协会TNF-857C>Ť，TNFRSF1A36A > G,TNFRSF1B676T > G希腊人群缺血性卒中多态性研究

抽象

背景。遗传因素在易感性开发缺血性中风的作用已经由先前的研究评估。目前研究的主要目标是确定任何可能的角色TNF-857C> T，TNFRSF1A36A> G，和TNFRSF1B676T > G卒中风险的多态性。材料和方法。研究人员对希腊西北部的173名首次完全由动脉粥样硬化病因引起的缺血性中风患者和179名健康无关的对照组进行了评估。结果。肿瘤坏死因子α-857 tt，TNFR136AA,TNFR2676TT与对照组相比，患者组的基因型显著增加(，OR = 2.47（1.26-4.84），， OR = 1.97(1.22-3.17)，且， OR = 2.2 (1.43-3.37)， resp.)此外,TNFR136A和TNFR2676T等位基因发现患者显著上升与对照组相比（，OR = 1.48（1.1-2），并，OR = 1.75（1.25-2.46），RESP）。结论。这些基因型和等位基因在患者组的高发病率表明，它们是潜在的诱发因素在研究希腊人口行程。需要大规模多中心对照研究来验证脑卒中易感这些多态性的影响。

1.简介

缺血性中风是一种多因素疾病，引起遗传和环境因素的相互作用，基于动脉粥样硬化和血栓形成动脉[1]。中枢神经系统(CNS)可以对包括缺血和动脉粥样硬化在内的各种损伤产生明确的炎症反应[2]。动脉粥样硬化有许多炎症介质，导致动脉粥样硬化形成、动脉粥样硬化损伤、斑块破裂，从而导致腔内血栓形成[2，3]。肿瘤坏死因子-(TNF-)参与炎症从开始到下调的每一个步骤，急性卒中和蛛网膜下腔出血患者脑脊液和血浆中TNF和其他细胞因子水平升高已被证实[4-6]。TNF通过作为生理衰减因子的两种细胞表面受体TNFRSF1A和TNFRSF1B发挥其生物学效应。

TNF基因启动子和可能影响功能或TNFRSF1和TNFRSF1B的表达多态性内部功能多态性已在各种免疫，炎性和神经变性病症[已研究7-14但是只有少数的遗传学研究集中在这些多态性与中风的关系上[15，16]。

根据该原理与遗传变异的个体有可能会是在缺血性中风的风险更大，我们分析的作用TNF-857C> T，TNFRSF1A36A“G,TNFRSF1B676T > G希腊西北部地区缺血性脑卒中患者的多态性，这是一个相当局限的地区，近期移民有限。

2.材料和方法

2.1。研究人群

病例符合招聘173年首次缺血性中风住院治疗的病人在中风参考中心西北希腊的18个月,从2008年5月到2009年11月,根据世界卫生组织的定义,定义和确认最近的大脑成像显示脑梗死的临床表现。作为对照组，从同一医疗中心招募了179名年龄匹配不相关的非家庭来访者。无卒中状态(QVSFS)调查问卷确定的对照组无缺血性脑血管事件史[17和正常的神经检查。该研究方案符合《赫尔辛基宣言》，并得到了机构伦理委员会的批准。所有符合条件的患者和对照组均签署知情同意书。

在所有科目获得详细的病史并进行全面体检。人口统计数据，生化指标，并建立了中风的危险因素进行记录。一个rterial hypertension was documented when systolic blood pressure (BP) was ≥140 mmHg or diastolic BP ≥ 90 mmHg or when individuals were receiving antihypertensive drugs for previously established hypertension. Smoking, active or ceased within the last 3 months, was considered as current. Diabetes mellitus was considered as present if fasting glucose was >126 mg/dl or the individual was treated with antidiabetic medication. Dyslipidemia was defined as fasting cholesterol >220 mg/dl or the individual was on current treatment with specific antilipidemic agents. Further evaluation of the patients included triplex ultrasound imaging or CT angiography of extracranial or/and intracranial arteries, electrocardiogram (ECG), echocardiography (transthoracic or transesophageal), and clinical/laboratory assessment to rule out systemic thrombotic and autoimmune disorders.

招聘的研究是根据吐司定义和执行包括患者腔隙(小,皮层下,hypodense病变直径小于15毫米和相应病变临床腔隙综合征)患者和大型动脉动脉粥样硬化(hypodense病变直径> 15毫米和适当的颅内动脉狭窄> 50%)(18]。

心源性卒中被排除在外，因为它们可以从不同的病因（例如，心房纤维性颤动）的结果。发生在全身条件，如或不明原因的凝血病或免疫性疾病过程中笔划也被排除，以保证笔划的仅动脉粥样硬化的病因。

2.2。遗传分析

按照标准的盐提取程序从外周血淋巴细胞中提取基因组DNA。多态性TNF-857C>T (rs1799724)、TNFRSF1A36A>G (rs767455)、TNFRSF1B676T>G (rs1061622)使用以下引物对放大:36 f: 5“呕吐CCC AAA TGG GGG AGT GAG AGG-3”36 r: 5“ACC gg CCC GGG CAG GAG AG-3’,676 f: 5’行动CTC CTA TGC CTG CT-3移行细胞癌的676 r: 5“ttc TGG AGT TGG CTG CGT GT-3’,和857 f: 5“亚美大陆煤层气有限公司TCG AGT ATG GGG ACC CCC CGT TAA-3”857 r: 5“CCC CAG TGT GTG GCC ATA TCT TCT条t - 3”。随后，分别使用限制性内切酶MspA1 I、Nla III和Hinc II进行限制性分析。每个基因型的样本分别以阳性和阴性作为对照和空白进行重复。

2.3。统计分析

用卡方检验检验基因型频率是否符合哈迪-温伯格平衡期望。二进制数据用百分比表示，连续数据用均数±标准差(SD)表示。我们计算了优势比和95%置信区间(CIs)来比较等位基因和基因型分布。检验均为双侧，显著性水平为95% ()。使用StatXact 3.0统计软件包(Cytel Inc.， Cambridge, Mass, USA)进行统计分析。此外，一项权力分析显示，每组(病例和对照组)至少应招募302名受试者TNF-857C>Ť， 272个科目TNFRSF1A36A > G,每组85名受试者进行TNFRSF1B676T > G多态性，如果需要80%的研究功率，显著性水平为0.05。

3.结果

173例患者中，男性113例(65%)，女性60例(35%)，平均年龄58.6岁(SD±7.2岁)。179例对照组中，男性123例(69%)，女性56例(31%)，平均年龄57.1岁(SD±5.9岁)。患者和对照组人口统计资料见表1。在卒中亚型方面，84例有腔隙性脑梗塞，而89例有大血管中风。

在健康对照中，三种多态性的基因型频率均处于哈迪-温伯格平衡。患者TNFRSF1A和TNFRSF1B多态性的基因型频率处于Hardy-Weinberg平衡。关于TNF-857C>Ť多态分布，患病率高TT病人的基因型(，OR = 2.47（1.26-4.84））揭示，意味着TT尽管对照组处于平衡状态，但仍选择了导致哈迪-温伯格不平衡的患者。等位基因频率差异无统计学意义，进一步建立假设TT选择患者。

TNF、TNFRSF1A、TNFRSF1B基因型及等位基因的分布及频率见表2。关于TNFRSF1A36A > G，在携带的患者之间观察到统计学上的显著差异AA基因型及对照(， OR = 1.97(1.22-3.17))。等位基因频率也有显著差异，即，一个和G在患者与48.3％，58.1％，对照组为一个患者中有41.9%的等位基因对照组中有51.7%G等位基因（， OR = 1.48(1.1-2))。为TNFRSF1B676T > G中，TT基因型在中风组比对照组中更常见，分别为61.9%和42.5% (，OR = 2.2（1.43-3.37））。类似地，等位基因频率之间具有统计学差异显著与78.3％的患者对67.3％在控制用于Ť相反地，G等位基因的患者占21.7%对照者占32.7% (， OR = 1.75(1.25-2.46))(见表2)公布。

在卒中亚型而言，当腔隙性卒中组中的基因型和等位基因分布相比，大动脉粥样硬化笔划组亚组分析并未披露任何统计学显著结果（数据未显示）。

4。讨论

在本研究中，我们调查了两者之间的联系肿瘤坏死因子- 857 c > T, TNFRSF1A36A > G,和TNFRSF1B676T > G缺血性卒中的多态性，理下，作为促炎细胞因子在脑缺血中发挥重要作用[4，五，19，20.，某些TNF和TNF受体多态性可能与卒中的发生有关。

位于染色体上的基因p21 6编码TNF-α。该TNF-857C>Ť多态性是一种与转录因子八聚体转录因子-1 (OCT-1)结合的功能多态性[7]。没有调研组，对中风的工作，一直专注于这一多态性。大多数群体在工作过TNF-308G>甲与Pereira等人的多态性表明TNF-308G>甲多态性可能在缺血性中风中发挥作用[21表明年轻的欧洲人的祖先携带一个等位基因(AA + GA与GG)在统计上显著增加了中风的风险，而与G等位基因（OR = 2.04，)。在意大利年轻中风患者队列中，一个等位基因的−308 g >多态性对年轻脑卒中患者缺血性脑卒中易感性具有独立影响AA + GA中风组基因型频率分别为25.2% + 1.7%，而对照组为15% + 0.6%。15]。不同的研究结果表明，该多态性在镰状细胞性贫血患儿脑卒中中具有重要的临床意义[22，但显示出保护作用TNF（-308）甲等位基因(OR = 0.39，)，而有18%的承运人一个中风组有38%的等位基因而对照组有38%的等位基因。

我们小组最近进行的一项研究显示，在希腊西北部的健康人群中，10),TNF-308G>甲多态性是不是在Hardy-Weinberg平衡，而我们的研究旨在对我国人口的具体特点，以排除这种多态性与重点TNF-857C>Ť多态性。我们的研究表明，另一种功能多态性在脑卒中发生中起作用，隐性基因型在缺血性脑卒中患者中更为常见。

TNFRSF1A由位于染色体上的一个基因编码12 p13.2。该TNFRSF1A36A > G多态性是一种无声的密码子的突变12,它虽然没有明显的功能对蛋白质结构的影响,许多研究都试图找到任何一基因多态性与特定的炎性疾病表现和对治疗的反应,如多发性硬化症(MS)、克罗恩病、类风湿性关节炎(RA) (10，11，14]。

TNFRSF1B由位于染色体的基因编码1个p36.3与TNF比TNFRSF1在这种受体具有更高的亲和力，和多态性影响TNF和涉及炎症途径的结合;TNFRSF1B多态性与慢性炎性疾病例如RA和系统性红斑狼疮的关联已经报道了10，12]。

我们的结果表明，对于许多炎症性疾病，研究最多的TNFRSF1A和TNFRSF1B的多态性也与中风有关AATNFRSF1A基因型和TTTNFRSF1B在中风患者中更常见这同样适用于一个与TNFSF1A等位基因ŤTNFSF1B的等位基因。

本研究的局限性包括患者的数量相对较少和患者的年龄肿瘤坏死因子- 857 tt哈迪 - 温伯格不平衡在我们的案件。由于少数案件的结果我们研究的动力关于限制TNF-857C>Ť和TNFRSF1A36A > G多态性。关于TNFRSF1B676T > G多态、功率分析证实了声功率这一结果。本研究的优势在于研究对象只有动脉粥样硬化的病因，以及所有缺血性卒中患者在一定纳入标准下的前瞻性设计，以及显著的结果TNFRSF1B676T > G多态性。

5.结论

结论是，我们的结果表明可能与−857 c > TTNF与中风的多态性和赞成的TNFRSF1A和TNFRSF1B对缺血性中风倾向的研究最多多态性的直接，缴费效应，TNFRSF1B676T > G多态性表示最接近的关联。我们的假设是，特定的多态性参与炎症反应的过程，因此，他们推动外和颅内动脉粥样硬化和中风之后。该基因同质人口允许关于我国人口假设的提取，但没有进一步的结论应该没有大规模的多中心研究和更广泛的结果来达到。在行程的任何角色和TNFα受体基因是远离这些基因是对脑卒中的遗传学进一步研究的最佳候选正在建立。

资金

本文是03ED研究项目的一部分，该项目在人力研究人力加强计划的框架内实施，由国家和社区基金共同资助(25%来自希腊发展部-研究和技术总秘书处，75%来自欧盟社会基金)。

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