文摘

客观的。阐明LINC00174促进结肠癌进展的机制,针对微- 2467 - 3 - p (mir - 2467 - 3 - p) /烯醇酶3 (ENO3)轴调节炎症和糖酵解。方法。的表达LINC00174 ENO3在结肠癌组织中,其与存活率的关系,使用生物信息学分析和相关性进行了分析。的影响LINC00174超表达和沉默和炎症在结肠癌细胞的生物学行为进行了分析通过转染实验。目标mir - 2467 - 3 - p之间的关系或LINC00174 ENO3使用序列预测和验证dual-luciferase记者分析,分别。此外,LINC00174 -和/或mir - 2467 - 3 - p - overexpressing细胞准备确定影响ENO3蛋白质含量和糖酵解。最后,LINC00174的影响和/或mir - 2467 - 3 - p过度结肠癌,ENO3蛋白质的水平,和炎症使用有肿瘤小鼠模型进行了分析。结果。LINC00174 ENO3和过表达和相关生存率较低。LINC00174 ENO3呈正相关,在结肠癌组织中。此外,过度LINC00174结肠癌细胞系的推广扩散,迁移和入侵结肠癌细胞和炎症但抑制细胞凋亡。mir - 2467 - 3 p的过度抑制ENO3蛋白质的水平,这是减毒通过LINC00174超表达。此外,它抑制炎症和糖酵解的生理行为在结肠癌细胞,阻止他们LINC00174-induced晋升。此外,使用动物实验,监管LINC00174对肿瘤生长的影响,ENO3蛋白质的水平,和炎症通过mir - 2467 - 3 p被证实。结论。LINC00174促进糖酵解、炎症、结肠癌细胞增殖,迁移和入侵,抑制细胞凋亡。LINC00174的促进机制与目标mir - 2467 - 3 - p促进ENO3蛋白质水平。

1。介绍

全球统计报告显示1148515例新病例的结肠癌和576858结肠癌症相关的死亡人数为2020人,占所有肿瘤的6.0%和5.8%,分别;这使得结肠癌第五个最常见的癌症类型(1]。手术或联合化疗是主要的治疗策略降低肿瘤负荷,延长病人的生存(2,3]。然而,结肠癌患者预后不良,大约60%的总体5年生存率(4,5]。然而,这种癌症的检测在早期阶段是困难的,和先进的结肠癌的存活率只有8% -30%6,7]。结肠癌也伴随着慢性炎症、溃疡性结肠炎等疾病可能会进一步发展为结肠癌(8,9]。此外,慢性炎症有利于肿瘤细胞转移(10,11]。此外,白介素- 1 (IL)增加β和引发水平促进结肠癌细胞的迁移和入侵(12,13]。因此,它是非常确定结肠癌发病机制的关键。

长非编码rna (lncRNAs)可以竞争性吸附小分子核糖核酸(microrna)和抑制其转录后的基因表达(14]。此外,他们可以通过诱导炎症促进结肠癌进展,如牛磺酸调节1 (15,16]。作为促进lncRNA LINC00174最近发现;它扮演了一个角色在促进肝癌的进展(17],乳腺癌[18),和骨肉瘤19]。sequencing-based研究报道,LINC00174与结肠癌预后和参与调节葡萄糖代谢20.]。然而,LINC00174的效果和机理,对结肠癌细胞的生物学行为尚不清楚。

肿瘤细胞产生ATP主要通过糖酵解,即使氧气供应充足;这被称为Warburg效应(21,22]。肿瘤细胞可迅速通过糖酵解获得能量,这有利于肿瘤细胞生长(23]。Warburg效应可以增加结肠癌细胞的侵犯;因此,逆转糖酵解可以是一个潜在的方法来治疗结肠癌(24,25]。烯醇酶3 (ENO3)β烯醇酶调节横纹肌发展(26]。基因分析表明ENO3与结肠癌的风险,这是参与糖酵解的规定(27]。高浓度的糖酵解导致炎症通路的激活28),也参与了肿瘤恶化[29日]。但是,这种机制仍多在细胞和动物水平,和ENO3表达式是监管的机制尚不清楚。

本研究的目的是确定的机制LINC00174调节ENO3,糖酵解,炎症和阐明了影响结肠癌。我们的目标是提供一个新的理论基础对结肠癌的诊断和治疗。

2。材料和方法

2.1。生物信息学分析

结肠癌病例癌症基因组图谱(TCGA)数据库进行了分析使用母星工具。对于微分分析,471肿瘤组织样本和41正常组织样本包括在内。生存分析,包括447个样本。的存活率LINC00174或ENO3高和低表达组使用logrank测试进行了分析和比较。此外,LINC00174之间的相关性和ENO3结肠组织进行了分析使用皮尔逊测试。

2.2。细胞培养

FHC人类结肠上皮细胞系(crl - 1831);Caco-2,结肠癌细胞系(HTB-37);SW480 (ccl - 228);COLO201 (ccl - 224);和HCT116 (ccl - 247 emt)从美国获得的文化集合类型(美国弗吉尼亚州马纳萨斯)。细胞系都保持在杜尔贝科修改鹰介质(DMEM)(美国Gibco)补充10%胎牛血清的边后卫,100毫克/毫升链霉素,青霉素100单位/毫升(美国Sigma-Aldrich)。细胞培养在5%的股份有限公司₂孵化器在37°C,湿度95%。在一些实验中,细胞治疗5毫米2-deoxy-d-glucose 48 h (2 dg)抑制细胞糖酵解。

2.3。细胞转染

细胞转染实验沉默LINC00174进行使用Caco-2 LINC00174较高的表达式。转染实验过度表现LINC00174进行使用COLO201细胞。此外,Caco-2细胞被用来cotransfect LINC00174和mir - 2467 - 3 - p模仿。siLINC00174、siENO3 LINC00174, mir - 2467 - 3 - p模仿,和相应的siNC / NC /模拟数控取自GenePharma有限公司有限公司(中国)。简单地说,50 pmol (0.67μ与25 g)质粒被稀释μL无血清DMEM(试剂)。然后,1μL (Entranster™-R4000 (Engreen)和24μL血清DMEM涨跌互现的25分钟(试剂B)。转染复合物是由彻底混合25μL试剂和25μL试剂B(使用吸管吸入10倍)和站了15分钟。细胞在0.45毫升的完全培养基与50转染μL转染的复杂。siNC / NC /模拟数控质粒被用作控制。

2.4。RT-qPCR

分析,400μL的试剂盒(美国热费希尔)添加到细胞或组织在一个1.5毫升无菌RNase-free EP管。细胞或组织匀浆,其次是增加600μL试剂盒和混合5分钟。然后,细胞离心5分钟(4°C, ),和颗粒都被丢弃。试剂盒和氯仿混合的比例1:2和添加到上层的前一步,紧接着摇动15 s。此后,异丙醇加入水相沉淀RNA。收集到的RNA颗粒是仔细用75%乙醇洗净去除杂质。RNA在diethylpyrocarbonate-treated重新溶解水和储存在−80°C。反转录成RNA cDNA使用PrimeScript RT试剂盒(RR047A,豆类)在下列情况下:37°C / 15分钟和98°C / 5分钟。qPCR放大进行了使用SYBR绿色试剂(豆类、日本)在下列情况下:94°C 3分钟,其次是40周期为15秒94°C, 58°C 20年代,30年代和72°C。LINC00174和mrna的表达的规范化GAPDH使用2^−ΔΔCt方法。mir - 2467 - 3 - p的表达,mir - 3918, mir - 542 - 3 - p是规范化的U6。使用的引物如下:LINC00174 F: 5 - - - - - -AAGCCCCTGGGGAATGTTTC-3 ,R: 5 - - - - - -AAGCCCCTGGGGAATGTTTC-3 ;il - 1βF: 5 - - - - - -TCCTTGCCCTTCCATGAACC-3 ,R: 5 - - - - - -TTACTTGGCACCCTGTTTGC-3 ;引发F: 5 - - - - - -GGCAGCCTTCCTGATTTCTG-3 ,R: 5 - - - - - -AATTTCTGTGTTGGCGCAGTG-3 ;il - 10 F: 5 - - - - - -GAGATGCCTTCAGCAGAGTGA-3 ,R: 5 - - - - - -ACTCATGGCTTTGTAGATGCCT-3 ;GAPDH F: 5 - - - - - -TTTCTGACTCCGTGAACCGC-3 ,R: 5 - - - - - -AGTCCTTCCACGATACCAAAGTT-3 ;mir - 2467 - 3 F - p: 5 - - - - - -CCTGAGGCTCTGTTAGCCTT-3 ,R: 5 - - - - - -ACAGACCCTGAGCCTCTC-3 ;mir - 3918 F: 5 - - - - - -GGTTAAGCCATGGGACAGGG-3 ,R: 5 - - - - - -CTACGAACCAGGTGCAGGG-3 ;mir - 542 - 3 F - p: 5 - - - - - -TCGGGGATCATCATGTCACG-3 ,R: 5 - - - - - -GAGTGGCTCCCAGACCTTTC-3 ;U6 F: 5 - - - - - -CTCGCTTCGGCAGCACA-3 ,R: 5 - - - - - -AACGCTTCACGAATTTGCGT-3 。

2.5。测定il - 1β、引发和il - 10水平通过酶联免疫吸附试验(ELISA)

在转染实验中,Caco-2细胞相对较高LINC00174表达式是用来沉默LINC00174,而COLO201细胞被用来LINC00174过表达。这些细胞被并置和离心机 15分钟在4°C。上层清液收集后,转移到96 -孔板。il - 1的水平β、引发和il - 10测定使用ELISA试剂盒(美国表达载体)后,制造商的指示。光密度(OD)测量使用微型板块阅读器(美国Biotek Winooski, VT)。il - 1的水平β、引发和il - 10表达为微克每毫升。

2.6。细胞计数Kit-8 (CCK-8)测定

细胞悬液(100μL)的密度 /毫升加入96孔板的井。在24、48和72 h, 10μL CCK-8的解决办法是补充道。盘子轻轻混合在一个轨道振动器为1分钟37°C,以确保均匀混合。盘子被孵化为2 h脱氢反应。OD是测量的波长450 nm使用标(Biotek)。

2.7。流式细胞术

细胞被收集并使胰蛋白酶化没有EDTA。洗后用PBS和离心法样品两次5分钟,每分钟2000转 细胞被收集和resuspended在500年μL具有约束力的缓冲区。然后,5μL的膜联蛋白V-fluorescein异硫氰酸酯和碘化propidium(三江生物技术有限公司,中国)被用来标记凋亡细胞在黑暗中(15分钟)。30分钟后,流式细胞仪(美国BD FACSCalibur)进行检测。正常细胞用于荧光补偿调制穿过大门的位置。

2.8。刮伤愈合试验

细胞增长到90% -95% confluency 6-well板块形成在上述条件下单层。这时,一个200μL吸管技巧被用于制造垂直划痕从上到下。这被认为是0 h,划痕宽度被记录。有细胞被冲走后,细胞在无血清培养基培养。照片拍摄后24小时来评估治疗。

2.9。Transwell化验

基底膜基质(1:8稀释;美国康宁公司)添加到参议院,和样本孵化为30分钟37°C。然后,600年μL的完全培养基(20%的边后卫)被添加到的下室24-well Transwell设备。细胞( /毫升)在无血清培养系统在37°C为饥饿24小时治疗。消化后,100μL细胞的解决方案( /毫升)添加到水化Transwell室。24小时后,uninvaded细胞被冲走,和低渗透到细胞室固定为95%乙醇和0.1%结晶紫染色20分钟在室温(25°C)。细胞的数量是算在五个随机领域×400倍的视野。

2.10。糖酵解水平的分析

糖酵解水平取决于检测葡萄糖摄取和乳酸分泌。简单地说, 细胞培养皿中被播种,在上述条件下培养24小时。中被删除,和5毫升中没有的边后卫和谷酰胺添加。孵化8 h后,上层清液通过离心收集。葡萄糖摄取被发现使用Amplex红葡萄糖/葡萄糖氧化酶试验设备(分子探针、钙、美国)。乳酸生产检测用乳酸检测工具(BioVision、钙、美国)。

2.11。Dual-Luciferase记者分析

dual-luciferase记者分析,1μ克野生型(wt) LINC00174 / ENO3-pGL4 (Promega公司(美国)或突变LINC00174 / ENO3-pGL4(诱导使用QuickMutation™装备,Beyotime,中国),50 nmol mir - 2467 - 3 - p模仿/模拟数控,和150 ngRenilla荧光素酶质粒转染到(Beyotime) 在37°C细胞使用Lipofectamine®2000 36 h。荧光素酶活性测定使用dual-luciferase报告基因检测设备(Promega公司)。所有数据被规范化Renilla荧光素酶活性。

2.12。西方墨点法

细胞或组织收集和孵化里帕溶解溶液在冰上30分钟。然后,总蛋白通过离心分离得到 在4°C为20分钟。钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳分离的蛋白质。兔子主要单克隆抗体ENO3(1: 1000)(美国Abcam ab157474)添加到膜(4°C,一夜之间)。然后,膜与Tris-buffered盐水洗两次/ 0.1%渐变(TBST)解决方案。膜被孵化与二次抗体(1:2000年,ab6721) 2 h在37°C。膜与TBST洗了三次。蛋白质印迹是可视化使用ECL工具包(Solarbio)和检测使用IPP6.0(美国媒体控制论)。

2.13。同系的建设模式

前不久男性正常的BALB / C小鼠(查尔斯河有限公司,中国)被用来检测细胞肿瘤发生。动物们被安置在24°C的环境°C和 相对湿度。总共24老鼠使用随机数字表法分组,每组6只老鼠。简单地说, 200年resuspended CT26-wt细胞μL PBS和注入的腋窝区域老鼠。移植后28天,老鼠牺牲和收集肿瘤称重。这些动物安乐死在肿瘤的直径> 2厘米(不参与这个实验)。协议涉及动物伦理委员会批准广西壮族自治区人民医院。

2.14。统计分析

所有的实验都是独立执行一式三份。数据表示为 。统计分析了使用单向方差分析和图基的多重比较测试(GraphPad Prism 7.0版本)。的 - - - - - -测试是用来分析两组之间的差异。生存分析是使用logrank测试执行。一个< 0.05被认为是具有统计学意义的价值。

3所示。结果

3.1。LINC00174在结肠癌中,与不良预后有关

初步分析LINC00174表达结肠癌,LINC00174 TCGA的结肠癌组织中表达数据库得到分析。LINC00174结肠癌组织中的表达显著增加(图1(一))。患者高LINC00174表达明显降低存活率( )(图1 (b))。与正常结肠上皮细胞相比,LINC00174表达显著调节在结肠癌细胞系(图1 (c))。这表明LINC00174在结肠癌中起着积极作用。Caco-2细胞相对较高的LINC00174表达式和COLO201 LINC00174较低表达被用于后续的实验。

3.2。沉默或超表达LINC00174影响增长,Caco-2细胞的迁移和入侵

确定LINC00174对结肠癌细胞的影响,Caco-2被用作模型细胞系LINC00174沉默。图2(一个)说明了转染结果。细胞生存能力LINC00174沉默(图后显著降低2 (b))。LINC00174抑制后,细胞凋亡率从大约5%增加到大约20%(图2 (c))。抓治疗水平显著降低siLINC00174组后24 h(图2 (d))。此外,细胞的数量,入侵的下室Transwell设备在siNC siLINC00174组低于集团(图2 (e))。

COLO201细胞相对较低的LINC00174表达式用来LINC00174过表达(图2 (f))。LINC00174表达式时增加的细胞,增殖能力明显增加,而细胞凋亡率降低(数字2 (g)和2 (h))。增加LINC00174表达式刮伤愈合率从60%上升到大约90%在24 h(图2(我))。细胞的数量,入侵的下室Transwell设备LINC00174组高于NC组(图2 (j))。

3.3。沉默或超表达Caco-2 LINC00174影响炎症的细胞

减少LINC00174表达减少促炎因子il - 1的表达β和引发(数据3(一个)和3 (b)),但增加了抗炎因子il - 10的mRNA表达(图3 (c))。这些结果表明,LINC00174沉默抑制的恶性生物学行为在结肠癌细胞和炎症。ELISA显示il - 1βsiLINC00174组和引发水平显著降低,而il - 10水平显著增加siLINC00174组相比siNC集团(数字3 (d)- - - - - -3 (f))。此外,LINC0017超表达促进了促炎因子il - 1的mRNA表达β和引发(数据3 (g)和3 (h)),但减少的抗炎因子il - 10(图3(我))。这进一步证实了促进LINC00174对结肠癌的影响。相反,当LINC00174-overexpressing细胞治疗2 dg,糖酵解抑制剂,或去除ENO3 (siENO3)的影响LINC00174过度炎症因素明显废除(数字3 (g)- - - - - -3(左))。与LINC00174组相比,il - 1β和引发水平明显降低LINC00174 + 2 dg和LINC00174 + siENO3组(数字3 (g),3 (h),3 (j),3 (k)),而il - 10水平在两组显著增加(数据3(我)和3(左))。

3.4。建设LINC00174 / mir - 2467 - 3 - p / ENO3轴

TCGA分析表明ENO3表达增加结肠癌组织(图4(一))。患者高ENO3表达明显降低存活率( )(图4 (b))。使用TCGA结肠癌样本数据库,LINC00174 ENO3被发现呈正相关( , )(图4 (c))。各自的目标microrna LINC00174和ENO3预测,确定了三种常见的microrna: mir - 2467 - 3 - p, mir - 3918, mir - 542 - 3 - p(图4 (d))。确定这三种microrna的差异,检查LINC00174改变对他们的影响。LINC00174沉默mir - 2467 - 3 - p含量增加Caco-2细胞;然而,它没有显著影响mir - 3918和mir - 542 - 3 - p水平(图4 (e))。同样,LINC00174过度抑制mir - 2467 - 3 - p水平COLO201细胞;然而,对其他两个microrna的影响并不显著(图4 (f))。总的来说,这些结果表明,mir - 2467 - 3 - p是一个关键的microrna在结肠癌通过LINC00174监管。

3.5。LINC00174目标mir - 2467 - 3 - p调节ENO3

初步验证LINC00174 / mir - 2467 - 3 - p / ENO3轴,细胞实验研究;结果表明,LINC00174绑定到mir - 2467 - 3 - p, mir - 2467 - 3 - p绑定到3 - - - - - -UTR ENO3(数字5(一个)- - - - - -5 (d))。此外,mir - 2467 - 3 - p - overexpressing COLO201细胞构造(图5 (e))。mir - 2467 - 3 - p水平升高抑制ENO3蛋白质水平(图5 (f))。这表明LINC00174目标mir - 2467 - 3 - p调节ENO3。

3.6。LINC00174 / mir - 2467 - 3 - p调节ENO3表达式和结肠癌细胞生物学行为和糖酵解

确定LINC00174 / mir - 2467 - 3 - p / ENO3轴及其对结肠癌细胞的影响,COLO201细胞overexpressing LINC00174和/或mir - 2467 - 3 - p通过转染了。LINC00174水平升高ENO3增加蛋白质含量,而mir - 2467 - 3 - p抑制ENO3蛋白质含量(数字6(一)和6 (b))。此外,LINC00174过度扭转ENO3镇压通过mir - 2467 - 3 - p。这表明LINC00174促进ENO3蛋白质含量通过瞄准mir - 2467 - 3 - p。

mir - 2467 - 3 - p水平升高细胞增殖能力下降,而LINC00174超表达不仅促进了细胞增殖能力,而且逆转的抑制性影响mir - 2467 - 3 - p在细胞(图6 (c))。此外,mir - 2467 - 3 - p超表达受阻的凋亡效应LINC00174(数字6 (d)和6 (e))。与数控+模拟数控组相比,迁移和入侵能力的LINC00174 +模拟数控组增加。此外,迁移和入侵能力LINC00174 +模拟组显著低于LINC00174 +模拟数控组显著高于数控+模拟组(数字7(一)- - - - - -7 (d))。LINC00174过度扭转的抑制性影响mir - 2467 - 3 - p细胞的能动性。综上所述,研究结果表明,在调节LINC00174结肠癌的作用是密不可分的mir - 2467 - 3 - p。

肿瘤细胞吸收大量的葡萄糖通过糖酵解,产生乳酸。因为ENO3是参与糖代谢和糖酵解,我们阐明LINC00174的影响和/或mir - 2467 - 3 - p过度糖酵解水平。海拔mir - 2467 - 3 - p降低葡萄糖吸收和抑制乳酸生产COLO201细胞。然而,LINC00174超表达不仅促进葡萄糖摄取和增加乳酸积累在结肠癌细胞还封锁的抑制性影响糖酵解mir - 2467 - 3 - p(数字7 (e)和7 (f))。这表明LINC00174 / mir - 2467 - 3 - p不仅调节ENO3还调节糖酵解。

3.7。LINC00174调节ENO3蛋白质含量、肿瘤生长和炎症通过瞄准mir - 2467 - 3 - p

进一步验证LINC00174对结肠癌细胞的效果和机制在活的有机体内,COLO201细胞与LINC00174和/或mir - 2467 - 3 - p过度被用来构造一个肿瘤小鼠模型。LINC00174超表达肿瘤体积和质量增加了约1.8倍,而mir - 2467 - 3 - p过度抑制肿瘤生长的一半观察数控+模拟NC组(数据8(一个)和8 (b))。肿瘤体积和质量的老鼠LINC00174 +模拟组明显低于LINC00174 +模拟数控组的老鼠明显高于那些老鼠的数控+模拟组(数字8(一个)和8 (b))。这表明mir - 2467 - 3 - p过度块在活的有机体内促进LINC00174对结肠癌的影响,证实了这些影响密不可分的mir - 2467 - 3 - p。此外,LINC00174和mir - 2467 - 3 - p促进和抑制ENO3体内蛋白质含量,分别为(图8 (c))。此外,LINC00174过度扭转ENO3的抑制性影响蛋白质含量在肿瘤组织通过mir - 2467 - 3 - p(图8 (c))。这些发现进一步证实LINC00174 ENO3增加蛋白质含量通过瞄准mir - 2467 - 3 - p在活的有机体内。

我们也阐明炎症水平在每组的肿瘤组织和观察到的mRNA表达il - 1β后,引发增加但il - 10的减少LINC00174超表达。mir - 2467 - 3 - p超表达了相反的影响(数据8 (d)- - - - - -8 (f))。此外,il - 1的mRNA的表达β和引发LINC00174 +模拟组高于LINC00174 +模拟数控组和低数控+模拟组;然而,il - 10的mRNA表达低LINC00174 +模拟数控组和高数控+模拟组相比,数控+模拟NC组(数据8(一个)- - - - - -8 (f))。mir - 2467 - 3 - p过度封锁了促进LINC00174对炎症的影响,表明LINC00174促进炎症的机制在结肠癌离不开mir - 2467 - 3 - p在活的有机体内的水平。

4所示。讨论

先天的遗传风险因子之间的相互作用和环境致癌因素是导致结肠癌(一个重要方面30.,31日]。炎症性肠病和其他疾病也可能导致结肠癌,和炎症参与结肠癌进展[是一个至关重要的因素32,33]。除了手术和化疗,新的免疫疗法经常被用于临床设置;然而,结肠癌患者的预后仍然贫困(34,35]。此外,大多数病人失去最好的机会时手术诊断和展览浸润和转移(36,37]。因此,重要的是要分析机制结肠癌进展。糖酵解和炎症在癌症细胞有着密切的相互关系。在这些细胞中,糖酵解经常调节,以促进他们快速增长和扩散38]。这种现象通常被称为Warburg效应。此外,糖酵解可以导致活性氧的产生,这可能会导致细胞损伤和触发炎症反应39]。慢性炎症通路的激活癌细胞会导致招聘的免疫细胞释放细胞因子和趋化因子,从而促进肿瘤的生长和转移。此外,炎症肿瘤微环境的诱导糖酵解在邻近的细胞,导致积极的反馈回路,燃料癌症恶化[40]。因此,糖酵解和炎症是相辅相成的过程驱动癌症发展和进展(41]。然而,癌症细胞的糖酵解和炎症之间的关系是复杂的、多方面的。虽然糖酵解对癌细胞的生存很重要,但它还诱发炎症反应,导致肿瘤恶化[42]。因此,确定战略目标糖酵解和炎症在改善癌症治疗可能有效。

lncRNAs小说是最近发现的肿瘤诊断和治疗的目标。例如,DNAJC3-AS1 [43],EGOT [44],LINC00261 [45被认为是结肠癌的临床标记和参与调节细胞增殖和入侵。LINC00174 (ENSG00000179406)在肝癌(17),胶质母细胞瘤(46),胸腺上皮肿瘤(47),产生促进作用。最近的研究报道,LINC00174与结直肠癌患者的恶性病理特征,并促进肿瘤进展和转移(48,49]。然而,LINC00174的效果和机理和炎症在结肠癌细胞的生物学行为尚不清楚。为此,TCGA结肠癌样本数据库的初步分析显示,LINC00174是过表达和相关生存率较低。此外,在体外实验用结肠癌细胞系透露,LINC00174超表达促进结肠癌细胞增殖,迁移,入侵,炎症和抑制细胞凋亡。这些发现表明,LINC00174对结肠癌肿瘤,和有助改善炎症的作用物损伤你的心脏,是结肠癌的生物标志物。

接下来,分析的机制LINC00174促进结肠癌,TCGA数据库是用于识别ENO3,在结肠癌组织与LINC00174呈正相关。类似于LINC00174, ENO3也在结肠癌和不良预后相关。此后,各自的目标microrna LINC00174和ENO3预测,确定了三种常见的microrna: mir - 2467 - 3 - p, mir - 3918, mir - 542 - 3 - p。区分这三种microrna,我们确定LINC00174改变的影响。LINC00174沉默增加Caco-2 mir - 2467 - 3 - p水平细胞,而LINC00174过度降低mir - 2467 - 3 - p水平COLO201细胞。然而,对其他两个microrna的影响并不显著。使用分子细胞的实验中,我们证实,mir - 2467 - 3 - p结合LINC00174和ENO3 mir - 2467 - 3 - p抑制ENO3蛋白质水平,,反过来,由LINC00174规定。一项研究报道,mir - 2467 - 3 - p可以抑制大肠癌细胞的转移(50]。这表明,mir - 2467 - 3 - p是一个关键的microrna在调节结肠癌和LINC00174 ENO3蛋白质水平。

在目前的研究中,我们观察到LINC00174可以绑定mir - 2467 - 3 - p,从而抑制其表达。反过来,mir - 2467 - 3 - p可以目标和表达下调ENO3表达式。因此,LINC00174间接调节ENO3表达调制mir - 2467 - 3 - p水平。我们发现LINC00174表达增加,从而导致减少mir - 2467 - 3 - p水平和增加ENO3表达式。这是与葡萄糖代谢改变,增加了癌细胞的扩散。因此,LINC00174可能发挥重要作用在调节葡萄糖代谢和癌症细胞增殖的调节mir - 2467 - 3 - p和ENO3蛋白质表达水平。然而,更多的研究是必要的完全理解这种监管网络所涉及的分子机制及其潜在作为癌症治疗的目标。ENO3编码β烯醇酶,主要表达在骨骼肌和肝脏。它在糖原和胆固醇代谢中起着重要的作用[51,52]。ENO3缺乏可导致代谢性肌病(53]。此外,ENO3可能有一个独特的功能在促进肿瘤细胞糖酵解。到目前为止,一些sequencing-based研究报道,ENO3参与糖酵解和结直肠或结肠癌症和高架ENO3促进ATP生产或糖酵解在缺氧条件下(27,54]。此外,基因组分析使用基因表达综合数据库显示,ENO3参与糖酵解监管;套索考克斯分析显示,ENO与预后相关(55]。糖酵解也调节结肠癌细胞的生物学行为56,57]。在目前的研究中,我们观察到,mir - 2467 - 3 - p目标ENO3表达式,可以抑制结肠癌细胞的恶性生物学行为和糖酵解,和减轻LINC00174的促进效应。此外,LINC00174促进糖酵解和街区的抑制性影响mir - 2467 - 3 - p对结肠癌细胞和糖酵解。此外,监管LINC00174对肿瘤生长的影响和ENO3蛋白质含量通过mir - 2467 - 3 - p通过动物实验证实。在动物模型中,升高LINC00174表达促进了il - 1的mRNA的表达β和引发,但抑制il - 10的表达。此外,mir - 2467 - 3 - p过度封锁了促进LINC00174对炎症的影响。这进一步表明,在结肠癌,LINC00174表达的增加促进ENO3蛋白质含量在转录后的层面针对mir - 2467 - 3 - p,这反过来,促进糖酵解和炎症,从而促进结肠癌进展。因为结肠癌细胞需要高葡萄糖水平维持快速增长,他们适应自己通过Warburg效应通过促进糖酵解。LINC00174之间的复杂的监管,mir - 2467 - 3 - p,和ENO3癌细胞生存和增殖的关键,和干扰这一监管网络可以是一个有前途的发展有效的癌症治疗方法。

5。结论

LINC00174能促进结肠癌细胞糖酵解、炎症、增殖、迁移和入侵和抑制细胞凋亡。LINC00174的促进机制与目标mir - 2467 - 3 - p促进ENO3蛋白质水平。然而,LINC00174在结肠癌的功能和机制应该进一步证实了在临床水平。此外,LINC00174促进糖酵解的机制应该确认在活的有机体内。

数据可用性

在生成的数据集和/或分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

伦理批准

本研究根据赫尔辛基宣言的原则执行。人民医院的伦理委员会广西壮族自治区批准这项研究(没有。20204532 aa)。

信息披露

盛徐、林加威荣陈co-first作者。

的利益冲突

作者没有披露相关的金融或非金融利益。

作者的贡献

所有作者的贡献研究概念和设计。细胞实验由盛,加威林、陈荣。动物实验是由谢俊杰和Enquan元。数据收集和分析由Fajie岑和Fanbiao香港。最初的草案手稿的作者是俊杰谢。所有作者评论的以前版本的手稿。阅读和批准所有的作者都最后的手稿。