文摘

常见的水果和蔬菜中发现的细菌荧光假单胞菌这是Germ-negative杆状。荧光假单胞菌起源于Roorkee-grown秋葵的根际。提出工作包括识别和控制的隔离荧光假单胞菌。提出工作的范围,这里使用的技术是一个独特的腐烂的真菌疾病的植物保护和控制策略的基础上,识别和管理荧光假单胞菌隔离。拮抗剂作用通常发生在蔬菜和水果植物。本研究的主要目的是隔离,识别和评估这些细菌的发展,对植物生长的影响。在本研究工作中,五个隔离已被选定为进一步研究基于形态学、生物化学和生理特点。所有五个隔离已确定荧光假单胞菌从Bergey手册细菌学的决心。过氧化氢酶、脲酶、淀粉酶和柠檬酸利用率测试都是积极的在所有的隔离。PFTT4可能被确认是一个应变等所有植物生长促进练习IAA的时代,HCN、氨、和磷酸溶解之后被评估为工厂发展推进属性。此外,体外研究发现,PFTT4减弱等植物病原体的发展腐皮镰孢霉菌和异常进一步发展种子发芽就像所有开发边界开枪和根的长度。此外,假单胞菌sp。PFTT4植物生长促进和抗真菌的活动提出可能是曾经因为bioinoculant代理现esculentus。

1。介绍

植物健康,根际土壤在植物根和包络的面积)是至关重要的。假单胞菌是一个重要的根际化学和一个特定的压力,加上女士的手指,已被证实能提高植物的身体状况在各种作物。假单胞菌的研究集中在世界各地,以确定他们是否可以使用农作物保护和土壤健康维护者。他们最多的根际细菌组织代谢和功能的灵活性。在根际土壤细菌和植物之间的相互作用可以帮助,阻碍或影响植物生长。的增长和发展生物防治制剂作为一种替代方法,生态友好的技术保护农业和园艺作物免受细菌和真菌疾病引发了关注由于环境和客户的担忧。此外,保护植物和动物发展许多疾病是必要的。最初的努力独立PGPR Roorkee-developed秋葵根际土壤表层土壤的描述了流动。的根际土壤微生物提供了一个理想的家,由于高补充通过根系分泌物可访问性。植物根际是一个重要的土壤生物环境plant-microbe交互。视的微生物、土壤补充地位,保护框架,气候和土壤,殖民通过微生物在根的范围可以导致共生,联想,在植物自然主义,或寄生关系。 Okra (现esculentus),一种受欢迎的蔬菜在许多国家,全球经济和营养意义。这种蔬菜作物广泛生产和地球上用于经济的目的。假单胞菌是目前全世界广泛的研究,看看是否他们可以用来保护组。可以帮助植物生长、延迟或阻碍作物土壤细菌之间的相互作用和保持土壤健康。它们是根际最新陈代谢和根际细菌和植物功能灵活。

假单胞菌是世界上一般的什锦和自然适用细菌聚集。假单胞菌菌株分泌的许多化学物质如赤霉素和磷酸溶解,细胞分裂素,植物生长激素,刺激他们产生HCN和含铁细胞,裂解酶植物开发,因此被称为植物生长促进rhizobacteria。所有非rhizobacteria和几把铜绿假单胞菌,假单胞菌aureofaciens,荧光假单胞菌,假单胞菌putida抑制土传微生物通过创建可选的代谢物,例如,抗毒素,蛋白酶、HCN,含铁细胞。rhizobacteria是提高植物发展同时也作为生物防治剂,可能是一个可行的解决方案。根据各种研究,保护秋葵发现了假单胞菌感染引起的疾病。

蔬菜发展中世界的空间,镰刀菌素种虫害和辣椒,具有显著的土传传染性污染的托儿所和领域创造了女士们的手指,导致灾难性的疾病,例如,根战利品和收缩,最后创造产量和质量下降。化学杀菌剂主要是用来对抗这些感染。然而,这些化学物质构成威胁的广泛使用对环境以及人类的健康。

因此,替代技术,植物病害控制应强调。植物生长促进rhizobacteria生物电控制能力可能是一个可行的选择。假单胞菌已被证明,以防止病原体引起疾病在秋葵,据几位。本研究的目的是使隔离、区分,评估的发展推进和对抗性的影响荧光假单胞菌影响秋葵Roorkee工厂,印度。

2。材料和方法

2.1。隔离荧光假单胞菌从根际的土壤

秋葵幼苗在Roorkee温柔地消除来自不同的领域;这些运输向实验室无菌的塑料袋。直到进一步的处理,每一个审判保存到冰箱4°5°C(显示在表1)。秋葵根际的污垢被移除和干空气。1克土壤重,连续稀释国王的电镀之前进行B盘子和孵化24-36小时28°C。纯粹的文化都为进一步使用偏躺在南(营养琼脂培养基)4°5°C温度(1]。

2.2。革兰氏染色法进行识别

我抹干净的幻灯片和准备薄的古老文化创建和热固定的。大约1分钟,几滴宝贵的结晶紫试剂是诽谤。使用自来水,我洗了。我用克的碘洪水涂片,让它在那里2分钟。一滴一滴地,酒精(95%)被用来使脱色的污渍。2 - 4分钟,我倒了几滴碱性藏红。我洗的水龙头水,山油乳剂或甘油之前看一看它在放大透镜(显微镜)2]。

2.3。CT(过氧化氢酶测试)

一滴过氧化氢(30%)是应用于测试文化放在干净的幻灯片,和泡沫的报道结果是3]。

2.4。IP(吲哚生产)测试

高压灭菌后,每个细菌培养注入试管中分别包含5毫升胰蛋白胨误事。一个试管保存时负责,没有细菌培养接种。1毫升的科瓦克试剂添加到每个管,包括控制,经过48小时的潜伏期。10-15-minute休息后,管子被轻轻地滋润。(4)允许试剂上升到顶部,管子被允许站(5]。

2.5。MRVP(甲基红和Voges-Proskauer)测试

在高压灭菌法之前,MRVP肉汤准备和6毫升的倒在每个试管。四个试管作为控制和细菌培养是投入的所有其他人。测试是孵化24 - 48小时的28°-32°C。05年滴先生指示器被添加到每个试管(6]。控制和观察颜色的变化。同样,对孵化试管和控制,8 - 10滴Voges-Proskauer-I试剂和2滴Voges-Proskauer-II试剂。颜色的变化观察试管和与控制(7]。

2.6。柠檬酸铜(利用)测试

西蒙的柠檬酸琼脂偏形成和细菌培养是有条纹的。36-48小时,管是孵化28°-32°C。它注意到偏的颜色发生了改变8]。

2.7。脲酶生产测试

一个接种环伸入对接(底部的管)和裸奔的偏波浪模式被用来接种尿素琼脂偏(9]。结果见过24小时后的孵化27°-28°C。管被放置在一个控制。

2.8。淀粉水解试验

接种文化放在淀粉琼脂板和孵化在28 - 30°C 48小时。板块与健康的细菌与碘溶液浸泡30秒使用滴管。多余的碘溶液是倒10]。结果表明明确的形成和清洁区周围每一个孤立的增长,例如,改变介质的颜色。

2.9。钢管(碳水化合物发酵试验)

首先,我们把管子的肉汤加了4种不同的颜色甜味剂(例如,0.5%的葡萄糖、甘露醇、乳糖和蔗糖);杜伦管已经淹没在每个管(11]。测试管文化培养了26小时28°-30°C。酸或气体的产生的迹象,如改变颜色或创建泡沫,检查管道。

2.10。IAA(吲哚乙酸)生产

Mansoor IAA的描述制造确认(2007)(12]。色氨酸(0.1 g / l)注入细菌菌落在营养肉汤。在4°C,指数增长的文化在10000 rpm离心机15分钟(12]。两滴Salkowski试剂添加到上层清液(2毫升)(1毫升0.5 FeCl₃HClO 50毫升的35%₄)。粉红色的外观确认IAA的存在。

2.11。磷酸溶解

隔离功能的磷酸溶解测试使用Pikovskaya琼脂板(13]。板块的外观检查和用于清理区域周围的殖民地后4天的孵化281°C(适当的增溶的惰性磷酸生产长寿酸的微生物)。

2.12。锌的溶解

锌溶解由微生物进行了根据·赛义德·的方法(2005)(6]。细菌被确定使用Tris-minimal媒体板块含有磷酸锌和被称为bromo-phenol蓝色的酸碱指示剂14]。

2.13。HCN生产

修改方法是用来确定HCN生产(2010)。隔离的指数增长的文化(108细胞/毫升)条纹在固体琼脂板与4.4 g甘氨酸/我补充,滤纸浸泡在0.5%苦味酸钠在1%₂有限公司₃添加到上面的盖子的盘子在同一时间15]。帕拉电影是用来密封板。后48 - 72小时的潜伏期在281°C,颜色由黄色变为浅棕色,明智的棕色,或强烈的棕色,表明可能HCN生产(16,17]。

2.14。氨生产

细菌分离将在蛋白胨水测试,看它是否可以生成氨。48-hour-old文化在08年毫升蛋白胨水孵化,孵化28°-30°C(70 - 72小时18,19]。文化上肉汤幻灯片,0.5毫升奈斯勒试剂应用。黄色到棕色降水出现在几分钟内,表明中度到高氨生产陈et al。20.]。

2.15。敌对的活动

隐蔽的菌株的发展与寄生虫感染腐皮镰孢霉菌测量使用双重文化方法(MTCC 3871) (21,22]。琼脂块(直径5毫米)插入中心的试验板的边缘5-day-old真菌病原体的文化。02年成立一个循环(24-hour-old)分离菌株文化厘米远离病原体。板块在281°C(培养3 - 7天23]。障碍区决心利用配方:抑制带(率)= 100 C−T / C, C地址螺旋开发负责和T地址延伸发展的双重文化Aarab et al。24]。

2.16。生物接种的种子

菌株(PFTT1-PFTT5)精制为48小时补充股票瓶在281°C。在4°C,文化在8000 rpm离心机15分钟。实现最后一个人口密度为1 108个细胞/ ml,生活方式的上层清液处理,球被清洗和悬浮在无菌精制水。独立,细菌细胞悬浮液与1% CMC答案结构浆,当时的外层覆盖种子。满秋葵种子1% CMC泥浆被用作管理。

2.17。发芽的种子

罐检查,无菌苗圃土壤利用。污垢是磨成细颗粒在消毒前在160°C肉用鸡2小时。秋葵种子从Roorkee社区市场聚集。我们选择坚实的种子,在结构和大小比较组三,细菌治疗种子被种植在花盆。种子处理只有1% CMC是用作基准分组。必要时,锅是浇水。以下是治疗:T1,假单胞菌种虫害细菌治疗PFTT1种子;T2,假单胞菌种虫害细菌治疗PFTT2种子;T3,假单胞菌种虫害细菌治疗PFTT3种子;T4;假单胞菌种虫害细菌治疗PFTT4种子;T5,假单胞菌种虫害细菌治疗PFTT5种子。21 DAS,根重、拍摄长度,拍摄重量、根长度、发芽率和考虑。

3所示。结果

3.1。隔离荧光假单胞菌

Rhizobacteria样本的使用国王从秋葵介质和连续稀释的方法。早期调查的基础上,总5隔离(PFTT1, PFTT2, PFTT3、PFTT4 PFTT5)检查。脲酶、柠檬酸利用过氧化氢酶生产,MRVP合成都是积极的,而吲哚生产-在所有5个。此外,据报道在IAA生产隔离,PFTT5展示最亮粉色的色调。实验的结果中描述各种表格和流程图。发现PFTT4可能用作秋葵和其他bioinoculants收成,因为它具有良好的植物生长和提高IAA年龄和磷酸盐的溶解性等特性。

3.2。革兰氏染色法和形态学特征

隔离殖民地形式被描述为球形和黄色绿色的颜色。革兰氏阴性和杆状的分离是在任何情况下发现的。

3.3。生化特性

整个脱离(PFTT1, PFTT2, PFTT3、PFTT4 PFTT5)观察脲酶阳性,使用柠檬酸,过氧化氢酶的作品和淀粉水解不过是吲哚-创建和MRVP创建(表1)。

3.4。吲哚乙酸的生产

IAA生产被发现在所有5个假单胞菌种虫害隔离(PFTT1 PFTT2、PFTT3 PFTT4,和PFTT5)。产生的最深的粉红色PFTT5表示最高的吲哚乙酸生产(表2)。

3.5。磷酸溶解和锌溶解

Pikovskaya琼脂板,所有的限制都是适合明确电晕在疫苗接种。磷酸溶解能力证明等结算区周围的细菌(表2)。因为没有光环在殖民地地区,没有任何隔离锌(表的增溶能力2)。

3.6。HCN和氨生产

除了PFTT3,整个中解脱出来荧光假单胞菌陷害HCN显示通过一个通道纸语调的变化。如图所示的严重的泥土颜色的阴影通过一个通道,PFTT4交付最HCN(表2)。蛋白胨股票,脱离生产碱通过创建黄泥土颜色的加速(表2和图1)。

3.7。对手的活动

整个假单胞菌断开试过了腐皮镰孢霉菌反对行动。测试微生物的开发PDA板块在28°C了假单胞菌spp。PFTT4。孵化的术语进行比较来扩张寄生克制。7天的孵化后,假单胞菌spp。PFTT4选择阻碍的42%腐皮镰孢霉菌,按正常的延伸发展约束率(表2)。

3.8。盆栽试验研究

假单胞菌利用种虫害断开细菌治疗被秋葵的种子均匀的形状和大小(PFTT1 PFTT5)。闭后22天盆种植的种子与上述微生物菌剂显示启动营养品质。假单胞菌sp。PFTT4有最好的种子发芽,射击,和根的长度。拍摄新的和干重,根干重,显示比较扩张倾向。的药物假单胞菌spp。PFTT1、PFTT4 PFTT5交付最好的植物的数量。假单胞菌sp。PFTT4细菌治疗秋葵种子带来一个广泛扩张种子发芽率(82.2%)、PFTT5紧随其后(75.8%)。种子萌发是40%(表控制治疗3)。与控制相比,每个测量的升级,在1%,另外5%是巨大的。图2显示了图的规模荧光假单胞菌影响种子萌发和秋葵的营养生长。

在一锅试验调查,秋葵种子细菌治疗荧光假单胞菌PFTT5显示临界扩张拍摄长度、根长度、射击和根干重。PFTT4和PFTT5对种子萌发率分别为83.3%和76.7%,分别。

4所示。讨论

流研究描绘了开始努力完成隔离PGPR Roorkee-developed根际的表层土壤的秋葵。由于高补充作为根用户可访问性分泌物,根际给出一个最优的土壤微生物环境。居民的数量在有机实体,生活在一个给定的气候很特别,由物理和自然影响组件中存在的气候。此外,Patel等人利用国王的介质从各种援救10株荧光假单胞菌根际的土壤产生植物如水稻、玉米、和集市11]。Kumar等人公认的115年荧光假单胞菌分离大豆根际的Cirebon, Plumbon、印度尼西亚(5]。所有的分离为过氧化氢酶阳性,柠檬酸,脲酶的年龄,和淀粉水解,但对吲哚混合和MRVP不利。

IAA生产被发现在所有的隔离。在PBRI、赫尔德、印度,细菌产生吲哚乙酸已被证明刺激根伸长和植物生长。自然酸的发展,例如,葡糖,酸,乳酸,反丁烯二酸的,琥珀酸与磷酸溶解细菌的分离。植物细菌鉴定的最简单的方法是物理评价作物遗传和设置适当的样本。通过这种方式,我们可以很容易地检测和诊断植物病害。但是,现代技术,如人工智能检测植物疾病中发挥至关重要的作用在早期阶段和诊断时间。

自然腐蚀融合带来了土壤pH值,带来H的时代⁺,它取代了Ca^{2 +}和排放HPO₄²⁻污垢的安排。假单胞菌和芽孢杆菌被认为是必要的磷酸盐溶解Ashrafuzzaman et al。21]。免疫接种微生物利用磷酸盐增溶的进一步发展玉米发展和粮食产量,减少肥料使用,降低了消耗臭氧层物质外流,每Mandal et al。13]。根据Verma et al ., 70%的分离适用于磷酸溶解的范围在5.8 - 13.45毫克/ 100毫升,推进鹰嘴豆改善(3]。这些调查支持我们的决定。

除了PFTT3,所有扭曲的树荫下分离通道的纸从黄色到橙棕色分配HCN制造商(4]。假单胞菌种虫害产生HCN,压制植物病原体的发展,按照萨阿德(8]。植物生长促进活动发挥重要作用的植物在许多方面的发展。可以帮助植物生长、延迟或阻碍作物土壤细菌之间的相互作用和保持土壤健康。此外,在体外研究显示,PFTT4抑制植物病原体的生长等腐皮镰孢霉菌显著提高种子发芽,以及所有开发参数,比如拍摄和根的长度。

HCN广泛抗菌原子占据着有机连接的由各种植物根污染控制荧光假单胞菌,所表示的莱昂et al。25]。在这次考试,每一个断开连接的生命形态观察是可以接受的嗅盐制造商。同时,考尔和Sharma发现嗅盐95%的时代芽孢杆菌与世隔绝,和94.2%的假单胞菌断开,维护我们的发现15]。阴影从棕色变为黄色基调是积极创建测试碱(11]。

观察PFTT4压制的方向腐皮镰孢霉菌增长(体外)在我们的调查。Wahyudi等人发现假单胞菌种虫害有抗菌功效腐皮镰孢霉菌(2]。Mansoor等人发现使用铜绿假单胞菌和p . lilacinus单独或结合有效地控制f .以上。基准组中,只有40%的种子发达(未经变质处理的种子)12]。这些发现就像·赛义德·等。这些发现免疫小麦种子p .荧光NCIM 5096扩展的步伐萌发了10% (6]。Ashrafuzzaman等人显示种子萌发的增量与植物生长促进水稻种子进行预处理时rhizobacteria分离(21]。同样地断言,植物生长促进rhizobacteria在螺母工作发展和种子上升。

因此,选择植物病害控制方法应该被提升。Rhizobacteria增强植物的发展同时也作为生物防治剂可能是一个可行的解决方案。根据各种研究,保护秋葵发现了假单胞菌感染引起的疾病。关于plant-microbe交互,植物根际土壤中生物栖息地是至关重要的。殖民由多种微生物在根会导致一种共生关系,联想,自然主义,或寄生交互在工厂内,根据微生物的种类不同,土壤补充地位,保护框架,和土壤温度。

因此,推测是可行的假单胞菌种虫害菌株将收集更多考虑生物肥料和自然领域的控制由于其多功能的能力。假单胞菌spp。(PFTT4),有很大的工厂发展提高IAA等时代特点,磷酸溶解,HCN创建、创建、碱和生物电控制,可以利用bioinoculants秋葵和不同的收成,按目前的审查(20.]。

5。结论和未来的范围

由于环境和消费者的关注,发展生物防治制剂作为一种替代方法,环境可接受的策略,维护农业和园艺作物对细菌和真菌的疾病产生了兴趣。此外,植物和动物的生长取决于防止各种疾病。荧光假单胞菌Germ-negative,杆状细菌通常存在于水果和蔬菜。荧光假单胞菌已经衍生出的根际Roorkee-grown秋葵。这里提供的工作的重点是识别和管理荧光假单胞菌隔离。工作是一个新颖的方法对保护和控制在植物腐烂的真菌疾病recognisation和控制的隔离荧光假单胞菌。整个研究的重点是使隔绝,辨别和评估开发推进这些细菌对植物生长的影响。五个不同的分离是基于他们的形态,生化、理化特征。这些PFTT1 PFTT2 PFTT3, PFTT4, PFTT5。所有五个观察脲酶阳性,柠檬酸用法,过氧化氢酶创造,和创造MRVP,然而,对吲哚生产不利。此外,IAA生产隔离所有被发现,发现在PFTT5观察最深的粉红色。实验的结果说明尽管各种表格和流程图。观察到PFTT4,拥有伟大的植物开发和提高IAA年龄和磷酸盐溶液化等特点,可以作为bioinoculants秋葵和不同的收获。然而,进一步的理解涉及的组件,以及对手之间的信令交互,病原体,土壤,植物需要在未来推动生物防治剂广泛适用的生物肥料。

数据可用性

可以根据要求提供的数据。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。