生殖系突变KIF1Bβ.与杂合性丧失相关的基因：嗜铬细胞瘤患者遗传筛查中下一代测序的有用性

抽象的

在过去的二十年中，Pheochromocytomasas和Paragangliomas的遗传方法发生了变化。如今，我们知道，超过40％的患者在迄今为止确定的易感基因中具有种系突变。我们的目标是强调下一代测序（NGS）的遗传诊断如何改善受嗜铬细胞瘤和Paragangliomas在常规诊断筛查中影响的患者的管理。我们报告了一种案例介绍和下一代测序分析，由Silico研究和线粒体地位的评估支持KIF1Bβ.组织。受2017年左分泌嗜铬细胞瘤行手术治疗手术后46岁的男性中，去甲变肾上腺素水平下降非常缓慢，检测疑似腹腔淋巴结。我们发现了一种新的种系KIF1Bβ.基因突变，C.4052C> T，p。Pro1351Leu与肿瘤损失的杂合子丧失，并导致硅研究中的可能致病。与野生型组织相比，这种突变也与通过电子显微镜相比的线粒体数量增加的线粒体数量与观察到的线粒体自噬分数的线粒体自牙本质的态度补偿。我们的结果强调了下一代测序在存在多个肿瘤倾斜基因的情况下，同时，其使用可能导致临床医生的挑战。迄今为止，根据最新的共识陈述进行遗传分析是由Pheo / PGL影响的患者的强制性。

1.介绍

嗜铬细胞瘤（PHEO）和副神经节瘤（PGL）是一种罕见的肿瘤，每年的发病率约为百万分之2-5。2017年，世卫组织内分泌器官肿瘤分类承认这种不可预测的行为，将PHEO和PGL划分为恶性类别（ICD-O/3）[1.]. 高达40%的PHEO/PGL是由目前已知的14个主要易感基因之一的种系突变引起的[2.]。此外，已经在肿瘤组织中发现了这些和其他基因的突变和其他基因。在过去，临床驱动了对鲍亚/ PG1患者的种系突变进行了搜索[3.]但是，随着下一代测序（NGS）的出现，已经创建了目标面板，允许根据PHEO / PGL遗传诊断的共识陈述同时分析易感基因[4.]。

特别是，我们同时测试许多易感性基因：EGLN1，EPAS1，FH，KIF1Bβ，MAX，NF1，RET，SDHA，SDHAF2，SDHB，SDHC，SDHD，TMEM127，和vhl..在过去的二十年中，对Pheo和PGL的遗传基础的了解经历了重要进展。转录组研究将Pheo / PGL分为两个主要簇：包括集群1PHD2- ，vhl.- ，SDHX.- ，idh.- ，HIF2A- ，MDH2.-，及跳频包括集群2的肿瘤包括在内RET- ，最大限度- ，NF1- ，TMEM127-，及KIF1Bβ.-mutated肿瘤加零星PHEO / PGL [5.]。

KIF1B是驱动蛋白3家族基因与能量输送特定细胞角色的成员。该基因位于染色体1p36.22和编码两种同种型，kif1bα.和KIF1Bβ.，后者用作神经细胞凋亡所必需的肿瘤抑制基因[6.]。A.KIF1Bβ.在受Charcot-Marie-tooth（CMT）2A型影响的家庭中描述了种系突变[7.]。

李等人。[8.]证明了KIF1Bβ.通过在Ser636位置的钙磷素（CN）激活的线粒体裂变通过钙磷酸蛋白（CN），并在SER636位置进行去磷酸化，并且DRP1从细胞质转移到线粒体导致线粒体裂变和细胞凋亡。还有ando等人。[9报道了…的中心作用KIF1Bβ.在线粒体介导的细胞凋亡中;特别是，他们证明了这一点KIF1Bβ.过表达诱导线粒体破碎和细胞凋亡与线粒体金属蛋白酶，YME1L1相互作用。

KIF1Bβ.约10年前被确定为神经内分泌疾病的易感基因，但迄今为止，只有少数变异与聚类2 PHEO/PGL相关[10,11]。

2。材料和方法

2.1。临床报告

受左偶然发现PHEO在2017年计算机断层摄影（CT）扫描和磁共振成像（MRI）称为我们的单元A 46岁的男性证实在左肾上腺固体病变的存在，8.。5. cm in size, with absolute and relative washout of 20% and 10%, respectively, at enhanced CT scan.

尿检显示尿后肾碱水平较高（MNu:4033 mcg/24） h、 正常值（nv） < 320）和尿正常甲肾上腺素（NMNu:5234微克/24小时，内华达州） < 390），确认存在PHEO。在患者的病史中，没有肿瘤危险因素的证据。

患者于2017年11月接受手术;手术过程是平静的，组织学检查证实存在左PHEO。病理报告显示，Ki67% <1%，无坏死和血管侵犯。肾上腺嗜铬细胞瘤评分(PASS) [12]没有报道。

患者对基因检测给予书面知情同意，并对所有主要易感基因进行了检测(EGLN1，EPAS1，FH，KIF1Bβ，MAX，NF1，RET，SDHA，SDHAF2，SDHB，SDHC，SDHD，TMEM127，和vhl.由门店)。只有意义不确定的变体(vus.）在外显子38KIF1Bβ.被找到。

One month after surgery, the levels of urinary metanephrines were still elevated (MNu 118 mcg/24 h; NMNu 946 mcg/24 h). Subsequent controls confirmed the increase in NMNu up to 1026 mcg/24 h in March 2018. The patient performed an abdominal MRI which revealed the presence of an enlarged lymph-node, close to the area of surgery, that showed a weak positive uptake at¹²³I-碘苯苄基胍（¹²³I-MIBG）闪烁扫描和at¹⁸F-氟二羟基苯（¹⁸F-DOPA）正电子发射断层扫描（PET）。

在最新的控制下，在手术两年后，我们观察到正常水平的NMNU（389麦克/天）。计划评估腹部淋巴结的状态。

2.2. 分子分析

获得知情同意后，将患者的基因组DNA，由QIAsynfony CDN试剂盒（Qiagen）提取。DNA的质量和数量，通过该量子位DS上的量子比特2.0荧光计（赛默飞世尔科技）测定法测量。

使用在线当然设计软件（Agilent Technologies）设计了14个基因。含有基因的预先征用的悬浮肺细胞瘤面板EGLN1，EPAS1，FH，KIF1Bβ，MAX，NF1，RET，SDHA，SDHAF2，SDHB，SDHC，SDHD，TMEM127，和vhl.被使用了。最终目标区域的大小为38.813kPb，2170扩增子，平均序列覆盖率为98.53，在目标区域的覆盖率为99.41％。

根据制造商的说明书，使用安捷伦HaloPlex目标富集协议生成库，并在Illumina Miseq平台上测序为150 bp的配对端reads。

Reads质量由FastQC检查(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc.)，并通过BWA-MEM比对与参考人类基因组hg19比对[13]。基因组分析工具包（GATK）14用于重新校准基础质量，并重新重新位对齐围绕插入/删除（Indels）的读取。

最后通过GATK的统一基因键模块和ANNOVAR的功能注释鉴定单核苷酸变体（SNV）和诱导鉴定[15]。

基于BedTools的Bash和R自定义脚本覆盖分析[16]用于获得每个样品的低覆盖率（≤20X）区域的列表。

根据美国医学遗传学和基因组学学院(American College of Medical Genetics and Genomics)和分子病理学协会(ACMG)的指南，已对临床相关变异进行了分类[17]。

2.3。杂合性丧失（LOH）分析

确定突变位置（c.4052C）是否存在LOH > T） ，我们进行了序列分析KIF1Bβ.从手术切除的组织中提取的肿瘤DNA的38外显子和侧翼内含子区域(NM_003002.2)，用标准PCR扩增。PCR产物用标准的BigDye version1.1试剂盒(Applied Biosystems, Foster City, California)进行直接测序。测序反应使用310 ABI PRISMA基因分析仪进行分析，数据通过测序分析进行处理(应用生物系统公司，福斯特市，加州)。

2.4。三维（3D）突变预测

KIF1Bβ.3D结构使用I-Tasser（迭代线程装配细化）进行建模https://zhanglab.ccmb.med.umich.edu/I-TASSER/)，一种分层的蛋白质结构和功能预测方法。该分析提供了来自蛋白质数据库(PDB)的结构模板。然后由COACH (https://zhanglab.ccmb.med.umich.edu/coach/)预测蛋白质配体结合位点[18–20.]。

这个I-TASSER生成的pdb文件用ChemDraw软件加载并可视化(版本8;剑桥软件;PerkinElmer, Inc.， Waltham, MA, USA)。

2.5. 电子显微镜

用PBS洗涤组织标本（2×2mm），并在4℃下在0.1M中的Cacocylylate缓冲液（pH7.4）中直接固定在Karnovsky（pH7.4）中，过夜，在冷1％锇中后固定在室温下在0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.4）中的硫代克雷氧化物。将样品在梯度丙酮中脱水，通过环氧丙烷，并嵌入环氧树脂中。用乙酸甲酯和碱性甲甲酸亚硝酸胍染色超薄部分，并在80kV下在JEM 1010电子显微镜（JEOL，TONKYO，Japan）下检查。用专用软件（分析，软成像软件，Muenster，Muenster，Muenster，Muenster，Muenster，Germany）连接了与个人计算机连接的Megaview III（软成像系统，Muenster，德国）数码相机进行了显微照片21]。将电子显微镜研究的结果与通过分析3种随机选择的野生型（WT）PHEO（表1.，[22]）。为了分析线粒体的数量，对于每个肿瘤5个胞质域在随机选择并进行通过点的计数[23]。

2.6. 父母的遗传分析

遗传分析，后来扩展到患者的母亲和父亲是谁同意进行研究。知情同意后，基因组DNA筛选所描述的定向研究KIF1Bβ.突变，使用PCR和测序。

3.结果

3.1。突变分析

本面板中包含的14个基因的NGS分析显示出外显子38中的新型种系，杂合​​的畸形突变KIF1Bβ.基因1351位(c.4052C > T)的脯氨酸被亮氨酸取代。Sanger测序证实了这种改变，并在肿瘤组织中检测到杂合性缺失(LOH)(图)1.，[24]。

通过查询不同数据库的差异分析，即.，Clinvar和intervar，使我们能够将变体分类为不确定（或未知）意义。我们随后评估了使用Varsome的新型转换的致病潜力，这是一种强大的套件，同时查询Silico分析的主要工具（表2.，[25,26]）。最后，还检查了突变P1351L对蛋白质结构的影响。使用I-Tasser从AA 480产生3D模型，使用I-Tasser，91％的残留物以> 90％的准确性进行建模（图2.，[27]）。wt之间的比较KIF1Bβ.蛋白质和突变蛋白P1351L揭示了两个激酶结构域1B的重叠（AA 799-846; AA 899-928），减少了约34％（浅蓝色）。另外，观察到预测的DUF3694结构域（AA 1220-1366）的旋转可能与KINASIC结构域稳定化（蓝色）有关。此外，还观察到对蛋白质相关（FHA）结构域（FHA）结构域（AA 512-581）（绿色），对蛋白质的核定位至关重要的分层。结果已通过教练的基因本体分析完全证实。特别地，预测了蛋白质的胞质细胞溶质积累，其主要是线粒体的细胞质细胞器的损失，以及在形成中枢神经系统（CNS）期间的细胞粒细胞间位移。

3.2。遗传家庭分析

我们发现了相同的KIF1Bβ.父亲的突变。他做了CT扫描并测量了尿中后肾上腺素，结果均为阴性。

３．３．线粒体的地位

自从KIF1Bβ.参与调节线粒体裂变和细胞凋亡[8.,9]我们在肿瘤标本中评估了通过电子显微镜和增殖指数的线粒体的数量和超微结构。

肿瘤的超微结构检查标本轴承KIF1Bβ.基因突变显示出几种肿胀线粒体的存在，具有破坏的嵴和清除基质。还观察到许多自噬液泡，其中一些含有线粒体残留物（图3（a）–3（b），[28]）。相比之下，在WT肿瘤标本中未观察到这种异常（图3（c），[28]）。此外，我们观察到这些细胞器的数量几乎高于2倍KIF1Bβ.-突变的肿瘤比未突变的嗜铬细胞瘤标本（20.5 ± 2.1和10.4 ± 线粒体/场分别为2.0）。

4。讨论

4.1. 角色KIF1Bβ.

KIF1Bβ.基因变异与神经和非目的肿瘤的发展有关[10]。芽髓KIF1Bβ.变异在PHEO患者中很少报道，而体细胞变异在肿瘤组织中更为常见。

致病机制KIF1Bβ.突变导致神经和非目录的发生仅是部分已知的。全局转录分析KIF1Bβ.-突变型PHEO显示这些肿瘤在转录上与RET-和NF1突变型PHEO（簇2）相关，但独立于SDH-和VHL相关肿瘤（簇1）。此外,，KIF1Bβ.- 与谷氨酸代谢和氧化应激反应有关的途径富集的肿瘤是唯一富集的[10]。此外，Kinesin KIF1Bβ作用于脯氨酸羟化酶下游诱导细胞凋亡;因此，种系的改变是不利的KIF1Bβ.功能允许某些神经元祖细胞逃避发育剔除[8.]。不是所有的KIF1Bβ.相关肿瘤与LOH相关，因此提示在某些肿瘤中wt等位基因的单倍不足或表观遗传沉默[10]。

4.2. 新的可能致病因子KIF1Bβ.突变

鉴定的转变（A> T）是一种新的突变，如在这种情况下，问题都是必须被认为是致病的。患者的家族史对于神经或非神经瘤的存在是消极的，因此我们在硅研究中进行了几个，以回答这个问题。生物信息工具将变体分为致病性。在肿瘤组织中的LOH的发现强化了这种假设，肾上腺素能生化特征[23我们的患者的肿瘤与集群2遗传概况一致。

4.3。家庭筛选

在这些成果的基础上，我们问病人的父母接受这是我们自己的知情同意后进行基因检测。相同KIF1Bβ.在父亲身上检测到突变，生化和影像学筛查结果为阴性。

鉴于KIF1Bβ.突变稀缺性，外显率未知且较低，只能假设父亲的阴性临床表现。更深入的解释可能存在于一种类似于发现的母基因印记中SDHD.和SDHAF2[29,30.]。实际上，在yeh等人的稿件中，家庭血统可以与母体印记一致[10]。尽管如此，父亲的临床后续仍然是强制性的。

4.4。病人的临床课程

在诊断的生化表型是符合簇2分泌模式。然而，先证者的跟进，MNU发现正常的，而NMNu，虽然下降，仍然升高，促使我们进行更多的研究来解释这种意想不到的结果。手术后检测到的生化表型可反映疾病的肾上腺外定位。MRI，¹²³i-mibg scintigraphy，和¹⁸F-DOPA-PET建议负责NMNu增加转移性淋巴结的存在。没有检测到额外的病变。在随访中，淋巴结中发现略有缩水，而NMNu标准化非常缓慢。患者，谁现在是血压正常，没有任何症状，将进行终生鉴于他的基因状态跟踪，寻找PHEO复发，转移性疾病的发展，或其他发生KIF1Bβ.-连锁肿瘤。手术后两年NMNu正常化的原因很难解释；这可能是由于肿瘤去分化或组织坏死。

4.5. 人类线粒体特征的首次评估KIF1Bβ.突变的嗜铬细胞瘤

为了研究这种突变在细胞水平上的后果，我们对肿瘤中的线粒体状态进行了深入分析，发现与wt组织相比，其异常形态和数量显著增加。这个结果与发现是一致的KIF1Bβ.改变的活性涉及不仅在神经变性疾病，而且在线粒体形态与某些肿瘤[像差相关联的20.]。以前的数据显示了KIF1Bβ.在调节线粒体细胞凋亡中发挥作用。特别是低表达KIF1Bβ.可能导致线粒体裂变和后续细胞凋亡的减少[8.,9]。与WT组织相比，我们在这里观察到线粒体数量增加（几乎两倍高）和突变肿瘤中的自噬液泡的存在。考虑到我们的结果，假设发现的突变是合理的KIF1Bβ.与在生理线粒体片段化，并用在自噬泡异常无功能的线粒体，最终导致在线粒体诱导的细胞凋亡，其可支持肿瘤进展减少的持久的降低相关联。它可以推测，恢复线粒体动态平衡，肿瘤细胞会激活一种代偿性新生物线粒体导致这些细胞的数量增加。需要进一步的研究来证实这一假说。尽管如此，目前的结果是符合以前的研究[8.,9]这是首次在小鼠线粒体中进行的观察KIF1Bβ.-变异组织。在未来对突变组织的研究中，对CN、DRP1和YME1L1的表达进行评估，有助于我们更好地理解基因的作用KIF1Bβ.人类疾病的改变。

5.结论

总之，我们提出一个新的KIF1Bβ.在PHEO患者中我们的研究证实了靶向NGS在癌症患者遗传分析中筛查所有主要易感基因的重要性。同时，它回顾了遗传学家和临床医生之间严格合作的必要性，以正确解释结果和个性化医疗的应用，以对这些患者进行适当的管理。首次分析了aKIF1Bβ.- 被隔绝的组织。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据可根据要求从相应作者处获得。

利益冲突

作者没有任何利益冲突披露。

致谢

这项工作是由PARAWESS基金会和FundZiOne Casa Di RISPARMIO皮斯托亚E.Pasina（PROT）支持的。2016.0241/gi）给MM、LC、TE、ER、G DF和ML，他们是ENS@T（欧洲肾上腺肿瘤研究网络）。

参考

1. A. S. Tischler，在世卫组织内分泌器官的Tummours分类，R.V.Llyod，R. Y. Osamura和G. Kloppel，EDS。，PP。183-189，IARC Press，Lyons，法国，第4版，2017年。
2. A.自助，A. Venisse，V.瑙等人，“嗜铬细胞瘤和神经节瘤基因检测的十年（2001- 2010年），”激素与代谢研究，卷。44，不。5，pp。359-366,2012。查看在：出版商网站|谷歌学术
3. M. Mannelli，M. Castellano，F.Schiavi等人，“临床导向的嗜铬患者嗜铬菌和/或功能或非官能或非官能术患者的临床导向遗传筛查，临床内分泌与代谢杂志，第94卷，第94期5, pp. 1541-1547, 2009。查看在：出版商网站|谷歌学术
4. PPG1（NGSNPPG1）的NGS研究组R.A.Toledo，N.Burnichon等，“关于遗传性肺炎群体和ParAgangliomas的下一代测序诊断测试的共识陈述，”自然评论内分泌学，第13卷，第4期，第233-247页，2017年。查看在：出版商网站|谷歌学术
5. s皮莱，V。戈帕兰，R。A.史密斯和A。K-Y。Lam，“新时代对棕色素细胞瘤和副神经节瘤的遗传学和临床影响的更新，”肿瘤学/血液学的关键评论，卷。100，pp。190-208,2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
6. s施利西奥，R。s肯查帕，L。CWVredeveld等人，“驱动蛋白KIF1Bβ.作用从EGLN3下游来诱导细胞凋亡，并且是潜在1p36肿瘤抑制，”基因与发育第22卷第2期7，第884-893页，2008。查看在：出版商网站|谷歌学术
7. C赵，J。Takita，Y。Tanaka等人，“微管运动基因突变引起的2A型腓肠肌萎缩症”KIF1Bβ.，“细胞，卷。105，没有。5，pp。587-597，2001。查看在：出版商网站|谷歌学术
8. S. Li，S. M.下降，O. Surova等，“1P36肿瘤抑制剂KIF 1Bβ是钙调神经磷酸酶激活、控制线粒体分裂和凋亡所必需的。”发展细胞第36卷第2期2, pp. 164-178, 2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
9. K.Ando，T. Yokochi，A. mukai等，“肿瘤抑制器KIF1Bβ.与YME1L1合作调控线粒体凋亡，”分子致癌物，卷。58，不。7，pp。1134-1144,2019。查看在：出版商网站|谷歌学术
10. 它。YEH，R. E. Lenci，Y.Qin等，“一种种系突变KIF1Bβ.神经性和非神经性肿瘤家族中1p36基因，“人类遗传学，卷。124，没有。3，pp。279-285,2008。查看在：出版商网站|谷歌学术
11. J. Welander，A. Andreasson，C.C.Juhlin等，“嗜肺细胞瘤和帕拉加菌瘤的敏感基因的靶向下一代测序鉴定了”罕见的种系突变“临床内分泌与代谢杂志，卷。99，没有。7，PP。E1352-E1360,2014。查看在：出版商网站|谷歌学术
12. L. D. R.汤普森，“肾上腺嗜铬细胞瘤比例分数（PASS），以从恶性肿瘤分离良性的，”美国外科病理学杂志，卷。26，不。5，第551-566，2002。查看在：出版商网站|谷歌学术
13. H李和R。Durbin，“使用burrows-wheeler变换快速准确的短读对齐，”生物信息学，卷。25，不。14，pp。1754-1760,2009。查看在：出版商网站|谷歌学术
14. a . McKenna, M. Hanna, E. Banks等人，《基因组分析工具包:分析下一代DNA测序数据的mapreduce框架》，基因组研究，卷。20，没有。9，第1297年至1303年，2010。查看在：出版商网站|谷歌学术
15. K. Wang，M. Li和H. Hakonarson，“Annovar：来自高通量测序数据的遗传变异功能注释”，核酸的研究，卷。38，不。16，p。E164，2010。查看在：出版商网站|谷歌学术
16. A. R. Quinlan和I. M. Hall，“Bedtools：灵活的公用事业套件，用于比较基因组特征，”生物信息学，卷。26，不。6，PP。841-842，2010。查看在：出版商网站|谷歌学术
17. S. Richards，N. Aziz，S. Bale等，“序列变体解释的标准和指南：美国医学遗传学和基因组学和分子病理学协会的联合共识建议，”药物的遗传学，卷。17，不。5，pp。405-423,2015。查看在：出版商网站|谷歌学术
18. A.罗伊，A Kucukural和Y.张，“I-TASSER：自动化蛋白质结构和功能预测一个统一的平台，”自然协议，第5卷，第4期，第725-738页，2010年。查看在：出版商网站|谷歌学术
19. J. Yang，A. Roy和Y. Zhang，“蛋白质 - 配体使用互补结合特异性子结构比较和序列轮廓对准”的蛋白质 - 配体结合位点识别，“生物信息学，卷。29，不。20，第2588至2595年，2013。查看在：出版商网站|谷歌学术
20. J. Yang，R. Yan，A. Roy，D.Xu，J.Poisson和Y. Zhang，I-Tasser套件：蛋白质结构和功能预测，“自然方法，第12卷，第2期1, pp. 7-8, 2015。查看在：出版商网站|谷歌学术
21. V.D'Antongiovanni，S.Martinelli，S. Richter等，“微环境诱导集体迁移SDHB.-silenced小鼠嗜铬细胞瘤球状球体，“内分泌相关癌症，卷。24，不。10，pp。555-564,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
22. G德菲尔波，E。康蒂尼，V。Serio等人，2020年，figshare.com，10.6084/m9.figshare.11567202。
23. G艾森霍夫，K。帕克，T。THuynh等人，“褐色素细胞瘤的儿茶酚胺代谢组学和分泌表型，”内分泌相关癌症第18卷第2期1, pp. 97-111, 2011。查看在：出版商网站|谷歌学术
24. G. De Filpo, E. Contini, V. Serio, et al.， 2020, figshare.com, 10.6084/m9.figshare.11566689。
25. G德菲尔波，E。康蒂尼，V。Serio等人，2020年，figshare.com，10.6084/m9.figshare.11567211。
26. D. Quang，Y. Chen和X. Xie，Dann：一种深入学习方法，用于注释遗传变异的致病性，“生物信息学，卷。31，不。5，第761-763，2015。查看在：出版商网站|谷歌学术
27. G. de Filpo，E. Contini，V.Serio，等，2020，Figshare.com，10.6084 / m9.figshare.11566704。
28. G. de Filpo，E.Contili，V.Serio等，2020，Figshare.com，10.6084 / m9.figshare.11566728。
29. J. A. Rijken, N. D. niemejer, M. A. Jonker等，“SDHB种系突变携带者副神经节瘤和嗜铬细胞瘤的外显率”临床遗传学第93卷第5期1, pp. 60-66, 2018。查看在：出版商网站|谷歌学术
30. H. P. H.诺伊曼，W. F.杨和C. ENG，“嗜铬细胞瘤和神经节瘤，”新英格兰医学杂志，卷。381，没有。6，第552-565，2019。查看在：出版商网站|谷歌学术

版权

版权所有©2020 Giuseppina de Filpo等。这是分布下的开放式访问文章知识共享署名许可协议如果正确引用了原始工作，则允许在任何媒体中的不受限制使用，分发和再现。