化应激在两种不同的方式(图1)。首先,通过其在氧化应激诱导的DNA损伤修复功能。它能增强修复,保护端粒,导致端粒缩短的速度下降。另一方面,PARP-1也是一个共激活剂的应激反应相关的转录因子核factor-kappa (NF - BκB)和激活蛋白1 (AP-1),共激活剂,它可以调节炎症反应(25,26]。在这个角色,它可能有负面影响端粒缩短,因为炎症会导致更多的氧化应激和氧化DNA损伤加速端粒缩短。因此,假设PARP-1活动将有助于加速端粒缩短,加速老化的慢性炎性疾病,通过其函数作为炎症反应的共激活剂。本研究的目的是探讨影响慢性PARP-1抑制端粒稳定在正常培养条件和慢性氧化应激的条件下在体外模型使用人类成纤维细胞(高频)。此外,心力衰竭细胞的长时间培养的影响在这些条件下subtelomeric甲基化状态进行了研究。

2。材料和方法

2.1。化学物质

最低基本培养基(MEM),汉克的缓冲盐溶液(hbs),胎牛血清(FCS),胰蛋白酶,必需氨基酸,不必要的氨基酸,维生素,和青霉素和链霉素都获得表达载体(布雷达、荷兰)。牛血清白蛋白(BSA)、二甲胺四环素、4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI),叔丁基氢过氧化物(t必和必拓)和二甲亚砜(DMSO)从Sigma-Aldrich购买(Zwijndrecht、荷兰)。细胞上清液含有鼠单克隆抗体是由10 h anti-PAR聚合物教授w . Buurman(荷兰马斯特里赫特大学马斯特里赫特)。FITC-conjugated山羊anti-mouse免疫球蛋白和荧光安装介质获得DAKO(斯特鲁普、丹麦)。过氧化氢(H₂O₂)从默克公司购买(达姆施塔特,德国)。非瑟酮是获得成分(Haibach,德国)。主要人类成纤维细胞(正常nonfetal皮肤组织)从柯瑞尔获得(柯瑞尔医学研究所,卡姆登,美国)。海拉细胞被亚历山大·伯克尔教授请提供(德国康斯坦茨大学)。

2.2。细胞培养

高频在最低基本培养基培养细胞(MEM) + GlutaMAX nonheat灭活FCS补充20%,青霉素和链霉素1%,0.5%不重要的氨基酸,必需氨基酸,0.5%和0.03%的维生素。细胞被维持在37°C公司5%₂的气氛。所有的细胞都在大约80% confluency通道。诱导氧化应激、并行文化发展有或没有接触t必和必拓。确定要使用的浓度,浓度系列是由5纳米到100纳米t必和必拓。细胞生存能力被台盼蓝排斥试验测试。在浓度小于10纳米细胞是可行的。5 nM > 80%的可行性被发现我们这个浓度用于实验。此外,在一个单独的实验PARP-1抑制的影响调查的补充非瑟酮(10毫米在DMSO溶液溶解,进一步稀释培养基最终浓度为1μM)和二甲胺四环素(10毫米在DMSO溶液溶解,进一步稀释培养基最终浓度100海里)高频介质的细胞的存在与否t必和必拓。所有化合物添加到培养基使或中等更新期间每2 - 3天。实验开始的通道称为P0。

2.3。免疫组织化学染色的聚合物相媲美

验证PARP-1选中的PARP抑制剂的抑制影响,高频细胞被播种15×10的密度⁴细胞每口井six-well板。第二天,细胞治疗300μM H₂O₂诱导PARP-1 overactivation和PARpolymer形成。治疗了10分钟的存在与否非瑟酮(1μ米)或二甲胺四环素(100海里),这增加了30分钟前H₂O₂治疗。孵化后,细胞使胰蛋白酶化,用PBS洗净,固定在甲醇。固定细胞在显微镜载玻片上,用0.1% BSA在PBS洗净,与100年孵化μL鼠单克隆抗体10 h anti-PAR聚合物在室温下一个小时。洗后用0.1% BSA在PBS,细胞与100年孵化μL多克隆山羊anti-mouse免疫球蛋白/ FITC一小时在室温下。接下来,细胞被洗又有0.1% BSA在PBS和孵化与100年10分钟μL DAPI解决方案。随后,细胞与荧光安装安装介质和评估使用荧光显微镜和露西娅GF 4.80软件。每张幻灯片至少100个细胞研究原子核PAR聚合物的存在。

2.4。DNA隔离

DNA提取使用QIAamp DNA迷你包(Venlo试剂盒,荷兰)根据制造商的协议和量化使用Nano-drop(等基因生命科学、比利时)。

2.5。端粒长度测量

端粒长度是由定量PCR如前所述11,27]。两个主和准备,有端粒引物和一个与人类β球蛋白(HBG)引物(1 x从Bio-Rad智商SYBR绿色Supermix)。引物的序列和浓度如表所示1。样品DNA用移液器吸取96孔板在最后10 ng /浓度μl . 20μL mastermix添加和板是离心机不久。每个样本一式三份。标准曲线的参考DNA样本稀释连续生产3种不同浓度的1.25、5、10 ng /μl .在每次运行负控制(MQ + mastermix)和参考样本包括在内。引用来自两个不同的海拉细胞线,一个相对较短的端粒(海拉S3: 5.5 kb)和一个长端粒(海拉229:14日至15日kb)。通过添加引用每个qPCR DNA的控件,可以创建一个标准曲线和样品的绝对端粒长度可以计算kilo-base双(kbp)。海拉细胞被亚历山大•伯克尔教授,请提供德国康斯坦茨大学。PCR进行使用Bio-Rad MyiQ iCycler单色rt - PCR检测系统使用智商SYBR绿色Supermix包含iTaq聚合酶、核苷酸、SYBR绿色的我,和缓冲区(Bio-Rad、钙、美国)。

2.6。端粒酶活性

端粒酶是由端粒重复扩增评估协议(陷阱)测定使用TeloTAGGG端粒酶PCR ELISAPLUS(罗氏诊断、米兰、意大利),这是一个扩展的原始方法被金正日et al。28]。细胞提取物(1 - 3×10⁵细胞等价物)了在第一步中,端粒酶的增加端粒重复(TTAGGG)的3′端biotin-labeled合成P1-TS底漆。这些延伸产品,以及内部标准(是),被PCR扩增。在第二步PCR产品被分成两个整除,变性,变性和杂化分别digoxigenin——(挖)标记检测探针,具体为端粒重复和,分别。通过光密度分析结果是规范化的数据表示为相对的端粒末端转移酶活动(等)。

2.7。Subtelomere甲基化

重亚硫酸盐处理EZ的基因组DNA进行了DNA甲基化工具包(美国CA Zymo研究)。bisulfite-treated DNA是进行聚合酶链反应(PCR)扩增subtelomere地区的引物特定染色体臂2 p。引物序列得到从李et al。29日]。甲基化特定引物是:向前ATGATTAGCGAGTTCGGTTTTAAC和反向:GAATCGCGCCAAATATATACG,向前unmethylated DNA和特定引物:GATGATTAGTGAGTTTGGTTTTAATG和扭转:ACAAATCACACCAAATATATACAAA。PCR反应进行的总量25μ包含1 x L Taq缓冲区,MgCl 2毫米₂核苷酸,0.2毫米,0.6μ每个引物的M, 1 U Taq, 500 ng bisulfite-treated DNA。PCR扩增进行如下:最初的95°C的变性10分钟,其次是40 94°C的周期为30秒,30秒58°C和72°C为30秒,在72°C到一个扩展10分钟。放大产品运行在一个溴化乙锭染色以2%琼脂糖凝胶。量化是通过测量灰值与程序ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/)。

2.8。统计分析

组之间的差异对端粒长度和PAR聚合物使用Mann-Whitney染色进行了测试U测试。PARP-1抑制效果进行了测试使用Wilcoxon符号秩检验。端粒长度之间的关系和subtelomeric甲基化状态是使用非参数斯皮尔曼等级相关系数的计算。值< 0.05被认为是具有统计学意义值< 0.1被认为是统计趋势。与SPSS统计分析分析了Windows(版本20.0;美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。

3所示。结果

确定高频慢性接触细胞氧化应激导致染色体端粒缩短速度,我们确定高频细胞端粒长度5海里t必和必拓。心力衰竭细胞暴露于t必和必拓显示明显较短的端粒比nonexposed细胞相同的通道编号()(图2(一个))。也观察到nonexposed细胞端粒长度显著降低了随着时间的推移以及暴露的细胞()(图2(一个))。此外,人口倍增时间增加暴露细胞nonexposed相比。端粒长度与减少约1490个基点后45人口倍增nonexposed细胞和1938个基点后45人口倍增暴露的细胞。nonexposed细胞,在几个时间点出现端粒长度增加而不是减少。能够解释这个现象我们测量细胞的端粒酶活性。像预期的那样(我们使用主细胞株),没有检测到端粒酶活性测定(图2 (b))。

确认PARP-1非瑟酮的抑制效应和二甲胺四环素,心力衰竭细胞治疗H₂O₂诱导PARP活性。PAR聚合物的形成在这些细胞被评估使用免疫组织化学染色。在参与细胞中,没有观察到票面聚合物的形成。治疗H₂O₂诱导增加票面聚合物阳性细胞的数量()。预培养与非瑟酮PAR聚合物阳性细胞的数量减少40%表明1μ米非瑟酮轻度抑制PARP-1。预培养与100 nM二甲胺四环素导致PAR聚合物阳性细胞的数量减少90% (),表明二甲胺四环素是一个强有力的抑制剂PARP-1(图3)。

探讨影响慢性PARP-1抑制端粒长度监管条件下慢性氧化应激,心力衰竭细胞培养与1μ非瑟酮或100 nM二甲胺四环素的存在与否t必和必拓。10通道后,端粒在所有培养条件相比,较短的端粒长度的实验(图4)。此外,培养的细胞存在t必和必拓、非瑟酮和二甲胺四环素(未经处理的细胞相比)导致更短的端粒。然而,培养他们的二甲胺四环素或非瑟酮结合t必和必拓并未导致加速端粒缩短相比,未经处理的细胞(图4)。此外,在实验的最后,细胞治疗t必和必拓,二甲胺四环素和t必和必拓,非瑟酮显示senescence-like表型(夷为平地,简约,分离细胞30.])。细胞培养在其他条件下正常外观。此外,细胞培养t必和必拓,t必和必拓和非瑟酮,二甲胺四环素仅显示增长速度下降,导致更长一段之前使(表2)。

检查对端粒稳定subtelomeric甲基化的影响,染色体2 p的甲基化状态评估在实验的开始和结束(图5)。在实验开始的高频细胞显示unmethylated subtelomere区域的染色体2 p模式。最后实验观察的条件之间的差异。细胞培养在正常情况下显示一种甲基化模式,类似于模式在实验的开始,而细胞治疗t必和必拓或二甲胺四环素显示近30%的甲基化的增加。细胞治疗非瑟酮增加只有一半(~ 15%)。斯皮尔曼的相关性来确定运行水平的甲基化和端粒长度之间的关系,揭示了一个统计上的显著相关(= 0.668;)。

4所示。讨论

在这项研究中,我们调查的影响慢性PARP-1抑制端粒稳定条件下慢性氧化应激。我们使用高频的长期培养细胞衰老模型发展。诱导氧化应激,我们培养高频的存在t必和必拓,这是一个短链有机氢过氧化物产生自由基代谢活化后(31日]。

4.1。慢性氧化应激导致端粒缩短

长期培养的高频导致染色体端粒缩短,表明生物老化的高频。此外,暴露于慢性氧化应激显著增加端粒缩短的速率。因为观察端粒缩短可能是由于细胞分裂的速度增加,人口翻倍计算。我们发现,人口倍增时间增加的细胞接触t必和必拓,这可能是由于细胞凋亡水平的增加,导致细胞增殖能力下降。出乎意料,在几个时间点nonexposed细胞端粒长度的增加。这似乎不是是由于端粒酶活性增加,由于端粒酶活性是缺失或非常低的初级细胞系。另一种机制可能涉及可采用酵母和人类telomerase-deficient细胞系,另一种为端粒延长端粒(ALT)维护。ALT从力学上看似乎是与细胞内生存和涉及基于同源重组机制的端粒可以使用的端粒延长nonhomologous染色体臂或染色体外端粒DNA (32- - - - - -34]。这种机制被证明存在于高频(35,36]。其他进程可能导致观察到的端粒长度增加,如细胞的存活和选择与更长的端粒和更好的适应培养条件。

4.2。抑制PARP-1非瑟酮和二甲胺四环素

非瑟酮和二甲胺四环素是用来抑制PARP-1。非瑟酮黄酮类,通常存在于水果和蔬菜等食物来源(37]。非瑟酮被描述许多有益健康的影响,就像记忆增强[38]。人们发现它具有抗炎作用通过激活的抑制NF -κB (39),之前的研究已经证实,非瑟酮抑制PARP-1在肺上皮细胞40]。

在浓度为1μM,非瑟酮引起的轻微抑制PARP-1活动当细胞暴露在H₂O₂。治疗慢性心力衰竭细胞与非瑟酮导致较短的端粒比控制细胞。在细胞培养和非瑟酮的存在t必和必拓的平均端粒长度没有明显不同而控制细胞。这一发现似乎支持我们的假设在端粒稳定PARP-1参与的活动。

森古普塔等人的最近的一项研究显示非瑟酮是一种很有前途的配位体形成的四股结构称为G-quadruplex [41]。形成四倍的已被证明会降低端粒酶的活性,但它也抑制了ALT机制(42,43]。因为这种机制可能发挥作用在我们的模型中,可能是四倍的形成由非瑟酮在正常情况下会导致染色体端粒缩短速度由于ALT减损。G-quadruplex形成抗癌症治疗是有益的,因为它阻碍端粒延长,大多数肿瘤细胞无限增殖(使用的机制44]。

盐酸二甲胺四环素,也称为二甲胺四环素,属于广谱抗生素四环素。它主要是用来治疗痤疮和其他皮肤感染和产生抗炎作用是完全独立于其抗菌行为(45]。我们发现二甲胺四环素的摩尔浓度显著抑制PARP-1活动,就像以前报道Alano et al。46]。培养的细胞在100 nM二甲胺四环素的存在导致短平均端粒长度与控制细胞。另一方面,当细胞培养在二甲胺四环素结合的存在t必和必拓、平均端粒长度控制相比没有明显下降。这些发现,与非瑟酮抑制的结果,似乎支持我们的假设PARP-1活动导致端粒稳定和抑制PARP-1活动增加端粒缩短的速率。然而,慢性氧化应激条件下,抑制PARP-1似乎导致染色体端粒缩短速度下降。非瑟酮的抗炎活性和二甲胺四环素也可能有助于稳定慢性氧化应激条件下影响端粒长度。

慢性二甲胺四环素治疗哺乳动物细胞的影响在很大程度上仍是未知的。研究主要集中在研究二甲胺四环素的可能的神经保护和抗炎作用的神经退行性疾病如多发性硬化(MS)和肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)。描述,二甲胺四环素是有效的在不同实验模型的肌萎缩性侧索硬化症,帕金森和亨廷顿病(47- - - - - -51]。急性中风患者的研究发现二甲胺四环素治疗显著提高患者结果相比安慰剂(52]。由于氧化应激是已知在神经细胞死亡在这些疾病中发挥作用(53),PARP-1抑制可能是一个潜在的机制,二甲胺四环素产生这些神经保护效应。然而,二甲胺四环素也在其他疾病模型中被证明是有效的。已经发现二甲胺四环素在老鼠模型可以预防失明的糖尿病性视网膜病变(45]。几项研究表明PARP活性的一个重要的角色在肾病等糖尿病并发症的发病机制,神经病变、视网膜病变(54- - - - - -56]。此外,二甲胺四环素产生在活的有机体内心血管效应通过抑制氧化应激,因此产前可卡因接触后预防胎儿心脏肌细胞死亡(57]。

选择性PARP-1抑制剂并不是在我们的实验测试。然而,Beneke等人所描述的一个实验,让他们接触细胞知名PARP-1抑制剂3-aminobenzamide (3 ab)和测量染色体端粒的长度(58]。他们发现在两种哺乳动物细胞系统(仓鼠和人力),药物抑制PARP1导致了一种快速、剂量依赖性降低端粒长度。这些结果具有可比性,我们获得的结果在我们的实验中,非瑟酮和二甲胺四环素PARP抑制剂。

对端粒长度的影响被观察到类似的与抑制剂。然而,二甲胺四环素治疗细胞形态的变化在早期通过比未经处理的细胞或细胞与非瑟酮治疗。这可能是由于这一事实二甲胺四环素是只有PARP-1抑制能力很强,而非瑟酮报道施加其他效果,增强细胞功能37]。非瑟酮的催化剂sirtuin蛋白1 (SIRT1),组蛋白脱乙酰酶(59]。SIRT1的活动增加与增强生存和长寿有关。非瑟酮已被证明对提高酵母的寿命酿酒酵母(59]。此外,非瑟酮能抑制COX2的表达(60]。它已经表明,选择性COX2抑制剂可以调节细胞衰老在人类皮肤成纤维细胞(61年]。激活SIRT1的COX2和/或抑制非瑟酮可以解释为什么细胞治疗非瑟酮正常外观和细胞用二甲胺四环素治疗,不称为SIRT1激活器,是在通过11衰老状态,尽管他们有类似的端粒长度。

4.3。Subtelomeric甲基化

小鼠模型,在体外研究表明subtelomeric甲基化在端粒长度调节的作用20.,21]。通常情况下,端粒有一个“封闭”构象所建立的表观遗传标记,包括subtelomeric的甲基化区域。当端粒变短,表观遗传标记减少,从而导致一个更“开放”确认,允许更大的可访问性telomere-elongating活动(62年]。已经表明subtelomeric地区的老年痴呆症患者短端粒是hypermethylated (63年]。相比之下,帕金森氏症患者的增加短端粒与subtelomeric hypomethylation被发现(64年]。PARP-1也能够影响DNA甲基化监管DNMT1的表达和活动或直接与DNMT1互动(65年- - - - - -67年]。我们观察到一个甲基化状态与端粒长度之间的相关性。我们发现从unmethylated状态变化实验开始时50%的甲基化条件的最短的端粒末端的实验subtelomeric染色体2 p的区域。长期治疗的细胞与非瑟酮甲基化增加较少,这可能是由于非瑟酮的抑制拟建DNMT——DNMT1-mediated DNA甲基化(68年]。

5。结论

慢性非瑟酮治疗心力衰竭导致较短的端粒在生理浓度来控制细胞相比,表明这些细胞的端粒稳定和增强生物老化。假设它是健康的,非瑟酮通常是添加在相对高浓度的营养补充剂。生物效应以来,经常食用高剂量的非瑟酮(黄酮)是未知的,全面的安全评估是保证对这些营养补充剂。慢性二甲胺四环素治疗也增强端粒缩短。这意味着应采取预防措施时二甲胺四环素是订阅作为慢性治疗。

然而,慢性氧化应激条件下,非瑟酮和二甲胺四环素似乎降低端粒缩短。因为我们的研究仅限于测试非瑟酮和二甲胺四环素的影响在体外与心力衰竭细胞模型,长期暴露于氧化应激还需要更多的研究来评估可能的积极作用非瑟酮和二甲胺四环素的慢性炎性疾病。

它可以得出的结论是,慢性药物或保健品管理局PARP抑制活动出现在慢性氧化应激条件是有益的,但在相对正常条件下可能是有害的。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

引用

1. d·r·怀廷l . Guariguata c·威尔和j·肖,”以色列国防军糖尿病阿特拉斯:全球糖尿病患病率的估计2011年和2030年,“糖尿病的研究和临床实践,卷94,不。3、311 - 321年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. j·e·肖,r . a . Sicree和p . z . Zimmet”全球糖尿病患病率的估计2010年和2030年,“糖尿病的研究和临床实践,卷87,不。1,学报》第4 - 14页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. j·m·j·罗姆·h·j·j·穆南f . j . van Schooten g . j .接触,“端粒长度评价:慢性氧化应激生物标志物吗?”自由基生物学和医学,44卷,不。3、235 - 246年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. c . Veryan p . n .克里斯托弗·a . Eva et al .,“7个位点的识别影响平均端粒长度及其与疾病,”自然遗传学,45卷,第427 - 422页,2013年。视图:谷歌学术搜索
5. c·b·哈雷a . b . Futcher和c·w·格”在人类成纤维细胞的衰老,端粒缩短”自然,卷345,不。6274年,第460 - 458页,1990年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. e·h·布莱克本,”端粒的结构和功能。”自然,卷350,不。6319年,第573 - 569页,1991年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. d . b . Rhee a . Ghosh j . Lu v . a .波尔和y . Liu”因素影响端粒的氧化基础伤害和修复DNA糖基化酶OGG1,”DNA修复,10卷,不。1,34-44,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. “t·冯·格林尼兹基氧化应激缩短端粒。”生化科学趋势,27卷,不。7,339 - 344年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. g·休伊特,d . Jurk f·d·m·马科斯et al .,“端粒青睐的目标持续老龄化和DNA损伤反应压力诱导衰老,”自然通讯2012年,3卷,第708条。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. 美国彼得森,g . Saretzki, t·冯·Zglinicki”优惠积累单链地区人类成纤维细胞的端粒,”实验细胞研究,卷239,不。1,第160 - 152页,1998。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. j·m·j·罗姆·e·m·Mercken h . b . Ketelslegers et al .,“端粒缩短在慢性阻塞性肺疾病,”呼吸系统药物,卷103,不。2、230 - 236年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. l . Savale a . Chaouat s Bastuji-Garin et al .,“循环白细胞端粒缩短的慢性阻塞性肺疾病患者,”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷179,不。7,566 - 571年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. a . Adaikalakoteswari m . Balasubramanyam诉汉,“端粒缩短2型糖尿病患者发生在亚洲的印度,”糖尿病药物,22卷,不。9日,第1156 - 1151页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 特拉维夫,“年表与生物学:端粒、原发性高血压和血管老化,“高血压,40卷,不。3、229 - 232年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. a . Benetos j·p·加德纳m . Zureik et al .,“短端粒与增加高血压颈动脉粥样硬化相关主题,“高血压,43卷,不。2、182 - 185年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. y Kinouchi: Hiwatashi, m . Chida et al .,“端粒缩短的结肠粘膜溃疡性结肠炎患者,”胃肠病学杂志》上,33卷,不。3、343 - 348年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. l .骑s e . Bojesen m . Weischer j . Vestbo和b . g . Nordestgaard”短的端粒长度,肺功能和慢性阻塞性肺疾病396年46个人,”胸腔卷,68年,第435 - 429页,2013年。视图:谷歌学术搜索
18. k·d·Salpea p . j .犹太法典,j·a·库珀et al .,”协会的端粒长度与2型糖尿病氧化应激和UCP2基因变异,”动脉粥样硬化,卷209,不。1,42-50,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. 美国Steinert、j·w·谢和w·e·赖特,“修改subtelomeric DNA,”分子和细胞生物学,24卷,不。10日,4571 - 4580年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 冈萨洛,错话,m·f·弗拉加et al .,“DNA甲基转移酶控制端粒长度和端粒复合在哺乳动物细胞中,“自然细胞生物学,8卷,不。4、416 - 424年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. r·他·m·Garcia-Cao, m·a·布拉斯科”端粒长度调节哺乳动物染色体端粒的表观遗传状态和subtelomeres,”自然遗传学,39卷,不。2、243 - 250年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. r . Ohki和f .石川Telomere-bound TRF1 TRF2停滞在端粒重复复制叉,“核酸的研究,32卷,不。5,1627 - 1637年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. p . Pacher和c。萨博peroxynitrite-poly角色(ADP-ribose)聚合酶通路在人类疾病中,“美国病理学杂志》,卷173,不。1、13、2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. w·l·克劳斯和m . o . Hottiger PARP-1和基因调控:进展和难题,”分子医学方面,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. p . o . Hassa和m . o . Hottiger保利的角色(ADP-Ribose)聚合酶在NF -κB转录激活。”生物化学,卷380,不。7 - 8,953 - 959年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. t . l . Andreone m·奥康纳a . Denenberg p . w .鳕鱼和b . Zingarelli“保利(ADP-ribose) polymerase-1调节活化的小鼠成纤维细胞激活蛋白1”免疫学杂志,卷170,不。4、2113 - 2120年,2003页。视图:谷歌学术搜索
27. r . m . Cawthon“端粒测量定量PCR,”核酸的研究,30卷,不。10篇文章e47 2002。视图:谷歌学术搜索
28. n . w . Kim m·a . Piatyszek k·r·普劳斯et al .,“特定人类端粒酶活性与不朽的细胞和癌症协会,”科学,卷266,不。5193年,第2015 - 2011页,1994年。视图:谷歌学术搜索
29. m·李郑胜耀Rha H.-C。Jeung、h·c·钟和B.-K。哦,”Subtelomeric DNA甲基化和端粒长度在人类癌症细胞,”癌症的信,卷281,不。1,第91 - 82页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. c . Bladier e . j . Wolvetang·哈钦森j . b . De Haan和可乐,”反应的初级到H人类成纤维细胞系₂O₂:衰老——比如增长逮捕或细胞凋亡?”细胞生长和分化,8卷,不。5,589 - 598年,1997页。视图:谷歌学术搜索
31. Hix s, m . b . Kadiiska r·p·梅森和o·奥古斯托”,体内新陈代谢甲基叔丁基氢过氧化物的激进分子。EPR spin-trapping, DNA甲基化的研究。”化学毒物学研究,13卷,不。10日,1056 - 1064年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. 问:杨”,细胞的衰老,端粒复合和维护”,细胞遗传学和基因组研究,卷122,不。3 - 4、211 - 218年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. s . Akimcheva b Zellinger, k . Riha”基因组稳定在拟南芥细胞表现出的替代延长端粒,”细胞遗传学和基因组研究,卷122,不。3 - 4、388 - 395年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. m·a·邓纳姆a·a·诺伊曼c . l .嘉年华和r . r . Reddel“端粒维护人体细胞的重组,”自然遗传学,26卷,不。4、447 - 450年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. m·p·韩德先生a . s . Balajee a . Tchirkov a . Wynshaw-Boris和p . m . Lansdorp”Extra-chromosomal端粒DNA在细胞从Atm - / -小鼠和ataxia-telangiectasia患者”人类分子遗传学,10卷,不。5,519 - 528年,2001页。视图:谷歌学术搜索
36. nŠ。Vidaček, a .Ćukušićm . Ivankovićet al .,“突然在正常的人类成纤维细胞端粒缩短,”实验老年学,45卷,不。3、235 - 242年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. n .汗d·n·赛义德·n·艾哈迈德,h·穆赫塔尔,“非瑟酮:健康促进的膳食抗氧化剂,”抗氧化剂和氧化还原信号,19卷,不。2、151 - 162年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. p·马赫、t . Akaishi和k .安”类黄酮非瑟酮促进ERK-dependent长期势差,增强记忆,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷103,不。44岁,16568 - 16573年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. r . r . r . de Sousa k·c·s·奎罗斯,a·c·s·苏扎et al .,“磷蛋白质水平,MAPK活动和NFκkB表达受到非瑟酮的影响。”酶抑制和药物化学杂志》上,22卷,不。4、439 - 444年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. l . Geraets h·j·j·穆南k .布劳尔·e·f·m·伍特斯a .韧皮g . j .接触,“饮食黄酮和黄酮醇抑制剂保利(ADP-ribose) polymerase-1肺上皮细胞”营养学杂志》,卷137,不。10日,2190 - 2195年,2007页。视图:谷歌学术搜索
41. 森古普塔,b .帕哈里人、l . Blackmon和p . k .森古普塔”生物类黄酮的非瑟酮四倍的DNA配体:生物物理的方法,”《公共科学图书馆•综合》文章ID e65383卷。8日,2013年。视图:谷歌学术搜索
42. 问:小王,J.-Q。刘,z . Chen等人“G-quadruplex形成3′末端的端粒DNA抑制端粒酶的扩展,由解旋酶聚合酶和解除,“核酸的研究,39卷,不。14日,第6237 - 6229页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. d·戈麦斯J.-L。Mergny和肯尼迪。基于G-quadruplex Riou”,检测端粒酶抑制剂配体通过修改后的端粒重复扩增协议分析,“癌症研究,卷62,不。12日,第3368 - 3365页,2002年。视图:谷歌学术搜索
44. l . Oganesian t·m·布莱恩,“生理特性的G-quadruplex形成的相关性:一个潜在的药物靶标,”BioEssays卷,29号2、155 - 165年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. j . k . Krady a·巴苏c·m·艾伦et al .,“二甲胺四环素减少促炎细胞因子表达,小胶质激活和caspase-3激活在糖尿病性视网膜病变的一种啮齿动物模型,”糖尿病,54卷,不。5,1559 - 1565年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. c . c . Alano t . m . Kauppinen a . v .舒适的环境和r . a . Swanson”二甲胺四环素抑制保利(ADP-ribose) polymerase-1摩尔浓度”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷103,不。25日,第9690 - 9685页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. 杜y, z,美国林et al .,“二甲胺四环素阻止黑注射多巴胺能神经退化的MPTP药物模型,帕金森症,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷98,不。25日,第14674 - 14669页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. d . c .吴诉Jackson-Lewis m·维拉et al .,“封锁小胶质激活是1-methyl-4-phenyl-1神经保护,2,3,6-tetrahydropyridine帕金森病小鼠模型,”神经科学杂志》上,22卷,不。5,1763 - 1771年,2002页。视图:谷歌学术搜索
49. 朱,i . g . Stavrovskaya m . Drozda et al .,“二甲胺四环素抑制细胞色素c的释放和延迟的肌萎缩性脊髓侧索硬化症在老鼠中,“自然,卷417,不。6884年,第78 - 74页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. l . Van Den博世p . Tilkin g . Lemmens和w·Robberecht”二甲胺四环素延迟疾病发病和死亡率在ALS的转基因模型,”NeuroReport,13卷,不。8,1067 - 1070年,2002页。视图:谷歌学术搜索
51. v . o . m . Chen Ona, m .李et al .,“二甲胺四环素抑制caspase-1和caspase-3表达和延迟死亡亨廷顿疾病的转基因小鼠模型,”自然医学》第六卷,没有。7,797 - 801年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. Lampl y、m波阿斯·r·吉拉德et al .,“二甲胺四环素治疗急性中风:一个非盲、evaluator-blinded研究中,“神经学,卷69,不。14日,第1410 - 1404页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. j . Emerit m . Edeas f . Bricaire,”神经退行性疾病和氧化应激生物医学和药物治疗,卷。58岁的没有。1,39-46,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. f·李,c。萨博,p . Pacher et al .,“口头评价活性聚(ADP-ribose)聚合酶抑制剂streptozotocin-diabetic鼠模型的周围神经病变早期,“Diabetologia卷,47号4、710 - 717年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. c·萨博bis, r . Benko e .堵塞和k . Susztak“保利(ADP-ribose)聚合酶抑制剂改善2型糖尿病患者的肾病Leprdb / db的老鼠,”糖尿病,55卷,不。11日,第3012 - 3004页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. m . Brownlee“糖尿病并发症的病理学:一个统一的机制,”糖尿病,54卷,不。6,1615 - 1625年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. i Nzenwa沈Sinha-Hikim, r, r·盖尔芬德s . k . Mahata和a . p . Sinha-Hikim”二甲胺四环素抑制氧化应激和变弱胎儿心脏肌细胞凋亡在子宫内可卡因曝光,引发了“细胞凋亡,16卷,不。6,563 - 573年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. s . Beneke o . Cohausz m .马兰加p . Boukamp f•奥尔和a·伯克尔”快速调节端粒长度是由聚(ADP-ribose) polymerase-1,”核酸的研究,36卷,不。19日,6309 - 6317年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. k . t . Howitz k . j . Bitterman h . y .科恩et al .,“小分子催化剂寿命的延长酿酒酵母,”自然,卷425,不。6954年,第196 - 191页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. y Suh f . Afaq j·j·约翰逊,和h·穆赫塔尔”,植物类黄酮非瑟酮抑制结肠癌细胞发生凋亡的考克斯₂和Wnt /表皮生长因子受体/ NF -κB-signaling途径。”致癌作用,30卷,不。2、300 - 307年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. j . h . s . r . Kim公园,m .李j . s .公园,s . c .公园和j·a·汉“选择性cox - 2抑制剂调节细胞衰老在人类皮肤成纤维细胞催化activity-independent的方式,”衰老的机制和发展,卷129,不。12日,第713 - 706页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. m·a·布拉斯科“哺乳动物染色体端粒的表观遗传调控,”自然遗传学评论,8卷,不。4、299 - 309年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. j . z关w·p·关,Maeda t . n .牧野,“短端粒的subtelomere hypermethylated在阿尔茨海默氏症,”衰老和疾病,3卷,第170 - 164页,2012年。视图:谷歌学术搜索
64. Maeda t . j . z关,我。”,y Higuchi, n .牧野,Aging-associated subtelomeric甲基化的改变在帕金森病,”期刊的老年医学,卷64,不。9日,第955 - 949页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. p . Caiafa、t . Guastafierro和m . Zampieri“表观遗传学:保利(ADP-ribosyl) PARP-1定位调节基因组甲基化模式,”美国实验生物学学会联合会杂志,23卷,不。3、672 - 678年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. p . Caiafa和j . Zlatanova”符合保利(ADP-ribose) polymerase-1 CCCTC-binding因素,”细胞生理学杂志,卷219,不。2、265 - 270年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. a . Reale g . De mattei g . Galleazzi m . Zampieri和p . Caiafa“调制ADP-ribose DNMT1活动的聚合物,致癌基因,24卷,不。1、13 - 19,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. j·l .赢得J.-Y。垫片,b·t·朱“DNA甲基转移酶的抑制机制茶儿茶素和生物黄酮素,”分子药理学,卷68,不。4、1018 - 1030年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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