绿茶和红茶渣中提取色素的可见光诱导抗菌活性研究

摘要

叶绿素及其衍生物是一种潜在的天然敏化剂，在抗菌光动力治疗中有广泛的应用前景。叶绿素衍生物是在茶叶加工过程中自然形成的，但它们对茶叶的颜色没有影响，因此可以推测它们留在了茶渣中。本研究旨在研究(1)从绿茶和红茶的茶渣中提取的色素中的叶绿素残馀，(2)以发光二极管(LED)为光源，研究从茶渣中提取的色素在光照下的抗菌活性。利用高效液相色谱法(HPLC)对色素进行分析，发现叶绿素的主要降解产物，如脱镁叶绿素及其衍生物、脱镁叶绿素和疏磷化合物。体外试验表明，在LED光照射下培养30分钟后，有色素存在的活菌数量显著减少。细菌敏感性由高到低依次为单核细胞增多性李斯特氏菌>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>伤寒沙门氏菌．在相同的辐照强度下，蓝光和红光led通过光动力反应可产生类似的失活效应。这些发现表明茶渣作为叶绿素衍生物的一种来源具有可见光诱导的抗菌活性。

1.介绍

由于传染病在全球范围内的传播、抗生素耐药性以及与能源危机和环境问题有关的问题，公众对公共卫生的担忧日益加剧，与微生物污染作斗争的任务变得越来越具有挑战性。光动力灭活技术是一种结合物理和化学反应来诱导目标微生物死亡的技术，特别是抗菌光动力治疗作为一种有前景的非热消毒技术，近年来受到了广泛的关注。据报道，这种新型疗法具有重大突破，如快速灭活病原微生物，有效消除耐药菌株，甚至产生生物膜的细菌，这些细菌往往对治疗具有耐药性[1- - - - - -3.]．

典型的光动力反应的三个组成部分是光敏剂、光和氧。光敏剂是一种可以从光中捕捉光子能量并将其转移到周围其他分子的物质。光敏剂释放的能量导致周围敏感分子(如蛋白质、脂类和氧)形成自由基[4]．自由基氧(ROS)是一种具有高度活性和细胞毒性的自由基;因此，过量的ROS会引起细胞的迅速死亡。叶绿素(特别是它们的一些衍生物)由于其独特的光物理和光化学性质已被报道为天然增敏剂的有前途的候选者[5，6]．它们的特点是在可见光谱的蓝色和红色区域中强烈吸收光[7，提供了利用无害的光能的显著好处，因此是应用于光动力失活的首选敏化剂[8]．此外，发光二极管（LED）可以用作经济上可行的光子源[9]．

迄今为止，许多研究突出了使用半合成叶绿素衍生物的微生物的光动力灭活的疗效，例如叶绿素钠盐，野磷脂，苯酚肽和氯e6 [10- - - - - -14]．叶绿素的自然结构易受环境pH值和温度变化的影响而降解，从而导致中心镁离子的释放，或叶绿醇尾部的分解[15)(见图1)．有趣的是，这种降解也会发生在茶叶的加工过程中，并且根据茶叶的种类而不同。铃木及盐井[16]报道了茶叶中各种叶绿素衍生物的检测。考虑到这些化合物在用热水泡茶时提取得很差[17]，从茶渣中回收色素可能提供叶绿素衍生物的另一种来源，并可能为用过的茶叶定价。

因此，本研究的目的是(i)利用从绿茶和红茶的残渣中回收的色素分析残余叶绿素及其衍生物，(ii)评估这些色素作为LED光照射下抗菌光动力治疗的敏化剂的潜力。利用紫外可见分光光度计和高效液相色谱(HPLC)和二极管阵列检测器进行颜料分析和表征。随后，在蓝色和红色LED照明下进行体外微生物检测。在各种微生物群中，致病菌是对公众健康构成最大威胁的主要病原[18];因此，本研究采用四种主要的食源性细菌作为指标，即单核细胞增多性李斯特氏菌，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌， 和伤寒沙门氏菌．

本研究的假设是“红蓝光照射绿茶和红茶冲泡渣中提取的色素对致病菌有抑菌作用”。该假设进一步分为三个子假设:(i)红光照射从绿茶和红茶渣中提取的色素对致病菌有抑菌作用，(ii)每种致病菌对红光照射色素的光动力失活表现出不同的敏感性，(iii)红光和蓝光照射色素对致病菌产生不同的灭活作用。

2.材料和方法

2．1．色素提取与分析

2．1．1．茶渣的制备及色素回收

商业绿茶和红茶是从一家茶厂(PT Sari Melati Sejahtera, Pekalongan, Indonesia)获得的。样品以1:100(茶与水)的比例在热水(90°C)中冲泡5和20分钟。随后将茶渣分离，铺在滤纸上，在室温下干燥一夜，以降低其含水量。将渣与丙酮按1.5:10(固体与溶剂)比例混合，旋转，离心16000 × g, 1 min后收集上清液。这个提取过程重复三次，直到渣变淡。然后通过真空蒸发去除溶剂，并将提取的色素收集在一个小瓶中，在低温(−20°C)下保存，直到进一步分析。

2．1．2．色素分析

根据Lichtenthaler的方程计算叶绿素总衍生物的浓度[19使用紫外-可见分光光度计(UV-1800，岛津，京都，日本)。根据先前公布的方法，采用高效液相色谱法测定色素组成[20.]．提取的每个色素样品溶解在丙酮中并过滤(0.22μm, Nylon, Whatman, Kent, UK)注射到C₈色谱柱安装在配备SPD-20MA二极管阵列检测器(岛津，京都，日本)的HPLC仪器(LC-20A)上。根据保留时间和光谱特征，在可见范围内(350-700 nm)识别出每个分离峰，并与[16，20.]．整个提取和分析过程都在昏暗的光线下进行，以避免色素降解。

2．2．色素隔离

在光动力实验中，用一种单一的色素作为阳性对照。从叶中分离得到叶绿素a (Chl a)和叶绿素b (Chl b)Pleomele angustifolia它们的叶绿素含量很高。首先将提取的粗色素溶解在丙酮中，以硅胶60为固定相，正己烷-丙酮为流动相，柱层析从类胡萝卜素组分中分离。叶绿素在由甲醇和丙酮组成的梯度流动相的高效液相色谱洗脱后得到纯化和收集[21]．在与丙酮中与乙酸反应后，从纯叶绿素A获得（Pheo A），并根据已建立的方法进行使用HPLC的颜料进一步洗脱[20.]．

2．3.光动力实验

2.3.1。增敏剂的制备

将每种分离色素的浓度重新调整为100 μg·毫升⁻¹在有机溶剂中，每个叶绿素a的摩尔消光系数为78.75 × 10^3. Lmol⁻¹·厘米⁻¹在丙酮溶液中，叶绿素b (56.26 × 10^3. Lmol⁻¹·厘米⁻¹在643 nm的乙醚中)和脱镁叶绿素a (46.50 × 10^3. Lmol⁻¹·厘米⁻¹在667 nm丙酮中)[22，23]．从茶渣中提取的色素虽然由各种叶绿素衍生物组成，但在667 nm处表现出最大吸收，说明脱镁叶绿素a的丰度。因此，首先通过调节脱镁叶绿素a在667 nm处的吸收强度来确定其浓度。和总脱钙素用Lichtenthaler的分子式确定[19]．溶剂完全蒸发后，用超声波将干燥的颜料分散在相同体积的无菌1%吐温80 (w/v)中。这些表面活性剂被用来防止叶绿素的分子聚集，这可能会抑制叶绿素作为增敏剂的生物活性[12]．在光动力学实验中，采用相同的表面活性剂水溶液作为负对照。

2.3.2。LED灯

采用相同的红色和蓝色LED灯(Yomiko YL-2550, 50 Watt, 4800 Lumens)作为光动力处理的光源。使用光谱仪(Ocean Optics USB4000, FL, USA)记录每个LED灯的发射光谱。LED灯被组装并设置在轨道激振器上方，以提供300±15μ摩尔·米²年代⁻¹光子(使用美国Apogee Instruments MQ-200测量，约等于65.2 Wm⁻²)在孔板上(见图2)．蓝光（445nm）和红光（640nm）的估计光子能量分别为2.79和1.94eV。

2.3.3。微生物分析

以4种病原菌为目标指标，其中2株为革兰氏阳性菌，2株为革兰氏阴性菌。单核细胞增多性李斯特氏菌(FNCC 0156)获得的食物和营养文化收藏部门，Gadjah Mada大学，日惹，而金黄色葡萄球菌(写明ATCC 6538),大肠杆菌(写明ATCC 8739)伤寒沙门氏菌(临床分离物)购自印度尼西亚泗水Widya Mandala天主教大学药学系。微生物试验包括两个阶段:(1)用红色LED初步筛选抗菌活性;(2)蓝色和红色led处理的相对失活能力。

简单地说，接种量为10⁸CFU·毫升⁻¹在营养肉汤(NB)中制备，体积为75μL被转移到容纳1425人的Eppendorf管中μL的敏化剂在1%吐温80。这一暂停随后被转报到400个人身上μL体积，并转移到一个12孔板上的孔，用于LED曝光，每个孔用于照明和未照明的样品。然后在室温(18±3°C)下照射30分钟，将板放置在一个台式轨道摇床(MaxQ 2000, Thermo Scientific, Iowa, USA)上，轻轻地搅拌(100 rpm)。光照后，立即用4.6 mL Mueller-Hinton Broth (MHB)稀释每个样品，并将0.5 mL悬液加入9.5 mL蛋白胨溶液中。涡流之后,20μL培养液在胰酶大豆琼脂(Trypticase Soy Agar, TSA)中，34℃孵育24 h，计算CFU数为总活细胞。灭活百分率是根据在有光照和无光照条件下样本中发现的总活细胞的差异计算的(l和D分别使用公式（（D−l)×100 /D)．所有微生物实验均为3个重复。

2.3.4。耐光性研究

将颜料溶解在丙酮中，在室温下用led连续照明60 min，进行了光稳定性研究。使用紫外-可见分光光度计(UV-1700，岛津，京都，日本)定期记录电子吸收光谱的演变，并检查吸收峰或峰肩的任何减少或移动。由于残留的植物胡萝卜素可能存在，色素的光稳定性也被评价使用β-胡萝卜素作为标准参考(变色龙试剂，日本大阪)。

２.４.统计分析

结果以平均值±标准误差(M±SEM)报告。采用0.05显著性水平的单因素方差分析(ANOVA)进行处理比较，然后采用Fisher最小显著差异检验或Dunnett检验与对照组进行比较。所有统计分析均使用Minitab软件进行。17.00为Windows。

3。结果与讨论

3．1.茶渣色素中叶绿素衍生物的研究

热水浸出的茶渣颜色浓厚，表明存在残余色素。根据Suzuki和Shioi之前的研究[16]以及唐劳和小川[17[茶叶输注中，只有2％的叶绿素A或7％的叶绿素的总叶绿素。然而，有关茶叶中残余颜料的信息有限。据我们所知，Higashi-Okai等人提供的第一个和唯一的报告。[24，他采用传统的薄层色谱法对日本绿茶经热水提取后的色素进行分离。

在本研究中，我们发现用丙酮提取茶渣会产生一种苍白的颗粒，表明达到了色素的回收。从绿茶和红茶渣中提取的色素具有相似的吸收光谱(见图)3.)，在410和665 nm处有两个明显的最大值，在475、533和606 nm处有几个微弱的吸收信号。叶绿素基团的典型吸收光谱表现为沿x- - -y-轴电子跃迁的色素分子(图3(一个))，在550 nm附近的Qx波段较弱，660 nm附近的Qy波段较强，而蓝色区域的Soret波段较强，为重叠区[25]．叶绿素a和b在430和457 nm处具有独特的Soret波段，其Soret: Qy波段的强度比分别为1.23和2.82 [26]．它们的分子衍生化使Soret转变为更高的能量（蓝色换档）以及Soret对QY带强度比的增加。事实上，叶绿素A比叶绿素B更高的三到四倍[27];因此，叶绿素a的光谱往往会掩盖叶绿素b的光谱。根据色素的吸收光谱，在410 nm处观察到的Soret波段以及增大的Soret与Qy波段的比值(图中为2.8)3(一个)图3.13 (b)）表明从茶叶中提取的颜料中的主要叶绿素衍生物。

延长发酵时间20 min后，色素的吸收强度有所降低，但吸收规律无明显变化。绿茶和红茶在665 nm (Qy波段)处的强度降低分别为17.6和12.4%。这种减少可能是由于茶的冲泡时间延长了约25-30分钟，从而从茶中提取了皂素[28]．虽然皂苷被称为弱表面活性剂，但该化合物的痕量可以增强疏水性颜料在茶浸渍中的溶解度[16]．

进行HPLC分析以确定叶绿素衍生物的级分。数字4显示从绿茶和红茶的残渣中回收的色素的色谱图。在660 nm处主要监测叶绿素基团，430 nm处主要监测类胡萝卜素。每个不同的峰是根据[16，如表所示1．除红茶中叶绿素b含量较低外，其余9种均为叶绿素衍生物。两种类胡萝卜素被鉴定为β-胡萝卜素和叶黄素，被称为辅助光合色素，分别在约450和475 nm处表现出光吸收。

当色素中没有叶绿素a时，表明叶绿素a完全转化为其衍生物，表现为脱镁叶绿素a和疏磷叶绿素a，以及由于结构相似而具有相邻峰的衍生物和/或组分。脱氢叶绿素a可能的种类为羟基脱氢叶绿素a(峰7)，在脱氢叶绿素a之前被洗脱，以及其低极性表基化合物(峰9)和脱氢叶绿素(峰11)，在脱氢叶绿素a之后被洗脱[29]．相反，从红茶渣中提取的色素中仍然存在叶绿素b残留，并伴有叶绿素b。这可能归因于叶绿素b的早些时候转换在绿茶比红茶,就是明证的强烈信号脱镁叶绿素b物种(高峰5和6)。叶绿素是更敏感,易受酸或热量,并释放其中央镁离子九倍叶绿素b (30.]．

在茶叶加工过程中，绿茶生产通常采用热处理方法，如蒸煮(日本式)或油炸(中国式)，而红茶加工则涉及发酵，在多酚氧化酶的存在下进行高级氧化[31]．因此，绿茶热处理的温度和时间将决定叶绿素a和b的衍生化效率[17，32]．热处理会加速这两种叶绿素的降解，而红茶在较低温度下发酵对叶绿素b的降解影响较小。Wijaya等人也报道了类似的结果[33他根据色谱中的峰面积比较了绿茶和红茶中的叶绿素组分。定量分析表明，绿茶和红茶渣中总叶绿素含量分别为3.08±0.18和2.31±0.31 mg⁻¹(干重),分别。红茶的生产过程比绿茶的生产过程要长;因此，进一步降解叶绿素衍生物为无色化合物是可能的。

3．2．茶渣色素的光诱导抗菌活性研究

光能在微生物控制中的利用已经得到了广泛的研究和应用，主要在紫外光(200-400 nm)和蓝光(400-470 nm)范围内[1]．然而，应用光动力治疗杀死肿瘤细胞需要的波长在治疗范围内(600-800 nm)，对宿主组织的损伤作用较小[34]．低能量红光照射在病原体的失活效果较小[35]．因此，本研究采用峰值发射波长为640 nm的红色LED灯，对茶渣色素的可见光诱导抑菌活性进行初步研究，以刺激Qy吸收波段的叶绿素化合物。

光动力反应发生时，感光剂吸收光子进行衰变，导致分子内能量转移，然后由单线态氧和自由基的光氧化。在相对较短的时间内，自由基可以由环境中的氧气和细胞膜中存在的生物分子(脂类和蛋白质)产生，造成细胞毒性作用和细胞膜损伤。在这里，我们证明了在孵育30分钟后，与黑暗条件下相比，光照条件下的活细胞数量减少。在黑暗和光照处理下，总活细胞的差异被量化为四种指示细菌的光动力反应引起的失活的百分比(图)5)．

失活的百分比明显较高(< 0.05)，说明发生了光动力失活，因此第一个假设被接受。同时，对照组指示菌也表现出明显的失活。使用水溶性表面活性剂溶液(1% w/v Tween 80)在低浓度下保持颜料作为单体，而不表现出任何细胞毒性作用[12]．在对照组中发现的活细胞总数的减少可能是由内源性敏感剂的存在引起的。一些细菌的代谢产物已被确定为潜在的内源性光敏剂，可增强其对光照射的敏感性，如原卟啉IX、草卟啉III和尿卟啉，这取决于细菌菌株[36，37]．温和抑制生长大肠杆菌和金黄色葡萄球菌Nussbaum等人报道了使用630 nm光处理后的结果[38]．因此，外源性光敏剂的存在可能有助于LED灯的失活能力。

从茶渣中提取的色素处理的细菌培养物的失活率与阳性对照(单一叶绿素化合物)相当，显著高于阴性对照(< 0.01)，特别是l . monocytogenes，金黄色葡萄球菌， 和大肠杆菌．这一发现表明，茶渣作为敏化剂的来源，无需进一步的色素纯化。两种或两种以上敏化剂的组合可增强协同效应，提高光动力失活能力[39]．

数字5也说明了指示菌(< 0.05);因此，第二个假设被接受。对光动力失活的敏感性由高到低依次为l . monocytogenes>金黄色葡萄球菌 >大肠杆菌 >伤寒杆菌．观察到最大的光动力影响为l . monocytogenes，占细胞死亡的48.55 ~ 74.92%。观察到最低的光动力失活伤寒杆菌，从12点到22.76%的细胞死亡。革兰氏阳性细菌(l . monocytogenes和金黄色葡萄球菌)对抗菌光动力处理的敏感性普遍高于革兰氏阴性菌(大肠杆菌和伤寒杆菌)．大多数革兰氏阳性细菌有一个单一的细胞壁，由肽聚糖与磷壁酸和脂壁酸组成，因此具有相当高的孔隙度，而革兰氏阴性细菌除了肽聚糖层外，还具有组织高度的外膜，由脂多糖、磷脂、脂蛋白和蛋白质组成[5]．细胞壁结构的复杂性和坚固性是感光剂附着和吸收的决定因素。

3．3.LED光波长对茶渣色素提取物光动力失活的影响

根据从茶渣中提取的色素的吸收模式(图3.)，在蓝色和红色区域有两个最大值。一些关于抗菌光动力治疗的研究倾向于使用波长较短的光，因为它具有更高的能量[40- - - - - -42]，但也有研究报道红光的有效性，尽管该区域的叶绿素化合物吸收强度不如蓝色区域的高[12，43]．迄今为止，有关在两个波长下使用光的光动力灭活的并行比较的信息是稀缺的。

在本研究中，蓝色和红色LED分别在445±50和640±60 nm处发光。数字6显示了led的发射光谱，与从绿茶和红茶的残渣中回收的色素的吸收光谱重叠。Soret吸收带与蓝色LED的发射区域相交，而Qy吸收带与红色LED的发射区域重合。通过调整灯和孔板之间的距离，使注入孔板中的样品的光子总数相等。

数字7显示了在蓝色和红色led下光动力处理后指示细菌培养的失活百分比。选择两种茶的优势色素Pheo a作为阳性对照。LED波长的变化对治疗效果无显著性差异(>0.05) for all bacteria, showing that both LEDs could be used to induce comparable inactivation effects. Thus, the third subhypothesis was rejected.

虽然使用蓝色LED的治疗中失活的百分比高于使用红色LED的治疗，但差异没有统计学意义。这一发现可以归因于光子能量和敏化剂吸收剖面的差异。蓝色区域的增敏剂的吸收强度始终高于红色区域，说明增敏剂的作用归因于添加的外源性增敏剂和潜在的内源性增敏剂(卟啉基团)的吸收特性。

正如Ghate等人所报道的[35，使用波长为461 nm，辐照强度为221 Wm的LED⁻²关于文化l . monocytogenes和金黄色葡萄球菌，分别为5.2和4.7 log CFU·mL⁻¹,分别。这种处理效果是在不使用外源性光敏剂的情况下，采用高剂量蓝光LED照射7.5 h，并结合低温处理(10°C)获得的。结果表明，该方法能有效地减少嗜冷菌和嗜中嗜冷菌的总活细胞。在本研究中，LED灯的照射强度较低(65.2 Wm⁻²在室温(18±3℃)孵育30 min后，显色率降低l . monocytogenes和金黄色葡萄球菌分别为2.78和1.98 log CFU·mL⁻¹,分别。除细菌类型外，通过控制光敏剂的浓度、培养时间和照射剂量可提高抗菌光动力治疗的效率[44]．由于在本研究中使用非选择性培养基进行细胞计数，所计数的存活细胞数可能包括可能的亚致死损伤细胞。此外，由于光动力失活过程发生得非常迅速和有效，由于治疗而产生细菌耐药性的风险是非常不可能的[45，46]．

通过光稳定性实验预测了蓝光和红光照射下的分子动力学。数据8(一个)和8 (b)描述了在0 ~ 60分钟的光照时间和相同的光照强度下，从绿茶渣中回收色素的吸收光谱演变。Qy波段(665 nm)的吸收没有明显变化，表明叶绿素衍生物在LED照明60 min内仍保持稳定。叶绿素衍生物，如叶绿素和疏磷化合物，已知具有良好的光稳定性;因此，与具有中心镁离子的天然叶绿素相比，它们被认为是更好的光敏剂候选者[12，47]．光敏化剂具有高的光稳定性，表明光敏化反应完成后，它能够恢复到初始状态，并且在后续光敏化循环中可以继续产生更多的自由基。

在约475 nm处吸收强度逐渐减弱，类似于类胡萝卜素的光吸收区。类胡萝卜素在光处理叶绿素混合物中的明显降解可能是由于光动力学处理的影响。当对标准胡萝卜素进行相同的光照处理时，降解效果降低(图)8 (c))．当被回收的色素暴露在蓝色或红色LED下时，光子与叶绿素化合物和环境氧发生光动力反应，从而产生自由基。类胡萝卜素对自由基特别敏感，因为它们在光合作用中起保护作用。如果类胡萝卜素存在于光动力系统和光稳定敏化剂中，将通过光动力反应产生足够数量的自由基，导致类胡萝卜素进行快速氧化。这种穷尽性的过程导致类胡萝卜素转化为更小和无色的最终产品。Fiedor等人在光动力系统中报道了同样的现象，该系统同时含有细菌叶藻素和类胡萝卜素[48，49]．

数字8 (c)结果表明，蓝光LED对标准胡萝卜素的辐照降解速率较高。这一发现对指导光致抗菌剂应用决策具有重要意义。蓝色(460 nm) LED以前被用于消除沙门氏菌在橙汁中，但由于类胡萝卜素降解，产品颜色发生了不希望发生的变化[50]．相比之下，在处理新鲜农产品时更喜欢使用红色led。在采后贮藏过程中，红色led (630-660 nm)与蓝色led (450-470 nm)相比，可以更好地保存生菜和西兰花的叶绿素和抗坏血酸含量以及食用颜色[51，52]．因此，我们发现利用茶渣中提取的色素，蓝光和红光诱导的光致抗菌活性并无显著差异，应优先选择波长较长、能量较低的光。

然而，光源的波长和强度通过影响敏化剂的光漂白速率而有助于光动力学处理的剂量测定。当孵育时间延长时，产生的单线态氧也会介导敏化剂的光降解，导致分子碎裂而褪色[53，54]．光动力学和光漂白反应通常发生在光照条件下;因此，理想的光动力失活系统的最佳设置需要进一步研究。在完善光动力学原理在茶渣色素去污过程中的应用中，叶绿素的可逆光漂白特性成为一个优势。感光剂的褪色可以作为停止光动力处理的指示剂。到目前为止，没有关于叶绿素无色降解产物毒性的报道，同样的途径也发生在绿色植物叶绿素的分解代谢中[55，56]．此外，根据Buchovec等人此前进行的水果净化研究[41，光动力反应产生的自由基的半衰期通常很短，在食物基质中诱导额外自由基的风险可以忽略不计。

4.结论

色谱和分光光度法分析证实了在绿色和黑色茶叶的渣滓中存在叶绿素衍生物，并且使用丙酮回收的总苯酚肽为3.08±0.18和2.31±0.31 mgg⁻¹(干重),分别。采用65.2 Wm的LED光源对颜料进行光照处理⁻²，表现出与单一叶绿素化合物在浓度为100时的灭活能力相当的抑菌效果μg·毫升⁻¹．革兰氏阳性细菌(l . monocytogenes和金黄色葡萄球菌）更容易受到光动力灭活的影响，而不是革兰氏阴性物质（大肠杆菌和伤寒杆菌)．显著减少l . monocytogenes和金黄色葡萄球菌高达72.14% (2.78 log CFU·mL⁻¹67.38% (1.98 log CFU·mL⁻¹)，分别在室温下光照处理30 min后得到。在同等辐照强度下，以茶渣中提取的色素作为光敏剂，蓝光和红光led对四种指示菌的灭活效果无显著差异。然而，在食品净化方面，红色LED对食品基质中内源性色素的降解作用较小。这些发现揭示了茶渣作为敏化剂的潜在利用价值，以及从自然资源中提取的光诱导抗菌剂用于微生物净化的可预见的未来。

缩写

领导:	发光二极管
高效液相色谱法:	高效液相色谱
ROS：	激进的氧物种
菌落:	集落形成单位
排名:	叶绿素
Pheo:	脱镁叶绿素。

数据可用性

用于支持这项研究结果的数据包括在文章中。

的利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

致谢

作者谨此感谢Harijono教授，Setyawan Purnomo Sakti教授，以及Erryana Martati博士（Brawijaya University）为他们的专家建议和博士（Cand.）Heriyanto有助于讨论色谱分析。作者还感谢Gita C. Kombaitan为她的颜料提取和分析提供帮助。该工作得到了由印度尼西亚共和国共和国的研发部/国家研究和创新机构提供的博士论文研究（009 / SP2H / AMD / LT-Multi / LL4 / 2020）的财务支持。

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