层粘连蛋白-α1链衍生肽，AG73，结合到MDA-231乳腺癌细胞的Syndecans并改变丝状足的形成

摘要

乳腺癌是美国女性最常见的癌症之一，仅次于皮肤癌。尽管已经开发出了治疗原发性乳腺癌的方法，但转移仍然是导致死亡的主要原因。转移的早期步骤是癌细胞侵入基底膜。然而，这个过程还没有被很好地理解。AG73，一种合成层粘连蛋白α链肽，在细胞粘附中起重要作用，此前已被认为与迁移、侵袭和转移有关。因此，我们的目标是确定AG73在乳腺癌细胞上的结合伴侣，它可能介导癌症进展。我们使用MCF10A、T47D、SUM1315和MDA-231乳腺细胞系进行了粘附试验，发现AG73与syndecans (Sdcs) 1、2和4结合。当我们在MDA-231细胞中沉默Sdcs 1和/或4时，这种相互作用被抑制，表明这些受体在这种关系中非常重要。通过肌动蛋白染色，我们发现在MDA-231细胞中沉默Sdc 1、2和4表达，与AG73结合的丝状伪足长度和数量减少。小鼠Sdcs 1、2、4在MDA-231细胞中的表达为丝状伪足提供了拯救，而过表达Sdcs 1和2导致丝状伪足长度和数量增加。我们的研究结果表明，AG73在肿瘤环境中与Sdcs在乳腺癌细胞上的内在相互作用，支持肿瘤细胞通过丝状伪足粘附和侵袭，这是癌症转移的重要步骤。

1.介绍

Laminin-111 (LM-111)参与正常乳腺和肿瘤乳腺生物学，增强肿瘤细胞的粘附、迁移和转移。基底膜糖蛋白在乳腺肿瘤环境中被切割，提示生物活性片段可能被释放到肿瘤环境中[1- - - - - -7]．支持这一观点的是，合成的LM-111多肽可以改变肿瘤细胞的行为。AG73是一种基于LM-的合成肽α1链(RKRLQVQLSIRT，残基2719-2731)影响许多生理事件。AG73在黑色素瘤、腺样囊性癌、口腔鳞状细胞癌和卵巢癌转移中的作用已被证实[8- - - - - -14]，而我们之前的报道显示AG73增加了乳腺癌向骨骼的转移[14]．此外，已知HT1080人纤维肉瘤、B16F10小鼠黑色素瘤和SW480人结肠腺癌细胞都能粘附AG73 [15]．而AG73的打乱序列(LQQRRSVLRTKI)对细胞粘附没有促进作用。此外，AG73可与多糖(壳聚糖和海藻酸盐)和透明质酸水凝胶结合，促进细胞活力，神经突延伸，与内皮细胞形成毛细血管样网络，与唾液腺细胞形成腺泡样结构[16- - - - - -19]．AG73还抑制细胞在LM-111上扩散的能力[15，表明它可能与生理相关。

AG73受体也可能在肿瘤的生长和转移中发挥重要作用。在没有添加肽的情况下，B16F10细胞亚群与AG73黏附超过30倍，对肿瘤细胞有影响，包括增加体外侵袭，皮下肿瘤生长，以及肺和肝脏转移集落生长[10]．这些结果表明，AG73受体及其信号通路在这些细胞的转移中非常重要，因此，我们重点研究了与AG73结合的乳腺癌细胞中的受体。AG73特异性结合细胞表面蛋白多糖，包括非乳腺细胞中的syndecans (Sdcs) 1、2和4 [12，20.- - - - - -24]．Sdcs是一个家族，由四种跨膜硫酸肝素蛋白聚糖组成，可与整合素、生长因子和趋化因子受体相互作用。虽然它们不是细胞外基质(ECM)、生长因子或趋化因子的主要受体，但它们通过同时的配体参与与这些分子的原型受体协同[25- - - - - -27]．这些受体在各种生理和病理生理功能中发挥关键的调节作用，包括伤口愈合、炎症、神经模式、肿瘤生长和血管生成[28，29]．因此，我们假设AG73通过Sdcs与乳腺癌细胞结合。在这里，我们证明了ag73诱导的乳腺癌细胞丝状足的形成是通过Sdcs 1、2和4介导的。这些数据确定了LM-111序列的受体，该序列可能在乳腺癌的恶性表型中发挥作用。这是我们所知的第一个在乳腺癌细胞中确定Sdcs作为层粘连蛋白肽AG73的结合伙伴的研究。

2.材料和方法

2．1．细胞培养

人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 (MDA-231)在添加5%胎牛血清(Gemini)、2 mM l -谷氨酰胺、1 mM丙酮酸钠、0.02 mM非必需氨基酸、嘌呤霉素(1μG /ml)和真菌带(2.5μl /毫升)(表达载体)。表达绿色荧光蛋白(GFP)的MDA-231细胞是D. Welch博士(堪萨斯大学医学中心)的礼物。人MCF7和T47D乳腺癌细胞在添加10%胎牛血清(Gemini)、4.5 g/l d -葡萄糖、(+)l -过剩和(-)丙酮酸钠(Invitrogen)的DMEM (Invitrogen)中生长。人SUM1315乳腺癌细胞在Ham’s F-12 (Invitrogen)中生长，5% FBS (Gemini)， 5μg/ml胰岛素，10 ng/ml EGF和10 mM HEPES (Sigma-Aldrich)。人MCF10A正常乳腺上皮细胞在添加5%马血清(Invitrogen)的DMEM/F-12 (Invitrogen)、20 ng/ml EGF、10μG /ml胰岛素，0.5μg / ml氢化可的松(Sigma-Aldrich)。所有细胞培养液含有100 U/ml青霉素和100μg / ml链霉素(表达载体)。此外，所有细胞保持在37°C的5% CO₂/95%湿化空气，常规检查支原体。

2．2．附着力化验

粘附试验按所述进行[30.，31]．简单地说，96孔板被AG73涂层和炒(2μg / ml)、层粘连蛋白(10μg/ml)、recl - lg -4和突变体recl - lg4 [20.(AG73位点突变RKR-AAA;11μg/ml，来自博士的善意礼物。或基膜提取物(10μg/ml, BME/Matrigel, Trevigen/Bio-Techne)在4°C PBS中过夜。(打乱的肽段是AG73氨基酸序列的随机打乱序列。)用3%热变性BSA(85°C下10分钟)在37°C下封井1小时。细胞不处理或PBS处理30分钟;5毫米EDTA;10毫克/毫升肝素;硫酸乙酰肝素;硫酸软骨素A, B和C;透明质酸(Sigma-Aldrich);AG73的10倍摩尔过量; or scrambled peptide, prior to 30 min adhesion. Heparin, heparan sulfate, and chondroitin sulfate B were used at 1-200 μg/ml₅₀使用Prism (GraphPad软件)计算。细胞(30,000个细胞/50个μl/孔的DMEM-0.1% BSA)，然后将处理添加到堵塞的孔中，37℃孵育30分钟。将带有独立细胞的培养基从孔中取出。贴壁细胞用0.2%结晶紫在20%甲醇中染色10 min，用水清洗2次。用10% SDS (50μL /孔)，测量光密度(600 nm)。每个样品重复三次，实验至少重复三次。

2．3.沉默的Sdc表达和救援

MDA-231细胞被一种来自Open Biosystems的含有GFP的慢病毒感染。NS1为慢病毒载体GINZEO非沉默(NS) shRNAmir序列;慢病毒载体GINZEO中Sdc 1-沉默shRNAmir序列Sdc 1kd;NS2对照，慢病毒载体GIPZ的非沉默shRNAmir序列;sdc2kd:慢病毒载体GIPZ中sdc2沉默shRNAmir序列;和慢病毒载体GIPZ中sdc4沉默shRNAmir序列sdc4kd。所有细胞通过流式细胞术选择2次，以检测GFP表达量前5%的细胞。这些细胞不是克隆细胞群，而是稳定表达shRNAmir的异质细胞群。流式细胞仪检测稳定表达。为了确保结果不是由于shRNAmir的脱靶效应，使用小鼠Sdcs 1、2和4 (OriGene)在人类细胞系中进行了营救实验，这些小鼠Sdcs 1、2和4 (OriGene)不是人类shRNAmir的靶标。 Specific targeting to human Sdc family members while expressing a mouse homolog has been demonstrated [32]．小鼠Sdc确实挽救了人类Sdc的击倒。小鼠Sdc cDNA被克隆到pBABE逆转录病毒(一种来自西北大学B. Parker博士的礼物)，它表达mCherry荧光蛋白。通过流式细胞术筛选出mCherry荧光表达量最高的5%的细胞。对照是KD或NS细胞感染pBABE逆转录病毒只含有mCherry荧光蛋白，并被称为空载体(EV)，因为没有Sdc的cDNA。流式细胞仪检测稳定表达。

２.４.流式细胞术

用Versene (Invitrogen, 0.48 mM EDTA)在37℃温和搅拌10分钟收获细胞。细胞在PBS中洗涤，在含1% FCS的冷缓冲液中重悬。总共 每个样本使用细胞。离心后，将细胞重悬于Hanks平衡盐溶液/2% BSA中，用滴定抗体(20μg/ml小鼠抗sdc 1 (B-A38, AbD sertec)，兔抗sdc 2 (R&D Systems)，兔抗sdc 3 (midi)，兔抗sdc 4 (Zymed));然后用PBS洗涤2次细胞，用二抗在4°C下孵育30分钟(1:100稀释的驴抗小鼠或兔子- cy5 (Jackson ImmunoResearch))，再用PBS洗涤2次，100重悬μPBS的l。采用Beckman Coulter FC500流式细胞仪对标本进行分析。比较人Sdc染色细胞与IgG对照细胞的相对表达量，然后比较KD细胞与ns感染细胞。同型匹配抗体作为阴性对照。

2．5．实时荧光定量PCR分析

使用rnaque - 4pcr (Invitrogen公司)，按照制造商的说明从乳腺癌细胞中分离总RNA。然后使用NanoDrop (NanoDrop技术)对RNA样本进行定量，并使用等浓度的RNA进行逆转录酶PCR。第一链cDNA合成和扩增使用qScript cDNA SuperMix (Quanta BioSciences)。采用7900HT快速实时PCR系统(Applied Biosystems)进行实时PCR。cDNA模板与SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems)相结合。引物序列从PrimerBank中获得，其中包含可在严格的等位基因不变扩增条件下用于qPCR的引物[33]．有关资料可浏览https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/．选用的特异性Sdc引物如下:Sdc 1正向引物5 -CTC tga caa CTT CTC CGG CGG CTC-3 ，Sdc 1反转:5 -TCT GGC agg act aca GCC tc-3 ；sdc2向前:5 -GCT CTG CCC cta aac TTC tgc-3 ，Sdc 2反转:5 -CTC TGC TGT GGT TTT GCT ct -3 ；sdc3向前:5 -CCC agc TCC cta GCT CTC tc-3 ，Sdc 3反转:5 -GCT GTC tca atg CCC gac t-3 ；Sdc 4向前:5 -GCT CTT CGT agg CGG agg -3 ，Sdc 4反转:5 -CCT cat CGT CTG gta GGG ct-3 ；和GAPDH向前:5 -TGG tga agc agg CGT CGG agg -3 ，GADPH逆转:5 -CGT caa agg TGG agg GGG TGT c-3 ．样品在95°C初始变性2分钟，然后在95°C 10秒和62°C 30秒循环40次。为了保证产品的均匀性，每次运行结束时都会生成熔化曲线。基因表达归一化为GAPDH。所有的反应都重复进行三次，每个实验至少重复三次。

2．6．固相

固相测定按所述进行[34]．多肽被涂在96孔板上(在孔上干燥过夜，100μ在H g / ml₂O);将孔在37°C封闭(3%热变性BSA) 1小时，然后将MDA-231细胞裂解液(2 mg/ml)置于3% BSA中4°C孵育过夜。对于肝素抑制，在与平板结合之前，在细胞裂解液中加入20 mg/ml的肝素。为了抑制胰蛋白酶，用胰蛋白酶(Invitrogen)处理细胞10分钟，然后溶解细胞。结合检测采用抗sdc抗体(0.2μg/ml，小鼠抗sdc 1 (B-A38, AbD Serotec);兔抗sdcs 2,3 (midi)和4 (Zymed/Thermo Fisher Scientific))，然后用山羊抗小鼠或兔子hrp标记的二抗(1:50 000稀释3%BSA-PBS)。经TMB溶液和1 M H孵育后，在450nm处检测信号₂所以₄．蛋白分析方面，MDA-231细胞膜被生物素化(62)，分离膜系以富集蛋白多糖，如所述(82)。6孔板用多肽包被，生物素化的MDA-231细胞膜用AG73或炒多肽孵育。将粘合的材料从培养皿中刮出，在4-12%的Bis-Tris凝胶上进行电泳。结合物转移到PVDF中，与链霉霉素-辣根过氧化物酶孵育，并用SuperSignal®West Dura Extended Duration Substrate (Pierce)检测反应蛋白。使用富士胶片las1000荧光图像分析仪“智能暗箱”(富士胶片医疗系统美国公司，斯坦福德，CT)在亚饱和水平下使用曝光时间检测化学发光。

2.7。肌动蛋白染色

AG73或一种炒过的肽在覆盖物上干燥一夜(100μ在H g / ml₂O)。用3%热变性BSA清洗和堵塞盖。用EDTA收集MDA-231细胞，计数并将其粘附在无血清的培养基上2小时。细胞在4%多聚甲醛(电子显微镜科学，Hatfield, PA)的PBS中固定20分钟。洗涤后，用0.1% Triton X-100 (Sigma-Aldrich)在PBS中渗透细胞5分钟并洗涤，然后用1:40稀释Alexa Fluor 647荧光标记phalloidin (Invitrogen)在1% BSA中染色检测肌动蛋白丝。然后用缓慢褪色抗褪色试剂(Invitrogen)清洗、固定细胞，将其倒置安装在载玻片上，并用LSM 510蔡司共聚焦显微镜(Carl Zeiss MicroImaging Inc.， Thornwood, NY)观察。使用ImageJ分析软件对丝状伪足进行定量分析。

3.结果与讨论

3．1.AG73在乳腺癌细胞上与Sdcs结合

AG73介导多种不同细胞类型的粘附，而打乱的AG73序列并不促进细胞粘附或具有其他生物学活性[9，30.，31]．为了确定乳腺癌细胞系是否与AG73结合并相互作用，如前所述进行了黏附试验[30.，31]．MDA-231乳腺癌细胞结合LM-111、AG73和重组LM- lg4 (LM- C端层粘连球蛋白域4的重组蛋白)α1 AG73序列所在的链(recl - lg4) [20.[])，而不是被打乱的肽或recl - lg4突变体(AG73位点突变;RKR-AAA [20.)(图1(一))．我们发现多种不同的乳腺细胞系与AG73结合，包括MCF10A、T47D、SUM1315和MDA-231(图)1 (b))．

为了评估细胞结合是通过蛋白多糖还是整合素，我们检测了肝素和EDTA对MDA-231细胞粘附这些多肽的影响。肝素完全抑制MDA-231细胞与AG73的结合，而EDTA没有作用(图)1(一))．这些结果表明MDA-231细胞通过膜相关的硫酸肝素蛋白聚糖与AG73相互作用，而不是通过整合素。此外，肝素和EDTA抑制了与LM-111和recl - lg4的结合，表明细胞通过蛋白聚糖和整合素与这些分子结合(图)1(一))．细胞通过蛋白聚糖和整合素与LM-111结合α6β1是公认的[35]，与recl - lg4的结合是通过Sdcs和整合素介导的α2β1在成纤维细胞中[20.]．

为了进一步研究AG73与MDA-231乳腺癌细胞的蛋白聚糖受体结合，我们进行了额外的实验。由于蛋白多糖含有硫酸肝素和硫酸软骨素侧链，这些糖胺聚糖(GAG)和其他的被测试了它们抑制MDA-231细胞附着到AG73的能力。MDA-231细胞对AG73的粘附作用显著( ）可被肝素、硫酸肝素和硫酸软骨素B阻断，但不被透明质酸、硫酸软骨素A或硫酸软骨素C阻断(图)1 (c))．肝素、硫酸肝素和硫酸软骨素B的连续稀释表明，抑制依从性50%所需的浓度遵循肝素(IC)的顺序₅₀, 0.8μg/ml)、硫酸肝素(IC₅₀, 6.6μg/ml)、硫酸软骨素B (IC₅₀, 22.4μg / ml)(图1 (d))．这些结果表明，糖胺聚糖的电荷对于防止ag73受体接触非常重要，因为肝素的负电荷最多，硫酸软骨素B的负电荷最少。此外,这些结果表明,硫酸乙酰肝素可能参与绑定AG73呕吐,因为它有一个更大的亲和力比硫酸软骨素AG73 b。以前的研究也表明,细胞结合AG73肝素可以抑制这些肽结合几种不同类型的蛋白聚糖,例如,AG73在人涎腺细胞和人真皮成纤维细胞上结合Sdcs 1和4，并在B16F10黑色素瘤细胞上结合软骨素-硫酸肝素蛋白多糖[22，30.]．10倍的AG73摩尔通路无法抑制乳腺癌细胞与基底膜提取物(BME)的粘附，BME含有LM-111、entactin、IV型胶原和硫酸肝素蛋白聚糖[36)(图1 (e))．而AG73可以抑制乳腺癌细胞对LM-111的粘附能力(图)1 (e))，表明细胞与LM-111的直接结合可能具有生理相关性。

Hozumi等人[20.]的研究表明，AG73序列对于蛋白多糖受体Sdcs 1、2和4与成纤维细胞上的recl - lg4的结合至关重要;然而，其他蛋白多糖，如glypican-1，不结合recl - lg4或AG73。因此，为了探究Sdcs在乳腺癌细胞中是否可以作为蛋白聚糖受体结合AG73，我们通过qPCR检测了Sdcs在MDA-231细胞中的表达情况。MDA-231乳腺癌细胞和其他乳腺癌细胞系如MCF7、T47D、SUM1315均表达四种Sdcs，即1-4(图1-4)2(一个))．因此，如前所述，Sdcs与AG73的结合使用固相分析进行了研究[34]．Sdcs 1和4与AG73结合(图2 (b))，但没有与杂乱的肽结合(数据未显示)，这种结合被肝素和胰蛋白酶预处理MDA-231细胞抑制，胰蛋白酶从细胞表面切割蛋白多糖[37，38)(图2 (b))．未检测到CD44或glypican-1(其他蛋白聚糖受体)与AG73或打乱的肽结合(数据未显示)。为了进一步表征AG73的受体，生物素化的MDA-231细胞膜与AG73或混合肽在固相实验中孵育。结合物的电泳和印迹显示AG73在>250、90和50 kDa处结合成分(图)2 (c))．这些分子量与观察到的Sdc受体的分子量一致[39，40]．这些数据表明，在乳腺癌细胞上AG73细胞表面受体可能的候选者是Sdcs。

利用shRNAmir在MDA-231乳腺癌细胞系中获得了Sdcs 1、2和4的敲低(KD)。Sdc的表达均成功降低了75%(图)3(一个)和3 (b))和消息(图3 (c))的水平。每一次击倒都被证实是特定的。一个家庭成员的沉默并不影响其他家庭成员的表达(图)3(一个)和3 (b))．在固相检测中，发现敲低Sdc(s) 1和/或4可抑制与AG73的结合(图)3.(d))，提示这些受体在ag73介导的细胞活动中很重要。Sdcs 1、2和4已被证明是非乳腺细胞(包括唾液腺细胞、成纤维细胞和黑色素瘤细胞)中AG73的结合伴侣[12，20.- - - - - -24]．我们的结果表明，AG73在乳腺癌细胞中与Sdcs 1和4结合。Sdcs 1和4在正常乳腺组织的上皮细胞和肌上皮基底外侧边缘表达[41]．在乳腺肿瘤的临床样本中，在基质和肿瘤细胞中都能发现Sdcs 1和4的染色[41- - - - - -43]．此外，高Sdc 1表达与三阴性和Her2+乳腺肿瘤相关，这是高转移亚型，是无病生存和总生存的负预测因子[41- - - - - -44]．这些研究表明Sdcs可能在乳腺癌的进展和转移中发挥作用。我们之前已经证明AG73增加了乳腺癌向骨骼的转移[14]．综上所述，我们的研究结果表明AG73和Sdcs之间的相互作用促进了乳腺癌转移。

3．2．AG73通过Sdcs 1、2和4影响乳腺癌细胞丝足的形成

丝状伪足在癌细胞迁移、侵袭和转移中起关键作用[45]．我们之前证明AG73增加了乳腺癌细胞中纤丝尖刺的形成，这类似于丝状伪足，而一种打乱的肽不会引起这些形态变化[14]．这些增加的丝状伪足也可以在与AG73结合的成纤维细胞中看到[31]．沉默Sdcs 1、2或4的表达显著减少了与AG73结合的MDA-231乳腺癌细胞上丝状伪足的长度和数量(图)4并补充图1)．小鼠Sdcs 1、2和4在沉默细胞中的表达可以挽救丝状根长度和数量的减少。此外，过表达Sdcs 1和2显著增加了细胞上丝状伪足的长度(图)4并补充图1)．这些数据表明，AG73与乳腺癌细胞上的Sdcs 1、2和4结合，并通过这些Sdcs介导丝状足的形成。虽然由于抗体识别的局限性，我们无法在固相检测中检测到sdc2，但我们仍然观察到它对丝状足形成的影响。之前的一项研究也报道了AG73、Sdcs和integrins在促进细胞粘附和扩散方面的协同关系，从而支持我们的研究结果[16]．我们在研究中观察到的丝状伪足的增加强调了AG73、Sdcs和癌症之间的可能联系，因为其他人已经表明，癌症患者中丝状伪足调节蛋白的表达与不良预后和低生存率相关[45]．此外，一项对乳腺癌患者丝状足基因表达的meta分析显示，丝状足诱导基因与乳腺癌高转移率之间存在联系[46]．总的来说，我们的研究结果表明，AG73和Sdcs之间的相互作用在驱动乳腺癌细胞丝状足的形成中发挥了关键作用。

4.结论

乳腺癌转移影响20-30%的患者，尚待完全了解[47]．为了转移，弥散的乳腺癌细胞必须与周围环境合作，绕过基底膜进入循环，转移到远处。在本研究中，我们专注于癌症进展的这一早期步骤，从而研究了乳腺癌细胞与基底膜中发现的层粘连蛋白肽AG73之间的相互作用。我们专注于AG73的受体，并确定硫酸肝素蛋白聚糖受体，Sdcs 1, 2和4，在各种乳腺癌细胞上表达，通过与AG73结合促进这种相互作用。我们认为这是第一个描述AG73和Sdcs在乳腺癌细胞中直接结合关系的报告。此外，我们发现AG73与Sdcs 1、2和4的结合促进了乳腺癌细胞(如MDA-231细胞系)丝状根的形成。乳腺癌细胞丝状伪足增多与肿瘤侵袭和转移有关[45，46]．综上所述，我们的发现证明了AG73和Sdcs 1、2和4在乳腺癌细胞上的一种之前未报道的联系，突出了癌细胞和肿瘤环境在介导癌症进展中独特的相互作用。

数据可用性

支持本研究结果的数据包括在文章和补充图中。

的利益冲突

没有利益冲突需要报告。

作者的贡献

Madhavi Puchalapalli和Liang Mu对这项研究做出了同样的贡献。

致谢

我们感谢Drs。Kentaro Hozumi和Yoshihiko Yamada为重组LG4和LG4突变体和他们的专家意见。这项工作得到了NCI K22CA116258-02和Lynn Sage癌症研究基金会以及芝加哥Zell基金会的资助，IL.成像工作在西北大学高级显微镜中心进行，由NCI CCSG P30 CA060553授予Robert H. Lurie综合癌症中心。

补充材料

补充图1:沉默Sdcs 1、2、4表达可降低MDA-231乳腺癌细胞丝状足的形成，wtSdc (WT)可挽救丝状足的形成。如图所示的量化包含有代表性的图像4．以未沉默shRNAmir (NS)和空载体(EV)感染的细胞作为对照。该EV与用于wtSdc表达的载体(pBABE)相同。（补充材料）

参考文献

1. E. Ioachim, A. Charchanti, E. Briasoulis等，“细胞外基质成分tenascin，纤连蛋白，IV型胶原蛋白和层粘连蛋白在乳腺癌中的免疫组化表达:它们的预后价值和在肿瘤侵袭和进展中的作用，”欧洲癌症杂志第38卷第2期18，页2362-2370,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
2. 郑文强，吕丽梅，谢丽萍，“组织蛋白酶D在乳腺癌中的表达与层粘连蛋白的相关性”，肿瘤杂志第88期4，页296-299,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
3. E. Ioachim, S. Kamina, M. Kontostolis, and N. J. Agnantis，“组织蛋白酶D在乳腺癌中与细胞外基质成分、类固醇受体状态和增殖指数相关的免疫组化表达，”菲尔绍档案，第431卷，第2期。5，页311 - 316,1997。视图:出版商的网站|谷歌学者
4. R. Albrechtsen, M. Nielsen, U. Wewer, E. Engvall和E. Ruoslahti，“通过层粘连蛋白免疫组化染色检测乳腺癌基底膜变化”，癌症研究， vol. 41, 12, Part 1, pp. 5076-5081, 1981。视图:谷歌学者
5. M. J. Bissell, A. Rizki, I. S. Mian，《组织结构:乳腺上皮功能的最终调节器》，《细胞生物学最新观点》，第15卷，第5期。6，第753-762页，2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
6. T. Gudjonsson, L. Ronnov-Jessen, R. Villadsen, F. Rank, M. J. Bissell，和O. W. Petersen，“正常和肿瘤来源的肌上皮细胞与乳腺管腔上皮细胞相互作用的极性和基底膜沉积的能力不同，”细胞科学杂志，第115卷，第1部分，39-50页，2002。视图:谷歌学者
7. K. Hozumi, F. Katagiri, M. Nomizu, H. K. Kleinman, J. E. Koblinski，“laminin -111衍生的多肽与癌症，”细胞粘附与迁移，第7卷，第5期1, pp. 150-159, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
8. C. F. Nascimento, a . S. de Siqueira, J. J. V. Pinheiro, V. M. Freitas, and R. G. Jaeger，“Laminin-111衍生的肽AG73和C16调节人腺样囊性癌细胞系侵袭性活性”，实验细胞研究第317期18，第2562-2572页，2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
9. W. H. Kim, M. Nomizu, S. Y. Song et al，”层粘连蛋白‐α1‐链序列Leu‐Gln‐Val‐Gln‐Leu‐Ser‐Ile‐Arg (LQVQLSIR)可增强小鼠黑色素瘤细胞转移。”国际癌症杂志第77期4、1998年。视图:出版商的网站|谷歌学者
10. S. Y. Song, M. Nomizu, Y. Yamada，和H. K. Kleinman，“层粘连蛋白‐1肽(LQVQLSIR)‐粘附选择B16‐F10黑色素瘤细胞形成肝转移”，国际癌症杂志，第71卷，第71期3，第436-441页，1997。视图:出版商的网站|谷歌学者
11. Y. Yoshida, K. Hosokawa, A. Dantes, F. Kotsuji, H. K. Kleinman, A. Amsterdam，“通过调节Mdm2和Bcl-2的表达，层粘稠蛋白在卵巢癌肿瘤生长和转移中的作用”，国际肿瘤学杂志第18卷第2期5，页913-921,2001视图:出版商的网站|谷歌学者
12. N. Suzuki, N. Ichikawa, S. Kasai等，“层粘连蛋白中的Syndecan结合位点α1链G域，”生物化学，第42卷，第2期43, pp. 12625-12633, 2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
13. A. S. Siqueira, L. N. Gama-de-Souza, M. V. C. Arnaud, J. J. V. Pinheiro, and R. G. Jaeger，“Laminin-derived peptide AG73通过syndecan-1调控人口腔鳞癌细胞的迁移、侵袭和蛋白酶活性β1整合素”,肿瘤生物学第31卷第1期1，页46-58,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
14. J. A. Engbring, R. Hossain, S. J. VanOsdol等人，“层粘连蛋白α1链衍生肽AG73可增加乳腺癌和黑色素瘤癌细胞中的纤维连接蛋白水平。”临床及实验转移，第25卷，第2期3，页241-252,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
15. M. Nomizu, W. H. Kim, K. Yamamura等人，“层粘连蛋白中细胞结合位点的识别α1链羧基端球状结构域，通过系统筛选合成肽生物化学杂志第270卷35，页20583-20590,1995。视图:出版商的网站|谷歌学者
16. K. Hozumi, T. Akizuki, Y. Yamada等人，“小鼠层粘连蛋白的细胞粘附肽筛选α1链G域，”生物化学和生物物理学档案，第503卷，第5期2，页213-222,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
17. M. Mochizuki, D. Philp, K. Hozumi等，“syndecan结合层粘蛋白肽AG73 (RKRLQVQLSIRT)的血管生成活性”，生物化学和生物物理学档案，第459卷，第2期。2，页249-255,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
18. “层粘胶蛋白活性肽/琼脂糖基质作为组织工程的多功能生物材料，”生物材料第33卷第3期16，页418 - 4125,2012。视图:出版商的网站|谷歌学者
19. Y. Yamada, K. Hozumi, F. Katagiri, Y. Kikkawa, M. Nomizu，“作为合成基膜的laminin -111衍生的多肽透明质酸水凝胶”，生物材料第34卷第3期28, pp. 6539-6547, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
20. K. Hozumi, N. Suzuki, P. K. Nielsen, M. Nomizu, Y. Yamada，“层粘连α1链LG4模块通过syndecans促进细胞附着，通过整合素促进细胞扩散α2β1,“生物化学杂志号，第281卷。43, pp. 32929-32940, 2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
21. M. P. Hoffman, J. a . Engbring, P. K. Nielsen等人，“糖胺聚糖的细胞类型特异性差异调节层粘连蛋白G结构域的肝素结合肽(RKRLQVQLSIRT)的生物活性α1链。”生物化学杂志第276卷第2期25，页22077 - 22085,2001。视图:出版商的网站|谷歌学者
22. J. a . Engbring, M. P. Hoffman, a . J. karand, and H. K. Kleinman，“层蛋白1上的转移促进位点的B16F10细胞受体是一种含硫酸肝素/硫酸软骨素的蛋白聚糖，”癌症研究第62期12，第3549-3554页，2002。视图:谷歌学者
23. L. N. Gama-de-Souza, E. cy雷诺- oliveira, V. M. Freitas et al.，“人唾液腺肿瘤细胞系的粘附和蛋白酶活性受层粘连蛋白来源的肽AG73, syndecan-1和β1整合素”,矩阵生物学第27卷第2期5，第402-419页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
24. K. Hozumi, K. Kobayashi, F. Katagiri, Y. Kikkawa, Y. Kadoya, M. Nomizu，“Syndecan-和整合素结合肽协同加速细胞粘附”，2月的信第584卷，第584期。15, pp. 3381-3385, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
25. 巴斯，摩根，汉弗莱斯，“辛迪加人摆脱了惰性分子的名声，”科学的信号，第2卷，第2期2009年第pe18条第64条。视图:出版商的网站|谷歌学者
26. C. C. Lopes, L. Toma, M. A. S. Pinhal et al.， " EJ-拉癌基因转染内皮细胞上调辛迪康-4的表达，下调硫酸肝素磺基转移酶和表酰基酶的表达。”Biochimie第88期10, pp. 1493-1504, 2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
27. E. Tkachenko, J. M. Rhodes，和M. Simons，《辛德肯人:信号街区的新孩子》，循环研究，第96卷，第2期5，页488 - 500,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
28. A. N. Alexopoulou, H. A. B. Multhaupt, J. R. Couchman，《伤口愈合、炎症和血管生物学中的辛迪加人》，国际生物化学和细胞生物学杂志第39卷第3期3，页505-528,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
29. M. R. Morgan, M. J. Humphries, and M. D. Bass，“整合素和辛德聚糖对细胞粘附的协同控制”，《自然评论分子细胞生物学》，第8卷，第2期12，页957-969,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
30. M. P. Hoffman, M. Nomizu, E. Roque等人，“Laminin-1和laminin-2 g结构域合成肽结合syndecan-1，参与人颌下腺细胞系的腺泡形成。”生物化学杂志，第273卷，第2期44，页28633-28641,1998。视图:出版商的网站|谷歌学者
31. N. Suzuki, H. Nakatsuka, M. Mochizuki等，“层粘连蛋白中同源环路区域的生物活动α链G领域。”生物化学杂志第278期46，页45697-45705,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
32. D. L. M. Beauvais和A. C. Rapraeger，《肿瘤细胞粘附和信号传导中的辛迪克人》，生殖生物学与内分泌学，第2卷，第2期1, p. 3, 2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
33. 王旭东，“基于基因表达分析的PCR引物数据库”，2012年第4期核酸的研究，第40卷，第5期。第1页，第2 - 3页，2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
34. M. L. Ponce, M. Nomizu，和H. K. Kleinman，“血管生成层粘连蛋白位点及其拮抗剂通过αvβ3和α5β1整合蛋白”,美国实验生物学学会联合会杂志，第15卷，第5期。8，页1389-1397,2001。视图:出版商的网站|谷歌学者
35. P. Ekblom, P. Lonai, J. F. Talts，《层蛋白1的表达和生物学作用》，矩阵生物学第22卷第2期1，第35-47页，2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
36. G. Benton, I. Arnaoutova, J. George, H. K. Kleinman, J. Koblinski，“Matrigel:从发现和ECM模拟到癌症研究的分析和模型，”先进的药物递送评论， vol. 79-80, pp. 3-18, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学者
37. K. J. Bame，“从中国仓鼠卵巢细胞的蛋白多糖中释放硫酸肝素糖胺多糖不需要核心蛋白的蛋白水解”，生物化学杂志第268期27、1996 - 19964页，1993。视图:谷歌学者
38. D. Heinegård和V. C. Hascall，“软骨蛋白聚糖的聚集III。从聚集物的胰蛋白酶消化物中分离出的蛋白质的特性生物化学杂志，第249卷，第2期。13，页4250-4256,1974。视图:谷歌学者
39. F. Granés, R. Garcı́a, R. P. Casaroli-Marano等，“Syndecan-2通过活性cdc42Hs诱导丝状伪足，”实验细胞研究，第248卷，第2期。2，第439-456页，1999。视图:出版商的网站|谷歌学者
40. C. Mundhenke, K. Meyer, S. Drew和A. Friedl，“在乳腺癌中，硫酸肝素蛋白多糖作为成纤维细胞生长因子-2受体结合的调节者”，美国病理学杂志号，第160卷。1，页185-194,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
41. F. Baba, K. Swartz, R. van Buren等人，“Syndecan-1和syndecan-4在雌激素受体阴性、高增生性乳腺癌亚型中过表达，”乳腺癌研究与治疗第98卷第1期1，页91-98,2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
42. M. Barbareschi, P. Maisonneuve, D. Aldovini等，“乳腺癌中syndecan-1高表达与侵袭性表型和较差的预后有关，”癌症第98卷第1期3，页474-483,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
43. M. Leivonen, J. Lundin, S. Nordling, K. von Boguslawski, C. Haglund，“乳腺癌中syndecan-1表达的预后价值”，肿瘤学，第67卷，第5期1，页11-18,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
44. T. L. Nguyen, W. E. Grizzle, K. Zhang, O. Hameed, G. P. Siegal, S. Wei，“在晚期乳腺癌中，Syndecan-1过表达与非管腔亚型和预后不良相关，”美国临床病理学杂志号，第140卷。4, pp. 468-474, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
45. G. Jacquemet, I. Paatero, A. F. Carisey等，“FiloQuant揭示了乳腺癌进展期间丝状伪足密度的增加，”《细胞生物学杂志》号，第216卷。10, pp. 3387-3403, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学者
46. A. Arjonen, R. Kaukonen, and J. Ivaska，“丝状伪足与癌细胞运动的黏附”，细胞粘附与迁移，第5卷，第5期。5, pp. 421-430, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学者
47. 美国癌症协会,2015-2016年乳腺癌事实和数据，美国癌症协会，亚特兰大，美国，2015。

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