27). HLA-B27 heavy chain (B27-HC) has an intrinsic propensity to fold slowly, leading to the accumulation of the misfolded B27-HC in the endoplasmic reticulum (ER) and formation of the HLA-B27 HC homodimer, (B27-HC)2, by a disulfide linkage at Cys-67. (B27-HC)2 displayed on the cell surface can act as a ligand of the killer-cell Ig-like receptor (KIR3DL2). (B27-HC)2 binds to KIR3DL2 of NK and Th17 cells and activates both cells, resulting in the activation of the IL-23/IL-17 axis to launch the inflammatory reaction in AS patients. However, activation of the IL-23/IL-17 axis originally derived from the HLA-B27 misfolding in the ER needs to be characterized. In this study, we delivered two HLA-B27-binding peptides, KRGILTLKY and SRYWAIRTR, into the ER by using a tat-derived peptide (GRKKRRQRRR)-His6-ubiquitin (THU) vehicle. Both peptides are derived from the human actin and nucleoprotein of influenza virus, respectively. Our results demonstrated that targeted delivery of both HLA-B27-binding peptides into the ER can promote the HLA-B27 folding, decrease the levels of (B27-HC)2, and suppress the activation of the IL-23/IL-17 axis in response to lipopolysaccharide. Our findings can provide a new therapeutic strategy in AS."> 目标交付HLA-B27-Binding肽进入内质网抑制IL-23 / IL-17轴脊椎关节炎的免疫细胞 - raybet雷竞app,雷竞技官网下载,雷电竞下载苹果
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研究文章|开放获取

体积 2017年 |文章的ID 4016802 | https://doi.org/10.1155/2017/4016802

Hui-Chun Yu Kuang-Yung黄黄Hsien-Lu Ming-Chi Lu中国Liu Ning-Sheng Lai Hsien-Bin黄, ”针对HLA-B的交付 27-Binding肽进入内质网抑制免疫细胞的IL-23 / IL-17轴脊椎关节炎”,炎症介质, 卷。2017年, 文章的ID4016802, 10 页面, 2017年。 https://doi.org/10.1155/2017/4016802

针对HLA-B的交付 27-Binding肽进入内质网抑制免疫细胞的IL-23 / IL-17轴脊椎关节炎

Hui-Chun余,1 Kuang-Yung黄,2,3,4 Ming-Chi陆,1,2,3 Hsien-Lu黄,5 中国刘,2 Ning-Sheng赖,2,3 和 Hsien-Bin黄4

1医学研究、Dalin慈济医院,台湾佛教慈济医疗基金会,嘉义,

2分工过敏、免疫学和风湿病,内科,佛教Dalin慈济医院,嘉义,台湾

3慈济大学医学院的花莲,台湾

4生命科学和分子生物学研究所、国立中正大学,台湾嘉义

5营养和健康科学部门,Fooyin大学,台湾高雄市

学术编辑器:柯恩Venken
收到了 2017年6月13日
修改后的 2017年9月19日
接受 2017年10月23日
发表 2017年12月31日

文摘

强直性脊柱炎(AS)是高度相关的表达人类白细胞antigen-B27 (HLA-B 27)。HLA-B 27重链(B27-HC)有一个内在倾向褶皱缓慢,导致错误折叠的积累B27-HC内质网(ER)和HLA-B的形成 27 HC为,(B27-HC)2半胱氨酸的二硫键- 67。(B27-HC)2显示在细胞表面可以作为配体的杀手细胞Ig-like受体(KIR3DL2)。(B27-HC)2结合KIR3DL2 NK和Th17细胞,激活细胞,导致IL-23 / IL-17轴的激活启动炎症反应的患者。然而,激活IL-23 / IL-17轴最初源自于HLA-B ER的27个错误折叠需要特征。在这项研究中,我们提供两个HLA-B 27-binding肽,KRGILTLKY SRYWAIRTR, ER使用tat-derived肽(GRKKRRQRRR)他6泛素(星期四)。肽都是源自流感病毒的人类肌动蛋白和核蛋白质,分别。我们的研究结果表明,目标两HLA-B交付 27-binding肽HLA-B ER可促进 27折,减少的水平(B27-HC)2,抑制IL-23 / IL-17轴的激活对脂多糖的回应。我们的研究结果可以提供一种新的治疗策略。

1。介绍

强直性脊柱炎(AS)是一种炎症性疾病,特征是炎症背部疼痛和不对称外围oligoarthritis [1- - - - - -4]。的发展是与人类白细胞antigen-B的表达密切相关 27 (HLA-B (27)5,6]。超过90%的病人表示HLA-B 27。HLA-B 27日的主要组织相容性复合体(MHC)类分子,由一个重链(α链),β2微球蛋白(β2米)。HLA-B 27日与抗原肽聚集于内质网(ER)。的抗原peptide-bound HLA-B 27个复杂被允许离开ER和运送到细胞表面的抗原表达CD8 + t细胞(7]。

HLA-B的内在倾向 27重链(B27-HC)允许在ER折叠缓慢,导致错误折叠的积累B27-HC和重链的形成为,(B27-HC)2,这是由二硫键共价连接在半胱氨酸- 67 (8- - - - - -10]。(B27-HC)2显示在细胞表面,作为配体的杀手细胞Ig-like受体(KIR3DL2) [11,12]。KIR3DL2存在自然杀伤(NK)细胞的细胞膜和辅助17 Th17细胞。最近的研究已经证明,(B27-HC)2可以与KIR3DL2受体相互作用和促进NK细胞的生存和生长,Th17细胞(13,14]。激活的NK细胞和Th17细胞(B27-HC)2的发病机理可能做出的贡献。

此外,错误折叠B27-HC积累腔的ER可以联想到Grp78 /毕普函数作为伴护蛋白(1,15,16]。在正常情况下没有显著积累蛋白质错误折叠和展开的腔,Grp78 /毕普结合三个传感器,ATF6, IRE1,活跃,展开的蛋白质反应(UPR)膜ER和街区的功能(17,18]。错误折叠的累积B27-HC在ER为Grp78 /毕普绑定提供了新目标。因此,Grp78 /毕普排放从其初始复合物,使传感器蛋白质诱导UPR [17]。事实上,错误折叠HMy2 B27-HC过表达。C1R观察细胞与Grp78 /毕普coimmunoprecipitation试验(15,16]。在HLA-B 27个转基因老鼠,过表达HLA-B ER应激诱导 27日激活UPR上调NF -的激活κB,并促进促炎细胞因子的表达,如肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),il - 1、il - 6和IL-23 [19- - - - - -21]。骨骨髓来源的巨噬细胞释放IL-23激活Th17细胞被观察到当UPR的积累引起的错误折叠B27-HC在转基因老鼠。

最近的研究表明,HLA-B 嗯可以促进HLA-B 27-binding肽 27折叠和压制的形成(B27-HC)2(22,23]。在先前的研究中,我们设计了一种新颖的6-ubiquitin-tagged Tat-derived肽(星期四)车辆交付HLA-B 27-binding肽,RRFKEGGRGGKY RRYLENGKETL,从细胞外空间到ER (16]。交付肽都是源自于DNA引物酶沙眼衣原体分别和人类B27-HC [24,25]。星期四的主要序列,从糖基的n端,包含一个Tat-derived肽,一个他6标签和泛素。货物肽立即与泛素的糖。GRKKRRQRRR人类免疫缺陷病毒Tat-derived肽,是一种小型基本肽可以有效地把不同类型的货物,包括寡肽、跨膜(26,27]。的THU-HLA-B 27-binding肽融合蛋白迅速易位到细胞溶质,HLA-B 27-binding肽出院星期四通过特定的裂解反应由胞质泛素c端水解酶(排序)。释放肽当时易位到内腔ER的抗原处理相关转运子(TAP) (28,29日]。呃,HLA-B 27-binding肽可以促进B27-HC的折叠和抑制(B27-HC)的形成2。的水平(B27-HC)2的浓度降低,组装HLA-B吗 27 HC /β2米/肽复杂细胞膜上的增加。然而,它仍然未知是否促进HLA-B ER的27个折叠可以抑制IL-23 / IL-17轴的免疫细胞。在这项研究中,我们两个新的HLA-B交付 27-binding肽,KRGILTLKY SRYWAIRTR,星期四进急诊室的车辆。我们的研究结果表明,目标HLA-B的交付 27-binding肽HLA-B ER可促进 27个折叠和抑制IL-17A或IL-17A / IL-23 PBMCs孤立的从病人的表达对脂多糖(LPS),表明HLA-B之间强烈的联系 27个错误折叠的ER和激活IL-23 / IL-17轴。

2。材料和方法

丙烯酰胺、氯化镍、二硫苏糖醇(DTT)、三羟甲基氨基甲烷、液Luria-Bertani肉汤(磅),氨苄青霉素,EDTA,异丙基咪唑β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) phenylmethylsulfonyl氟化物(PMSF),脂多糖(LPS)、拖把、嘌呤霉素,苯甲脒,十二烷基硫酸钠,叠氮化钠、氯化钠、tem、过硫酸铵,甘氨酸,潮霉素B获得Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。螯合琼脂糖和SP琼脂糖从通用电气医疗集团购买(乌普萨拉,瑞典)。tat-derived肽(GRKKRRQRRR)他的准备6泛素(星期四)和THU-RRFKEGGRGGKY (THUC)遵循的方法16]。

2.1。蛋白质纯化

互补编码THU-KRGILTLKY(承天顺)THU-SRYWAIRTR (THUNP),他的6-ubiquitin-KRGILTLKY(华),和他6-ubiquitin-SRYWAIRTR (HUNP)是由一个两步聚合酶链反应(PCR)。用于PCR扩增的引物中列出补充图S1。由此产生的产品从第一个PCR是用作第二个PCR模板。由此产生的产品的第二次PCR克隆到pET28a新人道我/Xho我网站的质粒。大肠杆菌BL21 (DE3)与重组细胞转换向量编码承天顺,THUNP,华,或HUNP成长在一个升磅肉汤和0.3克/升硫酸卡那霉素在37°C用颤抖的在250 rpm。吸光度在600纳米时在0.6和1.0之间,0.38克IPTG添加1毫米的最终浓度诱导蛋白表达。细菌被离心收获后三个小时的归纳。30毫升的颗粒状细胞resuspended 20毫米Tris-HCl缓冲区(pH值7.9),含有氯化钠0.5米,0.2毫米PMSF,叠氮化钠0.02%,苯甲脒和4毫米,由法国媒体和细胞溶解。不溶性组分被离心20分钟的20000克。上层清液加载到倪2 +琼脂糖列(2.5×10厘米)。洗后用一个体积相同的缓冲区,结合蛋白与一个线性筛选了咪唑梯度从5毫米(500毫升)1.0米咪唑(500毫升)在同一个缓冲区。包含蛋白质表达的分数是汇集,对去离子水透析(2升)和五个变化在36小时内删除多余的试剂,并冻干粉。然后冻干蛋白质溶解的20毫升20毫米拖把(pH值7.0)和0.2毫米EDTA。所有组件解决了SP琼脂糖层析(2.5×20厘米)与线性梯度从0(500毫升)2 M氯化钠(500毫升)。包含目标蛋白质的分数是汇集,对去离子水透析和冻干。

2.2。道德声明

根据修改后的纽约标准定义的患者(30.]这项研究招募了2014年1月至2014年12月在台湾南部地区教学医院。实验程序的分离人类PMBCs从病人已被评估和批准的机构审查委员会(IRB) Dalin慈济医院,台湾佛教慈济医疗基金会(B10302005数量)。书面知情同意了所有的研究的病人。人类PBMCs后的患者准备方法如前所述[31日]。

2.3。免疫印迹分析

HMy2。C1R细胞(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州)属于B-lymphoblast不充分地表达抗原的细胞 或HLA-B 基因(32]。两个C1R-B 27:04细胞和TAP1-knockdown C1R-B 来自HMy2 27:04细胞。C1R细胞稳定HLA-B过表达 27:04重链(B2704-HC)亚型B27-HC [16]。C1R-B 27:04细胞(3×106细胞/)生长在24-well盘子和维护在1毫升Iscove修改杜尔贝科的介质(IMDM)(表达载体,卡尔斯巴德,CA)与10%胎牛血清的边后卫(表达载体)和200μg / ml潮霉素b C1R-B 27:04细胞(3×106细胞/)TAP1击倒维持在同一介质为0.4μ克/毫升嘌呤霉素。细胞治疗20μ克承天顺,星期四,华,THUNP或HUNP和收获在表示时间。膜蛋白提取使用ProteoExtract原生膜蛋白提取工具包(Calbiochem,达姆施塔特,德国),根据制造商的指示。新鲜的碘乙酰胺(10毫米)是包含在所有的缓冲块在膜蛋白提取二硫桥形成。整除的上层清液中膜蛋白分离提取nonreducing sds - page (10%);转移到聚乙烯二氟化物膜(通用电气医疗集团);免疫印迹和BH2, anti-misfolded HLA-B 27个单克隆抗体(16];并分析了辣根过氧化物酶-(合)共轭山羊anti-mouse免疫球蛋白(圣克鲁斯生物技术、达拉斯、TX)。

2.4。流式细胞术

所有化验后描述的方法(16]。C1R-B 27:04细胞(2×106细胞每)或TAP1-knockdown C1R-B 27:04细胞(2×106每口井的细胞)生长在1毫升IMDM 10%的边后卫,200μ0.4 g / ml潮霉素B,μ克/毫升嘌呤霉素。细胞治疗10μM承天顺,10μM THUNP, 10μ星期四,10μ米花,或10μM HUNP一夜之间,其次是洗涤三次与PBS和染色W6/32抗体(Abcam、剑桥、马;1:500稀释)在黑暗中30分钟。与PBS三次洗涤后,染色细胞孵化了山羊FITC-conjugated anti-mouse免疫球蛋白(微孔、泰梅库拉、钙;1:500稀释)在黑暗中30分钟,用PBS三次,并通过流式细胞术分析。

2.5。定量实时逆转录酶聚合酶链反应

PBMCs (3×106细胞)与患者保持RPMI1640中、处理200 ng有限合伙人+ 20μg THUC,承天顺,或THUNP 37°C公司为5%224 h。的总RNA治疗PBMCs分离利用QIAamp RNA血液迷你包(试剂盒GmbH,德国)。干扰素-γ肿瘤坏死因子-α,il - 6、IL-17A或IL-23信使rna被实时PCR放大使用一步SYBR Taq交货存在工具包(豆类、志贺、日本)。

2.6。统计分析

数据显示为±SD方法。 值被Mann-Whitney获得U测试。 值小于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。蛋白质纯化

重组THU-KRGILTLKY(承天顺),THU-SRYWAIRTR (THUNP),他的6-ubiquitin-KRGILTLKY(华),或他的6在单独-ubiquitin-SRYWAIRTR (HUNP)大肠杆菌BL21 (ED3)和两步色谱纯化。KRGILTLKY和SRYWAIRTR肽都是源自流感病毒的人类肌动蛋白和核蛋白质,分别为(33]。由法国媒体细胞破裂后,原油提取纯化了倪2 +琼脂糖层析和SP琼脂糖层析。的同质性分析了纯化蛋白sds - page(图1)。


图1
sds - page分析重组THUNP承天顺,星期四,HUNP,华。一个整除(2μg)的重组THUNP承天顺,星期四,HUNP,华是解决通过sds - page(15%)和考马斯亮蓝染色。巷1:分子量标记,巷2:THUNP,巷3:承天顺,巷4:星期四,巷5:HUNP,和6巷:华。
3.2。目标交付HLA-B 27-Binding肽ER促进HLA-B 27折

我们使用了清华两HLA-B车辆交付 27-binding肽,KRGILTLKY和SRYWAIRTR C1R-B的ER 27:04。我们首先验证治疗是否承天顺降低(B27-HC)的生产2在C1R-B 27:04细胞。BH2,单克隆抗体可以识别(B27-HC)2是用于我们的早期研究[16,34]。数据2(一个)和2 (b)显示的水平(B27-HC)2THUA-treated细胞减少,而无论是清华还是老栓治疗(B27-HC)的水平变化2。治疗C1R-B 27:04承天顺、华、THUNP HUNP或清华的表达水平没有影响B27-HC(图2 (c))。因此,很明显,通过乙肽承天顺进入细胞。货物肽在细胞溶质通过摆脱承天顺乳沟的内生泛素c端水解酶,然后运送到腔ER的利用促进B27-HC折叠。C1R-B时又发生了类似的结果 与THUNP 27:04细胞治疗。(B27-HC)的形成2在C1R-B 27:04细胞显著抑制THUNP治疗(数字2 (d)和2 (e))。无论是HUNP还是星期四治疗能抑制(B27-HC)的生产2(数据2 (d)和2 (e))。丝锥,heterodimeric蛋白质TAP1和TAP2组成的子单元,位于膜,属于一个磷酸腺苷磁带(ABC)转运体成员(28]。胞质肽被利用ER转移,他们组装与MHC分子类我运输到细胞表面。我们表明,击倒TAP1亚基可以扰乱THUNP-promoted减少(B27-HC)2形成(图2 (f)和2 (g))。然而,击倒TAP1并不影响在C1R-B B27-HC的表达 27:04细胞(图2 (c)),这表明抑制(B27-HC)2形成由THUNP治疗开发活动的障碍。

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图2
治疗的效果与承天顺或THUNP (B27-HC)2生产C1R-B 27:04细胞。C1R-B后 27:04细胞处理每个表示次重组蛋白,膜蛋白提取。50μ分析了g(提取nonreducing sds - page(10%)和免疫印迹BH2单克隆抗体和anti-transferrin (Tf)受体抗体。Tf受体作为内部控制。(一)承天顺治疗12 h,但不是星期四或栓治疗,显著降低的水平(B27-HC)2。(b)的比值(B27-HC)2/ Tf受体平均三个独立实验(一)策划对清华的时候,华,或承天顺治疗(平均±标准差, )。(c) C1R-B待遇 27:04细胞与清华、华、HUNP承天顺,THUNP或TAP-1击倒不影响B27-HC的表达水平。C1R-B 27:04细胞治疗20μg(星期四)华、HUNP承天顺,或者THUNP 24 h。膜蛋白提取。一个整除(50μg)提取的蛋白质进行了分析通过减少sds - page BH2单克隆抗体和免疫印迹。(d)治疗THUNP减少(B27-HC)的形成2。(e)的比值(B27-HC)2/ Tf受体平均三个独立实验(d)策划反对清华的时候,HUNP或THUNP治疗(平均±标准差, )。(f) TAP1-knockdown抑制THUNP-induced减少(B27-HC)2。(g)的比值(B27-HC)2/ Tf受体平均三个独立实验(f)绘制THUNP治疗的时间(平均数±标准差, )。 值被Mann-Whitney获得U测试。
3.3。交付的肽可以显示在细胞表面

假设肌动蛋白肽或NP肽针对C1R-B的ER腔 27:04清华的汽车,它将提高B27-HC折叠和组装成B27-HC /β2m heterodimeric复杂。因此,组装B27-HC /β2米/肽heterotrimeric复杂将会增加,然后会被输送到细胞表面。两个种群的C1R-B 27:04细胞被流仪观察分析(数据3(一个)和3 (c))。细胞在小人口约占C1R-B总数的22% 27:04细胞但显示HLA-B的低水平 27:04在细胞表面,根据W6/32染色。这可能表明B27-HC低的表达在这个人口。另一个人口包含大多数C1R-B 27:04细胞。这一组的细胞显示HLA-B的高水平 27:04在细胞表面。因此,组装B27-HC /的水平β2细胞膜上的m /肽heterotrimeric复杂将会增加。因此,我们分析是否ER-targeted肌动蛋白或肽NP运送到细胞的质膜B27-HC /β2m复杂C1R-B 27:04。如果折叠B27-HC /β2米/肽heterotrimeric复杂等离子体膜存在,它将被W6/32,单克隆抗体识别折叠MHC类我分子(35]。C1R-B后 27:04细胞治疗与承天顺或THUNP W6/32-reactive细胞明显增加(的人口数据3(一个)- - - - - -3 (d)),这表明肌动蛋白肽或NP肽B27-HC /呈现在细胞表面β2m复杂。然而,增加W6/32-reactive细胞群C1R-B时没有被观察到 27:04细胞治疗与清华、花或HUNP(数字3(一个)- - - - - -3 (d))。此外,利用函数的可拆卸的减损TAP1减少抗原肽的易位到急诊室,导致降低组装B27-HC /β2m复杂抗原肽和减少细胞膜上的肽表示。显然,TAP-knockdown货物肽在细胞表面的细胞抑制即使他们承天顺或THUNP(数据处理3(一个)- - - - - -3 (d))。

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图3
治疗或承天顺THUNP增加细胞表面的抗原肽针对C1R-B 27:04。与承天顺(a)治疗,但不是星期四或华,增加了HLA-B 27:04 HC /β 2米/ KRGILTLKY C1R-B的复杂呈现在细胞表面 27:04,如流式细胞仪探测到。击倒TAP1废墟的抗原肽、KRGILTLKY呈现在细胞表面。(b)的意思是通道荧光测量(a)从三个独立实验平均(平均±标准差, )。值意味着荧光测量C1R-B人口众多的频道 27:04细胞显示HLA-B的高水平 27:04在细胞表面细胞治疗承天顺时增加。(c)治疗THUNP,但不是星期四或HUNP,增加了HLA-B 27:04 HC /β 2米/ SRYWAIRTR复杂呈现在细胞表面,通过流式细胞仪检测。TAP1击倒损害抗原肽,SRYWAIRTR,呈现在细胞表面。(d)的意思是通道荧光测量(c) C1R-B时增加 与THUNP 27:04细胞治疗。值(平均数±标准差, )测量高人口的细胞显示HLA-B的高水平 27:04在细胞表面平均是三个独立的实验。统计学意义是Mann-Whitney获得的U测试。
3.4。目标交付HLA-B 27-Binding肽的ER抑制IL-23 / IL-17轴PBMCs孤立从病人对有限合伙人的回应

一些证据表明,IL-23 / Th17轴高度参与发病机理(21,36- - - - - -38]。然后,我们被问及针对HLA-B的交付 27-binding肽ER可以抑制IL-23 / IL-17 PBMCs孤立的从病人的表达对有限合伙人的回应。HLA-B细胞因子表达 27-expressing PBMCs被LPS刺激没有承天顺,THUC或THUNP(图4(一))。图4 (b)显示目标HLA-B的交付 27-binding肽到星期四可以抑制ER的表达IL-17A HLA-B 27-expressing PBMCs。我们也观察到,THUNP治疗可以减少IL-23和TNF -α的表情PBMCs(图4 (b))。针对HLA-B的交付 27-binding肽为ER未能影响il - 6的表达(图4 (b))和干扰素-γ信使rna(图4 (b))。

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图4
THUC治疗的影响,承天顺,或THUNP生产的促炎细胞因子mrna PBMCs孤立从病人对有限合伙人的回应。(描述的合适的引物合成40]。信使rna的相对表达水平是由以下方程:(40−阈值周期(Ct)调整后18 s rRNA)的表达。(a)用LPS促进mRNA的表达细胞因子治疗,肿瘤坏死因子-α,正γ,il - 6, IL-23 IL-17A mrna(平均数±标准差, )。 获得的价值t以及。(b)治疗THUC、承天顺或THUNP减少IL-17A mRNA的表达。治疗THUNP也抑制TNF的表达α和IL-23 mrna(平均数±标准差, )。 值是通过单向方差分析测试随后Sidak多重比较测试。

4所示。讨论

压倒性的表达B27-HC证明自发发展就像疾病的转基因鼠(19- - - - - -21]。在HLA-B 27个转基因鼠模型中,积累的错误折叠B27-HC ER可以触发UPR。的mrna水平UPR标记,包括Grp78,切,XBP-1转录因子,在骨骨髓来源的巨噬细胞显著增加,累积的错误折叠引起的重链HLA-B 27日与的大小UPR upregulation高度相关。IL-23生产骨骨髓来源的巨噬细胞遭受UPR thapsigargin或HLA-B触发 27个错误折叠由有限合伙人协同刺激。IL-23是一个关键的细胞因子诱导天真的CD4 + t细胞的分化为Th17细胞产生促炎细胞因子,包括IL-17 [39]。刺激IL-23 / IL-17轴HLA-B之间提供了强有力的联系 27个错误折叠和UPR在转基因老鼠。然而,激活UPR和生产之间的联系的促炎细胞因子在发病机制仍不清楚38]。巨噬细胞来自患者在有限合伙人未能刺激UPR但显著调节IL-23生产,支持IL-23 / IL-17轴高度参与了发病机理和治疗目标(38]。

(B27-HC)2是一个关键的分子发病机制。大多数的患者显示(B27-HC)2在他们PBMCs [40]。骶髂关节炎的平均成绩和腰椎浴强直性脊柱炎放射学指数得分更高,患者(B27-HC)2在他们PBMCs [40]。(B27-HC)2一个KIR3DL2配体的存在对NK细胞表面,Th17细胞。(B27-HC)2能够刺激Th17细胞IL-17生产和促进炎性反应。尽管KIR3DL2 + 15%的CD4 t细胞的细胞由PBMCs,这群占Th17作为病人的主要数字(13,14]。从人类单克隆抗体,HD6筛选噬菌体展示库能具体地认识到重组(B27-HC)2在绑定化验41]。HD6可以阻止的绑定(B27-HC)2KIR3DL2和抑制KIR3DL2 + NK细胞的生存和生长。HD6抑制IL-17生产PBMCs隔绝的病人。在这项研究中,我们证明了目标HLA-B的交付 27-binding肽进入ER可以抑制IL-23 / IL-17轴PBMCs隔绝病人(数字4(一)和4 (b))。抑制IL-17 mRNA表达响应有限合伙人可能是因为减少(B27-HC)2生产与THUC PBMCs治疗后,承天顺或THUNP。因此,刺激KIR3DL2 + NK和Th17细胞(B27-HC)2下降,减少IL-17的生产。

是一种慢性炎性疾病的中轴骨。的地区关节脊柱和骨盆骶髂关节的主要影响病人。在严重的情况下,患者会逐渐出现关节僵硬和syndesmophytes [4]。非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)经常用于治疗;肿瘤坏死因子-α阻断剂被用于大多数NSAID-resistant病人。然而,尽管anti-TNF -α治疗可以消除炎症,syndesmophyte形成的发展不能终止(4,42]。副作用,如真菌感染的风险增加和肺结核的潜在患者结核分枝杆菌感染后升级anti-TNF -α治疗(43),或一些病人不应对这种疗法。此外,最近的报告表明,IL-23 / IL-17轴不受anti-TNF——影响α治疗的患者(44]。最近,治疗的目标都集中在IL-23 / IL-17轴。几个潜在的单克隆抗体针对IL-23 / IL-17通路进行了临床试验的治疗(45,46]。

5。结论

激活IL-23 / IL-17轴在发病机理是最初源自于HLA-B ER的27个错误折叠。我们的研究结果表明,目标HLA-B的交付 27-binding肽ER使用清华汽车可以促进HLA-B 27个折叠,减小(B27-HC)2生产和抑制IL-23 / IL-17轴的激活。我们的结果证实了HLA-B之间的强烈联系 27个错误折叠和激活IL-23 / IL-17轴的发病机理。我们构建肽交付肽治疗的潜在应用的发展。

的利益冲突

作者声明没有竞争的经济利益。

作者的贡献

Hui-Chun Yu和黄Kuang-Yung贡献了同样的工作。

确认

这项工作是支持由Dalin慈济医院,佛教慈济医疗基金会(DTCRD DTCRD 105 - e - 16日,104 (2)-I-01),和慈济医疗任务项目105-01-03,佛教慈济医学基金会和美国国家科学委员会,台湾中华民国(NSC 102 - 2320 - b - 194 - 002)。

补充材料

图S1:用于PCR引物序列。(补充材料)

引用

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