孤立的p。H62L突变的CYP21A2基因在一个简单的Virilizing 21-Hydroxylase缺乏耐心

文摘

先天性肾上腺增生由于21-hydroxylase不足-95%的病例占90%。这个常染色体隐性障碍有广泛的临床形式,从严重或古典,包括salt-wasting和简单virilizing形式,轻度晚发型或模形式。大部分的致病突变描述可能的后果nonhomologous重组或基因转换事件之间的活跃CYP21A2基因及其同源CYP21A1P假基因。然而,越来越多的自然发生的突变被发现。改变p。H62L是其中一个最频繁的罕见突变CYP21A2基因。这是建议p。H62L代表一个轻微的突变,可能负责一个更严重的酶损伤当面对另一个轻微的突变等位基因是相同的。在这个报告中,一名20岁妇女携带一个孤立的p。H62L突变与c复合杂合性。283 - 13 - a / C > G变异。虽然温和模表型是预期,病人的临床症状和激素水平符合一个更严重的简单virilizing 21-hydroxylase不足。genotype-phenotype相关的额外患者的研究将有助于定义p的角色。H62L疾病表现。

1。介绍

先天性肾上腺增生(CAH)由于21-hydroxylase不足(201910年人类)占-95%的儿童和青少年卫生与发育司病例(90%1,2]。常染色体隐性障碍,这是最常见的新陈代谢的先天的错误,有一个广泛的临床形式,从严重或古典,包括salt-wasting (SW)和简单virilizing (SV)形式,轻度晚发型或模形式的儿童和青少年卫生与发育司(NCCAH) [1]。

P450C21影响酶,编码的CYP21A2基因位于98%的核苷酸序列的身份一起CYP21A1P假基因,6 . 3号染色体上。由于这种基因之间高度的身份及其假基因,大部分的致病突变描述可能的后果nonhomologous重组或基因转换事件(3,4]。此外,超过130人出现罕见的点突变,独立于假基因,发现特定的人口或一个家庭,被描述的日期(详情访问http://www.hgmd.cf.ac.uk)。大多数患者复合杂合的和他们的表型取决于底层的突变组合(5]。

改变p。H62L是其中一个最频繁的罕见突变CYP21A2基因。基于患者的表型和功能研究,提出p。H62L等位基因是一个温和的突变,这可能是负责一个更严重的表型只有当与另一个轻微的变异在相同的等位基因(6,7]。而且,通过在网上分析使用作为模板的结晶牛CYP21股票79%的蛋白质序列与人类CYP21A2身份,海德尔et al。(2013)将这种突变的轻度疾病(8]。

这里我们描述一个最近病人从我们组群携带一个孤立的p。H62L突变等位基因和严重的c。283 - 13 - a / C > G在另一个突变。虽然轻微NCCAH表型预计,病人提供了一个经典的SV形式的疾病。

2。病例报告

2.1。临床和荷尔蒙的评估

内分泌和遗传评估在医院的部门Endocrinologia杜兰和Centro Nacional de遗传,布宜诺斯艾利斯,阿根廷。病人包括诊断标准后已经描述(9,10]。雄烯二酮(17-Hydroxyprogesterone(17形成₄)和睾酮(T)化验了放射免疫检定法(RIA)使用商业套装从诊断系统实验室(DSL),休斯顿,TX,美国。血浆肾素活性(PRA)测量使用商业套装从肾素,免疫系统,罗马,意大利(玛雅),如前所述9,10]。

病人,一个20岁的女人,被称为简单virilising儿科单位持续管理的形式的先天性肾上腺增生21-hydroxylase不足造成的。她生殖器模棱两可几乎完全唇融合和clitoromegaly从出生;然而医疗岁时达到了3.5年。她提出了一个泌尿生殖孔和一个2.4厘米的阴蒂与阴茎的外表,没有明显的性腺,先进的骨龄5.3岁,1.04米高(p90 - 97)。血浆的水平的17α羟孕酮> 66 nmol / L(绝对值的稀释血清激素没有可用)。她也提出了血浆肾素活性的增加9.5 ng / mL / h(正常值0.15 - -2.33)。她收到了口服氢化可的松和9α氟氢可的松(0.05毫克/天)。6岁时,病人接受了成功的生殖器与减少阴蒂和重建皮瓣阴道成形术。她有10.8岁初潮和有规律的月经。由于足够的治疗依从性,她最终取得了1.55米的身高和满意的性交自从19岁。当转移到成年人的单位,是转向强的松治疗图3毫克每夜。鉴于基础血浆肾素活性仍增加(7.1 ng / mL / h), 9α-氟氢可的松治疗。在这个治疗方案下,血清激素水平显示17α羟孕酮3.3 nmol /毫升,雄烯二酮5.23 nmol /毫升,总睾酮1.11 nmol / L。

2.2。分子分析

获得了书面知情同意后,从外周血白细胞DNA是孤立的,10个最频繁的点突变CYP21A2基因筛选,以下方法先前建立在我们的实验室9,10]。简单地说,CYP21A2特意放大了PCR基因在三个重叠的片段,每个突变被allele-specific PCR筛选或PCR-RFLP第二轮使用其中一个以前放大片段PCR模板。样本病人提出至少一个nondetermined等位基因进行了进一步分析通过直接测序覆盖整个基因和近端启动子区域CYP21A2在四个gene-specific重叠的片段如前所述[11]。此外,两个前所述监管区域(12,13)也通过直接测序分析。

上述组合策略显示c的存在。283 - 13 - a / C > G, G。185A>T (p.H62L) mutations, both in heterozygosis (Figures1(一)和1 (c))。虽然父母没时间,6克的存在或7 g在多态位点基因内区2 (g.562_568delG)允许两种突变本地化的识别反式(图1 (b))。此外,病人提出3多态变异杂合现象:g。> 692 G (p.K102R)外显子3 G。1130C>G (p.D183E) in exon 5, and g.2702A>G (p.N493S) in exon 10, thus further excluding a putative allele dropout commonly found inCYP21A2基因扩增(14]。没有发现变化监管区域的分析。

3所示。讨论

肾上腺皮质21-hydroxylase是糖皮质激素和盐皮质激素生物合成的关键酶。突变CYP21A2基因在个体的影响已报告CAH 21-hydroxylase不足造成的。到目前为止,许多不同的突变CYP21A2基因已被描述。因为CAH隐性障碍和大多数21-hydroxylase不足患者复合杂合的不同在两个等位基因突变,突变的表型取决于底层组合他们(5]。虽然大多数病人携带CYP21A1P-derived突变,越来越多的天然中发现了致病突变等位基因在过去几年。

改变p。H62L是其中一个最频繁的罕见突变CYP21A2基因。到目前为止,31 21-hydroxylase不足患者携带non-derived-pseudogene p已报告。H62L突变(6,7,15- - - - - -19]。他们中的大多数提出第二个相同的等位基因突变,而只有12个病人台湾人口的(7)从参考书目中的所有报道中没有显示出额外的突变在独联体(6,15,17,18]。

通过在网上分析,最近的一份报告预测,组氨酸的替换疏水性亮氨酸可能会扰乱H62和G35减少之间的氢键,但不能消除,酶活性(8]。而功能分析也表明,p。H62L是一个温和的突变,出现另一个在同一等位基因突变披露协同效应在减少酶活性(6,7]。

我们在此报告一个经典的病人提供了一个孤立的p。H62L等位基因和c。283-13A/C>G mutations in the other one. Unlike the mild phenotype found in those patients previously described with the isolated p.H62L mutation in compound heterozygosity with a severe one, clinical manifestations and hormonal profile of the patient herein described are consistent with a SV form of the disease. More severe clinical manifestations of the disease were found, by contrast, in those patients carrying p.H62L with another mild mutation on the same allele [6,7]。虽然整个基因和启动子区域在DNA测序样本病人从我们的队列,没有额外的突变被发现。没有发现变化要么是我们分析时,通过直接测序,两个前所述监管区域。然而,应该注意的是,在日本病人2009年报告,谁提出了一个孤立的p。H62L在一个等位基因和严重的集群E6 (p。I236 M p。V237 E, p.M239 K)在另一个突变,透露一个中间表型。她阴蒂的大小上限的正常和17-OHP SV和NCCAH形式之间的水平(17]。

基因型和表现型之间的不整合21-hydroxylase缺陷已经在先前的报道中描述。事实上,最近的一份工作新et al。20.)发现直接genotype-phenotype相关性在不到50%的基因型进行了研究。所有这些观察作为一个整体可能会表明,尽管轻度受损的酶活性的孤立的p。H62L变量提出了在体外功能的研究中,存在其他遗传或环境因素可能导致调节酶的活性体内。

genotype-phenotype相关的额外研究患者这种突变可以帮助定义这个变量在疾病表现的作用。与此同时,p的可能性。H62L突变本身可能会导致更严重的临床21-hydroxylase不足应考虑。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突,可以视为损害公正性的研究报道。

确认

作者感谢诉Sundblad博士帮助修改论文的。这项工作是支持由ANPCYT:皮克特人2006 - 00208,UBACYT X059,和Roemmers基金会。m . Taboas是一位从Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnologicas(国家)。

引用

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