H-Ras癌基因在实验性肝硬化中的表达和血管生成

摘要

背景。原癌基因，特别是ras，可能不仅影响细胞增殖，还通过影响促血管生成和抗血管生成介质来促进血管生成。本研究的目的是探讨在二乙基亚硝胺(DEN)诱导的实验性肝纤维化过程中ras表达与血管生成是否存在关系。材料和方法。腹腔注射DEN可诱发大鼠肝硬化。最后一次治疗后2周处死动物并行肝切除术。应用马尾松三色染色评价肝纤维化程度。通过确定CD34标记的血管切面计数来评估门脉和门脉周围区域的血管密度。定量评价H-ras的表达，在每个切片中计数阳性和阴性细胞。结果。在纤维化组中，H-ras的表达高于非纤维化组，并且在肝硬化肝脏中更为广泛。Friedman检验表明，H-ras表达与VD显著相关()。结论。此描述性研究的结果表明：H-ras基因的表达根据纤维化的严重性，逐渐增加，并且与血管发生强烈相关。

1.背景

原癌基因，特别是ras基因，不仅可能影响细胞的增殖，而且通过影响两促血管生成和抗血管生成介体[有助于血管生成1，2]。

近年来，肝损伤过程中纤维形成和血管生成的密切联系得到证实，有人提出，其操作在对传统疗法反应不良的慢性肝病的治疗中很有前景[3]。

无数的研究已经在实验模型，并从不同病因的肝硬化患者肝脏标本显示增强的Ras表达。有人提出，在例肝硬化ras基因表达的增加可能与炎症和纤维化肝癌的早期步骤相关的，除了它的建议的作用[4]。然而肝纤维化过程的ras表达与血管生成之间的关系还没有被记录。

因此，本研究的目的是调查是否diethylnitrosamine-（DEN-）诱导的实验性肝纤维化中的ras表达与血管生成之间存在任何关系。

2.方法

大鼠腹腔注射DEN (Sigma, Saint-Quentin-Fallavier, France)，体重100 mg/kg ()或0.9%氯化钠(） 一个星期一次。注射施加2（），4（)、5 (），6（)、8日()和10 (）周。处死大鼠，2周最后的应用程序和肝切除术进行后。肝组织样品固定在10％缓冲的福尔马林中并包埋在石蜡中。

准备四微米厚的切片和HE染色和Masson三色为组织病理学评估和肝纤维化程度的评估染色。Immunolabeling was performed using monoclonal antibodies directed anti-rat CD34 (dilution: 1 : 500, Santa Cruz, CA, USA) and H-ras (dilution: 1 : 200, Santa Cruz, CA, USA). An avidin-biotin-peroxidase technique (sc-2023, anti-goat ABC staining Kit, Santa Cruz, CA, USA) was used for labeling.

在门户网站和门脉周围区域中的血管密度通过测定CD34标记的容器部分的计在更高的放大倍率（×400），通过使用分为100个区域的眼部网格的评估。对于每个受试者的血管密度（VD）被记录在案。

对于H-ras基因表达的定量评价，在每个部分中阳性和阴性细胞在系统地随机选择的10到15个显微镜视野通过使用目镜网格在高放大倍率（×400）计数。阳性染色计算为阳性细胞被计数的细胞总数的百分比。不包括触摸网格的左侧和下缘阳性细胞。

通过使用统计软件包社会科学（SPSS 15.0 for Windows中，USA）进行所有的分析。曼 - 惠特尼ü检验用于建立组之间的差异。弗里德曼的测试是用来确定量化参数之间的关系。数据表示为平均值±SD和被认为是显著。

3.结果

在本研究中，5周后发现纤维间隔形成，8周后肝脏均为肝硬化。对照组未检测到任何纤维化。根据纤维化程度分为:I组:正常肝、II组:非纤维化肝(2、4周)、III组:纤维化肝(5、6周)、IV组:肝硬化肝(8、10周)(图)1和表1)。

而在对照组（组I）CD34染色限于门户血管的内皮，纤维化和肝硬化的肝中检测到大量的CD34标记的血管（图1)。CD34染色显示致密的血管丛围绕着硬化结节。在非纤维化肝脏(II组)中，CD34在门脉周围的一些血管结构中表达。与这些发现平行的是，VD值随着纤维化的进展而增加(图)1)。II、III、IV组的VD高于对照组()。这些群体的VD值之间的差异有统计学显著（）（图1和表1)。

在肝细胞的细胞质中观察到H-ras基因的表达。在正常肝脏（组I）中，表达被限制到几个门静脉周围肝细胞。然而，在DEN处理的大鼠H-ras基因表达显示的不均匀分布。纤维化组（III组）H-ras基因的表达明显高于II组更高和在例肝硬化（组IV）更广泛（图1)。在DEN-处理的大鼠组H-ras基因的表达均彼此不同显著（）（图1和表1)。此外，Friedman的测试表明，有H-ras基因的表达和VD之间的显著相关（)。

4.结论

此描述性研究的结果表明：H-ras基因的表达根据纤维化的严重性，逐渐增加，并且与血管发生强烈相关。

我们的数据表明，H-ras可能有助于肝损伤的伤口愈合反应，不仅是导致纤维化的肝星状细胞的强激活剂，而且还是血管生成的诱导剂。

根据这些观察,感兴趣的评估机制引发的h -在肝血管生成进一步的实验模型,为了完全澄清如果ras抑制剂的使用将是有益的在多目标处理的纤维发生慢性炎症与肝硬化肝脏疾病的结局。

承认

这部分工作是提出了在意大利病理22届欧洲国会九月4-9 2009年，佛罗伦萨，海报。

参考文献

1. 刘建华，“癌基因与肿瘤血管生成:血管‘供给’与‘需求’的问题”，癌症生物学讲座，第14卷，no。2，第93-104页，2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
2. H-ras通过激活不同的下游效应物调节血管生成和血管通透性。循环研究卷。102，没有。11，第1350至1358年，2008年视图:出版商网站|谷歌学术搜索
3. M.费尔南德斯，D. Semela，J. Bruix等人，“血管生成的肝脏疾病，”中华肝脏病杂志第50卷，no。3，第604-620页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
4. S. Reif, H. Aeed, Y. Shilo等，“Ras拮抗剂法尼斯基硫水杨酸治疗硫代乙酰氨基酰胺所致肝硬化”，中华肝脏病杂志卷。41，没有。2，第235-241，2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索

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