文摘
流行病学研究表明大量食用肉类与主要与年龄相关的疾病,包括心血管疾病。餐后增加血浆脂质异常后肉骨粉已假设在发病的机制。然而,这仍然是未知的,如果餐后血清后派生一个正常的肉骨粉可以影响血管内皮功能,如果肉的类型和捐助者的年龄是至关重要的因素。在这里,我们显示餐后血清的影响来源于健康的成年人和老年人志愿者食用肉类食物对人类冠状动脉内皮细胞(HCAEC)氧化应激、基因表达、DNA损伤、细胞衰老。我们观察到一个暴露在餐后血清诱发略有增加,活性氧与调制相关联的基因表达通路相关的氧化应激反应和代谢。ROS增加postprandial-induced不是与可衡量的DNA氧化损伤有关。然而,反复接触餐后血清诱导细胞衰老的加速度。考虑与年龄相关的血管疾病的细胞衰老的有害作用,结果显示一个新的机制,过多的肉类消费和时间老化期间在餐后状态可能影响健康状况。
1。介绍
许多流行病学研究已经大量食用加工肉类,特别是加工红肉与心血管疾病(CVD) (1)、中风(2)、糖尿病(3),和结直肠癌4]。这部分归因于生成氧化产品在热处理的肉(5),以及餐后状态的促炎和prooxidative条件(6]。餐后甘油三酯升高已报告损害血管内皮功能(7和施加proapoptotic对内皮细胞的影响8]。基因表达分析的内皮细胞暴露于hyperlipaemic餐后血清高脂肪的挑战后,从健康志愿者显示转录的基因参与增长逮捕和细胞凋亡9]。然而,这仍然是未知的,如果餐后血清后派生一个正常的肉骨粉可以影响内皮功能在某种程度上类似于所示脂肪后的挑战。曝光正常的人类冠状动脉内皮细胞(HCAEC)健康志愿者的餐后血清后肉骨粉一般包括饮料,配菜,和香料10)可以提供一个模型来模拟上餐后状态的生理影响内皮细胞(11]。的类型和质量最重要的是,这顿饭的肉类和其他组件以及年龄和健康状况的个人消费的食物可以改变餐后反应的特点,在一个正常的饭(12- - - - - -14]。即使考虑到正常的饭可以提供较低的生理影响(例如,餐后脂质增加)与脂肪的挑战相比,餐后状态可能诱发subcytotoxic强调长远来说是有害的。例如,模型重复短接触subcytotoxic压力(紫外线、氧过多、过氧化氢等)显示细胞衰老作为共同的命运(15,16]。在这里,我们报告的影响,餐后血清来源于健康的成年和老年志愿者食用餐根据不同类型的肉类HCAEC氧化应激,DNA损伤,细胞衰老,同时提供机械的见解通过基因表达分析。
2。材料和方法
2.1。研究设计
研究小组由6个成年人(年龄范围26-51年)和6个老年人(年龄范围66 - 73年),normolipemic健康,不吸烟的男性。所有志愿者正常消化的物理考试没有任何病史,肾、心血管、内分泌或慢性疾病。成年受试者的物理特性(均值±SD)年龄(年)39.3±11.2,体重(公斤)81.3±4.9,BMI(公斤/米2)24.8±2.4。老年人的生理特征(平均±SD)年龄(年)68.7±3.4,体重(公斤)72.7±6.71,BMI(公斤/米2)22.3±1.4。研究的目的和潜在风险解释所有科目,和他们的书面同意之前获得的参与。进行了研究后INRCA伦理委员会的批准。
志愿者指导消费每个星期的星期二和星期四一个具体的餐从三种不同的类型:(1)基于猪肉——(PM),(2)基于兔肉——(RM),和(3)鸡饭(CM)饭。所有的食物材料是加权和交付的每个志愿者前一天消费。志愿者还被指示不要改变他们每周饮食习惯研究的整个长度(75天,约10.5周需要完成所有餐所有科目),具体说明实验煮饭。吃饭是为了完成常见的意大利传统陪oven-cooked肉烤土豆和使用调味品如迷迭香、盐和特级初榨橄榄油。200克的主要食品材料包括(都是可以食用的)的猪排(点餐)或250 - 350克(约。60% - -70%可食用的鸡季度餐(CM)或(约400克。50%可食用)的兔子(RM餐)从当地生产商获得。这顿饭还包括5毫升(4 g)的特级初榨橄榄油,200克土豆(碳水化合物17.5%,蛋白质2%,水分79%),0.5 g的迷迭香,和2克盐(从本地市场商业产品)。所有调味品被添加到肉和煮熟在烤箱180 - 200°C 45 - 60分钟,最后烤5 - 10分钟。建立了温度和烹饪时间的范围以满足个人偏好的志愿者。 Drinks consisted of water ad libitum and a half glass of red wine (150 ml, 12.5% alcohol). Fresh pork chops showed the following proximate composition (g/100 g meat): protein 19.2, total fat 11.4, moisture 68.0, and ash 1.4. Rabbit pieces showed the following proximate composition: protein 22.0, total fat 2.4, moisture 74.3, and ash 1.3. Chicken meat showed the following mean composition: protein 23.6, total fat 2.5, moisture 72.6, and ash 1.3. The total caloric intake was 669, 521 and 536 Kcal for the pork, rabbit, and chicken meals, respectively.
2.2。血清收集
空腹血清(FS)在一夜之间迅速获得了至少10 h。血液被撤回在早上为了获得空腹血清样品。血液样本被收集到7毫升真空采血管血清管和在室温下放置1小时。离心后,血清收集,分为整除,立即冻结在−80°C。空腹血清池遵循同样的策略用于餐后血清。
餐后餐后血清收集4小时从每个志愿者。为了确保有足量的餐后血清实验,成年志愿者消耗5餐的每种类型(共30从每种类型的饭餐后血清样本)和老年志愿者消耗2餐的每种类型(总数为12个餐后血清样本从每种类型的餐)。成立后个体的血清血脂水平,血清样本从每顿都汇集(分别为成年和老年志愿者)为了处理6(老年人)或10(成年人)集中样本用于细胞实验(如计划所述1补充材料)。
2.3。细胞培养和增殖
HCAECs(人类冠状动脉内皮细胞)从Clonetics购买公司(Lonza)和内皮循证医学基础培养基培养,补充了EGM-2或EGM-2 / MV SingleQuots含有0.1% rh-EGF(重组人表皮生长因子),0.04%氢化可的松,0.1% VEGF(血管内皮生长因子),0.4% rh-FGF-B(重组人成纤维细胞生长因子),0.1% rh-IGF-1(胰岛素-如生长因子),0.1%抗坏血酸,0.1%的肝素钠,0.1% ga - 1000(硫酸庆大霉素加两性霉素B),和10%胎牛血清或10%人类的空腹和餐后血清。
HCAECs镀是在播种密度2.500细胞/厘米2T25烧瓶或12-well细胞培养板中含10%胎牛血清的存在或存在10%的人类血清(空腹或餐后)。细胞培养在烧瓶内达到融合6 - 7天后,作为评估光显微镜检查,他们通过每周的间隔。细胞培养在培养板达到融合后3 - 4天,通过每周两次。胰蛋白酶化和金属堆焊前,后收获细胞数使用血球计和人口的数量倍增(PD)是使用以下公式计算:(log10F−log10我)×3.32 (F表明细胞的数量的最后一段我细胞的数量在播种时)(17]。内皮细胞对内皮细胞衰老研究的后续段落之前连续两个人口倍增等于或低于0与衰老相关的形态学变化揭示了显微镜检查。累积人口翻倍(CPD)计算了PD的变化的总和。
2.4。RNA提取
总RNA提取HCAECs接受不同的治疗使用RNeasy迷你包(试剂盒、希尔登,德国)根据制造商的协议。随后,RNA浓度评估NanoDrop分光光度计(260/280吸光度比值)和RNA质量取决于凝胶电泳。
2.5。细胞衰老生物标志物
Senescence-associated苷活动(SA-beta-gal)是由流式细胞术如前所述[18]。简单地说,C12FDG pH值添加到调制/缓冲区。HCAECs孵化了这个解决方案1 h在37°C公司5%2。孵化后,HCAECs使胰蛋白酶化,用PBS, resuspended在200年μl PBS,使用库尔特史诗XL流式细胞分析仪和分析。数据分析工具软件,和细胞碎片被排除在光散射参数的基础。C12FDG FL1平均荧光强度的测定(MFI) HCAEC人口。
p16表达,总RNA进行使用的互补脱氧核糖核酸合成iScript逆转录酶(Bio-Rad大力神,CA)根据制造商的指导方针。管家基因的信使RNAβ肌动蛋白和p16当时测量的实时PCR在Bio-Rad iQ5光学实时热循环(Bio-Rad大力神,CA)使用1μ20 g的互补脱氧核糖核酸的总量μl包含智商SYBR绿色Supermix (Bio-Rad大力神,CA)。β肌动蛋白基因作为参考。正向和反向引物用于该模型曾被报导过(19]。任何低效RNA输入或逆转录被规范化的看家基因修正。p16使用阈值计算周期的相对量(Ct)值从qPCR获得和应用∆∆Ct方法(ΔCt = Ct beta-actin−Ct p16 mRNA)。低ΔCt值称为低p16 mRNA的表达。
2.6。活性氧的生产总量的测定
总细胞活性氧(ROS)生产HCAECs被加载后流式细胞术分析细胞高度敏感的荧光探针,[5和6 chloromethyl-2 ,7-dichlorodihydrofluorescein二乙酸,乙酰酯(CM-H2DCFDA)](分子探针,生活技术)。200整除之一,000个细胞是用作积极控制和preincubated 5分钟与叔丁基氢过氧化物溶液(70%)稀释1:100年PBS然后用PBS洗2次。所有其他HCAECs整除,包括积极的控制,在37°C孵化与2在黑暗中30分钟μM PBS缓冲的探针。CM-H2DCFDA由胞内酯酶裂解和氧化时变成了荧光染料。细胞被洗2次PBS和分析流式细胞术(库尔特史诗XL)。细胞的平均荧光强度000(自体荧光校正)被作为总ROS的测量负载。
2.7。DNA氧化损伤的测量
HCAECs经过4个小时的曝光与餐后血清颗粒使胰蛋白酶化和1整除的350.000细胞在液态氮冷冻然后储存在−80°C。另一个整除350.000细胞是镀在T25烧瓶和孵化18 h 37°C的包含10%胎牛血清的培养基。后的第二天,HCAECs被胰蛋白酶化分离,然后在液态氮冷冻,储存在−80°C到使用。使用QIAamp基因组DNA纯化DNA微工具包(试剂盒、意大利)后,制造商的协议。然后,DNA消化50°1 h和核酸酶P1 (Sigma-Aldrich、意大利)根据制造商的指示。孵化后的碱性磷酸酶1单位37°C 30分钟,DNA样本煮10分钟和放置在冰和随后储存在−20°C到使用。8-OHdG测量使用竞争环境影响评价试验(StressMarq生物科学Inc .)。测试使用一个anti-mouse IgG-coated板和8-OHdG-enzyme共轭的示踪剂组成。这种格式的优点提供低变异性和敏感性的增加与化验,利用antigen-coated板块。标准8-OHdG化验的浓度范围0 - 3000 pg / ml的副本。 Sample DNA assays were performed in duplicate, and the average concentration of 8-OHdG was expressed per nanogram of DNA.
2.8。微阵列基因表达分析
微阵列过程执行根据Affymetrix协议(美国加利福尼亚州圣克拉拉)。总之,100 ng的总RNA放大和标签使用GeneChip®3行+工具包(美国Affymetrix,圣克拉拉,CA)。杂交鸡尾酒含分散,end-labeled单链cDNA准备和杂化的人类基因组U133 GeneChip + 2.0阵列16 h在45°C。(美国Affymetrix,圣克拉拉,CA)。信号强度测量使用GeneChip扫描仪3000 7 g (Affymetrix)和转换成数字数据使用GeneChip命令控制台®软件(显示)。微阵列数据分析是由Partek®基因组学套件6.6 (Partek Inc .,圣路易斯,密苏里州,美国)使用默认Partek归一化参数。Affymetrix玻璃纸文件导入和背景校正和标准化进行了使用GC-robust multiarray平均(GC-RMA)算法。比较治疗组之间进行的方差分析工具中实现Partek软件删除批处理后的效果。为了正确的多重比较和减少假阳性的数量,一个错误发现率(罗斯福)调整值< 0.05与褶皱变化结合使用(FC)≥2。摘要分析了使用ConsensusPathDB (http://cpdb.molgen.mpg.de)[20.)和Partek通路软件(Partek,圣路易斯,密苏里州,美国)。
2.9。统计分析
最初检测数据正态分布。广义线性模型(纵向数据与正常分布变量)或克鲁斯卡尔-沃利斯检验(非正态的分布变量)被用来比较实验中数据组。正常数据图形化表示的意思是±SEM而非正态的数据表示为箱形图。作为统计软件SPSS诉23。
3所示。结果
3.1。血清甘油三酯水平在餐后血清肉餐
基线血糖、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯在正常(70 - 110;< 200;< 100;> 40;< 150葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯)或边界范围(200 - 239;130 - 159年总和低密度脂蛋白胆固醇)的所有课程。禁食值相比,血清甘油三酯水平和脂血症的指数增加4 h后肉饭( 与基线),而血清葡萄糖略降低血清中老年人志愿者(表1)。所有其他变量保持不变。脂血症的饭后指数基于猪肉或兔高相比,年长的成年志愿者( )。在餐后甘油三酯的总量增加血清。的脂肪酸组成餐后血清空腹血清成分只是略有不同。事实上,餐后血清含有很少的一些数量的长链脂肪酸,docosatetraenoic (C22:4),二十四烷(C24:0)和神经(C24:1)酸,空腹血清(补充表中没有检测到1)。
3.2。餐后血清HCAEC ROS增加生产而不是氧化DNA损伤(8-OHdG)几小时后的接触
孵化(4 h)与血清收集4 h猪肉午餐后导致显著增加HCAEC ROS相比与餐前的孵化(禁食)血清(图1)。相反,之间没有发现差异ROS HCAEC生长在自己的媒体与HCAEC孵化FS(图1)。孵化与餐后血清引起的活性氧的水平都低于治疗引起的t但是(图1)。我们发现没有显著改变8-OHdG HCAEC暴露4 h相比,餐后血清空腹血清(图2),也有任何显著差异在更换HCAEC自己的媒介18 h。
3.3。转录剖析HCAEC细胞暴露在空腹或餐后血清从成人和旧的捐助者
全球变化的基因表达分析在HCAEC细胞治疗4 h与空腹或餐后血清退出志愿者猪肉餐后,显示最高prooxidative影响HCAEC(图1)。至少4个独立复制为每个条件执行。双向方差分析确定了2877个基因显著调节餐后血清和空腹血清( )。这些基因,51明显表达( 和罗斯福< 0.05)与绝对的褶皱变化> 1.2。最大的前20个基因褶皱变化显示同一个方向HCAEC暴露于老人和成人餐后血清中列出表2。受影响最严重的路径搜索包括整个基因列表中设置分析工具可用ConsensusPathDB (http://cpdb.molgen.mpg.de)[20.]。重要途径,有助于人类内皮细胞模型显示在表中3。结果证实,最重要的生物功能受到餐后血清暴露包括解毒(化学致癌、异型生物质代谢和药物代谢),氧化应激(氧化应激衰老、MAPK信号通路和氧化应激),细胞衰老(氧化应激衰老和细胞衰老),和炎症介质(TNFR1-induced NF -κB信号通路和肿瘤坏死因子信号)。两个代表图片包括那些最重要的球员参与解毒(芳烃通路)和氧化应激衰老(p53途径)是由Partek通路(数字3和4)。CYP1A1(解毒功能的一个重要球员)和MDM2 (p53-signalling和氧化应激反应的一个重要球员)所代表的两个基因在大多数途径,此外明显褶皱的变化(图的特征5)。此外,CYP1A1明显高于细胞暴露于老年捐助者的血清(空腹和餐后)相比,成人捐赠者的血清,而MDM2在细胞暴露于低老年捐助者的餐后血清相比,成人捐赠者的餐后血清。
(一)
(b)
3.4。重复暴露于餐后血清略加速细胞衰老HCAEC空腹血清
HCAEC井和水瓶在正常培养基培养4 - 6周后显示的表型外观衰老(10 - 12 CPD)和6 - 8周(18 - 20 CPD),分别。这段时间后,细胞被成为不规则的形状与直径增加,因此表现出衰老细胞的特点包括beta-Gal染色。虽然显示的“系统”是加速衰老的外观特性和减少增生性HCAEC的潜力,我们被迫采用这种系统的比较重复暴露在空腹和餐后血清的影响由于有限的可用性生物材料(特别是人类餐后血清)。在第一组实验中(“瓶系统”中执行),我们调查是否单一曝光(4 h)的早期通过HCAEC餐后血清从不同的肉类食物可能会影响生长曲线和衰老的细胞。在这些实验中,并没有找到任何餐后血清对增长的影响曲线(测量在每个通道cpd) HCAEC(补充图1)。为了研究重复暴露于餐后血清的影响HCAEC复制衰老,我们使用了“系统”和餐后血清获得成人志愿者猪肉餐后,随着血清诱导HCAECs最高的单一曝光后氧化应激(图1)。当空腹血清添加一天敷两次,每次4 h,没有明显的,可再生的CPD或SA-beta-gal活动观察差异处理和未经处理的文化(未经处理的媒介文化取代了相同的时间和程序处理细胞)在整个生长曲线(数据没有显示)。相反,减少cpd HCAEC相比对空腹血清观察HCAEC对待餐后血清添加一天两次(4小时)从早期段落复制衰老的发生(图6)。此外,空腹血清相比,SA-beta-gal活性更高的段落末HCAEC治疗一天两次,餐后血清从早期段落复制衰老的发生(图6)。我们还观察到丧失生存能力和p16的表达增加通道10后细胞暴露于餐后血清治疗空腹血清(图6)。
(一)
(b)
(c)
(d)
4所示。讨论
本研究旨在回答这个问题是否急性和慢性暴露HCAECs正常餐后餐后血清退出志愿者组成的oven-cooked肉调味料和配菜可以对内皮细胞产生不利的影响,如果这些影响是受捐助者的年龄的影响。我们发现暴露HCAECs餐后血清,撤回独立于成年人和老年人,可以诱导活性氧产量略有增加。餐后serum-induced氧化应激也与基因的表达参与氧化应激反应,从化合物解毒,细胞衰老和炎症。然而,我们没有发现任何证据表明DNA损伤;因此,这表明单一曝光餐后血清的细胞是兼容一个轻微的压力事件。事实上,一旦删除餐后血清和再生细胞在正常条件下,增殖活动和复制衰老的发生不受影响。HCAEC相反,重复接触餐后血清(每天2次)随着时间的推移影响增殖活动和加速复制衰老的开始在体外。考虑到内皮细胞衰老细胞的积累是一种常见的机制在动脉粥样硬化的基础21- - - - - -23)和其他与年龄相关的疾病(24),这些数据可能形成原理探索一个新的机械链接在饮食习惯和与年龄相关的疾病的风险。
与先前的研究一致由政府在健康男性(高脂肪的挑战9,25,26),我们发现血浆甘油三酯和脂血症的指数增加4 h后oven-cooked肉骨粉(包括土豆,调味料,半杯酒)。我们另外发现脂血症的索引后,猪肉或兔子肉骨粉高与成人相比,老年志愿者。正如前面记录的,餐后脂血增加的大小与衰老(27,28),这一现象可能发生老年人心血管疾病风险而与成人同行。这种现象可能发生由于特异表达的分泌肝甘油三酯的等离子体在餐后时期(28]。餐后脂血也与一般代谢压力有关,表现为上升的氧化应激和促炎细胞因子以及内毒素,据报道,类似于年轻人和健康老年人(29日]。事实上,尽管高脂血症的指数从老年人餐后血清中,我们观察到的氧化应激增加HCAECs暴露于餐后血清血清中老年人和成年人之间相当志愿者,虽然与血清ROS高出一般来自于前者。在任何情况下,可能prooxidant介质已经出现在餐后血清消费(29日]。另外,另一个假设是,线粒体氧化脂质力量的高负担的生产ROS的类比高血糖反应[描述的现象30.]。这可能最终解释结果的比例脂血症的指数之间的各种各样的食物和活性氧的水平。
之前它已经表明,人类脐静脉内皮细胞(HUVECs)暴露于血清4 h后脂肪挑战减少增生性活动(9]。然而,证据正在增加,HUVECs来自血管床没有出现在成年人,表型和epigenetically成年细胞不同,如HCAECs [31日]。虽然我们的志愿者摄取不到一半的脂肪通常管理(约在膳食脂肪的挑战。50克),我们还发现了一种轻微的减少自发HCAECs反复暴露于餐后血清的扩散,这是符合观察氧化应激增加。这种增殖活动减少可能被视为补充有益的效果,以避免额外伤害的压力。事实上,单一曝光(4 h) HCAECs餐后血清诱发只有瞬态和适度增加氧化应激激活的几个防御通路(解毒途径,氧化应激反应和p53)时逆转细胞再生的正常中(数据未显示)没有功能障碍(如通过正常的生长曲线和复制衰老时间)。相反,当曝光重复一天两次对整个细胞寿命,餐后血清的影响生长和衰老的HCAEC透露。Subtoxic氧化应激在细胞培养中会产生一种短暂的适应性反应,最终可能产生有益的激效效应(32]。然而,对于长期反复接触过多的营养,适应性反应可能最终达到高潮的增殖抑制和细胞衰老33]。报告的过程可能是类似于一个加速衰老引起的高浓度葡萄糖培养的人类细胞的培养基(34,35]。我们的转录组和路径分析结果显示额外的假设。的确,餐后血清促进通路的激活参与化学致癌物的解毒,特别是芳香族碳氢化合物解毒途径。这是由postprandial-induced CYP1A1的表达(数字3和5)。这个基因(细胞色素P450酶的总科的一员)不仅是参与代谢多种多环芳烃和其它化合物(包括致癌物质),来自肉类烹饪(36),但也多不饱和脂肪酸转化为信号分子生理和病理活动。膳食脂肪酸可以调解P450感应37)和toll样受体受体激动剂,它可以解释炎症的调制签名后暴露在餐后血清和CYP1A1的改变表现38]。有趣的是,CYP1A1的基底的水平调节细胞暴露于老年人餐后血清的成年人相比,这可能是一致的与衰老血清游离脂肪酸的增加(39]。关于潜在致癌物质的生产,我们知道,红色和白色的肉煮熟的肉在高温下可能有高水平的诱变剂,包括苯并[a]芘(40),其中最研究多环芳烃来自煮熟的肉。接触多环芳烃以来涉及不仅在结肠直肠癌41在心血管疾病中也42),它可能形成了一个投机假设可能的这些化合物对内皮细胞衰老的影响。顺便说一下,发现苯并[a]芘抑制细胞周期在小鼠臂上皮细胞(43),提高突变频率和致癌作用在活的有机体内记者lacZ转基因(突变)鼠标39)和诱导p53蛋白积累,细胞衰老的中介,在各种细胞模型44,45]。最后的结果是符合我们发现upregulation HCAEC细胞衰老和p53通路的模型暴露于餐后血清。另外我们的分析表明,诱导在差别NF1对这些HCAEC暴露于餐后血清。这可能是有关复制衰老加速的NF1损失被称为诱导衰老在人类黑色素细胞(46和成纤维细胞47)以及人类内皮细胞(血管形态发生改变48]。最后但并非最不重要,我们的通路分析报道,TNF和NF -κB信号受到暴露于餐后血清的影响。虽然我们无法预测如果调制可以赞成或抗炎反应,结果与研究一致表明,餐后阶段的特征是炎症介质能够调节NF -κ在餐后阶段B和组织tnf的表达(49,50]。顺便说一下,它最近表明,治疗外周血单核细胞与餐后VLDL脂类分解产品增加TNF的表达α,il - 1β,引发控制,同时激活的NF -κB (51]。
在我们的知识,我们的研究首次地址重复暴露在这个特定环境的潜在后果。不幸的是,它是不可能解决的影响从氧化应激和炎症介质可能暴露在化学物质引起的烹饪过程。然而,很可能他们行动synergically建立的功能结果(减少增生性活动和加速衰老后重复曝光)餐后血清内皮细胞。有趣的是,一个非常类似的在体外技术,细胞系已暴露在从人类或动物血清收集限制热量饮食,已被建议作为一个工具来预测饮食调控的潜在影响长寿的标志(52,53]。事实上,细胞培养暴露在餐后血清来自受试者的热量限制试验显示更大的抗氧化应激,upregulation长寿基因,Sirt1的增加,减少扩散,热冲击阻力的增加(52]。考虑到这些实验是在肝肿瘤细胞不受复制衰老,我们的模型暴露的主要使用人类内皮细胞可能是一个有用的推进。我们模型的限制之一是,我们无法考虑到餐后的生理波动周期根据荷尔蒙分泌物特征和其他因素在活的有机体内条件。此外,老年人参加这项研究的临床标记符合一个出色的健康状况。这一事实可能最终阻碍老年人口调查结果的推广。
根据这些结果,可以得出结论:治疗在体外与餐后血清内皮细胞可能是一个有用的实验工具监控饮食干预的潜在的健康影响和挑战。这个实验工具可能是有用的在设计的实验旨在研究加工食品对健康的影响,特别是在西方社会中,一个重要的一天是在餐后状态6]。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
本研究的资助支持的意大利经济与财政部“工业2015 -免不了Italy-Programma n。MI01_00148。”
补充材料
方案1:池的设计策略采用撤军后获得每顿为了得到样品用于体外实验HCAECs”。“补充表1:脂肪酸成分猪肉、空腹血清和餐后血清后基于猪肉消费的一顿饭。补充图1。增长曲线HCAECs培养单一曝光后在烧瓶(4 h)各种餐后血清。没有差异的报道相比,治疗与空腹血清和正常培养条件与胎牛血清(图中未显示)。(补充材料)