(-)儿茶素没食子酸盐可以降低血小板源生长Factor-BB-Stimulated白细胞介素- 6在成骨细胞合成:抑制SAPK /物

文摘

我们之前显示增殖作用(MAP)激酶总科,p44激酶/页地图,地图p38激酶,压力激发了蛋白激酶(SAPK) / c-Jun终端(物),血小板源生长factor-BB积极起到了很重要的作用——(PDGF-BB)刺激白细胞介素- 6 (il - 6)的合成,一种有效的骨吸收剂,在osteoblast-like MC3T3-E1细胞而Akt和p70 S6激酶负调节合成。在目前的研究中,我们调查是否(-)儿茶素酸酯(EGCG)的一个主要绿茶类黄酮,影响这些细胞il - 6的合成和机制。EGCG显著降低il - 6的合成和il - 6 mRNA表达PDGF-BB刺激,EGCG减少PDGF-BB-stimulated primary-cultured成骨细胞中il - 6的合成也。EGCG对骨钙素水平没有影响和osteoprotegerin MC3T3-E1细胞。的PDGF-BB-induced PDGF受体的自身磷酸化没有被EGCG镇压。PDGF-BB-induced磷酸化p44 /页MAP激酶p38激酶地图并没有受到EGCG的影响。另一方面,EGCG显著抑制了PDGF-BB-induced磷酸化SAPK /物。最后,Akt PDGF-BB-induced磷酸化和p70 S6激酶没有受到EGCG的影响。这些结果强烈表明,EGCG通过抑制抑制il - 6的合成PDGF-BB-stimulated SAPK /物造骨细胞的途径。

1。介绍

白细胞介素- 6 (il - 6)是一种多功能的细胞因子,具有重要的生理效应等多种功能促进b细胞分化、t细胞活化,诱导急性期蛋白(1- - - - - -4]。人们普遍认识到,两个功能细胞,成骨细胞和破骨细胞,严格规范骨代谢,前者负责骨形成和骨吸收(后者5]。骨结构的形成和骨重建的结果耦合过程;通过激活破骨细胞骨吸收与后续沉积新矩阵的成骨细胞。在骨代谢中,认识到,il - 6是最有效的osteoclastogenic因素之一(3,4]。骨吸收是由本地生产的增加炎症细胞因子,如肿瘤坏死因子-α和il - 1。在成骨细胞(6- - - - - -8),据报道,骨吸收剂如肿瘤坏死因子-α和il - 1刺激il - 6的合成。至于骨代谢,il - 6已被证明刺激骨吸收和诱导破骨细胞的形成3,4,7,9]。因此,越来越多的证据表明,il - 6分泌的成骨细胞起着关键作用的下游效应骨吸收剂。它已经表明,血小板源生长factor-BB (PDGF-BB),一个著名的促有丝分裂的因素,增加扩散和抑制成骨细胞的分化10]。PDGF-BB也增强了骨吸收增加破骨细胞的数量,影响可能继发于增加il - 6的表达(10,11]。因此,调制PDGF-BB效应将会是一个可能的治疗骨质疏松症的目标。在我们最近的研究(12,13),我们报道,PDGF-BB刺激il - 6合成激酶通过p44 /页地图,地图p38激酶,压力激发了蛋白激酶(SAPK) / c-JunN终端(物)、MAP激酶家族成员(14),在osteoblast-like MC3T3-E1细胞和一种蛋白激酶,p70 S6激酶限制了合成。然而,PDGF-BB底层的确切机制造骨细胞的il - 6合成尚未阐明。

化合物的食物,比如蔬菜和水果有人类有益的属性。其中,据报道,黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌和抗肿瘤的作用[15,16]。儿茶素是一种主要的类黄酮,它存在于各种植物的物种如绿茶(16]。在骨代谢,它已被证明,儿茶素抑制骨吸收17]。至于破骨细胞,有报道称(−)儿茶素没食子酸盐(EGCG)诱导破骨细胞凋亡(18,19和抑制分化20.]。然而,EGCG的影响细胞因子的表达或从osteoclast-stimulated或对成骨细胞的细胞基质降解酶尚未报道据我们所知。至于成骨细胞,它已经表明,儿茶素刺激碱性磷酸酶活动,一个成熟的成骨细胞表型(5),减少细胞凋亡在osteoblast-like MC3T3-E1细胞(21]。然而,儿茶素在成骨细胞的确切机制尚不完全清楚。

在目前的研究中,我们调查是否(−)儿茶素酸酯(EGCG)的一个主要绿茶类黄酮,影响PDGF-BB-stimulated il - 6合成osteoblast-like MC3T3-E1细胞和其背后的机制。我们这里显示EGCG减少PDGF-BB-stimulated通过衰减SAPK / il - 6的合成物在这些细胞通路。

2。材料和方法

2.1。材料

重组PDGF-BB, il - 6 ELISA、骨钙蛋白ELISA和osteoprotegerin(功能)酶联免疫试剂盒购自研发系统,Inc .(美国明尼苏达州明尼阿波利斯)。EGCG是来自Calbiochem-Novabiochem集团(美国加州拉霍亚)。Phospho-specific PDGF受体β抗体,PDGF受体β抗体,phospho-specific p44 /页MAP激酶抗体,p44 /页MAP激酶抗体,phospho-specific p38 MAP激酶抗体,p38 MAP激酶抗体,phospho-specific SAPK /物激酶抗体,SAPK /物抗体,phospho-specific Akt抗体,Akt抗体,phospho-specific p70 S6激酶抗体,和p70 S6激酶抗体购买从细胞信号技术(美国贝弗利,质量)。发射极耦合逻辑免疫印迹检测系统从Amersham购买日本(日本东京)。其他材料和化学品从商业来源获得。

2.2。细胞培养

克隆的osteoblast-like MC3T3-E1细胞,来源于新生儿老鼠头顶(22),是维护如前所述[23]。简而言之,这些细胞被培养α最小基本介质(αmem)含10%胎牛血清(FCS) 37^°C在湿润的气氛中5%的有限公司₂空气/ 95%。细胞被播种到35毫米直径菜(/盘)或90毫米直径的菜肴(/盘)α包含10% FCS mem。5天之后,是交换媒介α包含0.3% FCS mem。48小时后细胞用于实验。

Primary-cultured成骨细胞得到头顶的新生儿(1或者为期两天的旧)balb / c小鼠如前所述[24]。他们被播种到直径90毫米的菜(细胞)α包含10% FCS mem。每3天中被改变,直到细胞达到融合在5天。然后,是交换媒介α包含0.3% FCS mem。48小时后细胞用于实验。

2.3。骨钙素的分析、功能和il - 6的分泌

培养细胞是用汽车或各种剂量的EGCG预处理(1到30μ米)24小时,骨钙素的水平和功能在中被各自的酶联免疫试剂盒测量。培养细胞被PDGF-BB 1毫升的刺激αmem含有0.3% FCS,然后孵化的显示时间。条件培养基收集,在中就以il - 6和il - 6的酶联免疫试剂盒。表示时,细胞用不同剂量的EGCG预处理为60分钟。

2.4。实时rt - pcr

培养细胞使用30μM EGCG或车辆为60分钟,然后刺激50 ng / mL PDGF-BB 60分钟。总RNA是孤立和转录成互补DNA使用试剂盒试剂和Omniscript逆转录酶工具包。实时rt - pcr进行使用光周期计系统(瑞士巴塞尔罗氏诊断)毛细血管和DNA由于“快速上手”项目主SYBR绿色我提供的工具包。感觉和反义引物合成基于辛普森et al.for鼠标GAPDH mRNA的报告(25]。意识和反义引物对小鼠il - 6 mRNA买来豆类生物有限公司(日本东京)(引物组ID: MA039013)。放大产品由融化曲线分析和琼脂糖电泳。il - 6 mRNA水平正常化与GAPDH mRNA。

2.5。免疫印迹分析

培养细胞被PDGF-BB刺激αmem含有0.3% FCS的显示时间。这些细胞被洗两次磷酸盐和细胞溶解,均质,和用裂解缓冲包含62.5毫米三羟甲基氨基甲烷/盐酸,液pH值6.8,2%十二烷基硫酸钠(SDS), 50毫米二硫苏糖醇,甘油10%。胞质分数收集离心后上清液在4 g×10分钟^°c . SDS-polyacrylamide凝胶电泳(页面)是由Laemmli [26在10%的聚丙烯酰胺凝胶。免疫印迹分析如前所述[27通过使用phospho-specific PDGF受体)β抗体,PDGF受体β抗体,phospho-specific p44 /页MAP激酶抗体,p44 /页MAP激酶抗体,phospho-specific p38 MAP激酶抗体,p38 MAP激酶抗体,phospho-specific SAPK /物激酶抗体,SAPK /物抗体,phospho-specific Akt抗体,Akt抗体,phospho-specific p70 S6激酶抗体,和p70 S6激酶抗体与peroxidase-labeled抗体在山羊长大对兔免疫球蛋白被用作第二抗体。过氧化物酶活动PVDG膜在x射线胶片通过可视化ECL免疫印迹检测系统。表示时,细胞用不同剂量的EGCG预处理为60分钟。

2.6。决定

酶免疫分析法测定样品的吸光度与厄尔340 450海里生物动力学读者(Bio-Tek仪器有限公司、Winooski Vt,美国)。使用分子的光密度分析分析师/ Macintosh(美国加州Bio-Rad实验室、大力神)。

2.7。统计分析

分析的数据方差分析其次是Bonferroni多重比较方法对,和一个被认为是显著的。所有数据给出的意思扫描电镜一式三份的决定。每个实验重复三次类似的结果。

3所示。结果

3.1。EGCG对PDGF-BB-Stimulated MC3T3-Cells和Primary-Cultured老鼠成骨细胞il - 6的合成

据报道,PDGF-BB诱发转录鼠成骨细胞的il - 6 (11]。我们曾发现PDGF-BB刺激il - 6的合成在鼠标osteoblast-like MC3T3-E1细胞(12]。我们首先检查EGCG PDGF-BB-stimulated il - 6的合成的影响。EGCG,仅对il - 6水平几乎没有影响,显著降低PDGF-BB-stimulated il - 6的合成(图1(a))。EGCG (30μ米)减少约50% PDGF-BB效应引起的。此外,我们还研究了EGCG primary-cultured老鼠成骨细胞的影响。PDGF-BB显著增强il - 6的合成主要成骨细胞(图1(b))。此外,EGCG (30μ米)显著降低PDBF-BB-stimulated il - 6的合成(图1(b))。我们接下来评估EGCG对细胞活力的影响通过台盼蓝染料排除测试。我们确认在37 MC3T3-E1细胞培养的可行性^°C在24小时30μM EGCG相比超过90%的控制细胞。确定EGCG可能影响细胞增殖,我们计算细胞数量前后24小时孵化与30μM EGCG。我们证实,EGCG并不影响细胞数量的剂量30μ米(细胞/毫升控制;细胞/毫升30μM EGCG在刺激24小时)来衡量。因此,EGCG在30岁μ米几乎不影响细胞的生存能力或扩散osteoblast-like MC3T3-E1细胞24小时。

3.2。EGCG对骨钙素水平的影响,在MC3T3-E1-Cells Osteoprotegerin

接下来,确定EGCG影响这些细胞的分化,我们检查了EGCG对骨钙素的合成的影响,一个成熟的成骨细胞表型(28],osteoprotegerin(功能),由成骨细胞和抑制监测骨吸收29日),在MC3T3-E1细胞合成。我们发现EGCG对骨钙素没有影响(没有可检测的实验条件下,< 1.56 ng / mL)和功能(196734个pg / mL车辆;1846年46个pg / mL 30μM EGCG)的合成。

3.3。EGCG对PDGF-BB-Induced表达的il - 6水平的影响在MC3T3-E1细胞信使rna

澄清是否抑制效应EGCG PDGF-BB-stimulated il - 6的合成是通过介导的转录事件或不是,我们检查了EGCG在PDGF-BB-induced il - 6的影响通过实时rt - pcr mRNA的表达。我们发现,EGCG (30μ米)显著下调白介素mRNA表达水平刺激(图后60分钟1(c)),这表明EGCG是介导的抑制效应至少在一定程度上降低il - 6的合成在osteoblast-like MC3T3-E1细胞。

3.4。效果的EGCG PDGF-BB-Induced PDGF受体的自身磷酸化β在MC3T3-E1细胞

为了澄清的抑制机制背后的EGCG PDGF-BB-stimulated il - 6在这些细胞合成,我们下一个检查EGCG的影响PDGF-BB-induced PDGF受体的自身磷酸化β。EGCG未能影响PDGF-BB-induced PDGF受体的自身磷酸化β(图2)。这些结果让我们推测EGCG-effect PDGF-BB-stimulated il - 6的合成的机制可能是通过下游PDGF受体介导的激活。

3.5。EGCG对PDGF-BB-Induced激酶磷酸化p44 /第42页地图,地图p38激酶或SAPK /物在MC3T3-E1细胞

在我们之前的研究13),我们报道,PDGF-BB激酶激活三大地图,p44 /第42页MAP激酶,p38激酶,地图和SAPK /物,导致在MC3T3-E1细胞il - 6的合成。我们下一个检查EGCG的影响PDGF-BB-induced p44 /第42页MAP激酶的磷酸化,p38激酶地图,或SAPK /物。EGCG未能影响PDGF-BB-induced p44 /第42页MAP激酶的磷酸化或p38激酶(数字地图3(一)和3(b))。相反,EGCG,本身几乎没有影响的磷酸化水平SAPK /物,显著抑制PDGF-BB-induced SAPK /物磷酸化(图4)。根据光密度分析,EGCG (30μ米)引起PDGF-BB-effect减少约40%。

3.6。EGCG对PDGF-BB-Induced一种蛋白激酶的磷酸化或p70 S6激酶引起PDGF-BB MC3T3-E1细胞

在我们先前的研究[12,13),我们证明了PDGF-BB-activated Akt和p70 S6激酶限制MC3T3-E1细胞中il - 6的合成。为了调查是否EGCG-effect PDGF-BB-stimulated il - 6的合成是通过一种蛋白激酶的激活介导或p70 S6激酶在这些细胞中,我们检查了EGCG Akt的PDGF-BB-induced磷酸化的影响或p70 S6激酶。然而,EGCG对Akt PDGF-BB-induced磷酸化的影响很小(图5(一))或p70 S6激酶(图5(b))。

4所示。讨论

在目前的研究中,我们表明,EGCG显著抑制PDGF-BB-stimulated il - 6的合成与表达的il - 6水平mRNA在osteoblast-like MC3T3-E1细胞。我们发现,EGCG也减少了PDGF-BB-stimulated il - 6的合成primary-cultured老鼠成骨细胞。这些发现表明,EGCG PDGF-BB-stimulated il - 6的合成的抑制作用不是特定的克隆osteoblast-like MC3T3-E1细胞但在成骨细胞是很常见的。我们证实,EGCG 30μ米几乎不影响细胞的生存能力或扩散osteoblast-like MC3T3-E1细胞24小时。至于EGCG对这些细胞的分化的影响,结果表明,EGCG对骨钙素没有影响功能和合成。然而,它已被证明,儿茶素刺激碱性磷酸酶活动,一个成熟的成骨细胞表型(5),减少骨吸收细胞因子生产osteoblast-like MC3T3-E1细胞(21]。考虑到这些结果,建议EGCG可以部分分化的影响osteoblast-like MC3T3-E1细胞。我们接下来研究的机理EGCG底层il - 6的合成的抑制作用。众所周知,MAP激酶总科中扮演着关键角色在细胞功能包括增殖、分化、和生存在各种细胞(14]。三大地图激酶,p44 /第42页MAP激酶,p38激酶,地图和SAPK /物,被称为中央元素所使用的哺乳动物细胞转导多种消息(14]。我们以前报道,SAPK /物作为积极的监管机构PDGF-BB-induced MC3T3-E1细胞中il - 6的合成(13]。在目前的研究中,我们表明,EGCG并不影响PDGF-BB-induced p44 /第42页MAP激酶的磷酸化或p38激酶地图。因此,似乎不太可能,EGCG减少PDGF-BB-stimulated il - 6合成通过下调激活p44 /页MAP激酶或p38 MAP激酶osteoblast-like MC3T3-E1细胞。另一方面,我们表明,PDGF-BB-induced磷酸化SAPK /物被EGCG明显抑制。这些结果表明,EGCG会使PDGF-BB-stimulated激活SAPK /物。考虑到我们的发现,这是最有可能通过下调EGCG抑制PDGF-BB-stimulated il - 6的合成SAPK /物的活化osteoblast-like MC3T3-E1细胞。进一步的调查需要澄清的精确机制儿茶素的抑制il - 6在成骨细胞合成。

我们之前显示一种蛋白激酶和p70 S6激酶负调节的il - 6 PDGF-BB-stimulated合成osteoblast-like MC3T3-E1细胞(12,13]。我们另外Akt的参与调查和p70 S6激酶的抑制作用EGCG对il - 6的合成。然而,EGCG未能影响Akt的PDGF-BB-induced磷酸化或p70 S6激酶。因此,它似乎不太可能,EGCG抑制PDGF-BB-induced il - 6合成通过下调一种蛋白激酶的激活或p70 S6激酶在osteoblast-like MC3T3-E1细胞。考虑到我们的发现,这是最有可能通过下调EGCG抑制PDGF-BB-stimulated il - 6的合成SAPK /物的活化osteoblast-like MC3T3-E1细胞。

il - 6,成骨细胞合成,调节各种骨细胞功能(3]。在骨代谢,il - 6分泌的成骨细胞作为自分泌/旁分泌因子,导致破骨细胞形成和激发其活性骨再吸收(4,7]。根据我们的结果,可能catechin-induced SAPJ /物激活的抑制PDGF-BB通过下调il - 6对骨吸收有抑制作用在成骨细胞合成。据报道,PDGF-BB被认为是一种潜在的刺激成骨细胞增殖和胶原蛋白的合成30.]。公布的PDGF在血小板聚集,一个关键的角色在骨折治疗系统性因素,这PDGF调节骨重塑当地因素(30.]。对于骨质疏松症的一个主要问题在发达国家老年人的健康,据报道,政府重组PDGF-BB加速骨折愈合在老年骨质疏松性大鼠(31日]。然而,目前的研究表明,PDBG-BB刺激il - 6的合成,有效的骨吸收剂之一,不仅是osteoblast-like MC3T3-E1细胞也主要培养的成骨细胞。在目前的研究中,值得注意的,EGCG减少PDGF-BB-stimulated il - 6在成骨细胞合成。因此,我们目前的研究结果让我们推测,EGCG可能提高骨折愈合的属性PDGF-BB降低il - 6在成骨细胞合成。我们目前的数据将提供一个新的见解药理儿茶素对骨代谢的影响。

EGCG的药物在人类志愿者单剂量600毫克/天显示快速吸收,最大血浆浓度的值为11.08μ米(= 3392 ng / mL);时间达到最大血浆浓度为2.2小时,和终端消除半衰期时间介于1.9和4.6之间(32]。有趣的是,10天重复政府的口服剂量的EGCG高达800毫克/天被发现是安全的和非常良好的耐受性33]。在目前的研究中,我们表明,显著抑制EGCG对PDGF-BB-stimulated il - 6合成的影响显然是观察到10μm .因此,最有可能的是一个可以喝绿茶足以达到体内水平是用于我们的体外研究。此外,它已经表明,血浆浓度所需的EGCG癌症预防或抗炎作用是在10μ米到50μ米(34- - - - - -36]。我们的研究结果,对于抑制il - 6的合成,与这些先前的发现一致。所知甚少的有效浓度EGCG才能调节胞内信号通路。进一步的调查使用primary-cultured成骨细胞除了MC3T3-E1将有必要阐明儿茶素的确切角色骨骼的新陈代谢。

总之,我们目前的研究结果有力地表明,儿茶素通过抑制抑制il - 6的合成PDGF-BB-stimulated SAPK /物造骨细胞的途径。

确认

作者非常感谢洋子河村建夫和精工Sakakibara熟练的技术援助。这次调查支持部分由增长的基础科学,科学研究补助金(16590873和16590873),教育部、科学、体育和文化的日本,长寿的研究资助科学(15 a - 1、15 c - 2和17 a - 3),在蛋白质组学研究,研究格兰特骨折和Dimentia来自卫生部、劳动和福利的日本,和研究拨款增长的基础科学。

引用

1. 彰,t . Taga,岸本t,白细胞介素- 6在生物学和医学中,“免疫学的发展54卷,页1 - 78,1993。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. d·海曼和A.-V。Rousselle”gp130细胞因子家族,骨细胞。”细胞因子,12卷,不。10日,1455 - 1468年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. k . t .吊杆,p . Marc t . Sandrine h·多米尼克·f·亚尼克,“il - 6, RANKL tnf / il - 1:骨吸收病理生理学的相互关系,“细胞因子和生长因子的评论,15卷,不。1,49-60,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. h·c·布莱尔,l . j .罗宾逊和m·扎伊迪“破骨细胞信号通路,生物化学和生物物理研究通信,卷328,不。3、728 - 738年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. p . j . Nijweide e·h·汉堡,j . h . m . Feyen“骨细胞增殖、分化、和荷尔蒙的规定,“生理上的评论,卷66,不。4、855 - 886年,1986页。视图:谷歌学术搜索
6. m·赫勒j . p . j . Brakenhoff e . r . De Groot和洛杉矶Aarden”白介素6参与白介素1-induced活动。”欧洲免疫学杂志,18卷,不。6,957 - 959年,1988页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. y Ishimi, c . Miyaura c·h·金et al .,“il - 6是由成骨细胞,导致骨吸收,”《免疫学,卷145,不。10日,3297 - 3303年,1990页。视图:谷歌学术搜索
8. a . j . Littlewood j .罗素·g·r·哈维·d·e·休斯,r·g·g·拉塞尔和m .高恩”调制的il - 6的表达及其受体在人类成骨细胞在体外,”内分泌学,卷129,不。3、1513 - 1520年,1991页。视图:谷歌学术搜索
9. gdp卢德曼,”观点:白细胞介素- 6:一个osteotropic因素?”骨和矿物质研究杂志》上,7卷,不。5,475 - 478年,1992页。视图:谷歌学术搜索
10. e . Canalis“骨骼生长因子,”骨质疏松症pp r·马库斯,艾德。P529-P546,爱思唯尔学术出版社,伯灵顿,质量,美国第3版,2008年版。视图:谷歌学术搜索
11. n . Franchimon d·杜兰特、美国Rydziel和e . Canalis“血小板源生长因子诱导白细胞介素- 6在成骨细胞转录激活蛋白1复杂和激活转录因子2,“生物化学杂志,卷274,不。10日,6783 - 6789年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. y堆,h·德田,t .研究员合作,r . Matsushima-Nishiwaki s Takai o . Kozawa,“磷脂酰肌醇3-kinase / Akt auto-regulates PDGF-BB-stimulated白细胞介素- 6在成骨细胞合成,“细胞生物化学杂志》上,卷99,不。6,1564 - 1571年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. s . Takai h·德田、y .堆和o . Kozawa”限制,p70 S6激酶的血小板源生长factor-BB-induced白介素6合成osteoblast-like MC3T3-E1细胞,”新陈代谢卷,56号4、476 - 483年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. j . m . Kyriakis和j . Avruch哺乳动物增殖蛋白激酶信号转导途径激活压力和炎症,”生理上的评论,卷81,不。2、807 - 869年,2001页。视图:谷歌学术搜索
15. j . Jankun s h·塞尔曼,r . Swiercz大肠Skrzypczak-Jankun,“为什么喝绿茶可以预防癌症,”自然,卷387,不。6633,561年,页1997。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j·b·Harborne和c·a·威廉姆斯,“自1992年以来,类黄酮研究进展”植物化学,55卷,不。6,481 - 504年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. j . m . Delaisse y Eeckhout, g .弗吉尼亚州”抑制骨吸收的文化(+)儿茶素,”生化药理学,35卷,不。18日,第3094 - 3091页,1986年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. h .中川m . Wachi J.-T。吴et al .,”芬顿反应主要是参与的机制(3)-epigallocatechin-3-gallate诱导监测细胞死亡,”生物化学与生物物理研究通信,卷292,不。1,第101 - 94页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. 黄永发。Yun, c。金,K.-S。曹,j。柴,C.-K。金,工程学系。崔”(-)儿茶素没食子酸盐诱导细胞凋亡,通过激活半胱天冬酶,从264.7原始细胞,破骨细胞分化”牙周研究期刊》的研究,42卷,不。3、212 - 218年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. a . Morinobu w .飚车,s .田中et al .,“(-) -Epigallocatechin-3-gallate抑制破骨细胞的分化和改善小鼠实验性关节炎,“关节炎和风湿病,卷。58岁的没有。7,2012 - 2018年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. e。崔和j。黄”,(+)儿茶素对成骨细胞的细胞功能,“生物与制药公告,26卷,不。4、523 - 526年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. h . Sudo h·a·玉y Amagai,山本y,和美国开赛,“体外分化和钙化的新克隆成骨细胞系来自新生老鼠头顶,“细胞生物学杂志,卷96,不。1,第198 - 191页,1983。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 铃木o . Kozawa a、h·德田和t . Uematsu”前列腺素${\text{F}}_{2_{\alpha }}$刺激白细胞介素- 6通过激活PKC osteoblast-like细胞合成,“美国生理学杂志》上,卷272,不。2,E208-E211, 1997页。视图:谷歌学术搜索
24. m .吉田m .羽a Ishisaki et al .,“甲氨蝶呤提高前列腺素D2-stimulated热休克蛋白27在成骨细胞诱导,“前列腺素白细胞三烯和必需脂肪酸,卷71,不。6,351 - 362年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. d·a·c·辛普森·费尼,c·博伊尔和a . w .施迪“视网膜VEGF mRNA绿色SYBR荧光:衡量一个多才多艺的定量PCR方法,”分子的愿景》第六卷,没有。24日,第183 - 178页,2000年。视图:谷歌学术搜索
26. 英国Laemmli”劈理的结构蛋白组装T4噬菌体的头,“自然,卷227,不。5259年,第685 - 680页,1970年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. k加藤,h Ito k .长谷川y Inaguma, o . Kozawa和t .浅野调制hsp27和压力诱导合成的$\alpha$B-crystallin环腺苷酸的C6鼠胶质瘤细胞,”神经化学杂志,卷66,不。3、946 - 950年,1996页。视图:谷歌学术搜索
28. p . Ducy c . Desbois b·博伊斯et al .,“osteocalcin-deficient骨形成增加老鼠,”自然,卷382,不。6590年,第452 - 448页,1996年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 美国科斯拉”功能:小/ RANKL /等级系统,”内分泌学,卷142,不。12日,第5055 - 5050页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. e . Canalis Varghese, t·l·麦卡锡和m . Centrella“血小板衍生生长因子在骨细胞功能的作用,“增长的监管,卷2,不。4、151 - 155年,1992页。视图:谷歌学术搜索
31. j . o .霍林格a . o . Onikepe j . MacKrell et al .,“加速骨折愈合在老年骨质疏松性大鼠与重组人血小板源生长factor-BB和注射beta-tricalcium磷酸/胶原基质,”骨科研究期刊》的研究,26卷,不。1,第90 - 83页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. 乌尔曼,j·哈勒,j.p. Decourt et al .,”一个提升的剂量研究儿茶素在健康的志愿者,“国际医学研究杂志》上没有,卷。31日。2、88 - 101年,2003页。视图:谷歌学术搜索
33. 乌尔曼,j·哈勒,j . d . Decourt j . Girault诉斯皮策和p·韦伯,“Plasma-kinetic净化的特点和孤立绿茶儿茶酸儿茶素(EGCG) 10天后重复剂量在健康的志愿者,“国际维生素和营养研究》杂志上,卷74,不。4、269 - 278年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. j·d·兰伯特和c . s .杨”茶成分,癌症预防机制”《华尔街日报》的营养,卷133,不。10日,页。3262 - 3267年代,2003年。视图:谷歌学术搜索
35. d·s·惠勒j . d . Catravas k .奥多姆a . Denenberg和h . r . Wong“诉Malhotra Epigallocatechin-3-gallate绿色tea-derived多酚,能抑制il - 1$\beta$端依赖促炎在培养呼吸道上皮细胞信号转导,”《华尔街日报》的营养,卷134,不。5,1039 - 1044年,2004页。视图:谷歌学术搜索
36. o . Aktas T . Prozorovski a Smorodchenko et al .,“绿茶epigallocatechin-3-gallate介导T细胞NF -$\mathrm{吗?}$在自身免疫性脑脊髓炎B抑制和发挥神经保护《免疫学,卷173,不。9日,第5800 - 5794页,2004年。视图:谷歌学术搜索

版权

版权©2008真嗣Takai等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。