Hyperforin / HP -β环糊精增强Mechanosensitive Ca^{2 +}信号在HaCaT角质细胞在过敏性皮肤体外加速伤口愈合

文摘

通过机械拉伸皮肤伤口愈合加快,hyperforin治疗,传统中药的重要组成部分和一个已知TRPC6活化剂,进一步增强了加速度。我们最近透露,这是由于ATP-Ca的增强^{2 +}在角化细胞信号hyperforin治疗。然而,低溶解度和简单的光降解阻碍hyperforin的局部应用治疗目的。我们设计了一个复合羟丙基-β环糊精- (HPβcd -) tetracapped hyperforin,增加溶解度和改进的光。我们评估了hyperforin / HP -生理效应βcd在伤口愈合HaCaT使用动态成像观察角化细胞ATP释放和胞内钙^{2 +}增加。针对拉伸(20%)、ATP释放只从最重要的细胞在伤口边缘;它然后扩散到细胞在伤口边缘和P2Y受体激活,造成传播^{2 +}通过TRPC6波。这个过程可能会促进伤口关闭,因为Ca^{2 +}伤口愈合反应,被各种ATP-Ca抑制剂抑制并行^{2 +}信号。我们还应用hyperforin / HP -βcd体外皮肤模型的特应性皮炎,发现hyperforin / HP -βcd治疗24小时提高了stretch-induced Ca^{2 +}反应和振荡失败在过敏性皮肤。

1。介绍

表皮角化细胞是位于皮肤的表面,接触到各种环境刺激包括机械和物理刺激和容易受到这些刺激。在伤口愈合过程中,这些外源性刺激和内源性刺激,如产生的张力和牵引力量最重要的细胞的迁移和细胞位于背后,可能会影响伤口闭合的速度。我们以前的研究表明,机械拉伸促进伤口关闭在牛主动脉内皮细胞1]。我们最近报道,伤口愈合HaCaT角质细胞与hyperforin加速了拉伸和治疗,这是一个主要组成部分的传统草药和已知TRPC6活化剂,进一步加快伤口关闭(2]。我们发现伤口闭合的便利化机械拉伸和hyperforin发生由于ATP的释放通过mechanosensitive hemichannels伤口边缘和P2Y受体介导^{2 +}涌入通过TRPC6在细胞位于背后伤口边缘使用实时ATP发光成像和Ca^{2 +}荧光测量(2]。Ca的涌入^{2 +}据报道通过TRPC6渠道也是必不可少的伤口愈合在TRPC6体内基因敲除小鼠(3]。

Hyperforin是主要活性组分的圣约翰草(贯叶连翘l .)提取,广泛用于传统草药,促进伤口愈合(4- - - - - -9]。hyperforin-rich膏的使用作为一个局部药物治疗特应性皮炎是最近报道10- - - - - -14]。尽管其潜在的治疗活动,的极端敏感性hyperforin光降解已经阻碍了其局部应用程序。圣约翰草提取物的络合- - -环糊精(CD)据报道,增强的光和溶解度hyperforin在水的解决方案15- - - - - -17]。在目前的研究中,我们旨在开发一种新型的封装与羟丙基hyperforin——的形成β环糊精(HP -βcd)来改善其水溶性和耐光性,因为惠普-βCD已被证明拥有最高的溶解度不仅在水里,而且在乙醇中几个常用的CD的化合物。我们也评估的影响复合伤口愈合和ATP-Ca^{2 +}信号在HaCaT角质细胞。

特应性皮炎是一种慢性炎症性皮肤病,由于各种因素,发展与表皮屏障功能障碍(18]。众所周知,Ca^{2 +}梯度的表皮是必要的为了维护屏障功能;然而,Ca^{2 +}过敏性皮肤动力学仍有待阐明。本文测量了stretch-induced Ca^{2 +}在过敏性皮肤反应体外使用共焦显微镜。我们发现Ca^{2 +}在过敏性反应受损表皮,响应恢复后hyperforin / HP -的应用βcd。数据表明hyperforin / HP -β乳糜泻是一种有效的靶向治疗剂,可用于促进表皮伤口愈合和治疗特应性皮炎。

2。材料和方法

2.1。试剂

Hyperfolin /羟丙基-β环糊精制备的络合hyperforin(开曼化工、安阿伯、MI)和羟丙基-β环糊精(HP -βcd;CycloChem、东京、日本)如下所述。其他化学药品和试剂如下:生胃酮二钠盐(CBX) apyrase(从土豆),GdCl₃、U73122 Cremophor EL (Sigma-Aldrich、圣路易斯、钼);圣地亚哥ionomycin (Calbiochem CA);苏拉明hexasodium (RBI,纳蒂克,MA);GsMTx-4(肽研究所,日本大阪);diC8-PIP₂(雁行生物科学,盐湖城,UT);dispase(戈蓝Shusei、东京、日本);Fluo-8点(AAT Bioquest,桑尼维尔CA);Cellmatrix IA型(Nitta明胶、大阪、日本);英杰公司Lipofectamine(18324年,卡尔斯巴德,CA);测距装置/ F12 (D9785;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州);的边后卫(12483;卡尔斯巴德,Gibco CA)。

2.2。亲水的制备和稳定Hyperforin / HP -βcd

4.66×10的解决方案⁻⁴M hyperforin(1毫升甲醇)和1.86×10⁻³M惠普-βcd(1毫升乙醇)涨跌互现,然后搅拌30分钟。溶剂被移除在真空离心蒸发器(0.1 Mpa, 2800 rpm, 90分钟,wkn - pv - 1200, Wakenyaku,京都,日本)在环境温度。得到白色固体是由声波降解法溶解在水里Milli-Q至少10分钟。结果hyperforin / HP -水溶液βcd是syringe-filtered 0.20μ米孔隙大小和保存在冰箱里,直到使用。所有的程序在light-shielded条件下进行。

hyperforin和惠普-化学计量学的反应βcd光谱方法确定。的浓度hyperforin这些研究为4.66×10⁻⁴而惠普-βcd使用浓度在0 - 8.0等价物。的紫外光谱hyperforin记录使用UV / VIS扫描分光光度计(基因规范三世,日立纳卡仪器、日立、日本)。吸光度的变化后hyperforin添加不同浓度的惠普-βcd络合剂测定281±7海里。

2.3。通过高效液相色谱法分析辐照Hyperforin解决方案

辐照测试执行使用6-watt LED灯泡(480 lm总光通量,色温:6700 K,松下、大阪,日本),放置14厘米以上样品。进行了辐照温度控制在一个黑暗的房间里(25°C)。能整除的40μL是每30分钟的分析。所有的定量测量进行了使用日立LaChrom精英高效液相色谱系统(日立高新技术、东京、日本)配备了四元泵(l - 2130),一个autosampler (l - 2200),一个列烤箱(l - 2300)和二极管阵列检测器(父亲/ l - 2450)。分离进行了使用TSKgel ods - 100 z反相列(4.6毫米×250毫米,5μm,但,日本东京)流动相组成的acetonitrile-water-methanol-trifluoroacetic酸(72:18:10:0.5,v / v / v / v)。流量为1.6毫升/分钟。紫外检测器是设定在270海里。曲线拟合进行了使用Excel (MS Office 2013)最小化价值。

2.4。细胞培养

HaCaT人类角化细胞细胞(19在段落36和37]从细胞系购买服务(CLS,海德堡,德国),生长在测距装置/ F12(0.07毫米^{2 +})补充2%的边后卫在37°C在湿润的气氛中5%的有限公司₂。测距装置的生长介质准备/ F12 (D9785;通过添加0.07毫米Ca Sigma-Aldrich)^{2 +},365 mg / L谷酰胺,59.05 mg / L L-leucine 91.25 mg / L赖氨酸·HCl、61.2 mg / L MgCl₂h·6₂啊,48.84 mg / L MgSO₄(无水),17.2 mg / L L-methionine和1.2 g / L NaHCO₃并调整与1毫米氢氧化钠pH值7.4。实验,细胞被播种在collagen-coated (Cellmatrix IA型)硅胶拉伸室(参见下面)或15毫米圆形玻璃盖玻片(Matsunami、大阪、日本)和培养在测距装置/ F12(1.05毫米^{2 +}附件)补充10%的边后卫,允许细胞。一天后,介质是测距装置/ F12(0.07毫米Ca所取代^{2 +})补充2%的边后卫,细胞进一步孵化1天实现融合。

如前所述的生理实验(2]。下面是一个简单的解释。

2.5。细胞拉伸实验和伤口关闭试验

细胞培养在一段室型Silpot 184 W / C硅酮弹性体(道康宁东丽、东京、日本)。与培养细胞室在拉伸机(ns - 600 w或st - 600 w, STREX,大阪,日本)安装在倒置显微镜的阶段(ix - 70、奥林巴斯、东京、日本)细胞内Ca^{2 +}成像或立式显微镜(BX51WI,奥林巴斯)细胞外ATP成像。HaCaT细胞被播种collagen-coated硅胶拉伸钱伯斯在3×10或15毫米的圆形玻璃盖玻片⁵细胞/厘米²和融合发展。一条狭窄的间隙游离(约250μ米)成立于一个完全汇合的单层通过移除硅胶带,在拉伸室的底部在细胞播种。伤口闭合过程监控每3 h划痕后使用一个倒置显微镜(ix - 70奥林巴斯)4 x (UPlanFL N, 0.13)的目标。伤口闭合速度定义为伤口闭合区域的比例,从最终的比例计算颗粒面积的地区迁移到最初。

2.6。细胞内钙^{2 +}测量和实时成像的ATP释放

在3 h后,拉伸HaCaT细胞室装有1μM Fluo-8我使用的是0.1的-0.2% Cremophor EL (Sigma-Aldrich) - min在孵化器37°C。洗后的染料和测距装置包含2.0毫米Ca / F12^{2 +}室的细胞在舞台上的拉伸装置的倒置显微镜4 x (UPlanFL N, 0.13)或10 x (UPlanFL 0.30)的目标。每隔0.5秒延时Fluo-8荧光图像获得使用MetaMorph软件(v6.3和7.5、分子设备、唐宁敦PA)。

stretch-induced释放ATP使用成像系统实时测量,如前所述[20.]。短暂,luciferin-luciferase ATP生物荧光检测使用一个高灵敏度与红外摄像系统同时DIC成像监测精确细胞位置在延伸和扩展。在3 h后,细胞拉伸室被附加到拉伸装置的舞台上一个正直的显微镜(BX51WI,奥林巴斯)4 x客观(340萤石XL, 0.28)和测距装置/ F12培养基中取代(2.0毫米^{2 +}玫瑰和10毫米,pH值7.4)包含高灵敏度luciferin-luciferase解决方案(60315;路西法HS,龟甲万Biochemifa,日本东京)。获得使用MetaMorph软件图像流收购模式(曝光时间100毫秒)。

2.7。TRPC6击倒的成分

TRPC6 shRNA质粒,coexpressed RFP (TF308626;OriGene技术,马里兰州罗克维尔市)。59-AAGCAGGACATCTCAAGTCTCCGCTATGA-39 shTRPC6目标序列。炒无效的质粒与相同的核苷酸内容作为消极的控制。每个成分的浓度45 nM制程使用Lipofectamine转染到HaCaT细胞试剂,根据制造商的指示。

2.8。体外皮肤准备和生活^{2 +}成像的表皮

活检是过敏性皮肤的外层前臂的一名志愿者。从志愿者书面知情同意了。这项研究是调皮捣蛋的中央机构伦理委员会的批准,2009年。皮肤组织的样品放置在PBS dispase治疗之前。与500 U /毫升dispase一夜消化后在无血清F12 /测距装置有或没有hyperforin / HP -βcd在4°C,表皮剥落的真皮钳。分离的表皮与皮内针固定在一个弹性硅胶室,并进一步在37°C在湿润的环境中5%的股份有限公司₂大气12 h。表皮组织是含有1μM Fluo-8使用0.2%的培养基Cremophor EL 1 h在37°C。洗后的染料和测距装置包含2.0毫米Ca / F12^{2 +},包含细胞室是附加到pulse-motor-driven拉伸机(ns - 600 w或st - 600 w, STREX)安装在舞台上的反向激光扫描共焦显微镜(LSM510 10倍镜头,卡尔蔡司,耶拿,德国)。延时Fluo-8荧光和Nomarski微分干涉对比图像获得每隔1 s。Ca^{2 +}成像实验在室温下进行(°C)。

3所示。结果

3.1。制备稳定的亲水Hyperforin封装在HP -β对伤口关闭cd和它的影响

改进的耐光性和溶解度hyperforin,在环糊精分子封装。Hyperforin与羟丙基-复合体β环糊精(HP -βcd)使用溶剂蒸发法在不同的摩尔比率。hyperforin / HP -βcd复合物进行了UV / Vis光谱学在水溶液中。摩尔比率的方法被用来确定hyperforin形成的包含复杂的化学计量学和惠普-βcd。Δ一个,不同的吸光度hyperforin有无惠普-βcd,是对惠普的摩尔比率——绘制βcd hyperforin 280纳米(图1(a))。hyperforin / HP -曲线βcd显示一个拐点的比率1:4,表明包含复杂的惠普——形成的βcd tetracapped hyperforin半松油精终端(图半个1(b))。接下来,我们检查的光稳定性1:复杂hyperforin / HP - 4β使用高效液相色谱的cd。图1(c)显示了可见的光致退化曲线hyperforin hyperforin / HP -βcd复杂。明显半衰期hyperforin 30分钟,而hyperforin / HP -βcd复杂长时间180分钟。通过单指数衰减曲线拟合分析基线显示一个大基线(44%),曲线hyperforin / HP -βcd,暗示nondegraded的存在(photoprotected)形式的复杂(图1(c)拟合线)。

我们之前证明伤口关闭加速角质细胞的伸展和hyperforin治疗进一步增强效应(2)(图1(d))。在目前的研究中,我们审查的影响hyperforin / HP -βcd上的伤口关闭。HaCaT的汇合的单层细胞培养在硅胶膜线性挠创建读~ 250的缺口μ米宽度,和在不同条件下允许伤口愈合。图1(d)显示代表伤口关闭图像捕获在0和抓挠后6 h和的平均值计算比例的伤口闭合区域。相比20%的持续促进伤口关闭nonstretched细胞(控制)和hyperforin (1μ米)治疗进一步提高拉伸的效果,如图所示。Hyperforin / HP -βcd (1μ米)也同样(或更多)有效促进伤口关闭。

3.2。Stretch-Induced ATP释放和Ca的起始^{2 +}波的主要细胞在伤口的差距

据报道,拉伸刺激诱导细胞间Ca^{2 +}波在hyperforin-treated HaCaT细胞,启动从伤口边缘上的主要细胞,这发生由于ATP的释放的主要细胞,激活TRPC6在背后的细胞前缘通过激活P2Y与ATP (2]。我们评估是否hyperforin / HP -βcd也同样影响HaCaT角质细胞。3 h后狭窄瘢痕的汇合的单层hyperforin / HP -β-CD-treated细胞,拉伸(20%为1 s,垂直于线性gap)诱导细胞内钙的增加^{2 +}在几乎所有的主要细胞在伤口边缘和Ca^{2 +}增加对传播背后的后细胞边缘波模式(图2(一个);网上电影S1)(见补充材料https://doi.org/10.1155/2017/8701801)。Ca^{2 +}波发生由于主要细胞释放ATP及其背后的扩散到周围的细胞边缘,如图2 (b)电影(S2)。应用平行延伸到线性差距对ATP-Ca本质上相同的效果^{2 +}信号和伤口愈合HaCaT细胞(2]。

hyperforin / HP -一个明显的优势βcd是影响stretch-induced ATP和Ca^{2 +}信号比获得简单hyperforin更可再生的。这可能是由于耐光性的提高和hyperforin / HP -的溶解度βcd。

3.3。的药理分析Stretch-Induced Ca^{2 +}在Hyperforin / HP -响应和伤口关闭β-CD-Treated细胞

分析stretch-induced Ca的特点^{2 +}反应,不同抑制剂对Ca的影响^{2 +}在hyperforin / HP -响应进行评估β-CD-treated HaCaT细胞。细胞内钙的时间进程^{2 +}反应诱导20%拉伸测量在不同的距离(0 - 240μ从疤痕(图)3(一个)、控制;hyperforin / HP -β-CD-treated细胞)。在0μ米(伤口边缘),Ca^{2 +}后立即反应是诱发拉伸延长几分钟。从边缘的距离增加时,发现了一个长时间延迟发病前的活动;然而,高原期的振幅几乎是相同的。这些结果与Ca的想法一致^{2 +}波简单扩散造成的ATP释放的主要细胞在伤口边缘和激活P2Y在周围细胞背后伤口边缘。当Gd^{3 +}(10μ米),一种抑制剂stretch-activated频道,是应用,Ca^{2 +}响应峰值降低,衰减的速度显然更快,尤其是在遥远的地区(图3 (b))。Ca^{2 +}反应也测量了在不同条件和抑制剂,并由峰值响应的平均跟踪反应在不同的距离(图3 (c))。压制在Ca^{2 +}在hyperforin / HP -无介质β在shTRPC6-treated -CD-untreated细胞和细胞,建议的涌入Ca的参与^{2 +}通过TRPC6。抑制的治疗与苏拉明(P2-receptor拮抗剂,100μ米),apyrase (ATP-hydrolyzing酶,20 U /毫升)和CBX (hemichannel拦截器,100年μ米)建议在这个过程中ATP信号的贡献。减少由每个治疗U73122 (PLC)抑制剂,10μ米)和diC8-PIP2(水溶性皮普₂抑制活性的PLC的模拟与皮普竞争₂,10μ米)建议P2Y receptor-Gq-PLC-DAG-mediated信号级联参与TRPC6的激活。这些结果一样通过治疗hyperforin (nonencapsulate)和拉伸刺激2]。这表明释放ATP的参与通过hemichannels P2Y的主要细胞,激活细胞在伤口边缘长期Ca的涌入^{2 +}通过TRPC6 Gq-PLC-DAG级联。

确认是否hyperforin / HP -β通过放大ATP-Ca cd促进伤口关闭^{2 +}信号,我们评估的各种抑制剂的影响在伤口上面使用闭包在持续延伸。伤口的差距几乎是收在约6小时(图3 (d)抓挠后控制),而使用Ca进行治疗^{2 +}损耗(名义上Ca^{2 +}无),CBX (100μ米),apyrase (20 U /毫升),苏拉明(100μ米),Gd^{3 +}(10μGsMTx-4(5米)μ米),shTRPC6治疗延迟伤口闭合(图3 (d))。这表明伤口闭合过程需要ATP-Ca^{2 +}信号,尤其是Ca的涌入^{2 +}通过TRPC6。

3.4。Hyperforin / HP -的影响βcd治疗在Ca^{2 +}反应的体外皮肤过敏性皮炎

接下来,我们评估hyperforin / HP -的影响βcd治疗和拉伸机械刺激体外表皮的过敏性皮炎。脱离的表皮,真皮与dispase隔夜治疗后,满载着Fluo-8AM和激光共焦显微镜观察。正常皮肤表现出频繁的自发的Ca^{2 +}振荡和Ca^{2 +}拉伸刺激(1个)和随后的Ca^{2 +}波与Ca的持久的高度^{2 +}(图4(一)、电影S3)。相比之下,过敏性皮炎的表皮显示一些振荡和只有一个小响应拉伸波(图4 (b)、电影S4)。相比之下,过敏性皮肤hyperforin / HP -处理βcd 24 h展出自主Ca^{2 +}振荡和瞬态长期增加Ca^{2 +}更频繁的Ca^{2 +}振荡后拉伸刺激(图4 (c)、电影S5)。hyperforin / HP -的应用β-CD-treatment为24小时导致过敏性皮肤的复苏mechanosensitive ATP-Ca^{2 +}信号,功能失调的治疗过敏性表皮。

4所示。讨论

hyperforin的局部应用,这是一个传统的偏方,抗炎,抗氧化,抗菌,antinociceptive,伤口愈合效果。最近,越来越多的证据表明,hyperforin促进钙的吸收造成的角化细胞分化^{2 +}通过TRPC6 [11]。我们先前的研究显示,hyperforin-treated HaCaT角质细胞可能会加速伤口关闭与外生和内生机械拉伸ATP-Ca的便利化^{2 +}信号级联(2]。hyperforin对mechanosensitivity的影响尚不清楚,但肯定hyperforin放大ATP-Ca^{2 +}信号和促进伤口愈合期间reepithelialization。然而,由于photoinstability hyperforin、日光启动其温和的氧化降解[21]。Prenyl侧链含有共轭双键(半松油精根)通常容易氧化。为了提高稳定性的hyperforin和发挥其局部治疗的潜力,hyperforin被封装形成超分子络合与惠普-βcd。惠普的溶解度βCD是最高的在乙醇和水在CD的化合物,α光盘,cd,甲基化,βcd, sulfobutyl乙基-β光盘,γcd,和惠普βcd。这个两亲的属性是一个主要的优势与疏水hyperforin时包含复杂。的摩尔比方法表明,最优比hyperforin / HP -βcd复杂是1:4。这意味着惠普——的形成β-CD-tetracapped hyperforin, hyperforin encapped惠普-βcd在每个半松油精一半(22)如图1(b)。这部小说包含复杂的显示明显的耐光性hyperforin相比(图1(c))。曲线拟合的衰减时间hyperforin / HP -βcd表明大型nondecayed组件的存在与photostable hyperforin。这一修改有助于制药应用和局部药物治疗。

我们评估hyperforin / HP -的影响βcd在伤口愈合和ATP-Ca^{2 +}在角化细胞信号。Hyperforin / HP -βcd增强伤口闭合的加速度通过相似的效率hyperforin伸展(图1(d))。在hyperforin / HP -β-CD-treated角质细胞,诱导显著增加Ca^{2 +}细胞水平的主要面临着伤口边缘和Ca^{2 +}海浪慢慢地传递到细胞边缘(图背后的伤口2(一个))。这些传播Ca^{2 +}波完全是由于ATP的释放的主要细胞(图2 (b))。ATP释放的途径(图CBX敏感3 (c)从我们之前的研究)和大概pannexin hemichannels2]。迁移细胞在伤口边缘代表形态变化,观察到类似epithelial-to-mesenchymal过渡,可能更容易受到内生和外生机械应力2,23]。Ca的增加^{2 +}在伤口边缘背后的细胞是依赖Ca的涌入^{2 +}通过TRPC6通道,激活的激活P2Y Gq-PLC-DAG-mediated信号级联(图3 (c))[2),持续时间相对较长时期。Ca的浓度和持续时间^{2 +}增加依赖于伤口边缘之间的距离,使Ca^{2 +}梯度的主要细胞后细胞。这个Ca^{2 +}伤口愈合组织梯度可能是至关重要的,包括细胞迁移,分子迁移和基因表达。细胞的细胞牵引力坐落在边缘迁移主要细胞也是一种重要的机械信号是由Ca的伤口愈合^{2 +}相关的分子如钙粘蛋白和信息交互。这个Ca^{2 +}信号由hyperforin治疗/ HP -增强βcd。

有趣的是,封锁了增加Ca的试剂^{2 +}也抑制伤口闭合的加速度响应在hyperforin / HP -拉伸β-CD-treated细胞(图3 (d))。因此,hyperforin / HP -βcd复杂显示了一个类似的效率在诱导mechanosensitive hyperforin ATP-Ca^{2 +}信号和伤口闭合角化细胞。事实上,hyperforin / HP -βcd似乎是由于数据的再现性优越stretch-induced ATP和Ca^{2 +}信号,这可能是由于耐光性和溶解度hyperforin / HP -βcd。

在我们的实验设计,HaCaT角化细胞培养在细胞外钙较低^{2 +}条件(0.07毫米),模仿细胞外钙^{2 +}环境barrier-perturbed表皮,如环境,会造成皮肤剥离或表面活性剂的使用。过敏性皮肤炎也是一个皮肤屏障功能障碍。局部药物hyperforin-rich圣约翰草奶油已被证明是特应性皮炎患者有效(10- - - - - -14]。激光扫描显微镜图像的分析表明,hyperforin-rich奶油降低皮肤表面干燥,提高角质层的水分水平(14]。然而,该机制的改善过敏性皮肤症状尚不清楚。我们目前的研究首次证明Ca^{2 +}过敏性皮肤表现在机械动力学环境伤口愈合和reepithelialization等。我们观察到Ca^{2 +}动态拉伸诱导的表皮体外使用共焦显微镜(图4)。在特应性表皮,有一个显著的减少^{2 +}反应和振荡引起的伸展(图4 (b))。治疗hyperforin / HP -β24小时恢复Ca的cd^{2 +}反应和振荡,甚至在过敏性皮肤(图4 (c))。这些结果表明,ATP-Ca过敏性皮肤炎的发病机制相关^{2 +}信号,hyperforin / HP -βcd可能治疗特应性皮炎的治疗应用。

5。结论

皮肤伤口愈合受到机械应力加速体内和从内部,和治疗hyperforin提高加速度通过ATP-Ca的便利化^{2 +}在角化细胞信号。我们成功地使惠普-β-CD-tetracapped hyperforin (hyperforin / HP -βcd),它具有增加溶解度和改进的光。治疗hyperforin / HP -βcd增强了机械诱导ATP-Ca^{2 +}信号和加速伤口关闭HaCaT角质细胞hyperforin等于(或更高)的疗效。我们还应用hyperforin / HP -βcd过敏性皮肤体外,发现hyperforin / HP -βcd治疗24小时提高了stretch-induced Ca^{2 +}在过敏性皮肤反应和振荡,降低。数据显示,hyperforin / HP -β乳糜泻是一种有效的靶向治疗剂,可用于促进表皮伤口愈合和治疗特应性皮炎。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢k Uekama(熊本大学名誉教授)的盛情帮助描述hyperforin / HP -βcd复杂。这项工作是支持的基金从日本促进社会科学(jsp)机构计划为年轻研究员海外访问高田(Hiroya);的医学研究格兰特Kyousaidan高田(Hiroya);由jsp KAKENHI格兰特JP24590274号和JP15K09174 (Kishio Furuya)。

补充材料

引用

1. t .田中,k . Naruse和m . Sokabe“机械应力的影响内皮细胞的迁移行为,”生物力学在微观和纳米级的水平h .和田,艾德,我卷,第87 - 75页,世界科学、新加坡,2005年。视图:谷歌学术搜索
2. h .高田k . Furuya和m . Sokabe Mechanosensitive ATP释放hemichannels和Ca^{2 +}在角化细胞涌入通过TRPC6加速伤口闭合,”《细胞科学,卷127,不。19日,4159 - 4171年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. j·戴维斯,A·r·伯尔·g·f·戴维斯,l·伯恩鲍姆和j·d·Molkentin”为myofibroblast TRPC6-dependent途径分化转移和伤口愈合体内,”细胞发育,23卷,不。4、705 - 715年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. s Samadi t . Khadivzadeh a . Emami n s Moosavi m . Tafaghodi和h r . Behnam“贯叶连翘的影响伤口愈合和剖腹产的疤痕,“替代和补充医学杂志》上,16卷,不。1,第117 - 113页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. z Saddiqe、i Naeem和A . Maimoona”审查的抗菌活性贯叶连翘L。”民族药物学杂志,卷131,不。3、511 - 521年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. Suntar, e . k . Akkol h . KeleşA . Oktem k h . c . Başer大肠Yeşilada,”一个新颖的伤口愈合药膏:贯叶连翘油配方,鼠尾草和牛至精油基于传统土耳其知识”民族药物学杂志,卷134,不。1,第96 - 89页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. m . Dikmen y Ozturk, g . Sagratini m . Ricciutelli s维托里、和f .美极,“伤口愈合的潜力评价的两个亚种贯叶连翘NIH3T3成纤维细胞培养,“植物疗法的研究,25卷,不。2、208 - 214年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 美国Wolfle、g . Seelinger和c . m . Schempp“局部应用圣约翰草(贯叶连翘),“足底》,卷80,不。2 - 3、109 - 120年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. f m .马瑞利g . Statti Conforti f . Menichini“金丝桃属植物物种的新潜在的医药应用,”本文着重在药物化学,16卷,不。9日,第720 - 710页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. c . m . Schempp t . Windeck s Hezel和j·c·西蒙,”局部治疗特应性皮炎与圣约翰草成随机,安慰剂对照,双盲半边比较,”植物学期刊,10卷,不。4,31-37,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. m·穆勒k . Essin k·希尔et al .,“具体TRPC6通道激活,一个新颖的方法来刺激角化细胞分化,“生物化学杂志,卷283,不。49岁,33942 - 33954年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 阿恩特,s . f . Haag a . Kleemann j . Lademann和m . c . Meinke“激进的保护在可见光和红外hyperforin-rich烧伤膏体内和体外方法,”实验皮肤病学,22卷,不。5,354 - 357年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. 美国Wolfle、g . Seelinger和c . m . Schempp圣约翰的“局部应用ʼ麦芽汁(贯叶连翘),“足底》,卷80,不。2 - 3、109 - 120年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. m . c . Meinke h·里克特a Kleemann et al .,”表征的过敏性皮肤和hyperforin-rich霜的效果通过激光扫描显微镜,”《生物医学光学,20卷,不。5、文章ID 051013, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. h·c·j·奥尔特和p·c·施密特hyperforin稳定和稳定”,Pharmazeutische工业,卷62,不。1、60 - 63、2000页。视图:谷歌学术搜索
16. 事务部门分析人士,b . Isacchi: Galeotti m . c . Bergonzi c . Ghelardini a . r . Bilia和f . f . Vincieri”体内药理测试来评估一些圣约翰草的生物利用度创新的口服制剂,“植物疗法的研究,23卷,不。2、197 - 205年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. j . Hatanaka y Shinme, k栗山et al .,“体外和体内表征的新配方的圣约翰草提取物改善药物动力学和anti-nociceptive效应,”药物代谢与药物动力学,26卷,不。6,551 - 558年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. m . j .软木s . g .丹比y Vasilopoulos et al .,“表皮屏障功能障碍在过敏性皮肤炎,”皮肤病学研究杂志》上,卷129,不。8,1892 - 1908年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. p . Boukamp r·t·Petrussevska d . Breitkreutz j .霍农a·马卡姆和n . e . Fusenig“正常的角质化在自发永生的人类非整倍性角化细胞细胞系,”细胞生物学杂志,卷106,不。3、761 - 771年,1988页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. k . Furuya m . Sokabe, r . Grygorczyk“实时荧光成像细胞ATP的释放,”方法,卷66,不。2、330 - 344年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 胡l . c . y . w . Ang, t·m·海因策et al .,“不稳定的圣约翰草(贯叶连翘l .)和退化hyperforin水解决方案和功能饮料,”农业与食品化学杂志》上,52卷,不。20日,第6164 - 6156页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. Clarot, d . Cledat s打脚,p . j . p . Cardot“色谱研究的萜烯衍生品多孔石墨碳固定相β环糊精作为流动相改性剂。”杂志的色谱,卷903,不。1 - 2、67 - 76年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. n·d·埃文斯,r . o . c . Oreffo e·希利p . j . Thurner黄懿慧男人,“上皮细胞力学生物学、皮肤伤口愈合,干细胞利基,”生物医学材料的力学行为杂志》上28卷,第409 - 397页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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