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胃肠病学研究与实践
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868916
10.1155 / 2013/868916
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研究文章
H-Ras癌基因在实验性肝硬化中的表达和血管生成
Elpek
Gulsum Ozlem
1
Unal
Betul
2
Bozova
Sevgi
3.
姜
Chunping
1
阿克丹尼兹大学医学院
病理学系
07070年海滨城市安塔利亚
火鸡
akdeniz.edu.tr
2
安塔利亚培训研究医院
病理学系
07070年海滨城市安塔利亚
火鸡
3.
Serik州立医院
病理学系
07070年海滨城市安塔利亚
火鸡
2013
22
8
2013
2013
05
06
2013
23
07
2013
2013
版权所有:Gulsum Ozlem Elpek等
这是一篇在知识共享署名许可下发布的开放访问的文章，该许可允许在任何媒介上不受限制地使用、发布和复制，只要原稿被正确引用。
背景 。原癌基因，特别是ras，可能不仅影响细胞增殖，还通过影响促血管生成和抗血管生成介质来促进血管生成。本研究的目的是探讨在二乙基亚硝胺(DEN)诱导的实验性肝纤维化过程中ras表达与血管生成是否存在关系。
材料和方法 。腹腔注射DEN可诱发大鼠肝硬化。最后一次治疗后2周处死动物并行肝切除术。应用马尾松三色染色评价肝纤维化程度。通过确定CD34标记的血管切面计数来评估门脉和门脉周围区域的血管密度。定量评价H-ras的表达，在每个切片中计数阳性和阴性细胞。
结果 。在纤维化组中，H-ras的表达高于非纤维化组，并且在肝硬化肝脏中更为广泛。Friedman检验表明，H-ras表达与VD显著相关(
P
<
0.01
)。
结论 。本描述性研究结果显示，H-ras表达随纤维化程度逐渐升高，并与血管生成密切相关。
1.背景
原癌基因，特别是ras，可能不仅影响细胞增殖，还通过影响促血管生成和抗血管生成介质来促进血管生成[
1 ,
2 ]。
近年来，肝损伤过程中纤维形成和血管生成的密切联系得到证实，有人提出，其操作在对传统疗法反应不良的慢性肝病的治疗中很有前景[
3. ]。
大量研究表明，在不同病因的肝硬化患者的肝脏标本和实验模型中ras表达增加。已经有人提出，ras在肝硬化肝脏中的表达增加可能与炎症和纤维化有关，除了在肝癌发生的早期阶段发挥作用之外[
4 ]。然而，ras表达与肝纤维化过程中血管生成的关系尚未被证实。
因此，本研究的目的是探讨在二乙基亚硝胺- (DEN-)诱导的实验性肝纤维化过程中ras表达与血管生成是否存在关系。
2.方法
大鼠腹腔注射DEN (Sigma, Saint-Quentin-Fallavier, France)，体重100 mg/kg (
n
=
24
)或0.9%氯化钠(
n
=
6
)每周一次。注射2次(
n
=
4
),4 (
n
=
4
)、5 (
n
=
4
)、6 (
n
=
4
)、8日(
n
=
4
)和10 (
n
=
4
)周。最后一次应用后2周处死大鼠，行肝切除术。肝脏组织标本用10%的福尔马林缓冲固定，石蜡包埋。
制备四微米厚的切片，苏木精-伊红染色，马松三色染色，用于组织病理学检查和评价肝纤维化程度。使用单克隆抗体靶向抗大鼠CD34(稀释:1:50 00,Santa Cruz, CA, USA)和H-ras(稀释:1:20 00,Santa Cruz, USA)进行免疫标记。采用亲和素生物素过氧化物酶技术(sc-2023，抗山羊ABC染色试剂盒，Santa Cruz, CA, USA)进行标记。
通过确定CD34标记的血管切片的计数来评估门脉和门脉周围区域的血管密度，放大倍数为400，使用眼网格细分为100个区域。记录了每个受试者的血管密度(VD)。
为定量评价H-ras的表达，系统随机选取10 ~ 15个显微镜视野，采用眼格网高倍镜(x400)，对每张切片中阳性和阴性细胞进行计数。阳性染色以阳性细胞占总计数细胞数的百分比计算。触碰网格左侧和下方边缘的阳性单元不包括在内。
所有分析采用社会科学统计软件包(SPSS 15.0 for Windows, USA)进行。的Mann-Whitney
U 采用检验来确定组间的差异。采用弗里德曼检验来确定定量参数之间的关系。数据以均数±标准差和表示
P
<
0.05
被认为是显著的。
3.结果
在本研究中，5周后发现纤维间隔形成，8周后肝脏均为肝硬化。对照组未检测到任何纤维化。根据纤维化程度分为:I组:正常肝、II组:非纤维化肝(2、4周)、III组:纤维化肝(5、6周)、IV组:肝硬化肝(8、10周)(图)
1 和表
1 )。
表1
血管密度(VD)和H-ras表达在正常肝脏(I组)、非纤维化肝脏(II组)、纤维化肝脏(III组)和肝硬化肝脏(IV组)的均值、标准差(SD)、中位和范围的分布
U
测试使用。
集团
VD
h (%)
平均数±标准差
中位数
范围
P
平均数±标准差
中位数
范围
P
我(
n
=
6
)
3.1±0.95
3.
鹿
> 0.05
0.66±0.58
0
0 - 4
> 0.05
二世(
n
=
8
)
6.82±2.5
7
2 - 11
< 0.05
13±6.08
12
3-30
< 0.05
三世(
n
=
8
)
11.3±2.4
10
9到16
< 0.05
19.6±6.39
22
10 - 30
< 0.05
四世(
n
=
8
)
15.90±3.7
16
10-22
< 0.05
25.87±7.28
26
夫人
< 0.05
图1
研究组肝纤维化(A)、血管生成(B)和H-ras表达(C)。在正常肝脏中，CD34标记的血管*和H-ras阳性细胞*的数量相比于用碱处理的肝脏更低。在后者中，它们的数量随着纤维化程度的增加而增加(*棕色染色)。
![]()
对照组(I组)CD34染色仅限于门静脉血管的内皮，在纤维化和肝硬化肝脏中检测到大量CD34标记的血管(图)
1 )。CD34染色显示致密的血管丛围绕着硬化结节。在非纤维化肝脏(II组)中，CD34在门脉周围的一些血管结构中表达。与这些发现平行的是，VD值随着纤维化的进展而增加(图)
1 )。II、III、IV组的VD高于对照组(
P
<
0.05
)。两组间的VD值差异亦具有统计学意义(
P
<
0.05
)(图
1 和表
1 )。
H-ras在肝细胞胞浆中表达。在正常肝脏(组I)，表达局限于少数门周肝细胞。然而，在den处理的大鼠中，H-ras表达呈现不均匀分布。在纤维化组(III组)中，H-ras的表达高于II组，且在肝硬化肝脏中更为普遍(IV组)(图)
1 )。处理组大鼠H-ras表达差异显著(
P
<
0.05
)(图
1 和表
1 )。Friedman检验表明，H-ras表达与VD存在显著相关性(
P
<
0.01
)。
4.结论
本描述性研究结果显示，H-ras表达随纤维化程度逐渐升高，并与血管生成密切相关。
我们的数据表明，H-ras可能有助于肝损伤的伤口愈合反应，不仅是导致纤维化的肝星状细胞的强激活剂，而且还是血管生成的诱导剂。
根据这些观察,感兴趣的评估机制引发的h -在肝血管生成进一步的实验模型,为了完全澄清如果ras抑制剂的使用将是有益的在多目标处理的纤维发生慢性炎症与肝硬化肝脏疾病的结局。
承认
2009年9月4-9日，意大利佛罗伦萨，第22届欧洲病理学大会上，这幅作品被部分作为海报展示。
[
]1
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余
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14
2
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Y。
帝国
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