文摘

炎症一直主张可能成为共同的中央发展认知障碍的机制。Rett综合症(RTT)是一个毁灭性的神经发育障碍,主要引起的新创功能丧失的突变基因编码MeCP2。在这里,我们研究了等离子体急性期反应(APR)在第二阶段(即。,“pseudo-autistic”) RTT patients by routine haematology/clinical chemistry and proteomic 2-DE/MALDI-TOF analyses as a function of four majorMECP2基因突变类型(R306C T158M R168X,和大型删除)。红细胞沉降率升高值(平均33.0毫米/小时和8.0毫米/小时,在RTT)被检测到,而c反应蛋白水平持平()。2 de分析确定重大改变总共17蛋白质,其中大部分被归类为APR蛋白质,或正面(点)或负面(点),和(在较小程度上的蛋白质参与免疫系统(与一些蛋白质斑点),有重叠的功能代谢(点)。蛋白质的数量变化与突变的严重程度成正比。我们的研究结果首次揭示的存在亚临床慢性炎症状态有关RTT的“pseudo-autistic”阶段,这是由严重程度相关MECP2基因突变。

1。介绍

RTT(人类ID: 312750)发生的频率高达1:10000人生活女性出生。诱发突变在X与methyl-CpG结合蛋白2基因(MECP2)检测在95%的情况下,尽管广泛的遗传的和表型异质性是良好的1]。大约80%的RTT临床病例显示,所谓的“典型”的临床情况;在度过一段显而易见的正常发展6 - 18个月,RTT女孩失去了认知、社会和运动技能在一个典型的四神经回归(2]。变得明显,有严重的频谱RTT,有些病人可能会出现非典型特征,有时重叠与暗示的自闭症谱系障碍(asd) [3- - - - - -5]。在RTT自闭症特征通常是短暂的,尽管这种情况一直被视为asd的遗传和表观遗传模型(6,7),RTT最近有别于asd组(8,9]。最近,基因序列分析表明几个数百个基因突变相关MECP2基因突变,因此被认为是潜在的疾病修饰符(10),虽然RTT的遗传机制探索一个非凡的程度上,迄今为止生物机制的细节链接MECP2基因突变对蛋白表达的临床表型,并有待澄清。特别是,唯一例外的蛋白质组学研究在小鼠模型(11),可能很少信息存在于RTT-related蛋白质的变化。尽管RTT清楚的神经病理学,细胞和分子机制,导致疾病的起始和进展,尚未阐明。

了多方面的证据表明自闭症的早期免疫激活的存在有一个关联的外围和中央慢性炎症(12- - - - - -16),主要侧重于肥大细胞功能障碍和细胞因子调节异常12,14]。

迄今为止,实验和临床证据已生成的想法几个血清蛋白质,作为生物标记,严格与自闭症的病理生理学(17- - - - - -20.]。尤其重要的炎症相关蛋白的变化表明,至少有一些自闭症儿童亚临床炎症状态显示(21]。在炎症,尤其是4月期间,有一个已知的几种蛋白质减少潜在影响胆固醇运输和抑制氧化现象。这种蛋白质列表包括胆固醇酯转运蛋白、肝脂肪酶和载脂蛋白。人们认为这些蛋白质,减少与增加积极的APR蛋白质,可能改变的高密度脂蛋白抗炎变成促炎粒子(22]。在目前的研究中,我们调查了发生等离子体4月在第二阶段(即。,“pseudo-autistic”) RTT patients by using routine haematology/clinical chemistry and proteomic 2-DE/MALDI-TOF analyses.

2。材料和方法

2.1。主题

这项研究包括25个女性患者临床诊断典型的RTT(平均年龄:5.0岁内部四分位范围3 - 6,值范围3 - 10年)了MECP2基因突变(R306C (),T158M (),R168X (),大删除(删除外显子3和4,)携带不同的表型严重,40的同龄健康对照组(平均年龄:5.0岁,内部四分位范围3 - 5.5,值范围3 - 10年)。RTT诊断和包含/排除标准是基于最近修订的RTT命名一致(23]。考虑到研究的具体目标,受试者临床明显的急性或慢性炎症条件被排除在外,以及个人在抗炎药,或进行补充与已知的抗氧化剂,如ω3多不饱和脂肪酸。所有患者连续承认Rett综合症国家参考中心的大学医院Azienda Ospedaliera大学联盟Senese(险)。受试者检查在这项研究中是一个典型的地中海饮食。RTT临床严重程度评估使用总临床严重程度评分(CSS),验证临床评级专门为RTT,或者基于13个人的“压缩”CSS顺序分类测量在RTT[临床特征普遍24],显性程度也是衡量Rett综合症的使用行为问卷(RSBQ) [25]。病人的血液采样组在住院期间进行常规随访研究,而对照组样本进行常规健康检查期间,运动,或者献血,期间获取的周期的临床检查。健康的对照组性别(考虑到超过98%的RTT患者是女性,我们选择了一个女性对照组)和年龄。批准的研究机构审查委员会和知情同意都来自父母或合法的导师招收患者。

2.2。样本收集和准备

所有采样RTT患者和健康对照组进行了大约8点后隔夜空腹。血液收集肝素化管和所有操作后2小时内进行样品收集。

血液样本离心机在2400克15分钟在4°C;穷人血小板血浆得救了,淡黄色的外套被抱负。血浆样本存储在−70°C到化验。

2.3。红细胞沉降率(ESR)

测试1分析仪,一个封闭的自动分析仪,确定血液中沉积反应的长度在一个标准大小主要与射孔管塞。测量的原理是研究聚合能力的红细胞(红血球)遥测。管放置在合适的架子,和他们的内容慢慢旋转大约2分钟。样品装入器同时接受4架包含15管。通过使用一个封闭的愿望针,血液直接来自集合管,分布在毛细管,离心机在20克左右。传感区域温度保持在37°C。系统使用一个红外射线显微光度计光波长为950 nm和执行1000个读数在20秒。使用光电二极管探测器收集,电脉冲直接相关的聚合红血球出席每个毛细管级别。对于每一个样品,一个聚合和沉降曲线。数学算法将原始数据获得的评价光学密度信号ESR结果,转化为可比魏氏值。 The system operates at a rate of 180 specimens per hour in continuous loading, providing a result every 20 seconds, and requires 150 μL为每个样本(血液26,27]。

2.4。c反应蛋白(CRP)

模块化分析P模块(罗氏公司、日立)被用来确定血清CRP immunoturbidimetry使用第三代CRP Tina-quant试剂(罗氏公司、日立)。功能性CRP检测灵敏度为0.042 mg / dL。间隔参考< 0.5 mg / dL c反应蛋白(28]。

2.5。二维凝胶电泳(2 de)

2 de是一种蛋白质分离技术,它结合了两种不同的电泳方法:等电点聚焦(IEF)在第一维度,在蛋白质分离根据他们的等电点(pI),和钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)在第二个维度,其中蛋白质分离根据其分子量(MW) (29日]。样本包含60μ克蛋白质由布拉德福德(30.)与10毫升的解决方案包含10%变性的SDS和2.3%的二硫苏糖醇(德勤)。之后,样本结合350毫升的增溶的缓冲区包含8 M尿素,2%的3 - [(3-cholamidopropyl) -dimethylammonium] 1-propane磺酸盐(家伙),德勤的0.3%,和2%的固定化pH梯度(IPG)缓冲区,并加载到18厘米IPG创口贴3 - 10非线性Ettan IPGphor(通用电气医疗集团)装置系统,和水化7 h。IEF进行了总共32 kV h。聚焦后,他们将平衡与含有50 mM Tris-HCl的缓冲区,pH值8.8,6 M尿素,w / v SDS 2%, 30% v / v甘油,1% w / v德勤15分钟。随后,条是平衡的平衡缓冲上面所描述的那样,除了它含有4% w / v碘乙酰胺代替德勤和溴酚蓝的痕迹。第二个维度是EttanDalt六电泳系统上执行(通用电气医疗集团)。带组和兆瓦的标准是1.5毫米厚的顶部嵌入垂直梯度聚丙烯酰胺凝胶(T) 8 - 16%使用0.5% w / v琼脂糖的恒定电流和运行40 mA /凝胶在20°C。每个样品在相同的条件下进行了一式三份。

2.6。图像分析

图像分析了凝胶的使用ImageMaster 2 d铂v7.0软件(通用电气医疗集团)。每组(即参考凝胶。,healthy controls, RTT, R306C, T158M, R168X, and large deletions in exons 3 and 4) was defined and used for the comparative analyses. The background was subtracted from all gels using the average-on-boundary method. Spot volume was expressed as a ratio of the total protein percentage volume (%V) detected from the entire gel to minimize differences between gels (gel normalization), for pooling them. Only spots appearing in all gels of the same group were matched with those of the reference gel.

2.7。胰蛋白酶消化和蛋白质质谱鉴定

2 de / MALDI-TOF是一个复杂的和先进的技术来识别和描述蛋白质从生物体液和/或组织的结果被认为是可靠的和可再生的一系列不同的参数,如肽匹配,序列覆盖率(%),MOWSE分数,和π/相对分子质量(kDa先生)。2 de / MALDI-TOF方法是有用的,以揭示全球蛋白质模式变化在一个给定的组织/体液对于一个给定的条件。然而,技术的灵敏度分析的局限性,当应用到不丰富或小蛋白质(即。细胞因子)(22,31日]。

质谱兼容的银染色后,制备凝胶在分析匹配到主凝胶凝胶匹配组(32]。spot-picking列表生成和导出Ettan位置选择器(通用电气医疗集团)。斑点的切除和交付到96孔酶标中使退色和脱水乙腈(ACN)随后补液与胰蛋白酶的解决方案。胰蛋白酶的消化是一夜之间在37°C。每一个蛋白质点消化(0.75毫升)被发现到谱仪目标和允许干燥。然后0.75毫升(饱和溶液的仪器矩阵的解决方案αACN -cyano-4-hydroxycinnamic酸在50%和0.5% v / v三氟乙酸)应用于样品和干干了。质谱得到,如[33),使用一个ultrafleXtreme MALDI-ToF / ToF(美国力量公司,Billerica的)。胰蛋白酶的肽大规模收购后,质量指纹进行搜索Swiss-Prot / TREMBL和NCBInr数据库使用吉祥物(矩阵科学,伦敦,英国,http://www.matrixscience.com)。100 ppm的质量公差是允许且只有一个错过的裂解位点。烷基化的半胱氨酸carbamidomethylation被假定为一个固定的修改,而蛋氨酸氧化被认为是一个可能的修改。用于接受标准识别包括序列覆盖的程度,匹配的肽,概率得分。

2.8。字符串9.0网络分析

可能发现有重大变化的血浆蛋白之间的联系与健康对照组相比,由蛋白质和基因表达水平进行了分析网络软件。对于每一个蛋白质,UniProtKB条目数量和相关基因的名字分别是在UniProtKB和用于网络一代使用字符串9.0 (http://www.string-db.org/)[34]。UniProtKB条目数据被插入到输入表单为“多个蛋白质”和“智人”被选为参考有机体。

2.9。统计数据分析

所有变量进行正态分布(D 'Agostino-Pearson测试)和数据被描述成意味着±SD为正态分布变量。统计分析蛋白表达不同的组进行了使用GraphPad棱镜软件使用学生的t以及和单向方差分析测试。用于多个Bonferroni-corrected重要性水平t测试。数据用中位数和四分位范围,除非另有表示。无与伦比的斑点或斑点明显不同% V被认为是“不同表达”组。对比不同的表达蛋白质的函数MECP2突变类型进行评估使用Mann-Whitney等级或克鲁斯卡尔-沃利斯检验和测试。小种群大小的影响可能的I型(α)/ II型(β)中的错误数据解释使用抽样检查大小的算法。一个双边被认为是显示统计学意义。12.1.4 MedCalc版本统计软件(MedCalc软件、Mariakerke比利时)使用。

3所示。结果

3.1。临床严重程度和MECP2突变类型

但平均临床严重程度评分为整个人口17岁(内部四分位范围9 - 21.2,值范围7-31)。

3.2。常规血液学/临床化学

高架ESR值(平均33.0毫米/小时和8.0毫米/小时,)在RTT(图检测1在参考范围内),而c反应蛋白水平(RTT值0.04 mg / dL内部四分位范围0.02 - -0.08 mg / dL,值范围0.01 - -0.18与控制中值0.04 mg / dL内部四分位范围0.001 - -0.11 mg / dL,值范围0.01 - -0.86,)。的存在和相关性识别亚临床炎症状态Rett综合症的证据强烈建议ESR值和显性疾病的严重程度之间的关系(图4)。

3.3。蛋白质表达谱差异RTT和健康对照组

变化,总共有17个不同的蛋白质识别和表达为折叠变化相对于控件(数字2(一个)- - - - - -2 (e)看看补充表在网上补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2014/480980)和二维地图(图所示3(一个)- - - - - -3 (e))。蛋白质由质谱随后被确认。蛋白质识别以及肽匹配,获取概率分数序列覆盖,使用吉祥物软件。生物功能及其作用在4月总结表1。实际上,大多数蛋白质分为积极APR蛋白(斑点,如补体因子B (CFAB,点1),alpha-1-antitrypsin (A1AT,现货5),纤维蛋白原γ链(FIBG,现货6),结合珠蛋白(HPT, 8点15)和血清淀粉样蛋白a - 1蛋白(SAA1,发现17))或负4月蛋白(斑点,如血清转铁蛋白(TRFE点2),白蛋白(ALBU,现货3蛋白质,而点7,11日和14 C末端片段),转体基因(TTHY,景点10和16)、载脂蛋白A1 (APOA1、现货12),和retinol-binding蛋白4 (RET4,发现13)),在较小程度上,像蛋白质参与免疫系统(景点,比如alpha-2-HS-glycoprotein (FETUA,点4)和搞笑gamma-2链恒定区(IGHG2点9))。有些蛋白质有重叠的功能代谢和信号转导(点,比如TRFE(位置2),ALBU(点3、7、11和14),FIBG(现货6),TTHY(景点10和16),APOA1(12点),和RET4(13)现货)。蛋白质的数量变化被发现的严重程度成正比MECP2基因突变。

SAA1、AIAT CFAB都在检查中MECP2突变类型。HPT的行为似乎是有差异的不同MECP2突变RTT, 40 kDa现货在T158M和大型中删除,而underexpressed R306C R168X突变类型,通常表示。HTP 18 kDa似乎通常表示在R306C和T158M患者血浆样本中过表达时R168X和大型删除。A1AT(现货5)明显过表达()在所有MECP2突变类型和不同从R306C + 2.96 + 5.15相比在大型删除控件(图2)。此外,我们的数据表明FETUA在所有MECP2突变检测。另一方面,RET4和APOA1显著underexpressed三四个检查MECP2基因突变类,也就是说,T158M R168X和大型删除。TTHY 15 kDa现货(非常接近理论15900兆瓦的Da)被发现在所有的突变类型和检查TRFE underexpressed现货似乎underexpressed R168X突变类型。详细分析蛋白表达模式的函数MECP2基因突变类型报告作为补充材料(蛋白质表达模式在不同的MECP2突变类型:详细分析)。

3.4。蛋白质相互作用分析

RTT人群识别蛋白质发生重大变化,可能被列为积极APR蛋白质,蛋白质- 4月和免疫反应的蛋白质,似乎紧密相连。字符串软件创建了一个预测蛋白质相互作用网络的基于信心(图(PPI)5(一个)(图),证据5 (b)(图)和操作5 (c))。PPI的信心,线的厚度显示了强烈的交互(阈值:0.4,中等的信心)。最强大的交互TTHY至RET4(联合协会得分:0.997),APOA1和ALBU(联合协会得分:0.994),和TTHY APOA1(联合协会评分:0.994)(图5(一个))。积极APR蛋白质,- 4月蛋白,免疫反应蛋白质中强调三个不同的椭圆。PPI的证据,线的颜色代表证据的类型特征蛋白质协会。更多的证据是TTHY和RET4之间(联合协会得分:0.997),ALBU和APOA1(联合协会得分:0.994),和TTHY APOA1(联合协会评分:0.993)(图5 (b))。行动PPI,不同颜色的线表示蛋白质的作用方式。代码行:黑色是TTHY之间反应和APOA1(联合协会得分:0.993),A1AT和ALBU(联合协会得分:0.951),和APOA1 TRFE(联合协会评分:0.982),而蓝色是绑定TTHY和RET4之间(联合协会得分:0.997),TRFE和ALBU(联合协会得分:0.988),一对和APOA1(联合协会得分:0.975),和TTHY TRFE(联合协会评分:0.970)(图5 (c))。

4所示。讨论

自闭症的病因还不知道虽然提出了几种解释(35),包括环境因素结合特定的基因型(36)、疫苗(37),邻苯二甲酸酯(38]。实验和临床证据积累在过去几十年表明自闭症的早期免疫激活的存在有一个关联的外围和中央慢性炎症(12- - - - - -16]。特别是,亚临床慢性炎症条件之前建议出现在自闭症(35]。

炎症,作为第一个非特异性防御反应在哺乳动物中,先天免疫是一个组件,一个自我保护的过程,其目的是消除有害刺激为了维持体内平衡(39]。慢性炎症不同于急性炎症过程的持续时间,参与细胞的类型和主要介质(即。,cytokines, reactive oxygen species, hydrolytic enzymes, and growth factors versus eicosanoids and vasoactive amines), site (tissue versus vascular), and outcome [40]。除了几个孤立的研究关于补充因素,TRFE和A1AT41- - - - - -43),不一致信息之间的关联个人确定血浆蛋白和自闭症或RTT文学存在的。积累的证据表明星形胶质细胞异常和Rett综合症之间的联系(44- - - - - -47]。尤其值得一提的是,最近的一份报告分析中星形胶质细胞活化的反应刺激促炎(48]提出保护表型对iron-mediated氧化应激在细胞死亡包括一个复杂的变化几个基因的表达和活动参与细胞氧化还原状态的控制。,因此,它是合理的氧化还原状态和异常识别炎性刺激会收敛RTT病人星形胶质细胞功能损害。

目前的研究表明,第一次发生亚临床持续炎症状态的RTT II期(即患者。“pseudo-autistic”)。此外,我们的研究结果显示血浆蛋白的数量之间的直接关系定量修改和临床疾病的严重程度。

适度增加ESR值是唯一的一个潜在的炎症过程的标准实验室的线索,然而,有趣的是,其他标准常规检测(即。,CRP)不变。在分子水平上,生产的c反应蛋白引起的促炎细胞因子il - 1、il - 6, IL-17 [49]。它是可信的,细胞因子失调可能存在于此病,目前虽然没有明确示范在这个意义上。可以推断出一个细胞因子失调之间的一个有趣的平行RTT和4月在围产期人血浆蛋白的变化50]。

血浆蛋白质组的分析2 de / MALDI-TOF是能够识别甚至细微变化具有高特异性的蛋白质鉴定和识别的结构变化和转译后的修改51]。这种方法允许在本研究推出几个积极的upregulation APR蛋白质,如SAA1和A1AT [52,53已知的差别,以及对这些负面APR蛋白质,如APOA1和RET4 [54,55]。SAA1、A1AT CFAB,被称为积极的APR蛋白质,都是在检查中MECP2突变类型。SAA1是一个主要的急性期反应物属于高密度脂蛋白和载脂蛋白的复杂。炎症细胞趋化作用,积极调节细胞因子分泌,和血小板激活它的一些功能(52]。A1AT是一种多功能蛋白参与抗炎和组织保护特性通过保护组织免受炎症细胞的酶。更广泛地说,A1AT起着重要的作用在调节免疫、炎症、细胞凋亡,可能是细胞衰老程序(53,56]。通过比较R168X T158M它有趣的是,A1AT underexpressed(5点),而c端片段之一ALBU(11点)似乎是过表达,从而支持假设在最严重的RTT表型发生更多的蛋白质水解蛋白酶抑制剂活性较低,包括A1AT。CFAB,组件的替代途径补充系统,有助于生成C3或C5转化酶和溶血性尿毒症复杂[扮演重要角色57),似乎是在T158M和大MECP2基因缺失。尽管如此,没有一个的特征存在于RTT hemolyticuremia复杂。

因此,我们可以假设的“pseudo-autistic”阶段RTT的特点是一个自适应的组织损伤/防御反应。这方面,越来越多的证据的一个持久的氧化还原平衡在RTT [6,58似乎与更广泛的上下文相关的慢性炎症过程,其机制还有待阐明。

作为预测的字符串(图软件5)最强相互作用是由TTHY RET4(联合协会得分:0.997)和显示的绑定RET4 TTHY当循环中等离子体化学计量学(1 - 1)。体外TTHY四聚物之一可以绑定两个分子RET4 [59]。

TTHY一直建议是甲状腺素转运体从血液到大脑60]。这方面,微妙的甲状腺激素水平的变化在RTT[已报告61年),尽管没有证据表明临床甲状腺功能减退是出现在受影响的病人。

TTHY显示了蛋白质组学的地图,对比行为,15 kDa点是均匀underexpressed RTT检查病人,而30 kDa现货似乎通常R306C和T158M患者中表达,但在R168X和过表达MECP2大缺失突变类型。根据我们的研究,观察underexpression TTHY 15 kDa的现货可解释为镜像的行为负4月蛋白质。TTHY点似乎是对应于一个更高的兆瓦(34400 Da)已经在文献中报道的生物意义仍然是澄清(62年]。MW的可能来源差异可能驻留在2 de的减少实验条件可能会导致整个原始蛋白分裂成两个子单元。

另一个TTHY交互与APOA1(联合协会得分:0.994),证明是有关不仅在生理条件也在淀粉样变(Reactome通路截至2012年10月,访问http://www.reactome.org/最新的更新)。

APOA1 RET4被发现显著underexpressed,控制相比,在四分之三的检查MECP2基因突变(即。,T158 M, R168X, and large deletions). Both proteins are involved in the lipid metabolism and have been suggested to be involved in the dyslipidemia of children with metabolic syndrome [54,55,63年]。另一方面,他们的参与RTT似乎支持改变脂质代谢的概念在这种情况下,hyperleptinemia [64年和高胆固醇血症65年]和共存的“脂肪酸悖论”的建议,鉴于过度内源性脂肪酸氧化是矛盾的改善通过管理相同的外源性脂肪酸(66年,67年]。

有趣的是,还与ALBU APOA1之间的相互作用(联合协会得分:0.994)发生在脂类代谢尤其是HDL-mediated脂质运输的途径。

相比之下,交互的APOA1 TRFE(联合协会得分:0.993)参与血小板分泌颗粒的释放组件(Reactome通路截至2012年10月,访问http://www.reactome.org/最新的更新)。

在我们的研究结果,TRFE underexpressed R168X突变类型,这一变化是按照经典- 4月蛋白质的变化。

在另一个生化过程,HPT可以绑定APOA1卵磷脂和损害其刺激:胆固醇酰基转移酶(LCAT)。LCAT在反向胆固醇运输中起着重要作用[68年]。成是一种蛋白质捕获并结合免费血浆血红蛋白,使肝循环的血红素铁,以防止肾脏损伤(69年,70年]。其行为似乎有差异的不同MECP2突变RTT, 40 kDa现货在T158M和大型中删除,而underexpressed R306C R168X突变类型,通常表示。HTP 18 kDa似乎通常表示在R306C和T158M时在最严重的检测突变(即。R168X和大型删除)。

重大的改变在RTT等离子体被证明在FETUA和IGHG2参与免疫反应。特别是,FETUA直接与APOA1(联合协会得分:0.874)。我们的数据表明FETUA在所有MECP2突变检测。随后FETUA是在人体肝脏内合成,并集中在骨基质。这种蛋白质是促进内吞作用,具有调理素的属性和骨矿物相的影响。钙和钡离子[FETUA显示高度的亲和力71年]。这方面,积累的证据表明,骨质疏松症是一种RTT的表型特征(72年,73年]。

当然,目前的研究产生了一些尚未解决的问题,包括4月的原因在RTT的自闭症阶段。刺激平行是最近在自闭症(亚临床炎症过程的演示35]。因此,炎症似乎是一种以前未被认识的特性在自闭症和认知障碍,这可能会发挥作用的病理和调节表型进化的严重性。

5。结论

积累的证据表明RTT多系统紊乱,肺的参与(53),骨(72年,73年,心74年),胃肠道装置(75年,76年),除了中枢神经系统。第一次,我们证明了亚临床慢性炎症状态与所携带的严重程度有关MECP2基因突变的“pseudo-autistic RTT的(第二阶段)阶段。我们持续的炎症状态的检测是兼容系统性疾病和发病机理中添加了一个新的视角和未来的治疗策略RTT [67年)和asd。

缩写

CFAB:	补充因素B
TRFE:	血清转铁蛋白
ALBU:	白蛋白
FETUA:	Alpha-2-HS糖蛋白
A1AT:	Alpha-1-antitrypsin
FIBG:	纤维蛋白原γ链
成:	结合珠蛋白
IGHG2:	Ig gamma-2链恒定区
TTHY:	转体基因
APOA1:	载脂蛋白A1
RET4:	Retinol-binding蛋白4
SAA1:	血清淀粉样蛋白a - 1蛋白质。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

塞Cortelazzo、克劳迪奥·德·菲利斯和罗伯特·Guerranti贡献同样工作,和卢卡·比尼人Joussef哈耶克同样监督这项工作。

确认

目前的研究项目已经资助的托斯卡纳地区(2009年也免不了敬礼,“抗氧化剂(ω3多不饱和脂肪酸,硫辛酸)补充Rett综合症:一种新型治疗方法”),意大利。此外,作者感谢支持Associazione Italiana Rett, (A.I.R.,President Mrs. Lucia Dovigo), the Kiwanis Club and Round Table 41 Club of Siena, and the Nencioni and Tanturli families from Fiesole and Florence. The authors acknowledge the Medical Genetic Unit of the Siena University (Head: Professor Alessandra Renieri) for gene mutations analysis. They sincerely thank Drs. Pierluigi Tosi, Silvia Briani, and Roberta Croci from the Administrative Direction of the Azienda Ospedaliera Senese for continued support to our studies and the Azienda Ospedaliera Senese for prior purchasing of the gas spectrometry instrumentation; Roberto Faleri from the Medical Central Library (for online bibliographic research assistance). We are very grateful to Maestro Roberto Innocenti (2008 winner of the IBBY Hans Christian Andersen award as best illustrator) for kindly endorsing the illustrations of a book in progress dedicated to the Rett syndrome girls and families. They heartily thank the professional singer Matteo Setti (http://www.matteosetti.com/)在引发了科学研究的意外收获hypoxia-related氧化应激在Rett女孩和自闭症儿童,以及他的许多慈善音乐会和持续的兴趣在科学方面的研究。但最后,他们真诚地感谢女孩和他们的家人。

补充材料