文摘gydF4y2Ba
间充质干细胞(MSC)派生细胞外囊泡(EVs)作为交付系统吸引了广泛的研究兴趣,特别是癌症治疗。在我们之前的研究中,lipocalin-type D2前列腺素合成酶(L-PGDS)对胃癌生长抑制的影响。在这项研究中,我们旨在探索是否MSC-EV-delivered L-PGDS (EVs-L-PGDS)可以抑制胃癌进展。EVs-L-PGDS从生成编码L-PGDS msc与腺病毒转染。细胞克隆形成、迁移、入侵和流式细胞术分析被用来显示电动车对肿瘤细胞的抑制作用在体外,执行和裸鼠皮下肿瘤模型的抑制作用电动汽车在活体肿瘤恶化。体外,EVs-L-PGDS可以内化和克隆形成抑制胃癌细胞的迁移和入侵能力国网公司- 7901和促进细胞凋亡。体内,EVs-L-PGDS抑制裸鼠皮下肿瘤模型中肿瘤的生长。与PBS和EVs包含空向量(EVs-Vector)集团更多的凋亡细胞和更高L-PGDS表达在肿瘤组织中发现的EVs-L-PGDS治疗组。这些差异是显著的。从力学上看,EVs-L-PGDS干细胞标记物的表达,包括减少gydF4y2BaOct4gydF4y2Ba,gydF4y2BaNanoggydF4y2Ba,gydF4y2BaSox2gydF4y2Ba和抑制STAT3磷酸化在胃癌细胞sgc基地- 7901。总之,我们的研究结果暗示MSC-derived电动汽车可以利用的有效nanovehicle交付L-PGDS胃癌治疗,它提供了一个新奇的想法EV-based癌症治疗。gydF4y2Ba
1。介绍gydF4y2Ba
虽然胃癌的发病率普遍下降,它仍然是一个沉重的疾病负担在发展中国家过去几十年(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。尽管在诊断和治疗进展,晚期胃癌的临床结果依然贫穷,迫切需要新的治疗方法。越来越多的证据表明,间充质干细胞(msc)持有承诺广泛应用治疗许多疾病包括癌症(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。唐等人发现,人脐带msc (huc-MSCs)抑制HepG2细胞的生长,促进了他们的细胞凋亡gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。huc-MSC-conditioned介质包含细胞外囊泡(EVs)可以有效地诱导细胞凋亡和减弱肿瘤细胞的迁移,这吸引了越来越多的关注(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。这些发现指出msc在癌症治疗的积极作用。gydF4y2Ba
电动汽车,包括微泡和液小颗粒分泌许多类型的细胞和细胞间通信中扮演关键性的角色gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。电动汽车不同起源抗癌治疗(游离蕴含着巨大的潜力gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。例如,tumor-derived EVs包含组件的母细胞相似,表明EVs可能目标癌症网站(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。化疗药物和microrna - 134和TNF-related凋亡诱导配体(TRAIL)可以通过tumor-derived电动汽车,从而增加这些治疗试剂的毒性和定位能力gydF4y2Ba10gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。树突细胞衍生EVs可能表现出免疫刺激性特征,包括诱导CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaCTL反应在癌症治疗gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。HEK239T细胞衍生EVs经常用于实现靶向到肿瘤部位基因修饰配体(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。MSC-derived EVs也是癌症治疗的潜在候选人。gydF4y2Ba
MSC-derived EVs有独特优势作为抗癌治疗[运营商gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。许多研究表明,msc肿瘤趋向性的特点,和电动汽车能够携带各种各样的生物活性分子,从母细胞(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。Naseri等人报道,EVs源自msc可以迁移到肿瘤的网站,这是类似于msc的能力(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。此外,电动汽车的免疫原性是低于msc由于低的膜蛋白等主要组织相容性复合体(MHC) [gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。此外,msc具有高度增殖和产生大量的电动汽车在合适的培养条件,为进一步临床应用提供可行性(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。刘等人发现MSC-derived细胞外囊泡传输miR-34a-5p会抑制肿瘤发生结直肠癌的gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。治疗分子由MSC-derived EVs能够克服肿瘤靶向治疗的缺点[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。这些研究强调MSC-derived电动汽车的积极作用是治疗分子交付航空公司。gydF4y2Ba
D2 Lipocalin-type前列腺素合成酶(L-PGDS)的病原反应酶的合成前列腺素D2 (PGD2)催化异构化的前列腺素H2 (PGH2) PGD2 [gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。研究表明PGD2起着重要的作用在调节生理睡眠和诱发过敏反应(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba),以及抑制肿瘤发生和发展gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。然而,PGD2的半衰期很短,因为F (PGF)前列腺素合成酶和自发在等离子体脱水,使它有限的直接临床应用gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。L-PGDS参与cyclooxygenase-2——(cox - 2)介导的细胞凋亡诱导化疗后(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。L-PGDS不足导致肿瘤细胞凋亡减少,和L-PGDS-derived PGD2参与抗肿瘤反应(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。此外,在我们之前的研究中,PGD2 / PTGDR2信号被发现参与调节自我更新和肿瘤发生胃癌的gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。总的来说,这些研究表明潜在的承诺L-PGDS抗癌治疗。gydF4y2Ba
的有前途的角色MSC-derived EVs突出显示在多个疾病模型包括癌症治疗。因此,电动汽车和治疗性分子的结合可能是癌症治疗的新方向。在这项研究中,我们准备好的电动汽车从huc-MSCs与腺病毒转染编码L-PGDS (EVs-L-PGDS),旨在评估的抗癌效果L-PGDS-loaded EVs胃癌。我们证明EV-based输送系统是一种新型颗粒癌症治疗的策略。gydF4y2Ba
2。材料和方法gydF4y2Ba
2.1。隔离人脐带mscgydF4y2Ba
huc-MSCs分离和识别如前所述gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。简单、新鲜脐带收集从通知,自愿的母亲和漂洗两次磷酸盐(PBS)含有青霉素和链霉素,脐带血在此过程中被删除。洗绳被切成1毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba份,提出最低必不可少的媒介gydF4y2BaαgydF4y2Ba(gydF4y2BaαgydF4y2Bamem、表达载体)含有10%的边后卫(Gibco)、青霉素和链霉素。组织被培养在37°C湿润有限公司5%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba空调。中初始镀后每3天更换一次。当纤维母细胞出现后10天,文化trypsinised,通过进一步扩张到新的培养瓶,媒介是改变每2天。msc受到成骨、脂肪形成的差异化分析和流量仪分析CD105、CD29, CD73, CD11b、CD34、CD45确认中成功分离msc。所有细胞培养在37°C湿润有限公司5%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba空调。gydF4y2Ba
2.2。代EVs-L-PGDSgydF4y2Ba
腺病毒是购自Fubio生物技术公司。的示意图表示腺病毒载体提出了补充图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。腺病毒编码L-PGDS (Ad-L-PGDS)和矢量(Ad-Vector)被添加到MSC介质在10gydF4y2Ba7gydF4y2Ba空斑形成单位/毫升时huc-MSCs融合达到60 - 70%。荧光显微镜观察转染效率。转染24小时后,文化媒体8毫升EV-free的边后卫/所取代gydF4y2BaαgydF4y2Bamem四十八小时。然后,EV隔离的条件培养基收集。短暂的条件培养基是离心20分钟2000gydF4y2BaggydF4y2Ba去除死细胞,随后,上层的是30分钟10000离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba去除细胞碎片。然后,阐明上层清液集中并为30分钟1500离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba使用100 kDa MWCO中空纤维膜(微孔,贝德福德,MA);之后,上层清液完全与ExoQuick-TC resuspended™(印度国家银行,EXOTC10A-1)和一夜之间保持在4°C。电动汽车在1500年通过离心30分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba并存储在-80°C。电动汽车由BCA决定蛋白质的蛋白质浓度测定。EVs的粒子分布是由纳米粒子跟踪检测分析仪(粒子矩阵ZetaView®)。gydF4y2Ba
2.3。EV吸收gydF4y2Ba
人类胃癌细胞株sgc基地- 7901购买的生物化学和细胞生物学研究所中国科学院(中国上海)和保存在我们的实验室和维护rpmi - 1640中有10%的边后卫(Gibco)。电动汽车与CM-Dil孵化(表达载体)染料为30分钟37°C和洗两次使用超速离心法gydF4y2Ba 70分钟去除多余的染料。之后,国网公司- 7901细胞孵化与Dil-labeled EVs 4 h, 4% PFA和0.1% Triton-X 100是用来固定和permeabilize细胞,随后,细胞核是用DAPI染色。图像是用一个倒置的广角荧光显微镜(δ愿景精英,通用电气医疗集团生命科学)。gydF4y2Ba
2.4。细胞迁移和入侵检测gydF4y2Ba
国网公司- 7901细胞被播种在一夜之间6-well板与PBS和治疗,EVs-Vector, EVs-L-PGDS 48 h。然后,10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞被播种到参议院Transwell室的无血清培养基中含有10%的边后卫是添加到众议院,随后,在细胞培养箱培养16个小时。钱伯斯是固定在4%多聚甲醛与PBS 30分钟,洗两次。结晶紫染色和PBS清洗后,室表面的迁移细胞的数量是在显微镜下计数,和至少六个领域的每组细胞化验。细胞入侵检测,200年gydF4y2BaμgydF4y2Bal(基底膜基质的稀释1:采用无血清4预镀成Transwell钱伯斯和细胞培养时间延长到24 h。剩下的手续是一样的在细胞迁移试验。gydF4y2Ba
2.5。集落形成实验gydF4y2Ba
国网公司- 7901细胞收获和播种6-well板每口井的1000个细胞的密度和孵化有限公司5%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba湿润孵化器在37°C为7天。潜伏期结束时,细胞与4%多聚甲醛固定,与结晶紫染色。细胞的数量是在显微镜下计算。gydF4y2Ba
2.6。细胞凋亡分析和TUNEL染色gydF4y2Ba
治疗后与PBS EVs-Vector或EVs-L-PGDS,国网公司- 7901细胞收获和沾膜联蛋白V和π(英杰公司)根据制造商的指示。通过流式细胞仪检测凋亡细胞。在肿瘤组织中凋亡细胞被TUNEL细胞凋亡检测评估工具包(武汉博士德,中国)根据制造商的指示。阳性细胞可视化,用光学显微镜拍照。gydF4y2Ba
2.7。免疫印迹gydF4y2Ba
细胞和组织溶解产物提取在裂解缓冲(•瑞帕,皮尔斯)和蛋白酶抑制剂。然后,总共60gydF4y2BaμgydF4y2Bag蛋白在12% SDS-polyacrylamide凝胶分离180 kDa prestained蛋白质标记(MP102-02, Vazyme生物科技有限公司)和转移到PVDF膜。膜被封锁的5% BSA然后孵化主要抗体GAPDH (1: 2000;Bioworld), CD9 (1: 500;手机信号技术)、CD63 (1: 500;Abcam)的研究(1:500;Abcam), Calnexin (1: 500;手机信号技术)、L-PGDS (1: 500;Bioworld),伯灵顿(1:400;手机信号技术)、Bcl2 (1: 500;手机信号技术)、Oct4 (1: 500; Cell Signal Technology), Nanog (1 : 500; Bioworld), Sox2 (1 : 800; Wanlei bio), p-STAT3 (1 : 500; Cell Signal Technology), and t-STAT3 (1 : 500; Cell Signal Technology) at 4°C overnight. The membranes were washed three times with Tris-buffered saline/Tween and incubated with goat anti-rabbit secondary antibody (1 : 2000, Invitrogen) at 37°C for 1 hour. The signals were visualized using Luminata crescendo western horseradish peroxidase substrate (Millipore) and image software of GE (ImageQuant LAS4000 mini).
2.8。体内致瘤性gydF4y2Ba
异种移植小鼠模型建立了如前所述[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。雄性BALB / c小鼠ν/ν(上海实验动物中心、科学院、上海、中国)年龄在4 - 6周(18 - 20 g重量)被随机分为三组每组小鼠(6)。老鼠被允许免费获取食物和水,被安置在一个控制温度(20 - 25°C)和湿度(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba在12 h光暗周期。所有组收到了国网公司- 7901细胞的皮下注射用PBS预处理,EVs-L-PGDS或EVs-Vector蛋白质浓度的320gydF4y2BaμgydF4y2Bag / ml 48 h (gydF4y2Ba 细胞在200年gydF4y2BaμgydF4y2Bal PBS)上肢。肿瘤生长是评估使用肿瘤重量和肿瘤体积测量。使用卡尺测量肿瘤体积根据修改后的椭圆形的公式gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba肿瘤出现在第十天,老鼠牺牲25天,和收获肿瘤受到后续分析。所有实验协议是江苏大学医学伦理委员会批准(2012258)。gydF4y2Ba
2.9。免疫荧光和免疫组织化学gydF4y2Ba
免疫荧光法用于检测L-PGDS的表达在肿瘤组织(1:50;Bioworld,路易公园,MN)。第二抗体是Alexa萤石555 -标记驴anti-rabbit免疫球蛋白g(1: 300年,表达载体,卡尔斯巴德,CA)。图像是用显微镜(尼康、东京、日本)。免疫组织化学分析,肿瘤组织固定在4%多聚甲醛(PFA)嵌入在石蜡,切成5gydF4y2BaμgydF4y2Ba米厚的部分。然后,这些部分与anti-PCNA孵化(1:100;Bioworld,路易公园,MN)一夜之间在4°C,随后,二次抗体孵育30分钟的37°C。最后,组织是复染色3,3gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Badiaminobenzidine (DAB)和显微镜拍照。gydF4y2Ba
2.10。统计分析gydF4y2Ba
所有数据都显示为gydF4y2Ba 由GraphPad棱镜(SD)和分析软件(版本7.0)。团体之间的显著差异是由单向方差分析评估图基的事后考验。gydF4y2Ba 被认为是具有统计学意义。gydF4y2Ba
3所示。结果gydF4y2Ba
3.1。识别和Multipotency huc-MSCsgydF4y2Ba
人类脐带huc-MSCs得到从新鲜。文化的第十天,huc-MSCs显示纤维增长在显微镜下(图gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba)。红脂肪水滴沾油红O观察在huc-MSCs被脂肪形成的诱导分化培养基(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba)。红色钙结节茜素红染色观察成骨huc-MSCs(图gydF4y2Ba1 (c)gydF4y2Ba)。然后,huc-MSCs被检测到的表面标记流式细胞术。CD105的表达水平,CD29, CD73是积极的,和CD11b的表达水平,CD34、CD45负(图gydF4y2Ba1 (d)gydF4y2Ba)。上述结果表明,我们已经成功地孤立huc-MSCs。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
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3.2。Ad-L-PGDS-Modified huc-MSCs打包L-PGDS分泌电动汽车gydF4y2Ba
腺病毒编码L-PGDS和向量被用来使转染huc-MSCs,分别。证实了GFP表达huc-MSCs荧光显微镜显示,腺病毒被成功地整合到基因组(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)。通过染色细胞核,几乎所有的成功与腺病毒转染细胞,这表明coexpression DAPI和GFP(补充图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。免疫印迹显示L-PGDS的表达明显高于在Ad-Vector Ad-L-PGDS-transfected msc比治疗组(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)。的上层清液huc-MSCs转染病毒收集的EV隔离。EVs分泌的huc-MSCs转染和Ad-L-PGDS Ad-Vector被标记为EVs-L-PGDS EVs-Vector,分别。免疫印迹显示电动车标记、CD9、CD63,和研究表示EVs-L-PGDS和EVs-Vector(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba)。Calnexin,消极的电动汽车的标志,并不表示(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba)。与EVs-Vector相比,在EVs-L-PGDS L-PGDS的表达显著增加(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba)。两种电动汽车显示典型的盘形状下的透射电子显微镜(TEM)(图gydF4y2Ba2 (d)gydF4y2Ba)。此外,NanoSight可见纳米颗粒分析仪检测到电动汽车的粒子分布相对均匀,直径大约100海里(图gydF4y2Ba2 (e)gydF4y2Ba)。结果证实,L-PGDS-loaded EVs可成功由腺病毒转染msc。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
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3.3。EVs-L-PGDS增加L-PGDS和减少干细胞标记表达和抑制STAT3磷酸化在胃癌细胞sgc基地- 7901gydF4y2Ba
电动汽车被标记与脂质膜染料CM-Dil孵化与国网公司- 7901细胞检查如果能够被癌细胞。荧光图像显示红色荧光斑点的出现在细胞质中核附近的癌细胞通过共焦显微镜、指示EVs的成功转移到癌细胞(图gydF4y2Ba3(一个)gydF4y2Ba)。与PBS和EVs-Vector组相比,免疫印迹显示L-PGDS在国网公司- 7901细胞的表达增加EVs-L-PGDS治疗后(数字gydF4y2Ba3 (b)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3 (c)gydF4y2Ba)。符合我们之前的研究,EVs-L-PGDS也减少干细胞标记物的表达,包括gydF4y2BaOct4gydF4y2Ba,gydF4y2BaNanoggydF4y2Ba,gydF4y2BaSox2gydF4y2Ba相比之下,PBS和EVs-Vector集团(数据gydF4y2Ba3 (d)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3 (e)gydF4y2Ba)。此外,免疫印迹分析表明,磷酸化STAT3的表达显著减少EVs-L-PGDS治疗后(数字gydF4y2Ba3 (f)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3 (g)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
(e)gydF4y2Ba
(f)gydF4y2Ba
(g)gydF4y2Ba
3.4。EVs-L-PGDS抑制迁移、入侵和集落形成和诱导胃癌细胞凋亡国网公司- 7901gydF4y2Ba
为了研究电动汽车的影响癌细胞的生物功能,EVs-L-PGDS和EVs-Vector用于治疗国网公司- 7901细胞。与PBS相比,EVs-Vector有轻微的抑制作用在肿瘤细胞的迁移,而EVs-L-PGDS迁移限制作用更有效(gydF4y2Ba ,gydF4y2BaPBS和EVs-Vector;gydF4y2Ba ,gydF4y2BaEVs-Vector比EVs-L-PGDS)(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba(a))。EVs-L-PGDS也进一步抑制了国网公司的入侵能力- 7901细胞(gydF4y2Ba ,gydF4y2BaPBS和EVs-Vector;gydF4y2Ba ,gydF4y2BaEVs-Vector比EVs-L-PGDS)(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba(b))。集落形成试验中,癌细胞治疗EVs-L-PGDS形成殖民地比PBS组少,而与EVs-Vector组相比,殖民地的数量没有显著变化,但规模较小的(gydF4y2Ba ,gydF4y2BaPBS和EVs-L-PGDS)(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba(c))。流式细胞仪分析显示细胞凋亡率在PBS, EVs-Vector, EVs-L-PGDS组gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba和gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba分别(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba(d))。更多的EVs-L-PGDS组观察到凋亡细胞(gydF4y2Ba ,gydF4y2BaPBS比EVs-L-PGDS)。gydF4y2Ba
3.5。EVs-L-PGDS抑制裸鼠皮下肿瘤生长的诱导胃癌细胞sgc基地- 7901gydF4y2Ba
一个皮下肿瘤裸鼠模型进行估计的增长能力国网公司- 7901细胞治疗与电动汽车。代表肿瘤小鼠的图像如图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(a)与另两组相比,预处理EVs-L-PGDS导致生产规模较小的肿瘤(图质量gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(b))。肿瘤组织的重量和体积EVs-L-PGDS组都是最小的(gydF4y2Ba ,gydF4y2BaPBS和EVs-L-PGDS)(数据gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(c)和gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(d))。免疫荧光和免疫印迹显示更多L-PGDS表达式被发现在EVs-L-PGDS治疗后肿瘤组织(数字gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(e) -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(g))。除此之外,伯灵顿的表达,proapoptotic蛋白质,也明显高于治疗组小鼠的肿瘤与EVs-L-PGDS与PBS(处理gydF4y2Ba )gydF4y2Ba和EVs-Vector (gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(数据gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(e)和gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(f))。和Bcl2的表达减少EVs-L-PGDS集团(gydF4y2Ba ,gydF4y2BaPBS和EVs-L-PGDS;gydF4y2Ba ,gydF4y2BaEVs-Vector与EVs-L-PGDS)(数据gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(e)和gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(f))。他染色显示肿瘤组织EVs-L-PGDS组更多孔,不如在PBS和EVs-Vector组织血管生成(图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(h))。TUNEL染色显示,有更多的凋亡细胞在小鼠肿瘤组织与EVs-L-PGDS治疗后比治疗PBS (gydF4y2Ba )gydF4y2Ba或EVs-Vector (gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(数据gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(我),gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(j))。免疫组织化学检查PCNA的表达表明,肿瘤细胞增殖数量显著降低肿瘤的老鼠EVs-L-PGDS组相比,治疗组与PBS (gydF4y2Ba )gydF4y2Ba或EVs-Vector (gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(数据gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(k)和gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(左))。总之,我们的数据表明L-PGDS-loaded EVs表现出抑制体内对肿瘤生长的影响。gydF4y2Ba
4所示。讨论gydF4y2Ba
我们之前的研究发现,L-PGDS在胃癌组织中表达低于在邻近组织和与病人预后有关(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。我们已经表明,PGD2直接刺激或L-PGDS超表达能够抑制胃癌细胞生长和迁移。此外,福冈等人发现外生L-PGDS PGD2胃癌细胞的分泌,从而抑制胃癌细胞的生长,表达过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba)[gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]。此外,L-PGDS抑制肿瘤的生长比PGD2注射肿瘤小鼠促使我们优化的抗肿瘤效应PGD2通过L-PGDS电动汽车。基于这些研究,我们推测,L-PGDS msc可以分泌EVs加载,并修改后的电动汽车可能会限制胃癌的进展。gydF4y2Ba
新出现的证据表明,电动汽车是有用的运载工具在肿瘤治疗因其高稳定性、低免疫原性、生物相容性和自然瞄准能力(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]。EVs包含丰富的内容,如信使rna,蛋白质,microrna,和脂质;电动汽车可以保护这些货物从退化gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]。在过去的几十年中,研究人员已经确定了不同origin-derived电动汽车可以利用车辆交付抗癌药物。每种类型的电动汽车具有明显的优势。在这项研究中,我们使用huc-MSCs作为电动汽车的起源。然而,msc的角色和MSC-derived EVs癌症进展一直存有争议。一些研究发现癌症发展电动汽车的有利支持。Roccaro等人发现,骨髓MSC-derived EVs进行更高水平的致癌蛋白,细胞因子和粘附分子来促进多发性骨髓瘤进展(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba),而其他研究认为电动汽车对癌症有疗效。例如,脂肪MSC-derived电动汽车可以抑制卵巢癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]。MSC-derived EVs也显示出抑制肝细胞癌的生长通过促进NK T细胞抗肿瘤反应(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba]。此外,通过基因工程MSC-derived电动汽车或nongenetic方法增强了抗肿瘤作用[gydF4y2Ba42gydF4y2Ba,gydF4y2Ba43gydF4y2Ba]。huc-MSCs,许多研究表明,huc-MSCs及其条件包含电动汽车媒体抑制生长和迁移和诱导细胞凋亡在多种肿瘤包括黑色素瘤、肺癌、肝癌、神经胶质瘤(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba44gydF4y2Ba,gydF4y2Ba45gydF4y2Ba]。造成这种差距的原因是未知的。一个可能的原因可能是电动车注入的时间之前或之后肿瘤形成(gydF4y2Ba46gydF4y2Ba,gydF4y2Ba47gydF4y2Ba]。有争议的结果的另一个可能的解释是由于电动车的来源。电动汽车可能携带不同的细胞分子从他们的父母。例如,朱镕基等人表明,骨髓MSC-derived EVs提升体内胃肿瘤的生长(gydF4y2Ba48gydF4y2Ba]。此外,不同的电动汽车对肿瘤恶化的影响也可能归因于不同的肿瘤类型(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba49gydF4y2Ba]。在这项研究中,MSC-derived EVs包含空向量也显示轻微的抗肿瘤效果,表明huc-MSC-derived EVs作为抗癌药物载体合适人选。gydF4y2Ba
肿瘤干细胞样细胞的微环境包含一个小的子集,癌症的发病中扮演很重要的角色,维护,和转移(gydF4y2Ba50gydF4y2Ba]。侵略性的癌症细胞通常有增强的潜在的自我更新能力,导致肿瘤恶化。STAT3被认为有一个重要的监管作用在癌症干细胞样细胞的行为gydF4y2Ba51gydF4y2Ba]。通过绑定的推动者gydF4y2BaOct4gydF4y2Ba,gydF4y2BaNanoggydF4y2Ba,gydF4y2BaSox2gydF4y2Ba,STAT3可能调节一些癌症干细胞样细胞的基因表达标记,这可能导致致癌作用和发展gydF4y2Ba52gydF4y2Ba,gydF4y2Ba53gydF4y2Ba]。在我们之前的研究中,我们显示L-PGDS过度可能会限制癌细胞具备干细胞的激活和抑制STAT3 (gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。在这项研究中,我们的数据表明,抑制STAT3磷酸化EVs-L-PGDS引起对干细胞标记物的表达是至关重要的。因此,我们推测,EVs-L-PGDS可能抑制胃癌进展通过抑制STAT3磷酸化。gydF4y2Ba
各种方法用来实现电动汽车修改。潜伏期通常用于化疗药物加载到电动汽车(gydF4y2Ba54gydF4y2Ba]。microrna或siRNAs加载到孤立的电动车,电穿孔是最常使用的gydF4y2Ba55gydF4y2Ba]。大多数研究人员使用病毒或质粒转染基因修改供者细胞(gydF4y2Ba56gydF4y2Ba]。,L-PGDS-loaded EVs获得通过adenovirus-transfected huc-MSCs以TEM和免疫印迹。我们发现EVs-L-PGDS被细胞内化,从而抑制集落形成、迁移和入侵和促进国网公司- 7901细胞的细胞凋亡。肿瘤生长被抑制在国网公司- 7901肿瘤小鼠与EVs-L-PGDS预处理后。这些数据表明adenovirus-transfected huc-MSCs能够分泌EVs富含治疗货物,这些货物可能功能传递到肿瘤细胞。gydF4y2Ba
采用电动汽车之前,仍有许多限制。目前,没有标准方法EVs的分离和提取。不同的方法包括ExoQuick EV提取设备,超速离心法,微流体分离,和immunomagnetic珠排序为电动汽车开发的分离,使得电动汽车呈现不同的品质gydF4y2Ba57gydF4y2Ba,gydF4y2Ba58gydF4y2Ba]。此外,潜在的副作用,长期使用后致肿瘤性应该提到在安全评估和监控gydF4y2Ba59gydF4y2Ba]。此外,大规模生产clinical-grade EVs迄今仍难以实现(gydF4y2Ba60gydF4y2Ba]。额外的努力,这些问题将会提高电动汽车的临床应用的可行性。gydF4y2Ba
总之,我们的研究表明,EVs overexpressing L-PGDS抑制胃癌进展通过调节癌细胞具备干细胞和抑制STAT3磷酸化。我们的研究结果提供新颖的见解EV-based癌症治疗基因改造。gydF4y2Ba
数据可用性gydF4y2Ba
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。gydF4y2Ba
的利益冲突gydF4y2Ba
作者宣称没有利益冲突。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
这项工作是支持的先进的科学和技术基础的江苏省(BE2020680),技术开发项目(20180361),江苏大学的自然科学基金中国江苏高等教育机构(kjb320007 19日),国家大学生创新训练项目和创业(202010299031),和项目优先资助的学术程序开发江苏高等教育机构(第三阶段)。gydF4y2Ba
补充材料gydF4y2Ba
图S1:腺病毒载体的示意图表示。图S2:代表绿色荧光蛋白的荧光图像和DAPI huc-MSCs与腺病毒治疗后。补充图3:uncropped免疫印迹图像数据。gydF4y2Ba(gydF4y2Ba补充材料gydF4y2Ba)gydF4y2Ba