文摘
NADPH氧化酶4 (Nox4)是一个重要的来源的活性氧(ROS)生产,和它的表达增加在脂多糖(LPS)刺激肺上皮细胞。聚合酶δ相互作用蛋白2 (Poldip2)证明来绑定Nox4和参与氧化应激和炎症。然而,Poldip2的角色/ Nox4 LPS-induced肺上皮细胞氧化应激和炎症尚不清楚。通过MTT检测细胞活力测定。的表达Poldip2 Nox4,血红素oxygenase-1 (HO-1) cyclooxygenase-2 (cox - 2),一种蛋白激酶,p-AKT被西方墨点法和/或免疫荧光检测。通过coimmunoprecipitation Poldip2和Nox4交互分析(Co-IP)测定。NADPH酶活性和活性氧的生产,前列腺素E2 (PGE2)、肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),interleukin-1β(il - 1β同时)进行了评估。小核RNA)或质粒针对Nox4被用来表达下调或上调Nox4和慢病毒向量编码Poldip2被用来表达下调或上调Poldip2。目前的研究表明LPS刺激的蛋白质含量显著提高Poldip2 Nox4和证明Poldip2与Nox4 Co-IP证明。重要的是,Poldip2 Nox4充当一个上游的监管机构。Nox4和cox - 2的表达增加;NADPH酶活性;ROS的产生,PGE2, TNF -α,il - 1β;和减少HO-1表达显著抑制了慢病毒,但差别Poldip2成分对这些增加了慢病毒upregulation Poldip2。此外,抑制PI3K-AKT信号明显减弱LPS-induced Poldip2 / Nox4激活。我们的研究表明,Poldip2介导LPS-induced氧化应激和炎症通过互动Nox4 PI3K-AKT监管的信号。针对Poldip2可能是有益的治疗ALI的治疗策略。
1。介绍
脂多糖(LPS),革兰氏阴性细菌的细胞壁的主要成分,开发和发展起着至关重要的作用的急性肺损伤(ALI) (1]。它可以启动生产生物活性分子的细胞(2,3),包括炎性细胞因子和活性氧(ROS)。越来越多的证据表明,氧化应激与阿里的发展(4,5]。过多的活性氧产量了抗氧化防御系统从而增加了炎症过程,最终导致组织损伤,尤其是肺上皮细胞损伤(6]。NADPH氧化酶的酶家族被认为是活性氧的主要来源在各种病理条件下(7),由七个同功酶,包括Nox1-Nox5 DUOX1, DUOX2 [8]。重要的是,NADPH氧化酶4 (Nox4)广泛表达于人类肺上皮细胞(9]。以前,研究表明,有限合伙人NADPH氧化酶激活明显增加,包括Nox4和细胞内ROS生产人类肺上皮细胞(10和阿里的鼠标临床前模型11]。这些观察表明,Nox4-mediated氧化应激和炎症可能会增强LPS刺激和涉及LPS-induced阿里。然而,激活的机制Nox4 Nox4-mediating效应在LPS刺激并不是完全理解。
此外,聚合酶δ相互作用蛋白2 (Poldip2)(也称为聚合酶delta-interacting蛋白质38 (PDIP38)和mitogenin-1)是一种多功能蛋白最初确认为一项有约束力的合作伙伴的DNA聚合酶δp50单元和增殖细胞核抗原(PCNA) [12]。Poldip2广泛表达于人类原发性肺微血管内皮细胞(HPMECs) [13)和肺上皮细胞(14]。除了它的角色在DNA复制和损伤修复12),Poldip2担任伴护蛋白质和参与线粒体功能和形态15,16),细胞外基质合成(17),和退化18),以及细胞周期进展(19]。之前,一项研究表明,Poldip2结合Nox4在酵母2台混合动力试验(20.),它还增加Nox4酶活力,积极调节血管平滑肌细胞和基底ROS生产HPMECs [13,20.]。此外,最近的一项研究表明,减少Poldip2防止有限合伙人induced-acute呼吸窘迫综合征(ARDS)通过抑制线粒体ROS生产在一个小鼠模型(13]。集体,Poldip2是一个关键的蛋白在调节阿里的发展但是Poldip2调节Nox4的表达和酶活性对有限合伙人的NADPH氧化酶类肺上皮细胞值得进一步研究。
本研究的目的是确定潜在的Poldip2特定角色,确定它如何调节Nox4的表达,NADPH氧化酶类的酶活性,Nox4下游对人肺上皮细胞的影响,进一步阐明潜在的分子机制。
2。材料和方法
2.1。试剂和材料
DMEM培养基和1640中从HyClone购买(美国HyClone)和胎牛血清从Gibco购买(美国Gibco)。有限合伙人和LY294002从σ购买(美国Sigma-Aldrich)。里帕裂解缓冲,DAPI兔免疫球蛋白,嘌呤霉素,FITC-conjugated二级抗体购自Beyotime (Beyotime,中国)。主要抗体Poldip2 HO-1, cox - 2, AKT, p-AKT,β肌动蛋白是从Abcam购买(英国Abcam)。主要抗体Nox4买来罗福斯(美国罗福斯)。
2.2。细胞培养
人肺腺癌A549细胞行和人类支气管上皮细胞系Beas-2B从细胞获得银行中国科学院(中国上海)。细胞培养在37°C在湿润的气氛中有5%的公司2在DMEM培养基或1640年中补充10%胎牛血清,100 U /毫升青霉素、链霉素和100毫克/毫升、分别。
2.3。细胞生存能力分析
细胞的生存能力是通过MTT试验来衡量的。细胞接受不同剂量的有限合伙人(0、2.5、5、10、15、20和40μg / mL A549细胞和0,0.25,0.5,1、2、5、10μg / mL Beas-2B细胞)24 h, 10μL MTT的解决方案(5毫克/毫升)被添加到每个在37°C对培养4 h,和100年μL (DMSO溶液加入溶解甲瓒晶体。570纳米波长的吸光度测量的标仪(美国BioTek)。结果表示为吸光度的平均比例在治疗组和对照组。
2.4。西方墨点法
细胞蛋白提取使用里帕裂解缓冲。蛋白质在10% sds - page凝胶电泳和electrotransferred聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)。膜被封锁使用5%脱脂牛奶在室温下2 h和孵化主要抗体12 h在4°C。辣根peroxidase-conjugated二级抗体在37°C添加1 h。在这项研究中,主要抗体Poldip2 (1: 1000), Nox4 (1: 1000), HO-1 (1: 1000), cox - 2(1: 1000),一种蛋白激酶(1:1000),和p-AKT(1: 1000)和使用β肌动蛋白(1:5000)担任内生控制。乐队被发现通过增强化学发光(ECL)检测设备(美国热费希尔科学,巴林顿,IL)。微对控制蛋白质都是标准化的。
2.5。NADPH酶活性测定
NADPH酶活性测定使用商用设备(Genmed科学,上海,中国)根据制造商的协议。短暂,上层清液的细胞溶解产物是孵化与氧化细胞色素c石英试管30°c 3分钟,然后混合氮氧化物衬底(NADPH)和孵化15分钟。吸光度的变化在340 nm监控分光光度计。NADPH由计算细胞色素c还原酶活性估计每分钟。
2.6。Coimmunoprecipitation化验
的内生互动分析,细胞在培养皿中10厘米文化融合为60%,然后处理有限合伙人12 h。细胞裂解和收集后,一夜之间,等量的溶解产物被孵化在4°C 3μ克的主要抗体Poldip2或正常兔免疫球蛋白g Mag琼脂糖(同形像控制)和蛋白质(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。蛋白质绑定到抗体蛋白G珠子和推倒进行免疫印迹分析。
2.7。细胞内活性氧测定
二乙酸生产测定了细胞内ROS dichlorodihydrofluorescein (DCFH-DA) (Beyotime,中国)制造商的指示。简单,细胞治疗与胰蛋白酶,孵化与10μ摩尔在37°C / L DCFH-DA 20分钟,洗和PBS 3次。然后,细胞被冲洗DMEM和分析流式细胞术(BD生物科学,富兰克林湖,新泽西)。
2.8。测定PGE2, TNF -α,il - 1β
酶联免疫吸附试验(ELISA)是用来衡量PGE2的水平,TNF -α和il - 1β在文化上层清液根据制造商的指示。肿瘤坏死因子的水平α和il - 1β确定使用ELISA试剂盒(absin,中国),和PGE2决心使用ELISA试剂盒(CUSABIO生物技术,中国)。
2.9。的差别siRNA-Mediated对这些Nox4
siRNA针对Nox4和负控制核从Hanbio获得生物技术有限公司(上海,中国)。细胞被播种和培养6-well板24 h和30 - 50%融合。细胞转染核使用lipofectamine 2000(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)按照制造商的协议。Nox4 siRNA-transfected细胞和消极控制siRNA-transfected细胞被定义为siNox4 siCont。72 h后,Nox4和转染效率的表达被免疫印迹检测。列出了siNox4序列如下:意义:5 - - - - - -GCAAUAAGCCAGUCACCAUTT-3和反义:5 - - - - - -AUGGUGACUGGCUUAUUGCTT-3 。
2.10。Plasmid-Mediated Upregulation Nox4的
Nox4质粒和空向量是由Hanbio生物技术有限公司(上海,中国)。细胞被播种和培养6-well板24 h和30 - 50%融合。与Nox4细胞转染质粒或空向量lipofectamine 2000年制造商的指示。72 h后,Nox4和转染效率的表达被免疫印迹检测。引物序列如下:转发:5 - - - - - -CAAGCTGTGACCGGCGCCTACGAATTCGCCACCATGGCTGTGTCCTGG-3和反向:5 - - - - - -ACCCCATCGATGGACCGGTCGGGATCCGCTGAAAGACTCTTTATTGT-3 。
2.11。的差别Lentivirus-Mediated对这些Poldip2
慢病毒载体包含Poldip2-specific成分或非特异性成分(负控制)是由Hanbio生物技术有限公司(上海,中国)。细胞被播种和培养6-well板24 h和30 - 50%融合。细胞转染慢病毒载体和孵化24 h,和上层清液交换72 h的新鲜培养基和培养。使用2 Stable-transfected细胞被孤立μg / mL的嘌呤霉素筛选嘌呤霉素耐药基因生产。Poldip2 shRNA-transfected细胞和消极控制shRNA-transfected细胞被定义为shPoldip2 shCont。72 h后,Poldip2和转染效率的表达被西方墨点法评估。列出了shPoldip2序列如下:前链:5 - - - - - -GATCCGGCGCTACTGTATCCGTTTGGAGAATTCAAGAGATTCTCCAAACGGATACAGTAGCGCCTTTTTTG-3和底部链:5 - - - - - -AATTCAAAAAAGGCGCTACTGTATCCGTTTGGAGAATCTCTTGAATTCTCCAAACGGATACAGTAGCGCCG-3 。
2.12。Lentivirus-Mediated Upregulation Poldip2的
慢病毒上调Poldip2粒子和慢病毒移植控制粒子由Hanbio生物技术有限公司(上海,中国)。细胞被播种和培养6-well板块融合24小时获得30 - 50%。慢病毒粒子被添加到井在感染复数(MOI)值50:1和细胞培养。24小时后,培养基代替新鲜的完全培养基,添加2μ嘌呤霉素的g / mL,培养一个额外的72 h。puromycin-resistant细胞被孤立。Poldip2-upregulated细胞,移植细胞被定义为LvPoldip2和LvCont控制。Poldip2和转染效率的表达被西方墨点法评估。引物序列如下:转发:5 - - - - - -AGAGGATCTATTTCCGGTGAATTCGCCACCATGGCAGCCTGTACAGCCC-3和反向:5 - - - - - -GTCACTTAAGCTTGGTACCGAGGATCCCAGTGAAGGCCTGAGGGTGGT-3 。
2.13。免疫荧光分析
细胞被固定在4%多聚甲醛为15分钟,5%挡着山羊血清2 h在室温下然后孵化主要抗体Poldip2和Nox4 4°C。隔夜孵化后,细胞被洗PBS和孵化与异硫氰酸荧光素(FITC)共轭二次抗体。核与DAPI染色。细胞被认为与一个反向LSM880共焦激光扫描显微镜(卡尔蔡司,耶拿,德国),蓝色和绿色通道。
2.14。统计分析
所有数据分析使用SPSS 23.0软件(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。结果表示为 。比较组间使用学生的测定 - - - - - -测试或单向方差分析图基的事后测试紧随其后。 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。有限合伙人的蛋白表达增加Poldip2和Nox4肺上皮细胞以剂量- /时间的方式
我们首先检查LPS刺激的效果在A549和Beas-2B细胞的可行性。细胞暴露于不同剂量的有限合伙人(0-40μg / mL A549细胞和清廉μg / mL Beas-2B细胞)24小时的无血清培养基,MTT还原试验和细胞生存能力评估。作为有限合伙人剂量增加,细胞生存能力有显著降低。如数据所示1(一)和1 (b)有限合伙人对A549细胞,40岁μg / mL显著降低细胞MTT还原,但在20μg / mL或更少,但并没有显示出毒性。Beas-2B细胞,有限合伙人在10μg / mL明显减少细胞MTT还原,但在5μg / mL或更少,但并没有显示出毒性。因此,我们选择用不同剂量的有限合伙人(0-20治疗细胞μ对A549细胞和0 - 5 g / mLμg / mL Beas-2B细胞)12 h在接下来的实验。
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接下来,我们研究确定有限合伙人是否会影响Poldip2的表达和Nox4细胞暴露于不同剂量的有限合伙人(0-20μ对A549细胞和0 - 5 g / mLμg / mL Beas-2B细胞)12 h和蛋白表达被免疫印迹检测。两种上皮细胞,基线的表达Poldip2 Nox4在0μ10 g / mL,达到顶峰μ克/毫升,1μg / mL,分别为(数字1 (c)和1 (d))。然后,Poldip2的蛋白质含量和Nox4监控在不同时期(0-24 h)有限合伙人治疗后10μ克/毫升,1μ分别g / mL。结果表明,有限合伙人Poldip2的表达明显增加,Nox4剂量依赖性的方式和最大水平在10μ克/毫升,1μg / mL,分别为(数字1 (e)和1 (f))。综上所述,在剂量LPS诱导Poldip2和Nox4表达——在A549和Beas-2B细胞/时间的方式。
4所示。与Nox4 Poldip2免疫沉淀反应应对有限合伙人
Coimmunoprecipitation试验是用来证实Poldip2之间的交互和Nox4 LPS刺激。使用特定于Nox4抗体,我们观察到,在LPS刺激与Nox4 Poldip2有效免疫沉淀反应。相应的抗体识别两个蛋白质与预期大小乐队Poldip2 (~ 37 kDa)和Nox4 (~ 67 kDa)原油lysate-positive控制(输入)(图2)。
(一)
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4.1。Downregulation Nox4抑制LPS-Induced氧化应激和炎症,但没有影响Poldip2表达式
进一步调查的效果上差别Nox4对这些LPS-induced氧化应激和炎症,我们的差别表现对这些Nox4 A549和Beas-2B细胞。细胞转染核反对Nox4 (siNox4)下调Nox4表达式并与控制核向量没有构造(siCont)(数据3(一个)和3 (b))。转染细胞(siCont和siNox4)治疗与PBS或有限合伙人12 h。HO-1和cox - 2,作为下游Nox4的目标,同时检测,结果显示的差别,对这些Nox4显著增强HO-1表达式但抑制cox - 2的表达(数据3 (c)和3 (d))。Nox4显著地抑制酶活性的差别,对这些基因的NADPH氧化酶类(数据3 (h)和3 (j)),以及ROS生成(数字3 (k)和3(左)LPS刺激下)。
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此外,PGE2, cox - 2的下游效应,和炎性细胞因子(TNF -α和il - 1βLPS刺激后)也进行了分析。Nox4明显减少LPS-induced差别结果表明,对这些产生PGE2(数字3(米)和3 (o))和肿瘤坏死因子的释放α(数据3 (n)和3 (p))和il - 1β(数据3(问)和3(右))。的差别,对这些Nox4没有影响Poldip2表达式(数字3 (c)和3 (d)),这表明Nox4充当Poldip2下游可能调解Poldip2的效果。免疫荧光分析(数据3 (e)- - - - - -3 (g)和3(我))与免疫印迹结果的数据一致3 (c)和3 (d)。
4.2。Upregulation Nox4增加氧化应激和炎症,但没有影响Poldip2表达式
此外,探索Poldip2和Nox4的相互依存关系和因果关系,我们执行upregulation Nox4通过质粒转染的存在与否shPoldip2 A549和Beas-2B细胞。A549和Nox4 Beas-2B细胞转染质粒或一个空向量72 h和结果表明,Nox4质粒的转染显著调节Nox4蛋白水平与空向量(数据进行比较4(一)和4 (b))。然后,转染细胞(shCont和shPoldip2) cotransfected Nox4质粒或空向量72 h。相比,我们的数据表明,与细胞转染空载体,Nox4 upregulation明显减毒HO-1表达式但增强型cox - 2表达(数据4 (c)和4(d)),而它对Poldip2没有明显的影响。因此,ROS的产生,PGE2, TNF -α,il - 1β也增加了Nox4 upregulation(数据4 (e)- - - - - -4(左))。总的来说,我们的研究证实,Poldip2徒上游Nox4在肺上皮细胞,但Poldip2功能调节NADPH酶活性是否需要进一步的研究。
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4.3。Poldip2 LPS-Induced氧化应激和炎症的影响
进一步调查Poldip2 LPS-induced氧化应激和炎症的作用,我们用慢病毒转染细胞A549和Beas-2B窝藏短发卡RNA(成分)对Poldip2 (shPoldip2)下调Poldip2表达式并与控制没有构建慢病毒载体(shCont)(数据5(一个)和5 (b))。转染细胞(shCont和shPoldip2)治疗与PBS或有限合伙人12 h。的差别我们发现对这些Poldip2通过shPoldip2明显抑制LPS-induced增加Nox4(数据的表达5 (c)和5 (d)NADPH氧化酶类),酶活性(数字5 (h)和5 (j)),和ROS生成(数字5 (k)和5(左))。免疫荧光分析(数据5 (e)- - - - - -5 (g)和5(我))与免疫印迹结果的数据一致5 (c)和5 (d)。Poldip2导致显著增强的HO-1差别与此同时,对这些基因的表达但减毒cox - 2表达(数字5 (c)和5 (d)LPS刺激下)。因此,生产PGE2, TNF -α,il - 1β(差别也减少了Poldip2对这些数据吗5(米)- - - - - -5(右))。
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相反,我们转染lentivirus-upregulating Poldip2粒子移植Poldip2表达式。结果表明,Poldip2 upregulation (LvPoldip2)引起的显著增加Poldip2蛋白质含量与控制(LvCont)(数据进行比较6(一)和6 (b))。然后,转染细胞(LvCont和LvPoldip2)被视为上面提到的。我们还发现,upregulation Poldip2夸大LPS-induced增加Nox4(数据的表达6 (c)和6 (d)NADPH氧化酶类),酶活性(数字6 (h)和6 (j)),和ROS生成(数字6 (k)和6(左))。免疫荧光分析(数据6 (e)- - - - - -6 (g)和6(我))与免疫印迹结果的数据一致6 (c)和6 (d)。同时,upregulation Poldip2导致显著的减毒HO-1表达式但增强型cox - 2表达(数据6 (c)和6 (d)LPS刺激下)。同样,Poldip2 upregulation大大夸大了LPS-induced PGE2, TNF -α,il - 1β生产(数据6 (m)- - - - - -6(右))。总的来说,这些数据表明Poldip2可能负责LPS-induced通过Nox4激活介导的氧化应激和炎症。
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4.4。角色Poldip2 / Nox4-Mediating氧化应激和炎症是依赖PI3K-AKT信号
如前所述,Poldip2与Nox4 LPS刺激和充当Nox4的重要调节器。PI3K-AKT信号已经证明增加NADPH氧化酶类的表达通过上调其在哺乳动物细胞的调节亚基(21]。这里,我们进一步探讨角色的PI3K-AKT信号激活Poldip2 / Nox4有限合伙人和细胞用PI3K抑制剂预处理LY294002 (10μmol / L,最终浓度、溶解在DMSO) 1 h与LPS后跟postincubation 12 h。如数据所示7(一)和7 (b),我们确定PI3K-AKT的激活信号通过分析关键效应的磷酸化,p-AKT通过免疫印迹。LPS刺激p-AKT表达明显增加,部分由预处理与LY294002镇压。重要的是,结果表明,抑制PI3K导致减少LPS-induced Poldip2, Nox4, cox - 2,以及减少HO-1表达式。免疫荧光分析(数据7 (c)- - - - - -7 (h))与免疫印迹结果的数据一致7(一)和7 (b)。集体,上面这些数据表明PI3K-AKT信号所需的LPS-mediated Poldip2 / Nox4激活。
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5。讨论
在这项研究中,我们的数据表明LPS诱导氧化应激和炎症肺上皮细胞通过增加Nox4和cox - 2的表达和NADPH酶活性和大幅增加活性氧的生产,PGE2, TNF -α,il - 1β和减少HO-1表达式。值得注意的是,Poldip2,小说Nox4调节器,与Nox4和作为一个上游的监管机构Nox4 LPS-stimulated肺上皮细胞。或upregulation Poldip2差别,对这些,我们证实Nox4需要Poldip2 ROS生成和随后的炎症。综上所述,我们的研究结果显示,Poldip2介导氧化应激和炎症与Nox4通过互动等效果Poldip2 / Nox4受PI3K-AKT LPS-stimulated肺上皮细胞的信号。我们的研究结果表明,Poldip2可能是一个潜在的治疗治疗ALI的候选人。
众所周知,LPS刺激可以产生过多的活性氧生成,夸大了一系列呼吸道炎症性疾病,如慢性阻塞性肺疾病(COPD),哮喘,和阿里22]。NADPH氧化酶是ROS的生成的一个重要来源23]。有别于其他成员的NADPH氧化酶,Nox4是活跃起来从而发挥了有害的作用在炎性疾病的发展24,25]。A549和Beas-2B细胞都是常用的探讨LPS刺激下肺部炎症的细胞机制,包括氧化应激和自噬(26,27]。,我们的研究结果清楚表明,有限合伙人NOX4表达式在肺上皮细胞的显著增加剂量- /时间的举止,平行于Poldip2的表达。多年来,Poldip2正成为一个重要的中介在炎性疾病,包括sepsis-associated脑病(28]和ARDS [13]。先前的研究已经表明,杂合的删除Poldip2或Nox4击倒明显减少过氧化物生产和改善生存在ALI / ARDS小鼠模型(13,23]。所有这些结果显示一致的可能性表达Poldip2和Nox4为阿里的发展至关重要。
之前的数据显示,Poldip2结合Nox4和显示,血管平滑肌功能协会(20.];符合这一点,我们发现了一个相关性Poldip2和Nox4 LPS-induced的规定在肺上皮细胞氧化应激和炎症。我们进一步探讨如何Poldip2和Nox4用siRNA互动或upregulation针对Nox4质粒。我们的数据表明,Nox4作为下游Poldip2,所需Poldip2应对有限合伙人的效果。符合我们发现,Datla和他的同事们表明Poldip2控制血管平滑肌细胞(VSMC)迁移通过调节焦点粘连营业额和牵引力的生产通过激活Nox4 / RhoA FAK信号(29日]。然而,正如我们所知,下游的目标Nox4与阿里的发展没有很好理解。HO-1诱导抗氧化酶,被认为是主要的蛋白防止LPS-induced阿里(30.]。促炎的中介,与此同时,cox - 2高表达在肺泡上皮细胞及其表达有利于穷人的结果阿里(31日]。据报道,LPS-induced HO-1和cox - 2表达显著减弱,NADPH氧化酶抑制剂(32,33]。的差别与这些研究一致,我们发现对这些Nox4使用核明显抑制cox - 2表达但增强HO-1 LPS刺激下表达。
NADPH氧化酶酶是一种复杂的系统,催化亚基组成的跨膜蛋白和胞质调节单元;它变得活跃后监管子单元把质膜和酶催化亚基相互作用形成的功能(34]。然而,Nox4激活的机制在应对有限合伙人尚未完全了解。如前所述,Poldip2作为上游Nox4调节器和行动与Nox4在LPS刺激。和差别后,重要的是lentivirus-mediated Poldip2对这些挑战有限合伙人在肺上皮细胞中,我们发现Nox4的表达,酶活性的NADPH氧化酶类,和生产的ROS明显抑制,这是伴随着降低cox - 2和增加HO-1表达式,表明Poldip2可能函数类似于其他NADPH氧化酶胞质监管子单元。的确,upregulation Poldip2显著增加LPS-stimulated肺上皮细胞氧化应激和炎症。与我们的研究结果相一致的是,一项研究也支持对言论Nox4 Poldip2的积极影响。例如,upregulation Poldip2使用腺病毒导致Nox4显著增加酶活性和基底ROS生产,而由差别Poldip2对这些核显著降低ROS生产VSMCs [20.]。因此可能抑制Poldip2表达式可能代表一个新颖的机制限制了氧化应激和炎症在LPS-induced阿里。
此外,PI3K-AKT信号被认为是哺乳动物细胞的关键信号通路调节细胞生长、增殖,新陈代谢,和能动性35]。越来越多的证据表明,PI3K-AKT信号是一个主要的途径参与阿里的发展(36,37]。在我们的研究中,我们探讨了预处理与LY294002显著抑制Poldip2 LPS-induced增加,Nox4, cox - 2和减少HO-1在肺上皮细胞,表明PI3K-AKT Poldip2上游信号作为监管机构。我们推测PI3K-AKT信号可能是参与调节Poldip2表达式,并最终影响Nox4的活动。然而,精确的机制参与PI3K-AKT信号调节Poldip2表达还不清楚,需要进一步调查。
我们的研究表明,Poldip2参与氧化应激和炎症通过与Nox4交互和受PI3K-AKT信号,这可能有助于更好的理解似是而非的急性肺损伤机制。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
概念是由范Guanghe公司和Yueguo王;正式的分析是由Yueguo Wang Youhui涂,徐吴和张署名;调查是由Yueguo王;方法是由Yueguo王与振兴丁;项目管理是由吴惠美和范Guanghe公司;写的初稿完成Yueguo王与振兴丁;审查和编辑的写作是由Yueguo王霜,吉龙沈,李张,惠美吴,Guanghe公司范。Yueguo王与振兴叮了同样的工作。
确认
我们想真诚地感谢丹丹藏马和方科研中心的安徽医科大学的宝贵的帮助在我们的实验中。这项工作得到了国家自然科学基金(81870036,81870036)和安徽省发展规划(1804 h08020237)。