防毒性活动桂花雀族和菊花莫瑞菊花提取物在肝细胞和肾小球系膜细胞中的作用

摘要

过量的游离脂肪酸(FFAs)流入非脂肪组织，如肝脏和肾脏，诱导脂肪毒性，导致肝脏脂肪变性和肾功能障碍。本研究的目的是探讨甲醇花提取物的保护作用桂花雀族()和菊花莫瑞菊（cm）对肝细胞（人hepg2细胞）和肾肾小球乳细胞（小鼠SV40-MES13细胞）的FFA诱导的脂毒性。结果表明，通过部分抑制甾醇调节元素结合蛋白-1C（Srebp-1c）和甘油-3-磷酸酰基转移酶（GPAT）的基因表达，显着抑制了FFA诱导的细胞内三酰基甘油积累。两种提取物抑制了FFA刺激的HEPG2细胞产生的反应性氧物质（ROS）。um和cm也抑制了白细胞介素-（IL-）1的mRNA表达1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α，转化生长因子- (TGF-)β用脂多糖处理的THP-1单核细胞培养液处理HepG2细胞。此外，OF和CM能有效抑制油酸诱导的细胞脂质积累，TGF-β分泌物，纤连蛋白在梭菌细胞中的过表达。总之，通过预防FFA诱导的乳腺细胞外基质形成，通过抑制肝脂肪载和炎症和肾脏保护来具有肝保护活性。

1.介绍

脂肪毒性通常被定义为有害脂质浓度增加，导致细胞功能障碍和组织功能破坏。已知不同种类的游离脂肪酸会在多种细胞中引发毒性作用和炎症[1］．通过触发炎症途径的直接效应和通过与内毒素相关的肠道微生物的改变的间接影响进行脂肪毒性，可以发生脂毒性。2］．脂肪毒性在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和肾脏疾病的发病机制中起着关键作用[3.那4.］．非酒精性脂肪肝炎（纳什），可能对肝硬化的先进形式的NAFLD，是由脂质介导的毒性和炎症反应引起的[3.］．NAFLD中的细胞内脂质积累来自增加的脂肪酸摄取，增加的Novo脂肪生成，降低脂肪酸氧化，然后对三酰基甘油（Tg）合成的酯化。脂肪生成主要在转录水平下控制。甾醇调节元素结合蛋白1C（Srebp-1c）和碳水化合物反应元素结合蛋白（Chrebp）被描述为NAFLD在Novo脂肪生成增加的主要转录因子[5.］．甘油-3-磷酸酰基转移酶(Glycerol-3-phosphate acyltransferase, GPAT)催化甘油-3-磷酸与脂肪酸酯化生成溶血磷脂酸，是合成TG的限速酶，其基因表达被SREBP-1c激活[5.］．

高水平的血脂可导致肾脂质积聚、活性氧(ROS)的产生、肾小球膜扩张和肾小球硬化的发生[4.］．许多研究表明转化生长因子β（TGF-β)在肾纤维化发病机制中起核心作用，是早期肾纤维化的重要标志。TGF -β通过刺激成纤维细胞增殖和上皮 - 间充质转换（EMT）来施加抗衰弱活性。增加了tgf-β通过刺激系膜细胞产生I型、III型和IV型胶原，刺激肾小球ECM积累;层粘连蛋白;纤维连接蛋白，通过阻断基质降解[6.］．

鲜花桂花雀族和菊花莫瑞菊在台湾常被用作民间药物及茶、饮料及食物的添加剂。o .桂花花(在中国也被称为瓜伊法)已被用于缓解疼痛，咳嗽，胃痛，腹泻和肝炎在传统中医(TCM)。从中分离出各种化合物o .桂花花，包括黄酮类化合物，酚酸，乙酸酪酯，茶花素，川芎苷和毛蕊花苷[7.-9.］．o .桂花花提取物及其生物活性成分显示出抗炎，抗氧化和神经保护活性，减轻糖尿病病理条件并减弱乙酰氨基酚诱导的肝毒性[9.-11］．菊花莫瑞菊鲜花（又称ju-hua中文）已在中药中使用，作为一种常见的寒冷，昏暗的视力，头晕和皮肤瘙痒的药物。这朵花也被广泛用作食品补充剂或凉茶，并且许多消费者被认为是健康的食物[12］．有几种品种C. Morifolium.台湾草药市场提供的花卉;“台湾恒鞠”通常用作凉茶或饮料。C. Morifolium.花朵含有许多酚类化合物，例如黄酮类化合物，咖啡酸衍生物，羟基氨基酰基喹啉和三萜类化合物[12］．前期研究表明，黄芩甲醇提取物中含有绿原酸、槲皮素、杨梅素和咖啡酸等选择性酚类物质C. Morifolium.和o .桂花花朵 [7.］．C. Morifolium.花提取物及其成分还具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗hiv、抗诱变、抗癌、抗衰老等多种生物学特性[12那13］．此外,polyphenol-richC. Morifolium.通过口服含有10%胆固醇、20%猪油和0.2%丙基硫氧嘧啶的乳剂，提取改善小鼠高脂/药物性脂肪肝[14］．已知丙基硫脲引起肝损伤和急性肝衰竭[15］．

尽管许多已知的生物功能的花提取物o .桂花和C. Morifolium.，关于它们对脂肪酸诱导的肝和肾脂肪毒性的影响的信息有限。在本研究中，我们检测了提取物的作用o .桂花和C. Morifolium.研究结果表明，脂肪毒性在ffa超载的肝细胞(人HepG2细胞)和肾小球系膜细胞(小鼠SV40-Mes13细胞)中的作用。

2。材料和方法

２.１.材料

HepG2细胞(BCRC RM60025;人肝母细胞瘤细胞系)、THP-1细胞(BCRC 60430;人单核细胞系)和系膜SV40-Mes13细胞(BCRC 60366;小鼠肾小球系膜细胞系)，来自台湾新竹生物资源收集研究中心。HepG2细胞在添加10%热灭活胎牛血清(FBS, Gibco)、1%非必需氨基酸(Gibco)、1% l -谷氨酰胺(Gibco)和1%青霉素/链霉素(Gibco)的DMEM/高糖培养基中培养。单核细胞THP-1细胞在含有10%热灭活胎牛血清(Gibco)和1%青霉素/链霉素(Gibco)的RPMI 1640 (Gibco)中维持。系膜细胞培养在DMEM/低糖/F12培养基(Gibco)中添加5%胎牛血清(Gibco)和1%青霉素/链霉素(Gibco)。这些细胞系是在37°C、5% CO的湿化气氛中培养的₂。

使用磷酸盐缓冲的盐水（PBS，pH7.2）制备BSA（Sigma-Aldrich，St.Louis，Mo，USA）溶液（10％）。所有游离脂肪酸（FFA）购自Sigma-Aldrich。制备FFA-牛血清白蛋白（FFA / BSA）复合溶液如前所述[16］．FFA / BSA或油酸（OA）/ BSA络合物溶液通过0.22无菌过滤 μ.m无菌过滤器(Millipore s.a.s.， Molsheim，法国)，然后在−20°C保存直到使用。

2.2。花提取物的制备

鲜花桂花雀族和菊花莫瑞菊(台湾杭菊)分别采自新北市定、苗栗通罗。代金券标本保存于国立台湾师范大学人类发展与家庭研究系。该植物的代金券标本已由蔡宝荣博士鉴定。风干的花被磨成粉末，用10卷甲醇提取两次。经真空蒸发浓缩过滤，45℃，得到甲醇花提取物o .桂花（甲醇花提取物C. Morifolium.(厘米)。有机肥和有机肥的产量分别为25和24%(以干燥和地面植物材料的重量计算)。将OF和CM溶于二甲基亚砜(DMSO;(RDH Chemical Co.， Spring Valley, CA, USA)，以200mg /mL原液进行序次实验。

２.３.of和CM对HepG2细胞脂质沉积和炎症反应的影响

2.3.1。ffa处理HepG2细胞及细胞活力的测定

为了模拟体内高脂饮食条件下的脂质暴露，我们使用FFA混合物在HepG2细胞中诱导脂质毒性，正如Lin等人先前所报道的[17］．在含有1％BSA的培养基中制备由棕榈酸，油酸，亚麻酸，亚油酸和花生酸（以40：25：15：15：5）的比例组成的50mM FFA混合物的储备溶液。16那17］．HepG2细胞(5 × 10^4.细胞/孔）在96孔培养板中培养，以后用各种浓度或cm处理的24小时进行指示的时间。使用3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴（MTT）测定测定细胞活力。MTT解决方案（Sigma-Aldrich; 100 μ.L, 0.5 mg/mL)， 37℃孵育3 h。用500取代含mtt的培养基终止反应μ.L的DMSO和福马赞盐在室温下轻轻摇晃约5分钟溶解。每孔的光密度(OD)在550 nm处用微孔板阅读器(Tecan, Männedorf，瑞士)测量。每个试验在3个重复的井中完成，每个试验重复3次。

2.3.2。HepG2细胞内脂质含量的测定

HepG2细胞(5 × 10^4.细胞/孔）在96孔培养板中培养24小时。然后在1mM FFAS / BSA存在下将细胞孵育另外24小时，并在表明浓度和CM或0.1％DMSO（作为载体细胞）。单独用1％BSA温育控制细胞。通过油红O染色评价总细胞内脂质含量。简而言之，将细胞在PBS中的4％多聚甲醛中固定在1小时，用油红O（Sigma-Aldrich）在室温下染色1小时，然后用DDH冲洗₂几次去除过量的污渍。完全洗涤和干燥后，100 μ.将L的异丙醇加入每个孔中，将混合物温育10分钟，然后温和振动释放油红色O.然后将萃取溶液转移到另外的96孔板中，通过微孔板将OD的OD转移到另外的96孔板中。读者（Biotek，Nevada，USA）。

2.3.3。细胞胆固醇和三酰基甘油含量的测定

hepg2细胞（1×10^6.细胞/孔)在6孔培养板中培养，24小时后单独用1mm FFAs/BSA(作为载体细胞)或与不同浓度的of或CM联合处理24小时。通过添加裂解缓冲液收集每个孔的细胞，并用Lowry蛋白分析(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)检测细胞蛋白。用比色法试剂盒(Randox, Crumlin, Antrim, UK)测定全细胞裂解液的总胆固醇(TC)和总三酰基甘油(TG)含量。计算其在HepG2细胞中的质量，并将其归一化为细胞总蛋白含量。

2.3.4。对FFA / BSA处理HepG2细胞中SreBP-1C和GPAT mRNA水平的影响

hepg2细胞（1×10^6.细胞/孔)培养在6孔培养板上，24小时后单独用FFAs/BSA(作为载体细胞)或与不同浓度的of和CM联合处理。孵育24 h后，收集HepG2细胞，用TRizol试剂(Invitrogen, Carlsbad, CA)提取细胞总RNA，从2中提取互补DNA (cDNA)μ.g总RNA，用oligo (dT)引物和1μ.逆转录酶L (Promega, Madison, WI, USA)。在icycle iQ实时检测系统(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)中使用iQ™SYBR Green Supermix (Bio-Rad)进行实时pcr。采用iQ5光学系统软件(vers)分析PCR产物的相对数量。２.１.如表所示1在本研究中使用了SreBP-1C和GPAT的引物序列。将每个基因的每个样品的信使RNA（mRNA）水平标准化为甘氨醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）mRNA的样品。折叠表达定义为相对于对照细胞的折叠增加。

2.3.5。活性氧产生量的测定

探针2,7-二氯流毒素（H₂DCF-DA;Sigma-Aldrich)用于监测细胞内ROS的生成。HepG2细胞(5 × 10^4.细胞/孔）在DMEM培养基中的96孔板中接种24小时。然后在1mM FFAS / BSA存在下将细胞孵育另外24小时，用指示的浓度或CM或0.1％DMSO（作为载体细胞）孵育。在不存在1mM FFAS / BSA的情况下，将控制细胞与1％BSA一起温育。孵育后，用PBS洗涤细胞并与10℃温育 μ.M.₂DCF-DA, 37°C, 2小时。使用Synergy™HT多模式微孔板阅读器(BioTek, Nevada, USA)在475 nm激发和525 nm发射下监测氧化荧光衍生物二氯荧光素(DCF)的形成。所有的手术都是在黑暗中进行的。

2.3.6。条件培养液处理HepG2细胞促炎细胞因子mRNA水平的测定

为了制备条件培养基，用0.5处理THP-1细胞 μ.G / ml脂多糖（LPS）（Sigma-Aldrich）24小时;收集培养基并离心以除去细胞碎片。衍生自THP-1单核细胞的培养上清液称为THP-1 / LPS /条件培养基（TLPS / CM）并在-20℃下储存直至使用。最初将HepG2细胞保持在DMEM中，具有10％FBS。然后逐渐增加RPMI 1640培养基以替代DMEM，并且在实现汇合时常规传代细胞。然后，在补充有10％FBS的RPMI 1640培养基中生长HepG2细胞用于随后的实验。hepg2细胞（1×10^6.细胞/孔)在6cm培养皿中接种无血清RPMI 1640培养基。HepG2细胞在RPMI 1640培养基中单独培养(作为对照细胞)，50% TLPS/CM单独培养(作为载体细胞)，与400共培养μ.在50％TLPS / cm存在下，G / mL或CM的存在。孵育48小时后，收集HepG2细胞，并使用Trizol试剂（Invitrogen，Carlsbad，Ca）从细胞中提取总RNA，并且互补DNA（cDNA）产生2 μ.g总RNA，用oligo (dT)引物和1μ.逆转录酶L (Promega, Madison, WI, USA)。本研究使用引物序列（表1）.如上所述进行实时PCR分析。

2.4。对肾肾小球髓质细胞肾肾小球细胞油酸诱导脂毒性的影响

2.4.1。oa处理系膜SV40-Mes13细胞及细胞活力测定

Mishra和Simonson [18]发现治疗200 μ.M油eate/ BSA诱导乳腺细胞中的肌纤维细胞样表型，这是对肾纤维化的含义。因此，我们使用了相同的方法来检查和厘米的可能的肾脏反应性质。还制备50 mm OA / BSA的储备溶液如前所述[16］．

系膜SV40-Mes13细胞(1 × 10^4.细胞/孔)在96孔培养皿中培养24小时，然后在无fbs培养基中停止生长24小时。系膜细胞在含200的DMEM/F12培养基中培养μ.M oA / BSA并配备各种浓度的或厘米（50,100和200 μ.g / ml）另外48小时。载液细胞在含OA/BSA的0.1% DMSO中孵育。单独用1％BSA温育控制细胞。根据制造商的协议，由Alamar Blue Assay（Invitrogen，Carlsbad，CA）确定细胞活力。

2.4.2。系膜细胞内脂质含量测定

系膜SV40-Mes13细胞(3 × 10^5.细胞/孔)在6孔培养皿中培养24小时，然后在无fbs培养基中停止生长24小时。用OA/BSA处理细胞(200μ.m）单独或与不同浓度的或12小时组合。如上所述，还通过油红O染色评价乳房细胞的细胞内脂质含量。

2.4.3。梭菌细胞中细胞胆固醇和三酰基甘油含量的测定

系膜SV40-Mes13细胞(3 × 10^5.细胞/孔）在6孔板中接种24小时，然后在无纺布培养基中生长24小时。用OA/BSA处理细胞(200μ.M)单独或与不同浓度的of和CM联合作用12 h。收集全细胞裂解液。用上述方法测定系膜细胞中TC和TG的含量。

2.4.4。TGF-蛋白水平的测定β和纤连蛋白

在3×10上播种髓鞘细胞^4.细胞/孔在24孔板中，DMEM/F12培养基中加入5%胎牛血清。治疗前用血清剥夺法使皮下系膜细胞静息24 h。然后用OA/BSA (200μ.m）单独或与不同浓度的或厘米组合6小时孵育（用于测定TGF-β）和24小时孵育（用于测定纤连蛋白）。收集无细胞上清液，浓度的TGF-β上清中纤维连接蛋白用TGF-定量β酶联免疫吸附测定试剂盒(Bender MedSystems GmbH, Vienna, Austria)和纤维连接蛋白酶联免疫吸附测定试剂盒(Assaypro, Winfield, MO, USA)。

2.4.5。免疫荧光染色

系膜SV40-Mes13细胞(2 × 10^4.将细胞/孔）接种到8孔Lab-Tek II室载玻片（Nunc，Rochester，NY）上。血清饥饿后，用OA / BSA处理细胞（200 μ.M)单独或与200μ.g/mL of或CM。孵育24 h后，用冷PBS洗涤系膜细胞，用丙酮/甲醇(1/1;v/v），然后染色。1小时后，用0.1％Triton X-100（PBST）的PBS中3％BSA封闭，将细胞与一抗抗体（兔抗小鼠纤连蛋白抗体，Epitomics，Ca，USA）一起孵育过夜，用PBS洗涤，并与Dylight 488缀合的二抗（Jackson Immunolesearch，West Grove，Pa，USA）孵育2小时。将载玻片用87％甘油安装并使用Deltavision®核心活细胞显微镜（Applied Precision Inc.，WA，USA）成像。

2.4.6。定量RT-PCR分析纤维连接蛋白mRNA水平

系膜SV40-Mes13细胞(1 × 10^6.将细胞/孔）在6cm培养中接种在6厘米的培养皿中。血清饥饿后，用OA / BSA处理细胞（200 μ.m）单独或与各种浓度或厘米组合。孵育24小时后，将细胞在三唑试剂（Invitrogen）中裂解，分离出总RNA。然后，如前所述，通过RT-PCR分析RNA。用于纤连蛋白的上游和下游PCR引物设计为5-gct tca TGC CGC tag atg t-3和5-gtg tgg att gac ctt ggt aga g-3 那分别。在这个实验中，基因β选取-actin作为参考。上游和下游PCR引物的序列β肌动蛋白5-gga CTC CTA TGT GGG TGA CG-3和5-ctt ctc cat gtc gtc cca gt-3 那分别。这些引物扩增了一个99 bp的纤连蛋白cDNA片段和一个102 bp的纤连蛋白cDNA片段β肌动蛋白cDNA,分别。纤维连接蛋白mRNA水平归一化为β-Actin mRNA。折叠表达定义为相对于对照细胞的折叠增加。

2.5。统计分析

所有数据都显示为平均值±标准偏差（SD）。使用SPSS 23.0统计包（芝加哥，IL，USA）进行统计分析。学生t- 最低或单向ANOVA和DUNCHAN的多个比较测试用于比较组差异。一种<0.05的值被认为是统计学意义。

3.结果

３．１．of和CM对FFA/ bsa处理的HepG2细胞脂质积累的抑制作用

一种研究肝脏脂肪变性的细胞肝模型体外已通过FFAs处理人HepG2细胞建立。在这里，我们使用了Lin等人所描述的饱和和不饱和脂肪酸的不同比例的混合物[17目的:探讨中药复方莪术的抗脂毒性作用。为了确定of或CM对HepG2细胞是否具有明显的毒性作用，我们测定了不同浓度of或CM在FFAs/BSA (1mm)存在下对HepG2细胞的细胞活力。结果表明，处理24 h后，处理浓度为200μ.与对照组细胞相比，g/mL没有明显引起细胞死亡(图1（a））.因此，25和100的浓度 μ.在随后的实验中使用G / ml和CM。

如图所示1（b），CM和CM在HepG2细胞中减弱FFA / BSA诱导的细胞内脂质沉积。接下来，我们研究了两种提取物是否抑制了TG和胆固醇的细胞内积累。和CM治疗显着降低了FFA / BSA诱导的细胞三酰基甘油累积（图1（c））.治疗(100μ.g / ml）显着降低了胆固醇含量，而CM治疗的减少没有达到统计学意义（图1 (d)）.

由于这两种提取物都具有明显的抑制脂肪积累的作用，我们试图在脂肪生成相关基因中找到of和CM的分子靶点。如图所示2，与单独的载体处理相比，of或CM处理显著抑制SREBP-1c和GPAT的mRNA表达。

３．２．of和CM对FFA/ bsa诱导HepG2细胞产生ROS的抑制作用

过量的ROS积累在各种脂毒性障碍中起着致病作用。在治疗24小时后，通过DCF荧光测量的载体细胞显示ROS积累的显着增加，同时用或厘米（25和100，HepG2细胞的辛酸 μ.g/mL)的结果表明，两种提取物的抗脂毒作用也与其抗氧化性能有关(图)3.）.

３．３．莪术和莪术对条件培养基诱导的HepG2细胞促炎细胞因子表达的抑制作用

除了肝细胞内甘油三酯的积累外，慢性肝炎症也与NAFLD的发病机制密切相关。由于活化的单核细胞/巨噬细胞释放多种促炎介质，导致炎症的诱导。本研究采用lps刺激的THP-1单核细胞(TLPS/CM)条件培养基诱导HepG2细胞炎症反应。TLPS/CM处理，TLPS/CM与of或CM共处理(200和400)μ.G / ml）没有显着影响对照细胞的细胞活力（图4（a））.所以浓度是400μ.G / mL用于随后的实验中检查两种提取物的抗炎活性。为了确定对促炎细胞因子的mRNA表达的影响和cm的效果，在TLPS / cm存在下用两种提取物处理HEPG2细胞。如图所示4（b）那4（c）那4（d）那4 (e)， 和4 (f)，编码促炎细胞因子的基因的mRNA表达TNF-α，IL-6，IL-8，IL-1β, TGF -βTLPS / CM治疗后显着增加。OF或CM治疗降低了这些炎性细胞因子的mRNA表达。

3．4．OF和CM降低OA/ bsa处理的系膜细胞中胆固醇和三酰基甘油的含量

评估Mesangial细胞上的细胞毒性，表明在50,100或200的浓度下提取物 μ.g / ml没有影响细胞活力（图5（a））.因此，这两种提取物的浓度被用于进一步的研究。如图所示5 (b)，浓度为100和200的浓度 μ.g/mL可显著降低OA/ bsa诱导的系膜细胞内脂质沉积。此外，对(50,100和200)μ.g/mL)显著降低TG和胆固醇含量，而CM对TG和胆固醇的积累也有显著的抑制作用，但仅在200℃时μ.g / ml和程度越来越少（图5 (c)和5 (d)）.

3.5。对TGF的影响和CM的效果β和纤连蛋白水平在OA / BSA处理的乳房细胞中

鉴于TGF的已知重要性 -β在肾小球硬化系膜细胞诱导基质生成的实验中，我们检测了of和CM对OA/ bsa诱导的TGF-的抑制作用β分泌。如图所示6(一)，两种提取物均能明显降低TGF-β的水平。免疫荧光染色显示OA/ bsa处理的系膜细胞中纤维连接蛋白的存在增加。用of或CM处理系膜细胞(200μ.g/mL)抑制了纤维连接蛋白水平(图6 (b)）.因此，评估了提取物对纤连蛋白水平的影响。如图所示6 (c)， OA/BSA处理系膜细胞时，上清中纤维连接蛋白水平显著升高。与免疫荧光染色结果一致，两种提取物都能减少OA/BSA诱导的纤维连接蛋白的分泌(图)6 (c)）.接下来，我们观察到，与单独治疗OA相比，与OF或CM联合治疗导致纤维连接蛋白mRNA水平显著降低(图)6 (d)）.这些数据表明，两种提取物均能抑制油酸诱导的系膜细胞活化。

4。讨论

与先前的研究一致[17， 1 mM FFAs处理可引起脂质积聚，但对HepG2细胞无细胞毒性(图1）.Lee等人。[19据报道，甲醇提取物C. Morifolium.花显著抑制3T3-L1脂肪细胞分化过程中的脂质积累。在本研究中，我们观察到，OF和CM对ffa处理的HepG2细胞的脂质积累有抑制作用(图)1（b）那1（c）， 和1 (d)）.接下来我们研究了OF和CM是否可以通过SREBP-1c和GPAT的转录调控来影响脂质代谢。SREBP-1c是一种脂肪生成转录因子，上调乙酰辅酶a羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FAS)，催化新生脂肪酸合成，导致肝脏脂肪变性[20.］．GPAT催化甘油脂合成的第一步和限速步骤。有助于TG的生物合成和脂滴的形成[21］．在ffa过载的HepG2细胞中，OF和CM均下调SREBP-1c和GPAT基因表达(图)2）.Cui等人。[14据报道，富含多酚C. Morifolium.该提取物通过降低高脂/丙基硫氧嘧啶喂养小鼠中SREBP-1c及其靶基因FAS的表达来预防脂肪肝。因此，结果提示，of和CM的降脂作用可能部分是通过下调SREBP-1c和GPAT基因表达介导的。值得注意的是，尽管OF或CM处理导致SREBP-1c在转录水平显著下调(图)2(一个)），还需要进一步研究来研究是否两种提取物调节无活性内质网膜结合的SrebP-1C前体的蛋白水解加工，得到其转录活性的N-末端形式。

粗甲醇或乙醇提取物o .桂花鲜花施加抗氧化活性体外[7.那22］．75％的乙醇提取物o .桂花花朵显示抗氧化活性通过减少乙酰氨基酚喂食小鼠的肝脂质过氧化[11］．总黄酮C. Morifolium.逆转脂质过氧化并保护肝肾免受小鼠铅诱导的氧化损伤[23］．与之前的研究一致，OF和CM具有降低ffa诱导的ROS产生的抗氧化能力(图)3.）.

肠道微生物在正常的肠道功能和健康维护中起着至关重要的作用，膳食组成可以影响微生物定植的性质[2］．证据表明，高脂肪饮食影响肠道微生物A组成伴有升高血浆内毒素水平。这些改变与肝脏脂肪变性和肥胖有关[24-26］．循环中的LPS(内毒素血症)可激活NF-κ..B然后触发促炎信号传导途径。THP-1细胞以与LPS刺激后的外周血液单核细胞 - （PBMC-）衍生巨噬细胞进行响应。27］．在LPS刺激后，THP-1细胞分泌增加量的TNF-α，IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10 [28那29］．因此，在本研究中，我们使用TLPS/ cm处理的HepG2细胞模型来模拟内毒素介导的炎症。我们的结果表明，OF或CM处理可有效抑制TLPS/CM诱导的促炎细胞因子如IL-1的mRNA表达βil-6, il-8, tnf -α, TGF -β在HepG2细胞中(图4.）.我们之前报道过水提取物o .桂花和C. Morifolium.也具有抗炎能力，可减弱RAW 264.7巨噬细胞lps诱导的一氧化氮(NO)生成[30.］．乙醇提取o .桂花已显示花明显降低了促炎介质IL-6，IL-8的表达水平，IL-8和NO在LPS刺激的人牙周韧带细胞中的表达水平[31］．的N-正己烷的可溶形式和非皂化脂馏分C. Morifolium.花提取物及其组分显示出对小鼠的12-O-四癸酰基（TPA-）诱导的耳朵水肿的显着抗炎活性[32］．一起携带，CM可以通过调节肝细胞中的脂肪沉积并调节炎症反应来降低胫骨肝炎的进展来进行肝脏保护活性。

值得注意的是，OF和CM治疗显著抑制TGF-βTLPS / cm的水平诱导。自TGF-β抑制剂可能具有肾保护作用[33[接下来，我们检查了含油处理的乳房细胞中可能的肾反应性和厘米。肥胖相关的肾小球病的患病率正在增加，包括髓气基质，肾小球基底膜增厚的增加，以及肾小球粥样硬化。这些变化可能是在高血压和葡萄糖的氛围中，或者可以在它们的出现之前，并且可能归因于Mesangial细胞中的脂质积累[34］．ION和CM还显示出对OA / BSA处理的肾肾小球乳腺细胞的降脂效果（图5.）.因此，of和CM降低tg的作用可能与肾保护作用有关。

Mishra和Simonson [18]显示油酸提高TGF-的分泌β在系膜细胞中可诱导肌成纤维细胞表型。与他们的发现一致的是，200μ.M OA / BSA治疗明显高达TGF-β和纤连蛋白蛋白水平（图6.）.洪等人[35]报道了水提取物o .桂花减弱TGF-β1-诱导人肺成纤维细胞中的细胞间/细胞外纤连蛋白，并施加肺纤维化的抗纤维化活性。热水提取物C. Morifolium.弗劳尔斯被认为对2型糖尿病有益[36］．在本研究中，我们证明了OF和CM可以逆转TGF-表达的增加β以及在高OA处理的乳腺细胞中增加纤连蛋白的沉积和分泌（图6.）.综上所述，OF和CM可能被证明有助于开发预防或治疗TGF-的天然制剂β介导的纤维化障碍。除了TGF-β，单核细胞趋化蛋白-1(单核细胞趋化蛋白-1,MCP-1)也在糖尿病肾病(DN)发病机制中参与ECM积累[37］．我们的初步数据显示CM处理(100、200和400μ.g / ml）显着消除了乳房细胞中的高葡萄糖诱导的MCP-1蛋白水平（数据未显示）。因此，将来将在未来研究对DN中的和CM的潜在保护作用的进一步调查。

综上所述，两种花提取物o .桂花和C. Morifolium.改善了ffa诱导的脂质沉积和ROS，具有抗炎活性。此外，两种提取物均能抑制脂质积累，诱导TGF-β和OA过载的小鼠髓细胞中的细胞外基质累积。这些结果表明，两种花提取物o .桂花和C. Morifolium.可能对非酒精性脱脂性和肾纤维化具有保护作用。

利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

致谢

这项工作得到了台湾科技部的支持，授予申请。大多数97-2321-B-003-001（对Wen-Huey Wu）并授予不。大多数105-2320-B-003-002（对Po-Jung Tsai）。

参考

1. S. Savary，D.Trompier，P.Andréoletti，F.Leborgne，J. Domarquoy和G.蜥蜴，“脂肪酸 - 诱导的脂毒性和炎症”目前的药物代谢，第13卷，第2期10, pp. 1358-1370, 2012。查看在：出版商的网站|谷歌学术
2. D. Estadella, C. M. da Penha Oller do Nascimento, L. M. Oyama, E. B. Ribeiro, A. R. Dâmaso，和A. de Piano，《脂肪毒性:饮食中饱和脂肪酸和反式脂肪酸的影响》，炎症的介质， 2013, vol. 2013, Article ID 137579, 13页，2013。查看在：出版商的网站|谷歌学术
3. M. E.Serunc和G.S. Hotamisligil，“脂质信号传导和脂毒性在MetaFlammation中：代谢疾病发病机制和治疗的适应症”荔枝研究杂志(第57卷)12, pp. 2099-2114, 2016。查看在：出版商的网站|谷歌学术
4. A. Izquierdo-Lahuerta，C.Martínez-garcía，和G.MENINA-Gómez，“脂毒性作为肾病的触发因子”，肾病学杂志，第29卷，第2期5, pp. 603 - 610,2016。查看在：出版商的网站|谷歌学术
5. Y.Kawano和D.Cohen，“非酒精性脂肪肝疾病中肝甘油三酯积累的机制”胃肠病学杂志》上，卷。48，第434-441,2013。查看在：出版商的网站|谷歌学术
6. A. Loboda, M. Sobczak, A. Jozkowicz, and D. Jozef，”TGF-β1 / smads和miR-21在肾纤维化和炎症中，“炎症的介质，卷。2016年，第8319283号，12页，2016年。查看在：出版商的网站|谷歌学术
7. T. H. Tsai，T.T.Sai，Y.C.C.C.C. Lee和P. J. Tsai，“体外针对致癌细胞的抗微生物活性及其抗氧化能力：绿茶与不同草药的比较研究，“食品化学号，第110卷。4，第859-864页，2008。查看在：出版商的网站|谷歌学术
8. Hung c.y.， Tsai y.c .， and k.y. Li，“从花中分离出的酚类抗氧化剂桂花雀族，“分子，第十七卷，第二期9, pp. 10724-10737, 2012。查看在：出版商的网站|谷歌学术
9. 周建林，方向阳，王建强等，“黄酮类化合物的结构和生物活性桂花雀族《金秋》精油提取残液天然产物的研究，卷。21，pp。1-4,2017。查看在：出版商的网站|谷歌学术
10. J. Y. Yang, J. H. Park, N. Chung, and H. S. Lee， "抑制潜在的成分桂花雀族以及针对晚期糖基化最终产物的结构类似物，α- 淀粉酶，α-葡萄糖苷酶和氧化应激，”科学报告， 2017年，第7卷第45746条。查看在：出版商的网站|谷歌学术
11. F.L.Huang和C. Y. Hung，“Kwai-Fah”的影响力（桂花雀族对乙酰氨基酚对BALB/c小鼠肝毒性的研究中华医学科技大学通讯，第26卷，第1-13页，2007。查看在：谷歌学术
12. T. K.ILM，“菊花莫瑞菊，“ 在食用、药用和非药用植物，T. K. LIM，ED。，Vol。7，pp。250-269，春天，纽约，纽约，美国，2014年。查看在：谷歌学术
13. L. Z.林和J.M.LARLLY，“菊花花酚类成分的鉴定（菊花莫瑞菊拉马特),“食品化学，卷。120，不。1，pp。319-326，2010。查看在：出版商的网站|谷歌学术
14. 崔颖，王学军，薛建军，刘建军，谢敏，"菊花莫瑞菊提取物可通过过氧化物酶体增殖物激活受体减弱高脂牛奶诱导的脂肪肝α- 小鼠的介导机制，“营养研究第34卷第3期3, pp. 268-275, 2014。查看在：出版商的网站|谷歌学术
15. A. Jamshidzadeh, H. Niknahad, R. Heidari等，“丙基硫尿嘧啶诱导的肝脏线粒体功能障碍及其与药物诱导的肝毒性的相关性”医药科学，第23卷，第2期。2, pp. 95-102, 2017。查看在：出版商的网站|谷歌学术
16. S. P. Cousin, S. R. Hügl, C. E. Wrede, H. Kajio, M. G. Myers Jr.和C. J. Rhodes，“游离脂肪酸诱导的胰腺葡萄糖抑制和胰岛素样生长因子i诱导的脱氧核糖核酸合成β-Cell Line Ins-1，“内分泌学，第142卷，第2期。1，页229-240,2001。查看在：出版商的网站|谷歌学术
17. C. L. Lin, H. C. Huang, J. K. Lin，“茶黄素通过激活人HepG2细胞的AMPK来降低肝脏脂质积聚，”荔枝研究杂志，第48卷，第48期11，页2334 - 2343,2007。查看在：出版商的网站|谷歌学术
18. R. Mishra和M. S. Simonson，“油酸诱导系膜细胞中肌成纤维细胞样表型”动脉硬化，血栓形成和血管生物学，卷。28，不。3，pp。541-547,2008。查看在：出版商的网站|谷歌学术
19. J. H. Lee, E. J. Choi, H. S. Park，和G. H. Kim，“菊科植物抗氧化活性、抗炎、抗癌和抗脂肪生成活性的体外评价”，食品和农业免疫学，第25卷，第2期1, pp. 104-118, 2014。查看在：出版商的网站|谷歌学术
20. P. Ferré和F. Foufelle，“肝脏脂肪变性:一个角色德诺维脂肪生成和转录因子Srebp-1c，“糖尿病，肥胖和新陈代谢，卷。12，补充2，pp。83-92,2010。查看在：出版商的网站|谷歌学术
21. A. A.Wendel，T.M. Lewin和R.A.Coleman，“甘油-3-磷酸酰基转移酶：三酰基甘油生物合成的速率限制酶”生物化学与生物物理学报(BBA) -脂类分子和细胞生物学，卷。1791年，没有。6，pp。501-506，2009。查看在：出版商的网站|谷歌学术
22. H. S.Wang，D.H. GaN，X.P. Zhang和Y.M.PAN，“纸浆中提取物的抗氧化能力桂花雀族及其组件”,LWT - 食品科学和技术，卷。43，不。2，pp。319-325,2010。查看在：出版商的网站|谷歌学术
23. D. Z. XIA，G. Y. LV，X. F. Yu，H. M. Wang和Q. yang，“总黄酮的拮抗作用”菊花莫瑞菊针对小鼠的铅诱导氧化损伤，“中国钟尧Za Zhi第33卷第3期23，第2803-2808页，2008。查看在：谷歌学术
24. P. D. Cani, a . M. Neyrinck, F. Fava等人，“肠道菌群中双歧杆菌的选择性增加通过与内毒素血症相关的机制改善小鼠高脂饮食诱导的糖尿病，”Diabetologia，卷。50，不。11，PP。2374-2383,2007。查看在：出版商的网站|谷歌学术
25. N. de Wit，M. Derrien，H. Bosch-Vermeulen等，“饱和脂肪刺激肥胖和肝脏脂肪变性，并通过增强膳食脂肪的溢流越来越多的肠道，”美国生理学 - 胃肠道和肝脏生理学，卷。303，没有。5，PP。G589-G599,2012。查看在：出版商的网站|谷歌学术
26. A.L.Neves，J.Coelho，L.Couto，A. Leite-Moreira和R. Roncon-Albuquerque Jr.，“代谢内毒素血症：肥胖与心血管风险之间的分子联系，”分子内分泌学杂志第51卷第1期2, pp. R51-R64, 2013。查看在：出版商的网站|谷歌学术
27. O. Sharif，V.N.Bolshakov，S. Raines，P. Newham和N. D. Perkins，LPS的转录分析诱导NF-κ..B巨噬细胞的反应，“BMC免疫学，第8卷，第2期第1页，2007。查看在：出版商的网站|谷歌学术
28. W. Chanput, J. Mes, R. a . M. Vreeburg, H. F. Savelkoul，和H. J. Wichers，“lps刺激的THP-1单核细胞和巨噬细胞的转录谱:研究食物来源化合物的炎症调节作用的工具，”食品和功能， vol. 1, no. 13，页254-261,2010。查看在：出版商的网站|谷歌学术
29. A. Schildberger，E. Rossmanith，T.Eichhorn，K. Strassl和V.Weber，“单核细胞，外周血单核细胞和THP-1细胞随后用脂多糖刺激表现出不同的细胞因子表达模式”炎症的介质，卷。2013年，2013年10页第697972号，10页。查看在：出版商的网站|谷歌学术
30. 蔡培杰，蔡崇华，蔡崇华。Yu, and S. C. Ho，“不同草本茶与绿茶清除no和抑制no活性的比较”，食品化学号，第103卷。1，页181-187,2007。查看在：出版商的网站|谷歌学术
31. 黄芩、黄芩、龙泉等桂花雀族变弱Porphyromonas Gingivalis.通过核因子红细胞2相关因子介导的抗氧化信号通路的脂多糖刺激的炎症作用，“口腔生物学档案，第60卷，第2期7, pp. 1030-1038, 2015。查看在：出版商的网站|谷歌学术
32. M. Ukiya, T. Akihisa, K. yasawa et al.，“菊科植物的成分。2.食用菊花提取物中三萜二醇、三醇及其3- o脂肪酸酯及其抗炎作用农业与食品化学杂志，第49卷，第49期。7，页3187-3197,2001。查看在：出版商的网站|谷歌学术
33. K. Braga Gomes, K. Fontana Rodrigues, and A. P. Fernandes，“转化生长因子- β在糖尿病肾病中的作用”，国际医学遗传学杂志，卷。2014年，第180270年，6页，2014年。查看在：出版商的网站|谷歌学术
34. 肥胖相关肾小球病:临床、病理特征和发病机制自然评论肾脏学，第12卷，第2期8，第453-471页，2016。查看在：出版商的网站|谷歌学术
35. 洪成玉、马世俊、刘淑芳、谢鹏飞、杨玉玲，“水提取物桂花雀族衰减tgf-β1诱导人肺成纤维细胞中的肺细胞纤维化，“国际药理研究杂志，卷。5，不。8，pp。191-199,2015。查看在：谷歌学术
36. J. Yamamoto, T. Yamane, Y. Oishi, M. Shimizu, M. Tadaishi, K. kobayashi - hatattori，“菊花促进脂肪细胞分化，脂联素分泌和葡萄糖摄取”，美国中医药杂志，卷。43，不。2，pp。255-267,2015。查看在：出版商的网站|谷歌学术
37. J. Park，D. R.Ryu，J.J.Li等，“MCP-1 / CCR2系统参与高葡萄糖诱导的纤维连接蛋白和型培养的乳腺细胞中的IV型胶原蛋白表达”，“美国生理学杂志 - 肾生理学第295卷第2期3，页F749-F757, 2008。查看在：出版商的网站|谷歌学术

版权

版权所有©2017 Po-Jung Tsai等。这是一篇发布在创意公共归因许可证如果正确引用了原始工作，则允许在任何媒体中的不受限制使用，分发和再现。