因子七激活蛋白酶多态性(G534E)与中风和死亡风险增加相关

摘要

介绍.FSAP Marburg I多态性（1704G > A） 降低FSAP活性，与人类颈动脉狭窄的晚期并发症有关。因此，本研究考察了Marburg I多态性和紧密连锁的Marburg II多态性（1280G）的影响 > C） 关于两个大型独立研究人群的各种心血管结局。方法.编码FSAP的HABP2基因中的两个Marburg多态性在有血管疾病风险的大量老年患者中进行了基因分型（PROSPER研究，），并与经皮冠状动脉介入治疗的研究人群（在性别研究，）.结果．在PROSPER研究中，马尔堡I型多态性与临床卒中风险(HR: 1.60, 95% CI: 1.13-2.28)和全因死亡率(HR: 1.33, 95% CI: 1.04-1.71)增加相关。在性别研究中，这种变异的携带者发生再狭窄的风险似乎更低(HR: 0.59, 95% CI: 0.34-1.01)。马尔堡II型多态性结果相似，但较弱。结论．马尔堡I型携带者中风风险的增加可能是由于平滑肌细胞和基质金属蛋白酶的不同作用，从而影响斑块的稳定性。对再狭窄可能的保护作用可能是参与止血和基质重塑的酵素活化减少的结果。

1.介绍

因子7激活蛋白酶(FSAP)是一种血浆丝氨酸蛋白酶，已知可激活因子7 (FVII) [1]及促丙氨酸激酶(pro-uPA) [2]．尽管有这些作用，但尚不清楚内源性FSAP在止血中是否有相关作用。编码FSAP的HABP2基因的Marburg I (1704G > A)多态性导致该蛋白蛋白酶结构域的氨基酸变化，当它与前upa激活减少而FVII激活不变时，可能导致血栓形成表型[3.]．尽管其与静脉血栓形成的可能联系仍有争议[4- - - - - -6，马尔堡I型变异体是冠心病的一个危险因素[7及颈动脉狭窄的晚期并发症[8]Marburg变异与晚期动脉粥样硬化（管腔狭窄>40%）相关，但与早期动脉粥样硬化（新斑块的发生）无关[8]．

此外，FSAP被认为是平滑肌细胞增殖和迁移的有效抑制剂[9]，特别是通过其切割血小板衍生生长因子- bb (PDGF-BB)的能力。在动物模型中，FSAP Marburg I变体也降低了对PDGF-BB的蛋白溶解活性，与抑制新生内膜形成的能力降低有关[10]．这可能是另一种机制，通过这种机制，马尔堡I型多态性可能在颈动脉狭窄和心血管疾病的许多其他方面发挥作用[11]．

因此，我们研究了这种多态性对临床卒中、冠状动脉事件、血管死亡率和全因死亡率的影响(PROSPER研究，)和经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后的临床再狭窄(性别研究，）.尽管与酶活性的改变无关，我们也研究了Marburg II变体(1280G > C)，这是一种紧密联系的多态性，导致了FSAP蛋白酶结构域的氨基酸变化。

2.方法

2.1。研究设计和PROSPER研究跟进

PROSPER协议在其他地方有更详细的描述[12]．PROSPER是一项前瞻性多中心随机安慰剂对照试验，评估普伐他汀治疗是否降低老年人发生主要血管事件的风险。1997年12月至1999年5月，我们在苏格兰(格拉斯哥)、爱尔兰(科克)和荷兰(莱顿)筛选和登记受试者。招募年龄在70-82岁之间的男性和女性，前提是他们有血管疾病或因吸烟、高血压或糖尿病而增加的血管疾病风险。共有5804名受试者被随机分配给普伐他汀或安慰剂。在这项遗传亚研究中，我们评估了预定终点、全因死亡率、血管死亡率、致命或非致命冠状动脉事件和致命或非致命临床中风的次级终点。中位随访时间为3.3年(四分位间距0.5年)，604例(10.4%)患者在研究期间死亡[13]．

2.2. 研究设计和性别研究的后续行动

本研究样本已在前面描述过[14]．简而言之，再狭窄基因决定因素项目(GENDER)是一项多中心随访研究，旨在研究各种基因多态性与临床再狭窄之间的关系。性别研究的整体纳入期由1999年3月至2001年6月。在荷兰13个介入心脏病转诊中心中的4个，共有3104名符合纳入性别研究的患者通过PCI成功治疗了稳定性心绞痛、非st段抬高急性冠脉综合征或无症状缺血。排除了治疗急性ST段抬高型心肌梗死的患者。经验丰富的术者采用桡动脉或股动脉入路，进行标准的血管成形术，包括或不包括支架置入。在研究中，没有使用药物洗脱支架。除发生冠状动脉事件外，随访至少持续9个月。主要终点是临床再狭窄，定义为目标血管重建术(TVR)，无论是通过PCI还是冠状动脉旁路移植术(CABG)。无症状再狭窄的受试者不包括在内，也没有常规的血管造影。 Median followup duration was 9.6 (interquartile range 3.9) months and 304 (9.8%) patients underwent TVR during followup.

对于这两项研究，所有终点均由独立的临床事件委员会裁决。方案符合赫尔辛基宣言的标准，并由各参与机构的医学伦理委员会批准。所有参与患者均获得书面知情同意书。

2．3.基因分型

基线时用EDTA管采集血液，按照标准程序提取基因组DNA。利用Sequenom Massarray基因分型平台(rs7080536和rs11575688)测定了Marburg I (1704G > A)和II (1280G > C)多态性。使用分析设计软件(Sequenom Inc.)设计了多重分析。作为质量控制，5-10%的样本重复进行基因分型;没有观察到不一致。对来自低质量和高质量等位基因的信号进行了聚类分析。两名独立研究人员进行了评分。基因型4.0 (Sequenom Inc.)产生的分歧或模糊定位的点被排除在结果之外。

２.４.复制

我们在鹿特丹研究中对中风全基因组关联研究中的硅复制进行了研究[15]．使用Illumina 550 K串珠芯片对5763名研究参与者进行了基因分型，随后对250万个HapMap II单核苷酸多态性进行了分析。马尔堡I多态性不存在，也没有任何代理的马尔堡I多态性．输入数据集存在Marburg II多态性，输入质量为> .8。在367例缺血性中风病例中评估了这种SNP与中风发作之间的关联。

2．5．统计分析

等位基因频率通过基因计数测定。卡方检验用于在与Hardy-Weinberg平衡的SNP位点来测试基因型频率的一致性。风险比（HR）的95％置信区间（CI）通过使用Cox比例风险模型来计算。所有的分析进行了调整性别和年龄。与PROSPER数据的分析都还调​​整了普伐他汀使用和国家。在性别研究中，多态性包括在包含对再狭窄的临床和程序的危险因素，如糖尿病，支架，和完全闭塞一个多变量模型。复制与调整性别和年龄逻辑回归模型进行评估。该SPSS软件（版本17.0.1，SPSS公司，芝加哥，伊利诺伊州）进行所有的统计分析。

3.结果

3．1.发展研究

表格1介绍患者特征和次要等位基因频率。Marburg I型和II型多态性的基因分型成功率分别为98%和97%，与Hardy-Weinberg平衡无显著差异。

采用Cox比例风险模型，包括性别、年龄、普伐他汀使用情况和国家等变量，发现马尔堡I型多态性与临床卒中之间存在显著相关性。数字1表明杂合子()及纯合子(）中，在用于临床行程（HR增加的风险：1.6，95％CI：1.13-2.28，)，与野生型组相比(）.此外，携带一个或两个变异副本的患者的全因死亡率显著更高(HR: 1.33, 95% CI: 1.04-1.71，）.死亡率的增加主要是由于血管死亡率的增加(HR: 1.37, 95% CI: 0.96-1.97，)，而血管死亡率主要由中风死亡决定。马尔堡I型多态性似乎没有影响冠状动脉事件的风险(HR: 0.98, 95% CI: 0.75-1.29)。对传统危险因素(高血压、糖尿病、吸烟和胆固醇水平)的额外调整没有改变结果(HR: 1.63, 95% CI: 1.14-2.31，）.

由于其位于同一编码序列中，且与Marburg I多态性相近，我们还提供了Marburg II多态性的数据，该数据显示了对死亡率的显著影响（图1）2)观察到的这种多态性的类似趋势可能是马尔堡变异体之间高度连锁不平衡的结果。连锁不平衡系数为0.79，62%的Marburg II携带者也带有Marburg I等位基因。由于Marburg II多态性等位基因频率较低，只有234个杂合子和4个纯合子具有变异等位基因。较大的置信区间确实表明，这些结果不如马尔堡I研究结果可靠。

最后，我们对与临床中风相关的马尔堡I型和马尔堡II型等位基因携带者与野生型等位基因携带者进行了分析。同时携带两种变异等位基因的受试者发生临床中风的风险比为1.60 (95% CI: 0.87-2.94);然而，由于人数较少，这并不重要。

3．2.性别研究

表格1呈现的患者特征和次要等位基因频率。基因分型的成功率分别为95％，两者的多态性，并有来自Hardy-Weinberg平衡没有显著偏差。

与PROSPER研究的结果相反，在GENDER研究中，马尔堡I多态性(变异等位基因有208个杂合子和5个纯合子)倾向于降低临床再狭窄的风险(图)1)， (hr: 0.59, 95%可信区间:0.34-1.02，).保护作用接近显著水平。马尔堡II型变异携带者的TVR风险略有降低，但无显著性差异（图1）2)在性别人群中，67名患者同时携带Marburg I和II风险等位基因，占所有Marburg II携带者的63%（105个杂合子和1个纯合子）。

3．3.复制

马尔堡II多态性显示，5763个科目鹿特丹研究的临床中风的风险增加。变异等位基因携带者有1.4倍提高临床中风的风险比野生型等位基因携带者（β：0.38，SE：0.23，）.

4.讨论

我们的数据表明，马尔堡我多态性，这导致更少的FSAP活动，增加中风的风险和死亡率。在死亡的马尔堡我相应增加，主要是由于致命性中风的风险增加。出人意料的是，这种变体的携带者似乎在发展中再狭窄的风险较低。临床中风的马尔堡II多态性的影响在鹿特丹研究队列被复制。

虽然FSAP最初被认为是因子VII和prorokinase (pro-uPA)的潜在激活物，但其在止血中的作用尚不清楚。内源性FSAP在血管内水平较低，尚未明确显示其影响凝血或纤溶[11]．此外，马尔堡I型多态性似乎并不影响静脉血栓形成的风险[4，16]．然而，FSAP可切割PDGF-BB，并已被证明可抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移在体外［9),在活的有机体内［10]．在马尔堡载体中，FSAP的活性较低，因此可能是动脉粥样硬化和再狭窄的危险因素，这些过程是由血管平滑肌细胞增殖决定的。

一项研究显示，在颈动脉中，马尔堡I型多态性与晚期动脉粥样硬化发生有关，表明FSAP可能在人类动脉粥样硬化中发挥作用[8]．尽管个案中带菌者的数目较低()及控制()，他们的发现表明Marburg I在颈动脉斑块形成中的作用。另一项研究调查了Marburg I对冠心病的影响，发现在整个人群中没有显著影响，但观察到Marburg I变异与胆固醇和甘油三酯水平升高之间的风险交互作用[7]．该研究的主要终点是心肌梗死和需要PCI的复合。

与这些研究一致的是，我们还发现，在所有参加PROSPER研究的患者中，马尔堡I型与心肌梗死没有关联，但我们确实发现了与脑卒中的显著关联，而脑卒中与颈动脉斑块形成相关。在马尔堡I型携带者中观察到的中风风险增加可能是平滑肌细胞过度增殖的结果，这是由于马尔堡I- fsap对PDGF-BB的蛋白水解活性降低。不幸的是，在PROSPER研究中，我们没有颈动脉粥样硬化的测量数据来得出更明确的结论。

马尔堡我的临床再狭窄稳定型心绞痛治疗的患者可能的保护作用是难以解释的。尽管动脉粥样硬化和再狭窄之间的一些相似性，如炎症和平滑肌细胞增殖的参与，存在这些方法之间的重要机理的差异。在动脉粥样硬化，其开发部分地响应于升高的脂蛋白水平和香烟烟雾相反，再狭窄过程是不循环脂质和吸烟特别敏感甚至似乎对再狭窄的风险降低[14]．因此，基因危险因素对PCI术后中风和临床再狭窄有相反的影响是不太可能的。

然而，与WT-FSAP相比，Marburg I-FSAP在再狭窄动物模型中预防新生内膜形成的效果较差[10]．基于这些发现，马尔堡I型多态性有望增加人类再狭窄的风险。尽管在性别研究中观察到的保护效果(边缘)不显著，但有强烈的保护趋势。矛盾的结果不仅与实验对象(小鼠与人类)或干预部位(股动脉与冠状动脉)有关，还可能是马尔堡i - fsap蛋白的确切位置和浓度的差异，高浓度局部应用于小鼠模型损伤的动脉。此外，FSAP在许多已知的重要的血管重建过程中发挥作用。最近研究表明，FSAP可激活基质金属蛋白酶MMP2和MMP9(明胶酶)[17，这在基质重塑中很重要。FSAP在血管重建和卒中发病机制中的确切作用尚需进一步研究。

Marburg II多态性也位于FSAP的蛋白酶结构域，没有已知的功能含义，也与催化活性的改变无关。

由于其低等位基因频率(2%)，马尔堡II的发现不太可靠。在该多态性中观察到的类似但弱得多的趋势可能是与马尔堡I型变异的连锁不平衡的结果。大置信区间表明，观察到的与血管死亡率的显著相关性可能是偶然发生的，这可能比马尔堡I对血管死亡率的影响略强。

在3.3年的随访中，PROSPER人群中有263个卒中终点。不幸的是，我们没有缺血性中风和出血性中风的数据。在目前的研究中，两种类型的卒中合并为一个临床终点。因为我们从以前对老年人的研究中知道，大约80%的中风可归因于缺血性事件[18，19，马尔堡I型多态性与临床中风之间的关联可能是由多态性与缺血性中风之间的关联驱动的。如果多态性和出血性中风之间没有关联，那么我们发现的关联是对缺血性中风的真正相对风险的低估。

总之，我们已经证明Marburg I多态性携带者临床卒中和卒中相关死亡率的风险增加。此外，在Marburg I携带者中观察到临床再狭窄风险降低的强烈趋势。由于Marburg I-FSAP降低了对PDGF-BB的蛋白水解活性，因此roke风险可能是平滑肌细胞过度增殖的结果。

PROSPER研究小组

苏格兰- j。Shepherd, C. J. Packard, A. Gaw，(北格拉斯哥大学病理生物化学系)，P. W. Macfarlane, D. J. Stott，(格拉斯哥大学心血管和医学科学部)，I. Ford，(格拉斯哥大学罗伯逊生物统计中心);爱尔兰-M.B.Murphy，B.M.Buckley，（科克大学学院药理学和治疗学系），I.J.Perry，（科克大学学院流行病学和公共卫生系），M.Hyland，C.Twomey，（科克大学医院老年医学系），B.J.Sweeney（科克大学医院神经病学系）；荷兰-S。Trompet, G. J. Blauw, A. J. M. de Craen, R. G. J. Westendorp, (Section of Gerontology and Geriatrics, Leiden University Medical Center), E. L. E. M. Bollen, (Department of Neurology, Leiden University Medical Center), J. W. Jukema, (Department of Cardiology, Leiden University Medical Center).

缩写

繁荣:	普拉伐他汀在高危老年人中的前瞻性研究
性别项目：	再狭窄的遗传决定因素项目
人力资源:	风险比
或者:	优势比
置信区间:	置信区间
一种总线标准:	经皮冠状动脉介入
介入治疗:	冠状动脉旁路移植术
TVR:	靶血管血运重建术。

致谢

作者感谢丹尼斯·克雷默和埃卡Suchiman，从莱顿大学医学中心分子流行病学科，他们用的Sequenom的MassARRAY基因型分析技术专家协助。这项研究是由格兰特99.210来自荷兰心脏基金会，荷兰的校际心脏病研究所（ICIN），从该中心医疗系统生物学（CMSB）的资助，由荷兰基因组计划批准卓越中心的资助/荷兰科学研究组织（NWO），以及由欧洲委员会第七框架计划（批准223004）。该资助者在研究设计，数据收集和分析，决定发表或手稿的准备没有任何作用。斯特拉Trompet和杜威·庞斯都同样这篇文章作出了贡献。

工具书类

1. J. Römisch, A. Feußner, S. Vermöhlen, and H. A. Stöhr， " A protease isolated from human plasma activation factor vii independent of tissue factor， "凝血和纤溶，第10卷，第5期。8，第471-479页，1999。视图:谷歌学者
2. J. Römisch, S. Vermöhlen, A. Feussner，和H. A. Stöhr，“FVII激活蛋白酶裂解单链纤溶酶原激活物”，止血，第29卷，第2期5，页292-299,2000。视图:谷歌学者
3. J. Roemisch，A. Feussner，C. Nerlich，H. A. STOEHR和T.韦默，“频繁马尔堡我多态性损害尿激酶原激活因子VII的效力激活蛋白酶（FSAP），”凝血和纤溶，卷。13，不。5，第433-441，2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
4. T. Gulesserian, G. Hron, G. Endler, S. Eichinger, O. Wagner, P. A. kyle，“因子viii激活蛋白酶的马尔堡I多态性与复发性静脉血栓栓塞的风险”，血栓和止血法，第95卷，第1期，第65-67页，2006年。视图:出版商的网站|谷歌学者
5. B.霍普，F. Tolou，H.瑞克，H.基塞韦特，T. DORNER，和A.萨拉马，“因子VII-活化蛋白酶的马尔堡我多态性与特发性静脉血栓栓塞相关联，”血，第105卷，第4期，第1549-15512005页。视图:出版商的网站|谷歌学者
6. B. Hoppe, F. Tolou, T. Döner, H. Kiesewetter，和a . Salama，“与影响静脉和动脉血栓栓塞的易感性有关的基因多态性:在健康德国人口中的频率分布，”血栓和止血法，第96卷，第2期4，第465-470页，2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
7. H. Ireland, G. J. Miller, K. E. Webb, J. A. Cooper, and S. E. Humphries，“因子VII激活蛋白酶G511E(马尔堡)变异和心血管风险”，血栓和止血法，卷。92，没有。5，第986-992，2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
8. J. Willeit, S. Kiechl, T. Weimer等，“因子viii激活蛋白酶的马尔堡I多态性:颈动脉狭窄的一个重要风险预测因子，”循环，第107卷，第2期5，页667 - 670,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
9. C.Kannemeier、N.Al Fakhri、K.T.Preissner和S.M.Kanse，“因子VII激活蛋白酶（FSAP）抑制生长因子介导的细胞增殖和血管平滑肌细胞的迁移，”美国实验生物学学会联合会杂志，第18卷，第6期，第728-730页，2004年。视图:谷歌学者
10. D. Sedding, J. M. Daniel, L. Muhl等，“编码因子viii激活蛋白酶的基因G534E多态性与心血管风险相关，因为新内膜形成增加。”实验医学杂志第203卷第2期13，第2801-2807页，2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
11. S. M. Kanse, M. Parahuleva, L. Muhl, B. Kemkes-Matthes, D. Sedding, and K. T. Preissner，“因子vii激活蛋白酶(FSAP):血管功能和在动脉粥样硬化中的作用”，血栓和止血法，第99卷，第5期。2，页286 - 28,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
12. J. Shepherd, G. J. Blauw, M. B. Murphy等，“普拉伐他汀在老年危险人群中的前瞻性研究设计(PROSPER)”，美国心脏病学杂志(第84卷)10，页1192-1197,1999。视图:出版商的网站|谷歌学者
13. J. Shepherd, G. J. Blauw, M. B. Murphy等，“普拉伐他汀在有血管疾病风险的老年人中的作用(PROSPER):一项随机对照试验，”《柳叶刀》，第360卷934，页1623-1630,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
14. W. R. P. Agema, P. S. Monraats, A. H. Zwinderman等，“目前在荷兰的PTCA实践和临床结果:药物洗脱前支架时代的现实世界，”欧洲心脏杂志，第25卷，第2期13，页1163-1170,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
15. M. A. Ikram, S. Seshadri, J. C. Bis等人，“中风的全基因组关联研究”，新英格兰医学杂志，第360卷17，第1718至1728年，2009年。视图:出版商的网站|谷歌学者
16. R.范Minkelen，M. C. H.德维瑟，H.L。Vos等人，“因子的马尔堡我多态性VII-活化蛋白酶不与静脉血栓形成有关，”血第105卷第1期12、第2 - 3页，2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
17. M. S. Parahuleva，S.M。Kanse，B.帕尔维兹等人，“因子七活化蛋白酶（FSAP）在人单核细胞和在不稳定型冠状动脉粥样硬化斑块的积累表达，”动脉粥样硬化第196卷第1期1，页164-171,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
18. C. M. Melcon和M. O. Melcon，《阿根廷社区中风患病率》，神经流行病学，第27卷，第2期，第81-88页，2006年。视图:出版商的网站|谷歌学者
19. E. Sagui, P. S. M'Baye, C. Dubecq等人，“塞内加尔达喀尔的缺血性和出血性中风:一项基于医院的研究，”中风第36卷第2期9，页1844-1847,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者

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