Eurotium CristatumPostfermentation杂草和苹果树叶花草茶

文摘

真菌Eurotium种虫害是主要的生物制剂发酵的叶子茶树茶布什形成一个受欢迎的食品,postfermented茶。真菌大肠cristatum高氏研究所的,存储在集合下新抗生素的数量在01267年被隔离和标识煤球福建中国茶。物种鉴定进行了基于morphocultural特点和DNA测序。本研究旨在确定制造postfermented草药茶使用的可行性大肠cristatum和评估他们的质量。Autofermented草药茶从Chamaenerion angustifolium(杂草)和马吕斯有明显(苹果树)作为本研究的起始物料。酚类化合物的浓度的变化,有机酸、糖类、氨基酸和自由草药茶受到postfermentation的观察大肠cristatum在01267年。这是发现大肠cristatum在01267株没有抗菌活性,不形成真菌毒素,这是食品安全的一项指标。

1。介绍

人们普遍认为茶是世界上最受欢迎的饮料之一,今天,中国被认为是一个主要茶叶生产国和出口国。在经典的版本中,茶是经处理的叶子茶布什茶树或c . assamica。茶的性能很大程度上取决于酶的氧化过程的叶子茶布什。所有的茶都是分为发酵(或autofermented)和postfermented茶。Autofermented茶是由植物细胞的生化过程。根据氧化程度,autofermented茶叶分为绿茶、发酵一段时间,和红茶是发酵了几个星期。Postfermented茶,额外的自动发酵,此外通过微生物发酵;因此,他们是最富含生物活性物质,不仅因为它们含有茶组件自动发酵的产品,而且产品的转换由微生物,以及微生物代谢产物(1- - - - - -3]。在postfermentation在潮湿条件下,康普茶饮料等流行的茶和茶饮料中国原产地和日本传统Ishizuchi-kurocha茶。在水的存在,自然postfermentation期间,家庭的细菌Acetobacteriaceae(主要是属Komagataeibacter康普茶)和种虫害乳杆菌科(即,Lactiplantibacillus杆菌和l . pentosusIshizuchi-kurocha)占主导地位。此外,但数量小得多,有家庭的细菌Paenibacillaceae,Staphylococcaceae,链球菌科,Lachnospiraceae,类杆菌,Bifidobacteriaceae。描述了大约30种真菌,但酵母酵母科(优势Zygosaccharomyces种虫害或假丝酵母spp),Schizosaccharomycetaceae(裂殖酵母spp。),Pichiaceae(酒香酵母属spp。)家庭获胜4- - - - - -9]。

在postfermentation干植物质量,耐旱性的真菌占主导地位,主要属子囊菌曲霉属真菌,青霉菌,酿酒,Eurotium(曲霉属真菌鉴定)。在中国最受欢迎的postfermented茶黑砖茶命名为“福建”茶或“Fu茶”(福建省广福茶叶有限公司,中国)。微生物群落的研究显示主要的真菌属福建postfermented茶Eurotium(超过15种为主大肠cristatum)[2,10]。存在的真菌在茶叶加工成金褐色的斑点,叫做“金花”,是一个高茶品质的指标(10- - - - - -12]。

postfermentation期间,茶的生化成分变化。目前,大约有2000中发现生物活性化合物茶已被证明。其中,有儿茶素、有机酸、黄酮醇、茶黄素,teagallins、生物碱、糖类、氨基酸、维生素等。3]。这些大量的活性化合物解释茶的丰富多样,其感官特性的差异,以及对机体的影响。Postfermented茶不仅是受欢迎的饮料,但也有药用价值:脂质代谢正常化,和他们有抗菌、治疗糖尿病药,抗氧化,抗诱变剂的影响10,13- - - - - -15]。除了有用的物质,真菌形成不良或有害物质的食品微生物学的观点。真菌是特别注意,这不仅与他们相关联影响成分,给产品有用的属性,而且还与许多人的能力产生抗生素或毒素,导致严重的食物中毒。然而,在植物食品水分活度较低( ),艾的真菌菌株,包括属Eurotium,有效地发展。最好的学习是隔离的大肠cristatum开发的干树叶c . sinensis。这些耐旱性的真菌是茶的形成特性的一个重要因素,积极在中国工业技术用于生产postfermented茶(2,10,16]。

除了茶的叶子c . sinensis,还有其他饮料从各种植物的叶子和草药。这些饮料叫做草药茶。这组研究最多的茶制成的伴侣(冬青属植物paraguariensis)、芙蓉(木槿sabdariffa)、薄荷(、)和洋甘菊(洋甘菊recutita)。这些饮料是药用的解渴和快乐。大多数这些植物的特点是一个相当高含量的酚类化合物,抗氧化剂和其他化合物影响psychoemotional状态(17]。

在俄罗斯,随着消费文化的传统茶c . sinensis叶子,草药茶自古以来受欢迎(18,19]。最受欢迎的是由Chamaenerion angustifolium(图1)。它是一种多年生草本植物与窄的叶子,像柳树的叶子。这是普遍在北半球,经常发现在林中空地和烧毁的地区。因此,这种植物的名字是杂草,firetop,伟大的willowherb,夹竹桃willowherb。Ch. angustifolium在俄罗斯有很多名字取决于该地区,但最常见的是Ivan-tea。除了杂草茶、饮料具有良好的感官特性和较高的抗氧化活性得到来自其他植物,特别是从水果和浆果作物的叶子19]。微生物技术postfermentation草药茶尚未发达在俄罗斯,他们不是工业生产。

本研究一般针对检查使用的可能性大肠cristatumpostfermentation两种草药茶。这个发表的实验数据代表技术的发展产生的第一步在俄罗斯postfermented草药茶。本研究的具体目标如下:孤立的大肠cristatum从福建postfermented茶团块和描述它;分析其增长在发酵的草药茶Chamaenerion angustifolium(杂草)和马吕斯有明显(苹果树);确定酚类化合物的组成、糖类、有机酸、氨基酸和自由在发酵和postfermented茶;比较两个互相草药茶的成分和文献数据;确定潜在的抗菌活性的面板测试菌株;并建立没有/真菌真菌毒素的存在。

2。材料和方法

2.1。样品收集

真菌是隔绝postfermented黑砖茶名叫“福茶”或“福建”茶(福建广福茶叶有限公司,湖南,中国)。在福建postfermented茶加工成的目视检查,一片片黄色的真菌生长都清晰可见。从这些地方,材料准备暂停。当播种一个暂停煤砖茶琼脂媒体,真菌菌落的生长形态相同类型的观察。证实了孤立的微生物纯度至少连续5通道在不同琼脂媒体。

2.2。文化媒体和文化条件真菌大肠Cristatum在01267年

孤立的真菌是孵化autofermented从植物草药茶Ch. angustifolium(杂草)和m .释放有(苹果树叶)(MOYCHAY。俄罗斯,莫斯科,俄罗斯)。

四个使用琼脂媒体(%):(1)Czapek介质:sucrose-3, NaNO₃-0.3,KH₂阿宝₄-0.1,MgSO₄•7 h₂О- 0.05,氯化钾- 0.05,FeSO₄•7 h₂o - 0.001,琼脂- 1.5;自来水;(2)Sabouraud琼脂培养基:glucose-4,蛋白胨- 0.7,黄豆面粉- 0.3,酵母提取物- 0.4,和琼脂- 1.5,自来水;(3)改良高氏琼脂培养基# 2:glucose-1,蛋白胨- 0.5,胰蛋白胨- 0.3,氯化钠- 0.5,agar-2,自来水,pH值7.2 - -7.4;和(4)矿物琼脂培养基# 1高氏:可溶性starch-2, K₂HPO₄-0.05,MgSO₄•7 h₂О- 0.05,了解₃-0.1、氯化钠- 0.05 FeSO₄•7 h₂o - 0.001, agar-2精华水,pH值7.2 - -7.4。

真菌是孵化28°C。

中等1用于真菌的存储和维护;培养的持续时间是7天。媒体1 - 4被用于形态学研究;培养期间2-21天。

媒体没有琼脂用于水下培养1 - 3。淹没在750毫升厄伦美厄烧瓶进行培养和150毫升的介质旋转瓶(200 rpm)。

2.3。真菌鉴定

孤立的物种应变确定基于形态和文化特点,以及基因序列的分析。

真菌的形态和文化特性被认为是在2-21天生长在不同的媒体。150 x的准备工作检查,600倍,1500倍的放大使用Mikmed-6光学显微镜(LOMO-Microanalysis、俄罗斯)。核糖体RNA基因的核苷酸序列和其他一些地区也发现(表1)。

总DNA的提取真菌生物量进行了使用DNeasy PowerSoil工具包(试剂盒Inc .)、美国)。聚合酶链反应(PCR)是使用一组进行PCR大师混合试剂(美国热科学)。的最后一卷50μL PCR结合包括25μL 2 x PCR反应混合液,0.5μ每个引物的摩尔,1 - 100 ng孤立的DNA和nuclease-free水。真菌底漆集和热循环程序表中描述1。PCR进行热循环2720设备(美国应用生物系统公司)。

放大产品纯化的DNA再沉淀在温和的条件下使用0.125醋酸铵70%乙醇水溶液和可视化在1%琼脂糖凝胶(使用此种Tris-borate缓冲区)在电场强度为7.6 V /厘米。相同的PCR引物测序地区ITS-D1 / D2,路易斯安那州立大学,RPB2只有正向引物(ef - 595 f,βt2a, gpd1)地区TEF1 -α,β浴缸,GAPDH是使用。桑格的核苷酸序列测定方法自动音序器基因分析仪3500(美国应用生物系统公司)。的DNAStar Lasergene SeqMan v.7.1.0 (WI DNAStar Inc .,麦迪逊,美国)和大型7 (20.)被用来查看、编辑和获得的原始序列数据一致。参考核苷酸序列得到从基因库数据库(21)和哥伦比亚广播公司(22]。

2.4。草药茶的生化参数的确定由于Postfermentation大肠Cristatum在01267年

成500毫升锥形烧瓶,20 g的autofermented草药茶了,由高压灭菌法灭菌(1 atm, 40分钟)和接种水中悬浮体,包含子囊孢子和菌丝体片段的浓度为10³CFU / g的茶。环境的湿度是20%。Postfermentation草药茶的真菌大肠cristatum在01267年进行了固定为14天28°C。获得的样本postfermented生物量干在50°C到5%的水分含量。水从获得的干生物量、提取准备的1 g的生物质添加到20毫升的水和提取与搅拌20分钟在80°C,紧随其后的是离心3000 g×15分钟。下列化合物在水提取物通过高效液相色谱法测定:酚类化合物、有机酸测定安捷伦1200色谱仪(美国安捷伦科技),二极管阵列检测器(爸爸),Hypersit ODS C18 5毫米μm色谱柱(美国热费希尔科学);溶剂系统是一个磷酸盐缓冲剂与乙腈与pH值2.5比13:8723,24];糖测定的安捷伦1200色谱仪(美国安捷伦科技)折射率探测器(摆脱),色谱柱Luna氨基100 a (美国Phenomenex),溶剂系统是乙腈和水的混合比例为75:25,流动相的温度是40°C (23,24];游离氨基酸测定的安捷伦1200色谱仪(美国安捷伦科技),二极管阵列检测器(爸爸),一个卢纳C18色谱柱(2) 5毫米μ(美国Phenomenex)与一个警卫列;溶剂系统是0.1米pH值6.4乙腈乙酸钠的比例9:1 (23,25]。

分析提取后,化合物的内容重新计算,并表示在微克每克的茶干重(μg / g d.w。)。

2.5。说明真菌毒素形成的可能性大肠Cristatum在01267年

的大肠cristatum在01267株生长在水下栽培介质1 7天。发展文化在5000×g离心20分钟。

真菌毒素的存在文化肉汤高效液相色谱法测定上清液在TermoFinnigan色谱仪与二极管阵列检测器,色谱柱海波西尔™BDS C18 5毫米μ(美国热费希尔科学);溶剂系统如下:对于黄曲霉毒素B1, toluene-ethyl acetate-formic酸体积比80:40:95;棒曲霉素和玉米烯酮,磷酸二氢钾缓冲溶液的pH值3.0乙腈的体积比95:5;deoxynivalenol,甲醇-水的体积比95:5 (23,26]。

高效液相色谱法检测限制了真菌毒素对黄曲霉素0.003毫克/公斤,deoxynivalenol 0.2毫克/公斤,0.2毫克/公斤玉米烯酮,并对棒曲霉素0.01毫克/公斤。

2.6。大肠Cristatum在01267:确定可能产生抗菌物质

确定抗菌活性,大肠cristatum在01267年在上述媒体在淹没条件下培养1 - 3。文化液体的样品是2、4、7、10、14、21天的增长。抗生素的存在活动文化液体是由扩散到琼脂培养基。为此,介绍了文化的研究样本液体的井培养皿琼脂培养基3感染测试压力。孵化后,抗菌活性水平是判断是否存在的区域增长的抑制试验井周围的文化。光盘有抗菌和抗真菌抗生素作为控制(左氧氟沙星(LVX5)、新生霉素(NB5),氯霉素(C30)、阿米卡星(AN30)、头孢噻肟(CTX30)和环丙沙星(CIP5);美国Becton, Dickinson和公司)。

下面的微生物被用作测试菌株确定抗生素的活性大肠cristatum在01267年:革兰氏阳性细菌枯草芽孢杆菌АТСС6633,b、国家反恐怖主义中心的8241年,b . mycoides537年,微球菌危害国家反恐怖主义中心的8340年,明串珠菌属mesenteroidesVKPM b - 4177,金黄色葡萄球菌FDA 209 p金黄色葡萄球菌在00761年,以及分枝杆菌分枝杆菌smegmatisVKPM Ac 1339和m . smegmatismc²155;革兰氏阴性细菌大肠杆菌写明ATCC 25922,铜绿假单胞菌写明ATCC 27853,Comamonas terrigenaVKPM b - 7571;和真菌黑曲霉在00760年和酿酒酵母259年RIA。

l . mesenteroidesVKPM b - 4177,答:尼日尔在00760年,囊。酵母RIA 259孵化在28°C,其余的测试菌株在37°C。

2.7。数据处理

数据分析使用MS Excel 2016和作为 三个复制。

3所示。结果

3.1。真菌鉴定

应变增长大约同样有机媒体Czapek Sabouraud,和修改琼脂培养基# 2高氏,但增长差矿物琼脂培养基# 1高氏(数字2(一个)- - - - - -2 (d))。在蔡氏培养基,真菌olive-beige,后来橄榄褐色的殖民地色彩,红棕色exopigment着色(图特征2(一个));增长率为5.2毫米/天。第四天的增长,大量的cleistothecia形成琼脂媒体(数字2 (e)和2 (g))。的大小cleistothecia从45到108年μ米直径。每个子囊孢子包含8个子囊孢子明显赤道脊和多刺的粗糙表面;孢子的大小是 μ(数据2 (g)和2(我))。分生孢子的观察孢子形成只有种植在蔡氏培养基以40%葡萄糖。分生孢子,孢子是位于上层的殖民地在菌丝体cleistothecia(图2 (f))。分生孢子的头覆盖着一层phialides,分生孢子链延长。分生孢子球形椭圆的形状,表面光滑,2.6到2.9μ米直径沿长轴(数字2 (h)和2 (j))。的整体特征描述,真菌物种的描述Eurotium cristatum(强奸犯et芬耐尔)·凯恩,teleomorph或曲霉属真菌cristatus强奸犯等芬内尔,鉴定(27,28]。

确认发现的物种,DNA六个区域的序列测定(表2)。在四个六个案例(基因ITS-D1 / D2、RPB2 TEF1 -α,β浴缸),巧合的是99.67 - -100%的序列曲霉属真菌cristatus基因数据库中,证实了morphological-cultural发现的物种所属的应变特征。真菌菌株沉积在高氏新抗生素研究所的集合Eurotium cristatum(鉴定曲霉属真菌cristatus)在01267年。

3.2。由于Postfermentation生化参数变化大肠Cristatum在01267年

最初由真菌植物材料的变换大肠cristatum在01267年被认定为酚类化合物含量的变化、有机酸、糖类和氨基酸postfermented草药茶的提取物。

草药茶的成分的比较分析表明,酚类化合物的总内容由于postfermentation杂草茶在苹果树明显高于叶茶(5626.44和251.12μ分别为g / g)。结果表明,杂草的postfermentation茶生物质导致大约增加了二倍芥子酸的含量和syringaldehyde完全消失的松柏和突触醛。茶从苹果树叶生物量的postfermentation导致的出现在126年的没食子酸μg / g和失踪的syringaldehyde和香兰素等组件。

指出,低分子量酚醛化合物的总含量之前和之后他们postfermentation几乎没有变化的情况下杂草生物量和茶略有增加(18%)的情况下苹果树叶子茶,这表明氧化还原过程的活动期间postfermentation(图3和表S1)。

糖含量的分析postfermented茶提取物的显示,在杂草的postfermentation茶,真菌完全利用蔗糖,果糖含量略有下降(12%)。在苹果树的postfermentation叶茶,蔗糖和果糖被完全利用。葡萄糖水平在这两种情况下仍然几乎不变(图4和表S2)。

后Eurotium cristatum在01267年增长,苹果酸和酒石酸是利用样本和苹果树的叶子茶,完全。草酸含量在两个样本无关紧要的改变。的挂内容琥珀酸(345%和150%)也是典型的样本。样本之间的差异在于急剧变化,由于postfermentation,柠檬酸和乳酸浓度的酸:增加杂草茶样品(分别为157%和488%)和减少苹果树叶茶(分别降至34%和0%)(图5和表S3)。

自由氨基酸的分析提取的杂草茶和苹果树种植前后叶茶大肠cristatum在01267人的调查显示,由于真菌生长,内容氨基酸天冬酰胺,谷氨酰胺、甘氨酸,缬氨酸显著增加在两个样本(在23 - 305%)。此外,在杂草茶样例中,内容的精氨酸,谷氨酸,蛋氨酸,丝氨酸也增加(26 - 58%),而在苹果树的样品叶茶,天冬氨酸的含量增加(127%)。在这两种提取物,之前和之后的培养大肠cristatum在01267年,所有9免费的必需氨基酸,必需氨基酸的含量如组氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和缬氨酸增加了杂草的茶。生物量的苹果树叶子茶,缬氨酸的含量显著增加(129%)和甘氨酸的含量略有增加(114%)。在这两种微生物,个别氨基酸的含量发生了变化,但总含量(图几乎保持不变6和表S4)。

3.3。决心的有毒和抗生素的活性大肠Cristatum在01267年水下种植

生物技术在茶叶生产,安全问题给出了一个特殊的地方,因为某些种类的曲霉属真菌真菌生长可以合成真菌毒素和抗生素期间,存在的和不受欢迎的食品是有害的。液体经过孵化的文化大肠cristatum在01267年Czapek应变分析了液体介质的高效液相色谱法对真菌毒素的内容:黄曲霉毒素B1, deoxynivalenol, zearalenoene和展青霉素。结果表明,大肠cristatum在01267年没有形成这些真菌毒素。抗生素的分析活动的文化液体大肠cristatum在01267株2 21天反对12岁的测试细菌和真菌的菌株也显示没有活动。

4所示。讨论

根据本研究的目的创建技术postfermented俄罗斯草药茶的生产,我们从postfermented黑砖茶福建分离出真菌。被确认为孤立的压力大肠cristatum和沉积在高氏研究所收集在01267年。它证实了先前发表的数据大肠cristatum通常是发现在福建茶团块。的能力大肠cristatum,主要底物是土壤和植物叶子,不仅开发的叶子c . sinensis茶布什,但也在其他植物材料,很明显在我们的研究和证实了两autofermented草药茶在俄罗斯商业生产。

像所有的真菌,大肠cristatum在01267年有明显的水解酶的活动,确保植物材料由于其增长低分子量化合物形成的植物生物聚合物。我们分析了低分子量的碳水化合物的含量(酚类化合物、有机酸和糖类)和自由氨基酸的花草茶提取之前和之后大肠cristatum在01267年的增长。

微生物发酵的影响(postfermentation)酚类化合物的组成已经深入研究了茶的叶子c . sinensis。没食子酸儿茶素的氧化酯(GCG)和epigalocatechin酸酯(EGCG)包含在茶叶导致冷凝products-theaflavins和theorubigins的形成。当属的真菌发酵曲霉属真菌进行普洱茶的技术,内容复杂的酚类化合物,EGCG和GCG等,减少和简单儿茶素不与没食子酸,免费的没食子酸,其转换产品增加(29日]。

是先前建立单宁(enotein)主导杂草草的酚类化合物的合成,而类黄酮(mericitin,槲皮素、槲皮甙、山柰酚和quercitrin-galloyl-galactoside)和没食子酸等酚类和鞣花酸存在于小批量(19]。自动发酵过程中,酚类化合物的合成进行了重大改革,酚酸的含量和类黄酮,抗氧化活性高,增加了。特别是,活跃的抗氧化剂在orthoposition羟基的化合物,如槲皮素。氧化酚类化合物可以凝结形成单宁或减少交互与其他抗氧化剂。根据我们的数据,类似的过程发生在postfermentation的大肠cristatum在01267株草药茶树叶杂草和苹果。氧化还原反应导致醛和酸的比值的变化(图3和表S1)。在postfermented杂草茶,syringic酸量下降(1.5倍)和syringaldehyde与常数香兰素含量增加;突触醛完全消失,而芥子酸的含量增加了一倍;此外,松柏醛完全消失了。苯酚的酚类成分和转换在苹果树的叶子比杂草草研究较少,但过程的方向是一般性的(18]。

根据我们的数据,在postfermentation,杂草茶叶中没食子酸的浓度略有增加(约1%),而在苹果树叶子茶,它大幅增加,也就是说,通过550次。然而,按绝对值计算,没食子酸的含量在杂草的茶是约40倍苹果树叶子茶。没食子酸存在于许多植物,它是复杂的一部分的单宁。它是一种抗氧化剂,如水杨酸、抑制白细胞在血管外的领域的积累的组织和抑制慢性炎症。它也表明,没食子酸影响免疫系统通过刺激免疫球蛋白G的形成(30.]。因此,茶叶中没食子酸的积累是一个有用的属性。作为一个影响Eurotium cristatum在01267年增长,香兰素和syringaldehyde消失,松柏的数量和突触醛略有增加,而syringic酸的含量有所下降。这些数据表明水解复杂的酚类和持续的氧化过程(图3和表S1)。获得的结果对应数据的分解复杂酚类茶树叶的布什山茶花属的真菌Eurotium(31日]。根据文献数据,酚类化合物的数量逐渐减少长时间的发酵。因此,茶postfermentation期间,复杂的酚类化合物分解,由于他们的衰变产物的积累,后部分吸收的真菌(31日]。

糖(蔗糖和果糖)的含量减少,直到完全消失,蔗糖在两种茶,以及果糖在苹果树叶子茶和水平减少杂草的茶。葡萄糖,称为“细胞的能量货币”,维持在一个恒定的水平(图4和表S2)。

琥珀酸和草酸的积累,以及减少在酒石酸和苹果酸的含量,是常见的茶;区别由乳酸和柠檬酸的含量的增加在减少杂草茶和茶从苹果树叶(图5和表S3)。琥珀酸,应该做的茶,是一种抗氧化剂具有广泛的生物活性,增加人体的免疫状态、抗毒素的影响,改善心血管系统的状态(32]。

当两个草药茶的氨基酸组成分析,较高含量的自由氨基酸(包括所有必需氨基酸)指出,和的浓度主要在4-38的范围μg / g。期望是天冬氨酸和丙氨酸的优势杂草茶(91.63和146.97μ分别为g / g),以及苏氨酸的含量高,缬氨酸和谷氨酰胺,而在苹果树叶子茶是天冬氨酸和丙氨酸(图6和表S4)。真菌发酵前后氨基酸的浓度并没有改变在碳水化合物的情况下(数字3- - - - - -5和表S1-3)。

一般来说,由于postfermentation,杂草茶有较高含量的酚类化合物,糖类、有机酸和氨基酸相比苹果树叶茶(表3)。花草茶的普及从杂草在俄罗斯历史上,发展,显然,这是基于开发的味道和好处,现在证实了实验室数据。在这项研究中,我们并没有计划在动力学研究茶的成分,但我们正计划这样一个任务,以开发生产技术,优化组合的茶和增加他们的有用的属性。茶的成分不仅原料,而异株,还有postfermentation的持续时间。因此,了解上市的组成物质动力,是可能的影响,例如,甜味或酸性饮料。

获得的结果,我们不能准确地与其他作者的出版数据由于不同的研究条件。可能是高总趋势与高分子化合物的水解一方面由真菌和获得的消费产品。最近的实验条件给出出版肖等人的氨基酸。表4显示了一个比较的结果,虽然在我们的研究中,发酵的时间是14天,在引用工作是12和16天33]。

表4表明postfermented茶树叶的布什c . sinensis大约是4倍在自由氨基酸比茶Ch. angustifolium(杂草)和m .释放有(苹果树叶)。也表明postfermentation 12天的时间降低了氨基酸的总含量为38%,而postfermentationCh. angustifolium和m .释放有减少只有3 - 4%。这再一次强调了postfermentation条件的重要性,特别是其持续时间。

真菌菌株的必要特征用于食品工业技术是没有毒性的。的安全大肠cristatum在01267菌株的高效液相色谱分析证实了文化肉汤由于缺乏共同的毒素黄曲霉毒素B1、棒曲霉素,deoxynivalenol,玉米烯酮生产的产毒素的真菌(34]。之前发现黄曲霉毒素biosynthesis-related基因的表达(aflD、aflQ aflS)大肠cristatum是表达下调(35]。

许多出版物指出postfermented茶的抗菌效果。这个活动可以解释为茶叶的成分或水解产品组件的茶叶的作用下大肠cristatum的生物合成产品,以及真菌生长在一个没有茶叶的微生物培养基。茶一再证明的抗菌活性与致病革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌(36,37]。作者认为植物多酚作为茶的主要抗菌药物,可能影响各种酶的活性和致病细菌的细胞膜的稳定性38]。建议的机制的抗菌活性的中国茶是酚类化合物的特性,特别是alkylresorcinols [39- - - - - -41]。

茶的抗菌性质的详细描述和他们组成提出了在文献[3,38]。几乎没有证明所产生的抗菌产品大肠cristatum。当在淹没条件下发酵,一个植物内生真菌大肠cristatum从海洋藻类en - 220、孤立海藻thunbergii,产生未知的吲哚生物碱,即cristatumins模拟,以及九个已知的副产品。有趣的是,这些化合物不同抗生素的活动:抗菌、杀虫、驱虫剂和真菌的。然而,这些化合物的麦克风高,达数十,数百微克每毫升(11,42]。益生菌菌株大肠cristatum被中国隔离砖茶Fuzhuan和测试吗在体外活动对即使黄曲霉。它建立了GC / MS有许多抗真菌物质中大肠cristatum滤液HNYYWX.21文化。此外,这一毒株抑制黄曲霉毒素的产生答:flavus。活性化合物的化学结构尚未建立(35]。

所描述的大肠cristatum在01267株没有显示抗菌或抗真菌活性测试14测试文化。抗菌活性没有文化获得的液体在真菌的生长在三个营养媒体不同的成分。我们认为这是一个理想的特性的应变可用于食品工业的postfermentation草药茶。

5。结论

的增长大肠cristatum在01267株高效autofermented草药茶的杂草和苹果树叶。由于postfermentation,植物原料水解和一些有用的低分子量代谢产物,如琥珀酸、必需氨基酸,酚类,积累。的大肠cristatum在01267株没有产生毒素和抗菌物质,在食品工业是可取的。Postfermented苹果树叶制成的茶有点劣质茶由杂草(“Ivan-tea”),在俄罗斯传统的饮料,营养的内容。

数据可用性

数据的数据3- - - - - -6用于支持本研究的结果中包括文件(表的补充信息S1-S4)。使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

补充材料

表S1:的影响Eurotium cristatum在01267年postfermentation在草药茶(酚类化合物的合成μg / g)。S2:表的影响Eurotium cristatum在01267年postfermentation糖成分的草药茶(μg / g)。表S3:的影响Eurotium cristatum在01267 postfermentation有机酸成分的草药茶(μg / g)。表S4:的影响Eurotium cristatum在01267 postfermentation草药茶的氨基酸组成(μg / g)。(补充材料)

引用

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