心肌梗死 炎症介质 1466 - 1861 0962 - 9351 Hindawi 10.1155 / 2017/4016802 4016802 研究文章 针对HLA-B的交付 ∗ 27-Binding肽进入内质网抑制免疫细胞的IL-23 / IL-17轴脊椎关节炎 余 Hui-Chun 1 黄 Kuang-Yung 2 3 4 http://orcid.org/0000 - 0001 - 9051 - 0351 陆 Ming-Chi 1 2 3 黄 Hsien-Lu 5 刘 中国 2 http://orcid.org/0000 - 0001 - 6853 - 7451 赖 Ning-Sheng 2 3 http://orcid.org/0000 - 0003 - 1257 - 5971 黄 Hsien-Bin 4 Venken 柯恩 1 医学研究部门 Dalin慈济医院 佛教慈济医疗基金会 嘉义 台湾 tzuchimedicalfoundation.org 2 分工过敏 免疫学 和风湿病学 内科 佛教Dalin慈济医院 嘉义 台湾 tzuchi.com.tw 3 医学院的 慈济大学 花莲的城市 台湾 tcu.edu.tw 4 生命科学和分子生物学研究所 国立中正大学 嘉义 台湾 ccu.edu.tw 5 营养和健康科学的部门 Fooyin大学 高雄市 台湾 fy.edu.tw 2017年 31日 12 2017年 2017年 13 06 2017年 19 09年 2017年 23 10 2017年 31日 12 2017年 2017年 版权©2017余Hui-Chun et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

强直性脊柱炎(AS)是高度相关的表达人类白细胞antigen-B27 (HLA-B ∗ 27)。HLA-B ∗ 27重链(B27-HC)有一个内在倾向褶皱缓慢,导致错误折叠的积累B27-HC内质网(ER)和HLA-B的形成 ∗ 27 HC为,(B27-HC)2半胱氨酸的二硫键- 67。(B27-HC)2显示在细胞表面可以作为配体的杀手细胞Ig-like受体(KIR3DL2)。(B27-HC)2结合KIR3DL2 NK和Th17细胞,激活细胞,导致IL-23 / IL-17轴的激活启动炎症反应的患者。然而,激活IL-23 / IL-17轴最初源自于HLA-B ∗ ER的27个错误折叠需要特征。在这项研究中,我们提供两个HLA-B ∗ 27-binding肽,KRGILTLKY SRYWAIRTR, ER使用tat-derived肽(GRKKRRQRRR)他6泛素(星期四)。肽都是源自流感病毒的人类肌动蛋白和核蛋白质,分别。我们的研究结果表明,目标两HLA-B交付 ∗ 27-binding肽HLA-B ER可促进 ∗ 27折,减少的水平(B27-HC)2,抑制IL-23 / IL-17轴的激活对脂多糖的回应。我们的研究结果可以提供一种新的治疗策略。

 国家科学委员会 NSC - 194 - 002 102 - 2320 b 佛教慈济医疗基金会 (2)-I-01 DTCRD 104 DTCRD 105 - e - 16所示 1。介绍

强直性脊柱炎(AS)是一种炎症性疾病,特征是炎症背部疼痛和不对称外围oligoarthritis [ 1- - - - - - 4]。的发展是与人类白细胞antigen-B的表达密切相关 ∗ 27 (HLA-B ∗ (27) 5, 6]。超过90%的病人表示HLA-B ∗ 27。HLA-B ∗ 27日的主要组织相容性复合体(MHC)类分子,由一个重链( α链), β2微球蛋白( β2米)。HLA-B ∗ 27日与抗原肽聚集于内质网(ER)。的抗原peptide-bound HLA-B ∗ 27个复杂被允许离开ER和运送到细胞表面的抗原表达CD8 + t细胞( 7]。

HLA-B的内在倾向 ∗ 27重链(B27-HC)允许在ER折叠缓慢,导致错误折叠的积累B27-HC和重链的形成为,(B27-HC)2,这是由二硫键共价连接在半胱氨酸- 67 ( 8- - - - - - 10]。(B27-HC)2显示在细胞表面,作为配体的杀手细胞Ig-like受体(KIR3DL2) [ 11, 12]。KIR3DL2存在自然杀伤(NK)细胞的细胞膜和辅助17 Th17细胞。最近的研究已经证明,(B27-HC)2可以与KIR3DL2受体相互作用和促进NK细胞的生存和生长,Th17细胞( 13, 14]。激活的NK细胞和Th17细胞(B27-HC)2的发病机理可能做出的贡献。

此外,错误折叠B27-HC积累腔的ER可以联想到Grp78 /毕普函数作为伴护蛋白( 1, 15, 16]。在正常情况下没有显著积累蛋白质错误折叠和展开的腔,Grp78 /毕普结合三个传感器,ATF6, IRE1,活跃,展开的蛋白质反应(UPR)膜ER和街区的功能( 17, 18]。错误折叠的累积B27-HC在ER为Grp78 /毕普绑定提供了新目标。因此,Grp78 /毕普排放从其初始复合物,使传感器蛋白质诱导UPR [ 17]。事实上,错误折叠HMy2 B27-HC过表达。C1R观察细胞与Grp78 /毕普coimmunoprecipitation试验( 15, 16]。在HLA-B ∗ 27个转基因老鼠,过表达HLA-B ER应激诱导 ∗ 27日激活UPR上调NF -的激活 κB,并促进促炎细胞因子的表达,如肿瘤坏死因子- α(肿瘤坏死因子- α),il - 1、il - 6和IL-23 [ 19- - - - - - 21]。骨骨髓来源的巨噬细胞释放IL-23激活Th17细胞被观察到当UPR的积累引起的错误折叠B27-HC在转基因老鼠。

最近的研究表明,HLA-B ∗ 嗯可以促进HLA-B 27-binding肽 ∗ 27折叠和压制的形成(B27-HC)2( 22, 23]。在先前的研究中,我们设计了一种新颖的6-ubiquitin-tagged Tat-derived肽(星期四)车辆交付HLA-B ∗ 27-binding肽,RRFKEGGRGGKY RRYLENGKETL,从细胞外空间到ER ( 16]。交付肽都是源自于DNA引物酶 沙眼衣原体分别和人类B27-HC [ 24, 25]。星期四的主要序列,从糖基的n端,包含一个Tat-derived肽,一个他6标签和泛素。货物肽立即与泛素的糖。GRKKRRQRRR人类免疫缺陷病毒Tat-derived肽,是一种小型基本肽可以有效地把不同类型的货物,包括寡肽、跨膜( 26, 27]。的THU-HLA-B ∗ 27-binding肽融合蛋白迅速易位到细胞溶质,HLA-B ∗ 27-binding肽出院星期四通过特定的裂解反应由胞质泛素c端水解酶(排序)。释放肽当时易位到内腔ER的抗原处理相关转运子(TAP) ( 28, 29日]。呃,HLA-B ∗ 27-binding肽可以促进B27-HC的折叠和抑制(B27-HC)的形成2。的水平(B27-HC)2的浓度降低,组装HLA-B吗 ∗ 27 HC / β2米/肽复杂细胞膜上的增加。然而,它仍然未知是否促进HLA-B ∗ ER的27个折叠可以抑制IL-23 / IL-17轴的免疫细胞。在这项研究中,我们两个新的HLA-B交付 ∗ 27-binding肽,KRGILTLKY SRYWAIRTR,星期四进急诊室的车辆。我们的研究结果表明,目标HLA-B的交付 ∗ 27-binding肽HLA-B ER可促进 ∗ 27个折叠和抑制IL-17A或IL-17A / IL-23 PBMCs孤立的从病人的表达对脂多糖(LPS),表明HLA-B之间强烈的联系 ∗ 27个错误折叠的ER和激活IL-23 / IL-17轴。

 2。材料和方法

丙烯酰胺、氯化镍、二硫苏糖醇(DTT)、三羟甲基氨基甲烷、液Luria-Bertani肉汤(磅),氨苄青霉素,EDTA,异丙基咪唑 β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) phenylmethylsulfonyl氟化物(PMSF),脂多糖(LPS)、拖把、嘌呤霉素,苯甲脒,十二烷基硫酸钠,叠氮化钠、氯化钠、tem、过硫酸铵,甘氨酸,潮霉素B获得Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。螯合琼脂糖和SP琼脂糖从通用电气医疗集团购买(乌普萨拉,瑞典)。tat-derived肽(GRKKRRQRRR)他的准备6泛素(星期四)和THU-RRFKEGGRGGKY (THUC)遵循的方法 16]。

2.1。蛋白质纯化

互补编码THU-KRGILTLKY(承天顺)THU-SRYWAIRTR (THUNP),他的6-ubiquitin-KRGILTLKY(华),和他6-ubiquitin-SRYWAIRTR (HUNP)是由一个两步聚合酶链反应(PCR)。用于PCR扩增的引物中列出补充图 S1。由此产生的产品从第一个PCR是用作第二个PCR模板。由此产生的产品的第二次PCR克隆到pET28a 新人道我/ Xho我网站的质粒。 大肠杆菌BL21 (DE3)与重组细胞转换向量编码承天顺,THUNP,华,或HUNP成长在一个升磅肉汤和0.3克/升硫酸卡那霉素在37°C用颤抖的在250 rpm。吸光度在600纳米时在0.6和1.0之间,0.38克IPTG添加1毫米的最终浓度诱导蛋白表达。细菌被离心收获后三个小时的归纳。30毫升的颗粒状细胞resuspended 20毫米Tris-HCl缓冲区(pH值7.9),含有氯化钠0.5米,0.2毫米PMSF,叠氮化钠0.02%,苯甲脒和4毫米,由法国媒体和细胞溶解。不溶性组分被离心20分钟的20000克。上层清液加载到倪2 +琼脂糖列(2.5×10厘米)。洗后用一个体积相同的缓冲区,结合蛋白与一个线性筛选了咪唑梯度从5毫米(500毫升)1.0米咪唑(500毫升)在同一个缓冲区。包含蛋白质表达的分数是汇集,对去离子水透析(2升)和五个变化在36小时内删除多余的试剂,并冻干粉。然后冻干蛋白质溶解的20毫升20毫米拖把(pH值7.0)和0.2毫米EDTA。所有组件解决了SP琼脂糖层析(2.5×20厘米)与线性梯度从0(500毫升)2 M氯化钠(500毫升)。包含目标蛋白质的分数是汇集,对去离子水透析和冻干。

 2.2。道德声明

根据修改后的纽约标准定义的患者( 30.]这项研究招募了2014年1月至2014年12月在台湾南部地区教学医院。实验程序的分离人类PMBCs从病人已被评估和批准的机构审查委员会(IRB) Dalin慈济医院,台湾佛教慈济医疗基金会(B10302005数量)。书面知情同意了所有的研究的病人。人类PBMCs后的患者准备方法如前所述[ 31日]。

 2.3。免疫印迹分析

HMy2。C1R细胞(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州)属于B-lymphoblast不充分地表达抗原的细胞 ∗ 或HLA-B ∗ 基因( 32]。两个C1R-B ∗ 27:04细胞和TAP1-knockdown C1R-B ∗ 来自HMy2 27:04细胞。C1R细胞稳定HLA-B过表达 ∗ 27:04重链(B2704-HC)亚型B27-HC [ 16]。C1R-B ∗ 27:04细胞(3×106细胞/)生长在24-well盘子和维护在1毫升Iscove修改杜尔贝科的介质(IMDM)(表达载体,卡尔斯巴德,CA)与10%胎牛血清的边后卫(表达载体)和200 μg / ml潮霉素b C1R-B ∗ 27:04细胞(3×106细胞/)TAP1击倒维持在同一介质为0.4 μ克/毫升嘌呤霉素。细胞治疗20 μ克承天顺,星期四,华,THUNP或HUNP和收获在表示时间。膜蛋白提取使用ProteoExtract原生膜蛋白提取工具包(Calbiochem,达姆施塔特,德国),根据制造商的指示。新鲜的碘乙酰胺(10毫米)是包含在所有的缓冲块在膜蛋白提取二硫桥形成。整除的上层清液中膜蛋白分离提取nonreducing sds - page (10%);转移到聚乙烯二氟化物膜(通用电气医疗集团);免疫印迹和BH2, anti-misfolded HLA-B ∗ 27个单克隆抗体( 16];并分析了辣根过氧化物酶-(合)共轭山羊anti-mouse免疫球蛋白(圣克鲁斯生物技术、达拉斯、TX)。

 2.4。流式细胞术

所有化验后描述的方法( 16]。C1R-B ∗ 27:04细胞(2×106细胞每)或TAP1-knockdown C1R-B ∗ 27:04细胞(2×106每口井的细胞)生长在1毫升IMDM 10%的边后卫,200 μ0.4 g / ml潮霉素B, μ克/毫升嘌呤霉素。细胞治疗10 μM承天顺,10 μM THUNP, 10 μ星期四,10 μ米花,或10 μM HUNP一夜之间,其次是洗涤三次与PBS和染色W6/32抗体(Abcam、剑桥、马;1:500稀释)在黑暗中30分钟。与PBS三次洗涤后,染色细胞孵化了山羊FITC-conjugated anti-mouse免疫球蛋白(微孔、泰梅库拉、钙;1:500稀释)在黑暗中30分钟,用PBS三次,并通过流式细胞术分析。

 2.5。定量实时逆转录酶聚合酶链反应

PBMCs (3×106细胞)与患者保持RPMI1640中、处理200 ng有限合伙人+ 20 μg THUC,承天顺,或THUNP 37°C公司为5%224 h。的总RNA治疗PBMCs分离利用QIAamp RNA血液迷你包(试剂盒GmbH,德国)。干扰素- γ肿瘤坏死因子- α,il - 6、IL-17A或IL-23信使rna被实时PCR放大使用一步SYBR Taq交货存在工具包(豆类、志贺、日本)。

 2.6。统计分析

数据显示为±SD方法。 P 值被Mann-Whitney获得 U测试。 P 值小于0.05被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。蛋白质纯化

重组THU-KRGILTLKY(承天顺),THU-SRYWAIRTR (THUNP),他的6-ubiquitin-KRGILTLKY(华),或他的6在单独-ubiquitin-SRYWAIRTR (HUNP) 大肠杆菌BL21 (ED3)和两步色谱纯化。KRGILTLKY和SRYWAIRTR肽都是源自流感病毒的人类肌动蛋白和核蛋白质,分别为( 33]。由法国媒体细胞破裂后,原油提取纯化了倪2 +琼脂糖层析和SP琼脂糖层析。的同质性分析了纯化蛋白sds - page(图 1)。

sds - page分析重组THUNP承天顺,星期四,HUNP,华。一个整除(2 μg)的重组THUNP承天顺,星期四,HUNP,华是解决通过sds - page(15%)和考马斯亮蓝染色。巷1:分子量标记,巷2:THUNP,巷3:承天顺,巷4:星期四,巷5:HUNP,和6巷:华。

 3.2。目标交付HLA-B < inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M42 " > < mml: msup > < mml: mrow / > < mml: mrow > < mml:莫>∗< / mml:莫> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml:数学> < / inline-formula > 27-Binding肽为ER促进HLA-B < inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = " M43 " > < mml: msup > < mml: mrow / > < mml: mrow > < mml:莫>∗< / mml:莫> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml:数学> < / inline-formula > 27折叠

我们使用了清华两HLA-B车辆交付 ∗ 27-binding肽,KRGILTLKY和SRYWAIRTR C1R-B的ER ∗ 27:04。我们首先验证治疗是否承天顺降低(B27-HC)的生产2在C1R-B ∗ 27:04细胞。BH2,单克隆抗体可以识别(B27-HC)2是用于我们的早期研究[ 16, 34]。数据 2(一个)和 2 (b)显示的水平(B27-HC)2THUA-treated细胞减少,而无论是清华还是老栓治疗(B27-HC)的水平变化2。治疗C1R-B ∗ 27:04承天顺、华、THUNP HUNP或清华的表达水平没有影响B27-HC(图 2 (c))。因此,很明显,通过乙肽承天顺进入细胞。货物肽在细胞溶质通过摆脱承天顺乳沟的内生泛素c端水解酶,然后运送到腔ER的利用促进B27-HC折叠。C1R-B时又发生了类似的结果 ∗ 与THUNP 27:04细胞治疗。(B27-HC)的形成2在C1R-B ∗ 27:04细胞显著抑制THUNP治疗(数字 2 (d)和 2 (e))。无论是HUNP还是星期四治疗能抑制(B27-HC)的生产2(数据 2 (d)和 2 (e))。丝锥,heterodimeric蛋白质TAP1和TAP2组成的子单元,位于膜,属于一个磷酸腺苷磁带(ABC)转运体成员( 28]。胞质肽被利用ER转移,他们组装与MHC分子类我运输到细胞表面。我们表明,击倒TAP1亚基可以扰乱THUNP-promoted减少(B27-HC)2形成(图 2 (f)和 2 (g))。然而,击倒TAP1并不影响在C1R-B B27-HC的表达 ∗ 27:04细胞(图 2 (c)),这表明抑制(B27-HC)2形成由THUNP治疗开发活动的障碍。

治疗的效果与承天顺或THUNP (B27-HC)2生产C1R-B ∗ 27:04细胞。C1R-B后 ∗ 27:04细胞处理每个表示次重组蛋白,膜蛋白提取。50 μ分析了g(提取nonreducing sds - page(10%)和免疫印迹BH2单克隆抗体和anti-transferrin (Tf)受体抗体。Tf受体作为内部控制。(一)承天顺治疗12 h,但不是星期四或栓治疗,显著降低的水平(B27-HC)2。(b)的比值(B27-HC)2/ Tf受体平均三个独立实验(一)策划对清华的时候,华,或承天顺治疗(平均±标准差, n = 3 )。(c) C1R-B待遇 ∗ 27:04细胞与清华、华、HUNP承天顺,THUNP或TAP-1击倒不影响B27-HC的表达水平。C1R-B ∗ 27:04细胞治疗20 μg(星期四)华、HUNP承天顺,或者THUNP 24 h。膜蛋白提取。一个整除(50 μg)提取的蛋白质进行了分析通过减少sds - page BH2单克隆抗体和免疫印迹。(d)治疗THUNP减少(B27-HC)的形成2。(e)的比值(B27-HC)2/ Tf受体平均三个独立实验(d)策划反对清华的时候,HUNP或THUNP治疗(平均±标准差, n = 3 )。(f) TAP1-knockdown抑制THUNP-induced减少(B27-HC)2。(g)的比值(B27-HC)2/ Tf受体平均三个独立实验(f)绘制THUNP治疗的时间(平均数±标准差, n = 3 )。 P 值被Mann-Whitney获得 U测试。

 3.3。交付的肽可以显示在细胞表面

假设肌动蛋白肽或NP肽针对C1R-B的ER腔 ∗ 27:04清华的汽车,它将提高B27-HC折叠和组装成B27-HC / β2m heterodimeric复杂。因此,组装B27-HC / β2米/肽heterotrimeric复杂将会增加,然后会被输送到细胞表面。两个种群的C1R-B ∗ 27:04细胞被流仪观察分析(数据 3(一个)和 3 (c))。细胞在小人口约占C1R-B总数的22% ∗ 27:04细胞但显示HLA-B的低水平 ∗ 27:04在细胞表面,根据W6/32染色。这可能表明B27-HC低的表达在这个人口。另一个人口包含大多数C1R-B ∗ 27:04细胞。这一组的细胞显示HLA-B的高水平 ∗ 27:04在细胞表面。因此,组装B27-HC /的水平 β2细胞膜上的m /肽heterotrimeric复杂将会增加。因此,我们分析是否ER-targeted肌动蛋白或肽NP运送到细胞的质膜B27-HC / β2m复杂C1R-B ∗ 27:04。如果折叠B27-HC / β2米/肽heterotrimeric复杂等离子体膜存在,它将被W6/32,单克隆抗体识别折叠MHC类我分子( 35]。C1R-B后 ∗ 27:04细胞治疗与承天顺或THUNP W6/32-reactive细胞明显增加(的人口数据 3(一个)- - - - - - 3 (d)),这表明肌动蛋白肽或NP肽B27-HC /呈现在细胞表面 β2m复杂。然而,增加W6/32-reactive细胞群C1R-B时没有被观察到 ∗ 27:04细胞治疗与清华、花或HUNP(数字 3(一个)- - - - - - 3 (d))。此外,利用函数的可拆卸的减损TAP1减少抗原肽的易位到急诊室,导致降低组装B27-HC / β2m复杂抗原肽和减少细胞膜上的肽表示。显然,TAP-knockdown货物肽在细胞表面的细胞抑制即使他们承天顺或THUNP(数据处理 3(一个)- - - - - - 3 (d))。

治疗或承天顺THUNP增加细胞表面的抗原肽针对C1R-B ∗ 27:04。与承天顺(a)治疗,但不是星期四或华,增加了HLA-B ∗ 27:04 HC / β2米/ KRGILTLKY C1R-B的复杂呈现在细胞表面 ∗ 27:04,如流式细胞仪探测到。击倒TAP1废墟的抗原肽、KRGILTLKY呈现在细胞表面。(b)的意思是通道荧光测量(a)从三个独立实验平均(平均±标准差, n = 3 )。值意味着荧光测量C1R-B人口众多的频道 ∗ 27:04细胞显示HLA-B的高水平 ∗ 27:04在细胞表面细胞治疗承天顺时增加。(c)治疗THUNP,但不是星期四或HUNP,增加了HLA-B ∗ 27:04 HC / β2米/ SRYWAIRTR复杂呈现在细胞表面,通过流式细胞仪检测。TAP1击倒损害抗原肽,SRYWAIRTR,呈现在细胞表面。(d)的意思是通道荧光测量(c) C1R-B时增加 ∗ 与THUNP 27:04细胞治疗。值(平均数±标准差, n = 3 )测量高人口的细胞显示HLA-B的高水平 ∗ 27:04在细胞表面平均是三个独立的实验。统计学意义是Mann-Whitney获得的 U测试。

 3.4。目标交付HLA-B < inline-formula > < mml:数学xmlns: mml = " http://www.w3.org/1998/Math/MathML " id = "还有M78 " > < mml: msup > < mml: mrow / > < mml: mrow > < mml:莫>∗< / mml:莫> < / mml: mrow > < / mml: msup > < / mml:数学> < / inline-formula > 27-Binding肽的ER抑制IL-23 / IL-17轴PBMCs孤立从病人对有限合伙人的回应

一些证据表明,IL-23 / Th17轴高度参与发病机理( 21, 36- - - - - - 38]。然后,我们被问及针对HLA-B的交付 ∗ 27-binding肽ER可以抑制IL-23 / IL-17 PBMCs孤立的从病人的表达对有限合伙人的回应。HLA-B细胞因子表达 ∗ 27-expressing PBMCs被LPS刺激没有承天顺,THUC或THUNP(图 4(一))。图 4 (b)显示目标HLA-B的交付 ∗ 27-binding肽到星期四可以抑制ER的表达IL-17A HLA-B ∗ 27-expressing PBMCs。我们也观察到,THUNP治疗可以减少IL-23和TNF - α的表情PBMCs(图 4 (b))。针对HLA-B的交付 ∗ 27-binding肽为ER未能影响il - 6的表达(图 4 (b))和干扰素- γ信使rna(图 4 (b))。

THUC治疗的影响,承天顺,或THUNP生产的促炎细胞因子mrna PBMCs孤立从病人对有限合伙人的回应。(描述的合适的引物合成 40]。信使rna的相对表达水平是由以下方程:(40−阈值周期(Ct)调整后18 s rRNA)的表达。(a)用LPS促进mRNA的表达细胞因子治疗,肿瘤坏死因子- α,正 γ,il - 6, IL-23 IL-17A mrna(平均数±标准差, n = 9 )。 P 获得的价值 t以及。(b)治疗THUC、承天顺或THUNP减少IL-17A mRNA的表达。治疗THUNP也抑制TNF的表达 α和IL-23 mrna(平均数±标准差, n = 9 )。 P 值是通过单向方差分析测试随后Sidak多重比较测试。

 4所示。讨论

压倒性的表达B27-HC证明自发发展就像疾病的转基因鼠( 19- - - - - - 21]。在HLA-B ∗ 27个转基因鼠模型中,积累的错误折叠B27-HC ER可以触发UPR。的mrna水平UPR标记,包括Grp78,切,XBP-1转录因子,在骨骨髓来源的巨噬细胞显著增加,累积的错误折叠引起的重链HLA-B ∗ 27日与的大小UPR upregulation高度相关。IL-23生产骨骨髓来源的巨噬细胞遭受UPR thapsigargin或HLA-B触发 ∗ 27个错误折叠由有限合伙人协同刺激。IL-23是一个关键的细胞因子诱导天真的CD4 + t细胞的分化为Th17细胞产生促炎细胞因子,包括IL-17 [ 39]。刺激IL-23 / IL-17轴HLA-B之间提供了强有力的联系 ∗ 27个错误折叠和UPR在转基因老鼠。然而,激活UPR和生产之间的联系的促炎细胞因子在发病机制仍不清楚 38]。巨噬细胞来自患者在有限合伙人未能刺激UPR但显著调节IL-23生产,支持IL-23 / IL-17轴高度参与了发病机理和治疗目标( 38]。

(B27-HC)2是一个关键的分子发病机制。大多数的患者显示(B27-HC)2在他们PBMCs [ 40]。骶髂关节炎的平均成绩和腰椎浴强直性脊柱炎放射学指数得分更高,患者(B27-HC)2在他们PBMCs [ 40]。(B27-HC)2一个KIR3DL2配体的存在对NK细胞表面,Th17细胞。(B27-HC)2能够刺激Th17细胞IL-17生产和促进炎性反应。尽管KIR3DL2 + 15%的CD4 t细胞的细胞由PBMCs,这群占Th17作为病人的主要数字( 13, 14]。从人类单克隆抗体,HD6筛选噬菌体展示库能具体地认识到重组(B27-HC)2在绑定化验 41]。HD6可以阻止的绑定(B27-HC)2KIR3DL2和抑制KIR3DL2 + NK细胞的生存和生长。HD6抑制IL-17生产PBMCs隔绝的病人。在这项研究中,我们证明了目标HLA-B的交付 ∗ 27-binding肽进入ER可以抑制IL-23 / IL-17轴PBMCs隔绝病人(数字 4(一)和 4 (b))。抑制IL-17 mRNA表达响应有限合伙人可能是因为减少(B27-HC)2生产与THUC PBMCs治疗后,承天顺或THUNP。因此,刺激KIR3DL2 + NK和Th17细胞(B27-HC)2下降,减少IL-17的生产。

是一种慢性炎性疾病的中轴骨。的地区关节脊柱和骨盆骶髂关节的主要影响病人。在严重的情况下,患者会逐渐出现关节僵硬和syndesmophytes [ 4]。非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)经常用于治疗;肿瘤坏死因子- α阻断剂被用于大多数NSAID-resistant病人。然而,尽管anti-TNF - α治疗可以消除炎症,syndesmophyte形成的发展不能终止( 4, 42]。副作用,如真菌感染的风险增加和肺结核的潜在患者 结核分枝杆菌感染后升级anti-TNF - α治疗( 43),或一些病人不应对这种疗法。此外,最近的报告表明,IL-23 / IL-17轴不受anti-TNF——影响 α治疗的患者( 44]。最近,治疗的目标都集中在IL-23 / IL-17轴。几个潜在的单克隆抗体针对IL-23 / IL-17通路进行了临床试验的治疗( 45, 46]。

 5。结论

激活IL-23 / IL-17轴在发病机理是最初源自于HLA-B ∗ ER的27个错误折叠。我们的研究结果表明,目标HLA-B的交付 ∗ 27-binding肽ER使用清华汽车可以促进HLA-B ∗ 27个折叠,减小(B27-HC)2生产和抑制IL-23 / IL-17轴的激活。我们的结果证实了HLA-B之间的强烈联系 ∗ 27个错误折叠和激活IL-23 / IL-17轴的发病机理。我们构建肽交付肽治疗的潜在应用的发展。

 的利益冲突

作者声明没有竞争的经济利益。

 作者的贡献

Hui-Chun Yu和黄Kuang-Yung贡献了同样的工作。

 确认

这项工作是支持由Dalin慈济医院,佛教慈济医疗基金会(DTCRD DTCRD 105 - e - 16日,104 (2)-I-01),和慈济医疗任务项目105-01-03,佛教慈济医学基金会和美国国家科学委员会,台湾中华民国(NSC 102 - 2320 - b - 194 - 002)。

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图S1:用于PCR引物序列。

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