文摘

客观的。调查的影响绿豆肽及其配合物促进铅排泄和神经保护的斑马鱼。方法。铅中毒模型建立了斑马鱼的醋酸铅溶液;模型是处理高、低浓度(58.3和175μ绿豆肽的g / mL),高、中、低浓度(27.8,83.3,和250年μ绿豆肽复合物的g / mL),分别。绿豆的影响肽复合物含铅量,轴突的荧光强度,和周围运动神经长度变化识别斑马鱼模型,和绿豆肽的影响及其复合物对斑马鱼的铅排泄、轴突的保护,和外围运动促进神经再生率计算。结果。高浓度的绿豆肽的影响(175μg / mL)在促进铅排泄为29% ( ),的影响,高浓度的绿豆肽复合物(250μg / mL)在促进铅排泄为30% ( )。其他浓度的绿豆肽及其复杂的组没有表现出明显的铅排泄的影响。绿豆的保护作用肽浓度的58.3和175年μ对斑马鱼g / mL轴突损伤分别为98%和101% ( ),和促进周围神经再生效果分别为29% ( )和42% ( ),分别。绿豆的保护作用肽复合物浓度的27.8,83.3,250μ对斑马鱼g / mL轴突损伤85%,78%,93% ( );促进周围神经再生率分别为46%,50%,和50% ( )。结论。绿豆肽及其复合物可以有效地促进斑马鱼铅中毒的铅的排泄,保护和对斑马鱼神经再生的影响。

1。介绍

铅(Pb)是一种常见的神经毒性重金属污染物,这是广泛应用于工业活动,通过不同的路线进入环境1,2]。急性铅暴露可以引起动物的神经毒性效应,如异常行为、学习障碍、听力损失(3]。除了明显的神经发育毒性,领导也可以摧毁身体的氧化还原状态通过直接诱导人体产生活性氧和消耗细胞内的抗氧化剂,导致氧化损伤身体,这将导致损伤组织和器官,特别是神经系统(4,5]。

铅很容易通过血脑屏障,抑制中枢神经系统的发展(6]。神经胶质细胞的正常发育具有重要影响的迁移神经元和突触连接的建立。铅也会导致过早分化的神经胶质细胞,和胶质细胞和神经元之间的相互作用不能正常进行(7]。此外,铅可以积聚在内皮细胞,它还可以通过calcium-like效应影响突触的形成和神经细胞粘附分子(8]。

绿豆富含蛋白质、淀粉、矿物质、维生素、必需氨基酸,其中蛋白质含量是19.5%到33.1%9,10]。在过去的20年里,研究人员发现,从休蛋白肽具有广泛的生物活性功能,如抗氧化、降低血压、降低胆固醇,改善身体的免疫力(17岁)。近年来,越来越多的受到关注的健康机制研究绿豆肽(MBPs),尤其是神经保护机制。然而,没有报告修复神经损伤引起铅中毒与MBPs (16]。

斑马鱼具有体积小的特点,繁殖周期短,胚胎快速发展、胚胎透明的身体,和高与哺乳动物同源性18]。复合物对神经系统的影响在生活或完整的固定标本通过特殊染色法可以快速检测到。有机损伤是一个模型活动广泛用于发育毒理学、遗传生物学、药物开发和环境监测19- - - - - -22]。为了进一步探索绿豆肽的影响和绿豆肽复合物在促进铅的排泄和保护神经,通过感应铅中毒斑马鱼模型建立,以及不同浓度的影响绿豆肽和绿豆肽复合物在促进铅的排泄和斑马鱼神经保护被观察到。

2。材料和方法

2.1。药物和主要试剂

绿豆多肽和绿豆肽复合物从Zhongshiduqing提供生物有限公司(山东)有限公司(中国菏泽);依地酸钙钠购买从华中Haiwei基因科技有限公司有限公司(中国,北京);醋酸铅和其他由上海阿拉丁试剂提供生化科技有限公司有限公司(上海,中国)。

2.2。主要仪器

解剖显微镜(SZX7、奥林巴斯、日本);精密电子天平(CP214,排开,中国);电感耦合等离子体质谱仪(热电、十二类型、热);电动聚焦连续变焦荧光显微镜(AZ100、尼康、日本);antimicrotubule和相关蛋白抗体(美国σT6793);6-well板(鸟巢、中国);甲基纤维素(σ,中国)。

2.3。动物

野生型AB的斑马鱼被自然成对交配繁殖。共有2130个鱼类的年龄2高通滤波器是用来确定最大允许浓度(MTC)绿豆肽复合物,评估绿豆的铅排泄影响肽和绿豆肽复合物,并评估受伤的轴突的保护作用。运动神经元荧光斑马鱼(电视台应变)被自然成对交配繁殖。共有240个鱼,2岁高通滤波器,用于评估的影响绿豆多肽和绿豆肽复合物在促进周围运动神经再生。上面的斑马鱼生长在养鱼水28°C(水质量:200毫克的即时海盐是添加到每个1 l(反渗透水、导电率是480∼510μS / cm;pH值为6.9∼7.2;硬度为53.7∼71.6 mg / L CaCO₃)。

2.4。测定绿豆肽复合物矿渣MTC

2102 AB高通滤波器野生型菌株的斑马鱼被随机选择six-well板(30每口井的鱼,3毫升)的能力,和绿豆肽复合物(50,100年,250年,500年和1000年μg / mL)溶解在水中获得不同浓度。正常对照组(斑马鱼鱼类养殖用水处理)和模型对照组设置。死者斑马鱼每天观察和删除。绿豆肽复合物治疗后72高通滤波器,斑马鱼的死亡人数统计,和斑马鱼的矿渣MTC决心根据斑马鱼的毒性和死亡。

2.5。评估的影响绿豆多肽和绿豆肽复合物在促进排泄

共有240个野生型AB的斑马鱼被随机选择受精后2小时(2高通滤波器),放置在一个six-well盘子。有30个鱼在每个容量3毫升,共有6个平行组招待。模型是用绿豆肽治疗(58.3和175μg / mL)和绿豆肽复合物(27.8,83.3,250μ在水溶液分别g / mL),阳性对照药物注射依地酸钙钠125 ng /鱼。醋酸铅被添加到水铅中毒建立模型。70小时后,斑马鱼的样本被收集的清洗液体和养鱼的水吸收EP管。每隔60斑马鱼被设置为一系列样品,icp探测到他们每个人。斑马鱼的主要内容(C)样本的比例转换为总导致斑马鱼的湿重,和绿豆的C肽和绿豆肽复合物被用来评估复合物的主要排泄的影响。铅排泄效果的计算公式如下:

2.6。在轴突损伤的保护作用

2402 AB高通滤波器转基因野生型菌株的斑马鱼被随机选择six-well板(30鱼好,每卷3毫升)。模型是用绿豆肽治疗(58.3和175μg / mL)和绿豆肽复合物(27.8,83.3,250μg / mL)。70小时的政府后,axonal-specific抗体染色,荧光显微镜下的照片拍摄。斑马鱼头轴突的荧光强度(S)收集评估绿豆的轴突保护肽及其复合物。轴突损伤的保护效应计算公式如下:

2.7。促进周围运动神经元损伤的再生

70小时后,在荧光显微镜下拍摄照片收集周围运动神经的平均长度(L),运动神经的长度是用来评估的运动神经再生效果绿豆肽及其复合物。的公式推广运动神经损伤再生的如下:

2.8。统计分析

数据被表示为(±年代)和群体之间的差异进行了测试T以及。

3所示。结果与讨论

3.1。测定绿豆的矿渣MTC肽复合物

绿豆肽复合物诱导斑马鱼死亡100%浓度的500μ克毫升⁻¹及以上,没有发现明显的不良表型在250的浓度μ克毫升⁻¹和下面。因此,绿豆的矿渣MTC肽复合物决心是250μ克毫升⁻¹(表1)。绿豆肽复合物的浓度减少到申请者和27.8μ克毫升⁻¹(MTC) 1/9 83.3μ克毫升⁻¹(MTC) 1/3, 250μ克毫升⁻¹(MTC)被选中的药效学评价实验。绿豆肽复合物含有70%的绿豆肽。因此,绿豆肽的浓度在周围运动神经的再生测试组为58.3μ克毫升⁻¹(1/3 MTC)和175年μ克毫升⁻¹(MTC),分别。

3.2。铅排泄的影响绿豆肽及其复合物

铅中毒后成功建立斑马鱼模型,他们对待绿豆肽及其复合物分别。70小时后,斑马鱼样本收集的清洗液体和养鱼的水吸收EP管。三个平行样品测试对于每个实验组,每个60斑马鱼是视为一个样本。铅中毒的含铅量的斑马鱼模型对照组(9.01μg g⁻¹)明显高于正常对照组(3.11μg g⁻¹),这表明该模型成功地构造( )。阳性对照组(依地酸钙钠125 ng /鱼)包含8.38μg g⁻¹领导,促进铅排泄的影响为7%,表明依地酸钙钠有一定的趋势在实验剂量条件下促进铅的排泄。

与模型对照组相比,含铅量斑马鱼的绿豆肽高浓度组(175μg / mL)显著降低( ),和铅排泄效果为29%;与模型对照组相比,含铅量斑马鱼的绿豆肽复合物高浓度组(250μg / mL)显著降低( ),和铅排泄效果为30%。没有明显的铅排泄的影响在其他浓度的绿豆肽和绿豆肽复合物,这表明,适当的绿豆肽的浓度和绿豆肽复合物促进铅的排泄(表有显著影响2)。

3.3。绿豆肽及其复合物保护受伤的轴突

与模型组相比,依地酸钙钠对斑马鱼轴突损伤的防护率85% ( ),绿豆肽浓度的58.3和175年μg / mL对斑马鱼有保护作用,和保护的轴突损伤率分别为98% ( )和101% ( )。与模型组相比,绿豆肽复合物浓度的27.8,83.3,250μ在斑马鱼g / mL保护受伤的轴突,和利率85% ( ),78% ( )和93% ( )。结果表明,适当的绿豆肽的浓度和绿豆肽复合物对斑马鱼受伤的轴突(图有明显的保护作用1和表3)。

3.4。绿豆肽及其保护的配合物促进受伤的圆周运动神经元的再生

与模型组相比,依地酸钙钠促进了斑马鱼周围神经的再生46% ( )。与模型组相比,绿豆肽浓度的58.3和175年μ克/毫升在斑马鱼对周围神经再生的影响,和再生率分别为29% ( )和42% ( )。与模型组相比,绿豆肽复合物浓度的27.8,83.3,250μg / mL促进周围神经再生,和利率46% ( ),50% ( ),和50% ( )。结果表明:适当浓度的绿豆多肽和绿豆肽复合物可以显著促进周围神经的再生在斑马鱼(图2和表4)。

4所示。结论

导致有害人体多个系统和器官,包括骨髓、造血系统、免疫系统、神经系统、消化系统、肾脏和心脏22,23]。近年来随着工业化的发展和交通,环境铅污染增加,对人类健康的影响日趋严重的(24]。依地酸在临床上,铅中毒的治疗主要是使用钙二钠和青霉胺,但这些药物有许多副作用反应,如肾脏损害、过敏反应(25]。天然产物对铅的排放有显著影响(26- - - - - -28]。据报道,大蒜中蒜氨酸结合会导致减少lead-poisoned老鼠的毒性;魔芋粉能具体地绑定到领导和促进其放电而不影响吸收钙,铁,锌,所以可以使用魔芋精粉作为防治铅中毒的健康食品(29日,30.]。

绿豆是公认的安全、无毒的健康食品,它吸引了来自世界各地的广泛关注(31日]。目前,最集中的绿豆是绿豆淀粉和粉丝的加工,忽略其副产品的开发利用绿豆蛋白(32,33]。这项工作的调查浓度范围下,绿豆肽及其的复合体由Zhongshiduqing(山东)生物有限公司,有限公司对铅的排泄有显著影响,对斑马鱼再生效果显著周围运动神经损伤引起铅中毒,和对轴突损伤有明显的保护作用。

神经损伤后神经元细胞体不能再生,和相关的主要功能也将不断受到攻击(34- - - - - -37]。目前,所谓的神经再生是指轴突的再生,包括轴突的生长、轴突延伸,重建与靶细胞突触连接,实现神经再生,恢复功能(38,39]。在正常情况下,周围神经损伤后,沃勒变性发生在一些神经的近端和远端,导致神经纤维的变性和坏死和髓鞘神经功能障碍(40,41]。在这个工作中,发现高浓度绿豆肽复合物(250μg / mL)有一个保护93%的速度对斑马鱼轴突损伤和促进周围神经损伤率为50%,表明绿豆肽可以保护斑马鱼轴突的再生,促进周围运动神经。

作为一种农产品,绿豆是容易生长,绿豆的输出非常高。预计开发绿豆肽复合物lead-promoting健康功能性食品,这将提供一个适当的、无毒、绿色lead-emission慢性铅中毒患者的健康食品。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

魏魏和王·苏同样这项工作。