文摘

调查的抗氧化活性和抗菌活性Vernonia cumingianaBenth,在这项研究中,分光光度法分析是用来确定体外抗氧化和抗菌活性指数,包括1,1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力,旨在了解其药效学组件。结果表明,不同的组件提取物在体外高DPPH的清除能力,并且清除率最高的0.60 mg·毫升氯仿提取的分支⁻¹乙酸乙烯酯0.10 mg·毫升⁻¹,0石油醚提取0.90 mg·毫升⁻¹;最大限度的清除DPPH••哦,O^{2 -}•为104.71%,99.04%,93.05%,0.90毫克毫升⁻¹;95%乙醇提取物有抑制作用大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,和葡萄球菌epidermidis表明它具有良好的抗炎活性。

1。介绍

自由基是不稳定和高活性的原子/组和未配对电子。会导致膜损伤、心脏并发症,衰老和癌症;抗氧化剂可以保护自由基造成的损害(1]。天然抗氧化剂能够有效地提高药物的稳定性,食物和营养,增加抗炎,抗过敏药,和人体的抗癌潜力;另一方面,植物酚类含量高是强大的抗氧化剂的良好来源2]。

Vernonia cumingianaBenth。属的植物吗Vernonia菊科植物管状的花亚科。Vernonia也被称为Jingfenghong Guoshanlong,Vernonia tenuiflora等等。这是广泛分布在中国,主要集中在云南、四川、贵州,西南部和西部广西。它生长在山坡上,灌木,稀疏的森林或森林边缘,和藤蔓。有超过1000种的植物属,其中许多可供药用,有12种药用植物在中国。目前,有很多的化学成分和生物活性研究Vernonia植物,研究表明,其化学成分是复杂和多样化。它有抗疟[3,抗肿瘤4,5),细胞毒性6),细菌(7)、抗炎和镇痛作用[8,9]。此外,许多植物在这个属也有杀虫和抗疟效果,尤其是在美国,作为杀虫剂的植物药物和抗疟效果;它有一个显著的疗效[10]。根据记录,这种干根或茎藤可以治疗风湿疼痛,腰部肌肉拉伤,四肢瘫痪,等等,还可以用于冷和热。斑鸠属的植物菊花在中国有丰富的资源;当前的有毒斑鸠菊的根的化学成分、药理活性植物是不够的,有一个广阔的发展空间。特别是,有茎和叶的研究更少Vernonia寻常的,因此有必要进行深入的研究Vernonia寻常的建立完善的质量标准。

它们通常作为民间药物很长一段时间,因为它们ethnomedicinal属性包括风湿,背部和腿部疼痛,伤病从瀑布,和疟疾(10]。Vernonia植物有各种各样的化学成分。它包括类固醇、萜类、黄酮类化合物、phenylpropanoid脂肪酸、挥发油。甾类和萜烯的化学成分是越来越普遍。有其他类别的化学成分的研究相对较少。因为Vernonia物种含有多种化学成分,他们有许多不同的药理作用。他们有良好的效果在治疗糖尿病,高胆固醇,白癜风增强免疫力。他们也有抗菌,抗癌5,11,12),和抗炎8,9)的影响。因此,寻找天然抗菌,抗真菌,抗氧化剂代理使用相似的治疗效果可能是一种很有前途的方法,这是更安全、更健康。很少有报道的抗氧化和抗菌活性花属的分支。因此,为了更好地开发和利用菊花分支和提供新开发的抗氧化和抗菌药物植物资源,本文进行了初步研究其体外抗氧化和抗菌活性。

在这项研究中,分光光度法分析是用来确定体外抗氧化和抗菌活性指数,包括1,1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力,旨在了解其药效学组件。结果表明,不同的组件提取物在体外高DPPH的清除能力,和最高的清除速率得到氯仿提取的分支0.60 mg·mL-1时,醋酸乙烯酯0.10 mg·mL-1,和石油醚提取0.90 mg·mL-1;最大限度的清除DPPH••哦,O^{2 -}•为104.71%,99.04%,93.05%,0.90毫克毫升⁻¹;95%乙醇提取物有抑制作用大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,和葡萄球菌epidermidis表明它具有良好的抗炎活性。

1.1。植物材料

的植物Vernonia cumingianaBenth。收集2019年1月在长江李自治县、海南省和被教授钟家,青岛科技大学,凭证标本(2019号dgbjj)存放在济宁医科大学分子医学和化学实验室。

2。实验

2.1。一般的实验程序

1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH (1, - 1,。R,耐温钛化工发展有限公司有限公司);抗坏血酸(一种。R,化学试剂国药控股有限公司。);甲醇(。R,无水)、石油醚(A。R,无水)、乙酸乙酯(A。R,无水),n丁醇(A。R,无水)、乙醇(A。R,无水),1× PBS (phosphate buffered solution, 0.01 M, pH 7.2–7.4, Biochannel), phenanthrene (A.R), FeSO₄(A.R), H₂O₂(A.R),焦■酸(A.R)、盐酸(A.R),铁氰化钾(A.R),三氯乙酸(A.R)和氯化铁(A.R)都是分析纯(国家药品)。实验水是蒸馏水。uv - 5000可见分光光度计(上海Yuanqing仪器有限公司);电热恒温水浴锅(河北黄花航空航天仪器工厂);FA2104电子分析天平(上海天平仪器厂);r - 1001 - vn旋转蒸发器(上海Yarong生化仪厂);dzf - 6020真空干燥箱(山东龙口Xianke仪器有限公司,有限公司);高速万能粉碎机(浙江Hongjingtian工贸有限公司有限公司);手动压力机类型移液枪(海易科技有限公司有限公司、北京)、低速离心机表(湖南凯达科学仪器有限公司)、立式压力蒸汽灭菌器(上海Shenan医疗器械厂),恒温水套孵化器(金坛市辉煌设备制造有限公司),和恒温振荡器(太仓实验设备工厂)。营养琼脂(广州鸿洲实验设备科技有限公司),培养皿(德文仪器有限公司),和牛津杯(青岛cata生物学)也被使用。

2.2。提取制备

的粉茎、花和叶子Vernonia cumingianaBenth。分别与不同溶剂提取,如乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷使用浸渍方法在室温下24 h。在下面,他们透过纸滤器和溶剂蒸发真空在45°C下屈服原油提取。

2.2.1。制备不同浓度的样品溶液为每个极性部分

与甲醇溶解50毫克的极性部分样品在10毫升容量瓶稀释容量和摇匀获得样本股票溶液浓度为5.00 mg·mL-1。画0.04,0.08,0.12,0.20,0.40,0.80,1.20,和1.80毫升的每个极性部分序列的样本股票的解决方案在10毫升容量瓶,用甲醇溶解并稀释体积,摇晃它,和样品溶液,浓度是0.02,0.04,0.06,0.10,0.20,0.40,0.60,和0.90毫克毫升⁻¹。

2.2.2。Vc的制备不同浓度的标准解决方案

Vc 10.00毫克准确与甲醇重10毫升容量瓶是用于获得最初的Vc溶液浓度为1.00 mg毫升⁻¹。吸管0.01,0.02,0.04,0.08,0.12,0.16,和0.20毫升的原始Vc的解决方案在10毫升容量瓶,用甲醇溶解并稀释体积,摇匀,并存储在黑暗中获得一个Vc样品溶液,其浓度分别为0.001,0.002,0.004,0.008,0.012,0.016,和0.020毫克毫升⁻¹(13]。

2.2.3。DPPH解决方案的准备

测量DPPH 10.10毫克甲醇溶解于25毫升容量瓶稀释体积,吸管5.00毫升到50毫升容量瓶的体积不变,摇匀,并存储在黑暗中获得DPPH浓度为40.40 mg毫升的解决方案⁻¹。

2.3。体外抗氧化活性测试

2.3.1。测定DPPH清除率

调整为零与甲醇和设置测量波长为517纳米,准确地把2.00毫升的甲醇和同等体积的DPPH解决方案在试管中,避免光,后测量吸光度A0摇晃,然后吸管2.00毫升的样品不同的极性和不同浓度的解决方案。把相同体积的甲醇在试管中,摇匀,测量吸光度Aj [14- - - - - -16]。吸管2.00毫升的样品的解决方案不同的极性和不同浓度的序列,并将同样体积的DPPH解决方案在试管中。在黑暗中摇匀并存储。测量0.02毫克的吸光度毫升⁻¹在每2分钟,记录每个部分的价值。参见图1观察到的变化是稳定的(17),然后测量每一层的吸光度Ai。然后,做两个平行实验获得的三组数据。三组的平均值,代入相应的清除率。对照组Vc的操作方法是一样的。

间隙(%)= [1−(人工智能−Aj)/一个₀)×100%^一个。

2.3.2。确定哦清除率

添加2.00毫升的pH = 7.45 PBS(磷酸缓冲溶液,0.01米)解决方案和1.00毫升蒸馏水1.00毫升0.75摩尔L⁻¹o-phenanthroline,然后添加1.00毫升0.75更易·L⁻¹FeSO₄解决方案和1.00毫升的0.01% H₂O₂,摇匀。然后,在37°C水浴加热1 h。使用536 nm波长测量吸光度,这是美联社;取代1.00毫升的H₂O₂与同等体积的水,上面的一样测量吸光度,Ab,并使用它作为一个控制管确定样品溶液的吸光度;1.00毫升的水换成同等体积的样品溶液,上面的一样。测量吸光度,然后做两个平行实验获得的三组数据。把三组的平均值代替他们获得相应的清除率。对照组Vc的操作方法同上(18,19]。

间隙(%)= (作为−美联社)(Ab−美联社)×100%^b。

2.3.3。确定啊²⁻·清除率

指的是焦棓酸法(20.,21),5.00毫升PBS溶液在试管中,加1.00毫升的每个组件的样品溶液的浓度梯度,然后添加25.00更易·L⁻¹在室温下焦棓酸0.50毫升,摇匀,让它站了4分钟,然后用两滴8.00摩尔·L⁻¹盐酸停止反应。使用299 nm波长测量吸光度,也就是说,A1;标准管1.00摩尔·L⁻¹盐酸。用1.00毫升蒸馏水代替示例解决方案作为一个空白的控制,测量吸光度,A0。焦棓酸换成0.50毫升蒸馏水,测量吸光度如上所述,这是A2。做两个平行实验得到的三组数据,用三组的平均值和代入相应的清除率,实验重复两次,取平均值。对照组Vc的操作方法是一样的。

间隙(%)= (一个₀−(一个₁−一个₂)/一个₀×100%^c。

2.3.4。总还原能力的测定

指的是铁氰化钾还原法(22- - - - - -26]。添加1.00毫升的样品溶液,2.50毫升的铁氰化钾溶液,1%和2.50毫升PBS试管,摇匀,把它在50°C水浴30分钟,用冷水迅速冷却,然后添加2.50毫升的10%三氯乙酸,并将其放在一个离心机并设置4000 r·分钟⁻¹;10分钟后,取2.50毫升的上层清液,并将其在试管中,加入2.50毫升的0.1%氯化铁溶液和2.50毫升蒸馏水,三个均匀混合,和测量吸光度与700 nm波长站10分钟后,用平行三次。对照组Vc的操作方法同上(改变上述样品溶液蒸馏水;其他操作都是一样的,作为一个空白的控制在测量吸光度)。

3所示。抗菌活性研究

3.1。样品溶液的制备

与95%乙醇浸泡碎粉花分支三次,每次浸泡一周,将滤液三次,旋转成一个提取供以后使用。浸泡的花枝粉200克2000毫升75%的乙醇。浸泡24小时后三次,三个滤液结合旋转成一个提取供以后使用。加2000毫升的纯粉和水200克花分支与电热套加热的三倍。每40分钟后,滤液三次相结合,形成一个提取的混合物旋蒸,供以后使用。三个不同的样本准备的提取样本不同浓度25.00 mg·mL的解决方案⁻¹20.00 mg·毫升⁻¹15.00 mg·毫升⁻¹10.00 mg·毫升⁻¹和5.00 mg·毫升⁻¹。

3.2。牛津杯法抗菌实验

四种细菌包括革兰氏阴性细菌(大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,伤寒沙门氏菌)和革兰氏阳性细菌(葡萄球菌epidermidis)被接种到营养琼脂和动摇一夜之间在37°C 100 RPM获得四个种子细菌液体。混合不同细菌液体和琼脂液体在一定比例(大肠杆菌:琼脂液= 1:2.5,葡萄球菌epidermidis:琼脂液= 1:5枯草芽孢杆菌:琼脂液= 1:1.5,伤寒沙门氏菌;就能达到所需的透光率与琼脂混合解决方案);在波长600 nm,空白琼脂溶液作为参考,使透光率T= 20。首先,倒入10.00毫升琼脂培养皿底部凝固,均匀地添加到四个牛津杯,然后添加50μL调整解决15.00毫升细菌的琼脂,把它倒入precoagulated琼脂,等待它。凝固后,取出牛津杯,加入样品溶液和准备的双抗体。站了半个小时后,把它放到37°C烤箱,观察是否有带抑制第二天。

4所示。结果和分析

4.1。抗氧化能力

以下4.4.1。清除DPPH研究能力

测试后,样品溶液的吸光度值根据不同的极性部位都达到一个稳定的水平在大约40分钟。从数据1和2,DPPH自由基的清除作用在不同极性部分显然是不同的。可以看出有一定的线性关系,每一层的浓度和最明显的区别是0.02毫克·毫升⁻¹-0.40 mg·毫升⁻¹和0.40 mg·毫升⁻¹-0.90 mg·毫升⁻¹,这一趋势减慢。在同一浓度,可以看出每个极性部分的清除率是乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物> 95%乙醇提取物>氯仿提取物>石油醚提取物、乙酸乙酯的影响更加明显。可以看出,乙酸乙酯的抗氧化能力强于Vc相比的数字1和2。这部分仍在粗提取阶段。如果进一步的纯化及其组件净化,天然抗氧化剂可以获得。

4.1.2。清除的能力哦

从整体的角度对数字的看法3和4,羟基自由基的清除速率不同的极性部分基本上表现出上升趋势。乙酸乙酯最大的羟基自由基清除速率,和氯仿有最小的扫气率哦。根据基本趋势,可以看出,清除利率如下:乙酸乙酯提取物> 95%乙醇提取物>正丁醇提取物>石油醚提取物>氯仿提取。乙酸乙酯的去除率,95%乙醇提取物、正丁醇提取物基本上是大于0.02毫克·毫升的Vc去除率⁻¹证明了乙酸乙酯的抗氧化性能,95%乙醇提取物、正丁醇提取物。石油醚和氯仿的Vc 0.60 mg·毫升的浓度⁻¹几乎等于0.02 mg·毫升⁻¹,这证明了其良好的体外抗氧化活性。

4.1.3。清除的能力啊²⁻·

从数据5和6的清除O^{2 -}通过与不同极性样品显示整体上升趋势。根据的基本趋势,它可以得出结论,清除率在降序排列如下:石油醚提取物>正丁醇提取物>氯仿提取物>乙酸乙酯提取物> 95%乙醇提取物。正丁醇的消除速率,石油醚、氯仿、乙酸乙酯^{2 -}基本上是大于0.02毫克的Vc毫升⁻¹,证明了正丁醇、石油醚和氯仿组件在体外抗氧化。它的工作原理。

4.1.4。总还原能力的测定

数据显示7和8,减少样品在不同极性的增加随着样品浓度的增加部分。根据的基本趋势,它可以得出结论,降序排列的总还原能力是乙酸乙酯>氯仿>正丁醇> 95%乙醇提取物>石油醚。总还原能力的乙酸乙酯、氯仿、正丁醇,95%乙醇提取基本上是大于0.02毫克·毫升⁻¹Vc,这证明了乙酸乙酯、氯仿、正丁醇,95%乙醇提取物有很好的外部抗氧化作用。

4.2。抗菌活性测定

四种细菌被当作研究对象,进一步研究的抗菌效果Vernonia cumingianaBenth。在不同的浓度,结果如表所示1。

从表中的数据可以看出1不同浓度的乙醇提取物对四种细菌有不同的抑制能力。所有的浓度没有抑制作用伤寒沙门氏菌,但有抑制作用葡萄球菌epidermidis,枯草芽孢杆菌,大肠杆菌。

5。讨论和结论

筛分装置部件的抗氧化和抗菌活性是由提取的不同部分Vernonia cumingianaBenth。包括叶、花、茎和各种类型的溶剂(甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯)。因此,一个合适的溶剂系统用于提取最大数量的强有力的抗氧化成分从典型的植物材料。抗氧化实验,抗氧化活性Vernonia cumingianaBenth。从不同极性部位对DPPH••哦,和O^{2 -}•自由基清除速率和总还原能力测定。结果表明,三种自由基是食腐动物在不同极性部分,有量效关系浓度和食腐动物和抗氧化能力。不同的极性部位有不同的间隙率在不同抗氧化实验中,也就是说,他们有不同的抗氧化能力。综上所述,乙酸乙酯组件具有更好的抗氧化活性和清除能力强于Vc,特别是在清除DPPH••哦,其次是正丁醇组分的抗氧化能力。石油醚组件通常是弱,但其去除能力^{2 -}•是相对强劲;氯仿的总还原能力仅次于乙酸乙酯,并取消95%的乙醇提取•哦,是仅次于乙酸乙酯,但对另一些人来说,自由基的清除能力较弱。

此外,样本的总还原能力不同极性部位Vernonia venomata大于风险。因此,Vernonia有很强的抗氧化能力。抗菌实验,酒精提取的Vernonia cumingianaBenth。不同浓度对革兰氏阴性细菌有一定的抑制作用(枯草芽孢杆菌和大肠杆菌)和革兰氏阳性细菌(葡萄球菌epidermidis);所有浓度的酒精提取物对革兰氏阴性细菌没有抑制作用伤寒沙门氏菌。抗菌实验研究奠定了一定的理论基础的发展新的植物的抗菌药物。

数据可用性

和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

的利益冲突

没有报告的作者潜在的利益冲突。

确认

这项研究是在经济上支持大学基金项目支持的山东科技职业学院“化学成分和活动喷雾的决心Vernonia CumingianaBenth。,” (No. 2019LG024).