文摘

背景。圆形的rna (circRNAs)导致许多疾病的规定。然而,很少有人知道的角色发展的circRNAs激素性骨质疏松症(GIOP)。本研究旨在系统地描述GIOP circRNA表达谱和预测的潜在功能相关的监管网络。方法。小动物GIOP模型开发的Sprague-Dawley老鼠每日腹腔内给药合成糖皮质激素地塞米松。ct机和骨骼histomorphometry进行的骨质流失。染色茜素红S (ARS)和碱性磷酸酶(ALP)活性进行评估来确定bmsc的成骨分化潜能。RNA序列进行识别差异表达之间的bmsc circRNAs GIOP和正常组,由存在验证。siRNA干扰实验被用来演示其功能。基因本体论(去)和《京都议定书》百科全书的基因和基因组(KEGG)分析预测的功能差异表达circRNAs。微(microRNA) circRNAs和circRNA-miRNA交互的目标是预测。结果。ct机和骨骼histomorphometry证实老鼠GIOP模型。ARS强度和高山GIOP bmsc活动减少。十七circRNAs被确定 , ,和 ,7是调节和10个表达下调。的存在结果选择circRNAs RNA-seq结果一致,表明circARSB circAKT3明显调节,而circPTEN和circTRPM7 GIOP组中表达下调。circARSB和circPTEN差别进一步功能实验发现,对这些基因的表达成骨分化导致了相应的变化,这表明circARSB消极,积极而circPTEN,调节BMSC成骨分化。circRNA-targeted microrna的分析预测,mir - 135 - 5 - p与circARSB circAKT3,和mir - 881 - 3 - p circPTEN和circTRPM7有关。此外,这些差异表达相关的信号通路circRNAs预测。结论。circAKT3,本研究确定了circARSB circPTEN,和circTRPM7与成骨分化期间通过circRNA-targeted GIOP miRNA-mRNA轴,这可能提供洞察GIOP的病理生理机制。

1。介绍

激素性骨质疏松症(GIOP),最常见的继发性骨质疏松,是最常见的并发症之一,长期服用糖皮质激素(gc)。它发生在30%的患者长期(超过6个月)使用GC [1]。据报道,低骨密度(BMD)和随后的脆弱性骨折与GIOP的发展(2- - - - - -4),严重影响患者的生活质量,增加了经济负担。

间充质基质细胞(msc)是众所周知的自我更新能力分化成多种细胞类型体外和体内包括成骨的chondrogenic,脂肪形成的,肌原性的血统5- - - - - -7]。最常见的来源的msc是骨髓msc (bmsc),常用在骨骼组织工程在体外和在活的有机体内(8]。bmsc先前已被证明在疾病进展和治疗反应中发挥作用,已被用于骨再生9]。以前的研究报道,长期使用外部GCs与bmsc的障碍,因此导致受损的骨成骨细胞凋亡增加,所有这些导致骨形成减少,骨量减少(10,11]。尽管GIOP的发病机理的理解已取得了很大的进步,和终端分化的bmsc,严格调制通过不同的转录因子和各种信号通路(12,13),具体机制尚未完全阐明,和需要进一步研究14]。因此,迫切需要有一个更好的理解的发病机制GIOP识别新型生物标志物和制定新的战略GIOP的预防和治疗。

圆形RNA (circRNAs),一种新的非编码RNA,形成共价闭合循环和代表一个更稳定和广泛的阶级比线性RNA的RNA分子(15]。circRNAs发挥重要作用在生物过程和作为诊断和预后的生物标记神经发育(16[],癌症17),和心血管疾病18),等等。此外,据报道,circRNAs还在骨科疾病发挥他们的功能,包括骨肉瘤(19),骨关节炎(20.),和椎间盘变性21]。然而,circRNA概要文件和他们的角色在骨再生的GIOP仍然未知。

在目前的研究中,我们旨在识别差异表达之间的bmsc circRNAs GIOP组和正常组使用RNA序列(RNA-seq)和研究他们的监管互动网络和基于生物信息学分析的基本机制。这些发现可能有助于阐明指定GIOP发展机制,揭示小说GIOP诊断生物标记。

2。材料和方法

2.1。GIOP动物模型制备

总共十Sprague-Dawley健康雌性老鼠岁4个月平均重量 来自广东省实验动物中心。老鼠被随机分配同样分成两组,分组和剂量如下:正常组,5毫升/公斤蒸馏水;GIOP集团5毫克/公斤地塞米松。治疗都是由腹腔内注射每周两次连续12周。在那之后,老鼠被颈椎脱位牺牲。股骨被移除和放置在无菌PBS bmsc的进一步提取。左和右胫骨被解剖,放置在4%多聚甲醛之前评估骨形态测量学。腰椎vertebra-4解剖和放置在4%多聚甲醛进一步microcomputed断层扫描(ct机)分析。所有动物的治疗方法进行按照有关标准的第一附属医院伦理委员会的中山大学(2019 - 196)。

2.2。ct机

腰椎vertebra-4从正常和GIOP组织分析了高分辨率ct机扫描(Hitachi-Aloka、日本)。扫描仪是55千伏的电压,电流145毫安,分辨率为10μ米/像素。腰椎的横断面图像vertebra-4被用来执行成像重建的三维histomorphometric分析软件(VGStudio MAX V2.2)。分析三维结构参数包括骨密度,骨小梁数量(结核病。N)、小梁厚度(结核病。Th),骨体积/总量(BV /电视),和小梁分离(结核病。Sp)。

2.3。骨Histomorphometry

骨骼组织在4%多聚甲醛固定,脱钙,乙二胺四乙酸(EDTA)解决10%的福尔马林4周,然后,嵌入在石蜡。胫骨石蜡包埋组织被切割成4μ米厚的标本与haematoxylin-eosin染色。彩色的胫骨在光学显微镜下观察和成像(奥林巴斯BX43、东京、日本)。所有测量数据进行图像分析系统(奥林巴斯cellSens维度、东京、日本)。所有参数测量根据设定的指导方针骨矿研究的美国社会Histomorphometry命名法委员会(1987)(22]。

2.4。提取bmsc和成骨分化的文化

分离、培养bmsc后整个骨髓依从性方法。股骨被移除和放置在一个无菌小烧杯,然后搬到一个超级洁净工作台。与PBS洗涤后,两国木乃伊化以股骨被切除。一个注射器被用来吸入细胞培养液冲洗骨髓腔,重复3 - 5次。细胞在杜尔贝科resuspended修改鹰的媒介:营养混合物F-12 (DMEM / F12;Gibco)补充10%胎牛血清(的边后卫;Gibco), 100国际单位/毫升青霉素、链霉素和100国际单位/毫升、后细胞被播种到烧瓶和培养在孵化器37°C, 5%的公司₂,100%的相对湿度。48小时后,改变了流体的悬浮细胞。此后,每3天中被改变。当融合bmsc达到80 - 90%,0.25%胰蛋白酶包含0.53毫米EDTA是用来消化细胞。伴着被扩大,用于在体外和在活的有机体内在章节3 - 5实验。

伴着被播种在12-well板的密度 在生长介质(GM)组成的DMEM / F12和10%的边后卫。文化融合达到80%时,介质改为成骨分化培养基(OM, Cyagen生物科学),每3天更换一次。碱性磷酸酶(ALP)活性和茜素红S (ARS)染色后被用于确定成骨分化潜能诱导在天7和14日。ARS量化、10%氯化十六烷吡啶一水(中国共产党,Sigma-Aldrich)被用来使退色1小时在室温下的细胞。然后,200年μl液体被转移到一个96孔板,并在562纳米光谱吸光度测定。

2.5。RNA提取和测序

两组的bmsc收获5天后成骨的归纳。总RNA分离与试剂盒试剂(表达载体)。核糖体rna被使用Ribo-Zero rRNA去除包(Illumina公司)。RNA纯度和浓度的样品测定NanoDrop nd - 1000 (NanoDrop热)。RNA样本的完整性是由变性琼脂糖凝胶电泳。

图书馆是由RNA与TruSeq rRNA-depleted RNA链总RNA图书馆准备工具包(Illumina公司)。图书馆是质量控制和量化生物分析仪2100系统(安捷伦科技)。接下来,10点图书馆是单链DNA分子变性,捕捉到Illumina公司流动细胞原位放大作为集群,最后测序的Illumina公司6000年NovaSeq编曲150个基点配对读取结束。

2.6。定量实时聚合酶链反应(存在)的分析

量化的表达所选circRNAs,总RNA (2μg)受到与核苷酸合成第一链cDNA混合(疯狂的有限公司)、核糖核酸酶抑制剂(酶),上标三世逆转录酶(热费希尔科学)。存在进行QuantStudio 5实时PCR系统(热费希尔)使用SYBR绿色主人混合(Cloudseq)。ACTB用于规范化。引物序列如下:circARSB,向前:5 - - - - - -CTCTGGAACAACACGGTCCT-3 ,反向:5 - - - - - -TACATTCCCAGGTGCCATTT-3 ;circAKT3转发:5 - - - - - -TGGTTCGAGAGAAGGCAAGT-3 ,反向:5 - - - - - -TTGGCTTTGGTCGTTCTGTT-3 ;circTRPM7转发:5 - - - - - -GCACAGAAGCTCACATTTGC-3 ,反向:5 - - - - - -TGGGAGAACTCTCCTCCAGA-3 ;circPTEN转发:5 - - - - - -GAGGCCCTGGATTTTTATGG-3 ,反向:5 - - - - - -GCAGTTAAATTTGGCGGTGT-3 ;ACTB转发:5 - - - - - -AAGTCCCTCACCCTCCCAAAAG-3 ,反向:5 - - - - - -AAGCAATGCTGTCACCTTCCC-3 。相对表达式计算的公式 。每个样品测试在三个独立的实验一式三份。

2.7。核转染试验

转染时进行细胞融合达到70 - 80%。si-circARSB si-circPTEN(补充2),和相应的消极控制转染单独使用Lipofectamine 3000(美国热费希尔)根据制造商的协议。收集细胞转染48 h后mRNA分析中存在。

2.8。统计分析

定量数据表示为 (SD)和所有实验进行至少三次。用SPSS 20.0软件进行统计分析。未配对的两组之间的差异进行分析 - - - - - -测试,而单向方差分析(方差分析)是用来确定以上两组之间的差异。一个 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。老鼠的增长状态

在治疗之前,在两组大鼠表现出总体体重增加无显著差异( 和 GIOP组和正常组, )。经过12周的干预,GIOP组大鼠的体重明显低于正常组( vs。 , )。

3.2。GIOP鼠模型的验证

一个三维重建感兴趣的区域(ROI), 2 d腰椎的截面图像,而且他的胫骨部分染色正常和GIOP组如图1(一)。ct机分析被用来评价小梁骨微体系结构的改变大鼠腰椎的BMD, BV /电视,结核病。N,结核病。Th和结核病。Sp腰椎的骨小梁GIOP组显著降低( )(图1 (b))。Histomorphometric分析最初使用胫骨骨执行。胫骨的histomorphometric数据被提供在图1 (c)。与正常组相比,结核病。基于“增大化现实”技术的%,结核病。N,结核病。Th和结核病。Sp GIOP组显著降低( )。更重要的是,我们发现,与正常组相比,成骨细胞的数量明显减少GIOP组( ),虽然没有明显差异群体之间的破骨细胞的数量(图1 (d))。

3.3。在bmsc GC的成骨的影响

成骨诱导后7天、14天,ARS染色结果表明,矿化结节增加正常bmsc的成骨诱导组(上)比GIOP的成骨诱导bmsc集团(OG)(图2(一个))。和量化的结果ARS符合ARS染色(图的结果2 (b))。此外,高山活动的结果证实减少高山活动期间GIOP bmsc的成骨分化(图2 (c))。

3.4。的表达模式circRNAs

总共有2990 circRNAs被确定在bmsc GC治疗。其中,1081 circRNAs已经记录在circBase和/或其他的研究报道,而其余1909 circRNAs小说circRNAs在这项研究中。2990年的circRNAs是分布在几乎所有的染色体。X染色体1 - 2911 circRNAs组成,包含72 circRNAs,和7 circRNAs是线粒体染色体(图中发现的3(一个))。1695的大小其实circRNAs从62元到81015元不等,其中绝大多数(33.63%)长201 - 500元,平均长度为2480.41元(图3 (b))。之间的差异表达的概述circRNAs GIOP组和正常组是由一个热图显示折叠后改变过滤(图3 (c))。总的来说,火山图和散点图circRNAs显示17 circRNAs鉴定差异表达,其中7 circRNAs调节和10 circRNAs显著下调( , )(数据3 (d)和3 (e))。和这些差异表达的特定信息circRNAs见表1。总的来说,11日,4,2人属于外显子类型,重叠的类型,分别和基因间区域类型。染色体上的分布差异表达circRNAs如图3 (f)。

其中,四个circRNAs,即circARSB (chr2:42574415 - 42585308 +), circAKT3 (chr13:99644745 - 99660065), circTRPM7 (chr3:125789087 - 125790770)和circPTEN (chr1:258685624 - 258693123 +),选择基于他们的原始强度,改变,折起来值。circARSB和circAKT3调节,而circTRPM7和circPTEN被存在GIOP组中表达下调。验证结果表明,这四个选择circRNAs的表达水平与RNA-seq结果(图一致4(一))。根据UCSC基因组浏览器,所有这些circRNAs其实类型。具体而言,circARSB环化形成的外显子2,第3外显子,外显子4 Arsb基因的染色体上2 q14并最终形成成熟的序列长度为586新台币(图4 (b));circAKT3环化形成的外显子,外显子4,Akt3基因的外显子5号染色体上13 q25并最终形成成熟的序列长度为389新台币(图4 (c));33 circTRPM7环化形成的外显子,外显子34岁和35 Trpm7基因外显子3号染色体上q36并最终形成成熟的序列长度为433新台币(图4 (d));circPTEN环化形成的外显子,外显子4,Pten基因的外显子5 1号染色体上q52并最终形成成熟的序列长度为328新台币(图4 (e))。

3.5。可拆卸的bmsc的circARSB和circPTEN调节成骨分化

转染是击倒circARSB的表达和circPTEN。存在分析证实,circARSB的表达和circPTEN击倒组降低(图S1 (a))。ALP的活性降低circARSB击倒组而增加circPTEN击倒组诱导后7天(图S1 (b))。成骨诱导后14天,ARS染色强度明显降低circARSB击倒组虽然circPTEN击倒组增加,表明基质矿化是降低(图S1 (c))。

3.6。去KEGG circRNAs宿主基因的途径分析

circRNAs可以影响GIOP bmsc的成骨分化过程通过调节相应的信号通路,这可能涉及GIOP的发展。因此,我们进行富集分析去探索不同的势函数表示circRNAs。基因本体论(去)分析包括三个方面:生物过程、细胞组件和分子功能。分析排名前128的丰富的条款与调节circRNAs表示,最丰富的生物过程的条件(上)与皮脂腺有关发展(去:0048733),负调节急性炎症反应(去:0002674),甲基化和组蛋白H3-K36(去:0010452)。最丰富的细胞组件条款costamere(去:0043034),信息接触区(去:0044291)和细胞外的外来体(去:0070062)。最丰富的分子功能方面与硫酸酯水解酶活性(去:0008484),S100蛋白结合(去:0044548),和组蛋白甲基转移酶的活动(H3-K4具体)(去:0042800)(数据5(一个)- - - - - -5 (c))。

根据分析排名前340的丰富的条款与表达下调circRNAs,最丰富的生物过程方面与凋亡过程的积极监管有关(去:0043065),积极调节细胞程序性死亡(去:0043068),和积极的调节细胞死亡(去:0010942)。最丰富的细胞组件条款somatodendritic舱(去:0036477),神经元胞体(去:0043025)和囊泡(去:0031982)。最丰富的分子功能条款phosphatidylinositol-3-phosphatase相关活动(去:0004438),磷脂酰肌醇一磷酸磷酸酶活性(去:0052744)和血小板源生长因子受体结合(去:0005161)(数据5 (d)- - - - - -5 (f))。

京都百科全书的基因和基因组(KEGG)调节circRNAs途径的分析,列出了前73途径根据浓缩分数,和具体途径与成骨分化和antiadipogenic分化丰富,包括调节脂肪细胞的脂解作用,VEGF信号通路、细胞凋亡,mTOR信号通路。21通路的表达下调circRNAs,列出根据浓缩分数,和具体途径与成骨分化和antiadipogenic分化丰富,包括矿物质的吸收,mTOR信号通路,FoxO信号通路,PI3K-Akt信号通路(数字5 (g)和5 (h))。

3.7。预测和注释的microrna circRNAs的目标

所选circRNAs circRNA-miRNA网络(表2)被米兰达和预测由Cytoscape映射(图6(一))。接下来,我们分析了这四个的目标microrna circRNAs,发现mir - 216 a - 3 - p和mir - 135 - 5 - p circARSB和circAKT3可以针对性的网络(图6 (b))。circPTEN和circTRPM7 mir - 881 - 3 - p和mir - 6326都可以有针对性的circRNAs circRNA-miRNA网络(图6 (c))。我们假设这四个circRNAs充当microrna的海绵来调节circRNA-miRNA网络及其相互作用预测表明,他们可能GIOP发展过程中发挥着至关重要的作用。

4所示。讨论

描述GC-induced骨质流失在小动物模型中,我们调查了影响合成GC地塞米松的老鼠,已经开发作为骨质疏松症最常用的模型,基于ct机,histomorphometry,和成像方法23,24]。在这项研究中,我们表明,最重要的改变在老鼠的骨头中发现用地塞米松治疗骨形成减少,骨小梁的测量。换句话说,骨小梁的几个参数的变化,比如BMD,结核病。基于“增大化现实”技术的%,BV /电视,BS / BV,结核病。N,结核病。Th和结核病。Sp,被ct机和histomorphometric分析检测。此外,据报道,GC施加负面影响成骨细胞的分化和增殖,但显著增加成骨细胞的凋亡25]。因为新骨的形成主要依赖于bmsc的分化成成骨细胞谱系,高糖皮质激素的负面影响在GIOP bmsc无疑会导致骨质流失。在这项研究中,我们发现GIOP大鼠成骨细胞的数量减少,而GIOP大鼠和正常大鼠之间的破骨细胞数量没有统计上的不同,这表明GIOP-related病态的GIOP老鼠可以诱导成骨细胞的结果。

非编码RNA,比如microrna、circRNAs lncRNAs,调节各种流程在RNA水平和参与多种疾病,包括GIOP。事实上,只有少数文献研究非编码RNA和GIOP之间的关系,其中大部分集中在microrna和GIOP的发生和发展的关系。例如,任研究et al。26]分析了microrna的表达在人类通过高通量测序,发现六个显著调节与GIOP microrna和三个显著下调microrna,提供新颖的见解GIOP的机理和奠定一个好的基础GIOP的预防和治疗。此外,有一些额外的研究与特定的分子相关联。沈et al。27]发现let-7f-5p提升Dex-inhibited成骨细胞分化并阻止地塞米松诱导骨质疏松体外和体内针对TGFBR1,后来介导下游成骨的转录GIOP作为一个潜在的治疗目标。马等的研究。28)发现mir - 186可以用作治疗激素性骨质疏松的方法管理中介的抑制组织蛋白酶k·拉尔森和Satterthwaite的研究29日)表明,mir - 365可以抑制DXM-induced osteoclastogenesis通过RANKL表达的抑制成骨细胞和直接调节破骨细胞的骨吸收。一项研究从刘et al。30.)表明,mir - 106 b和GIOP C57BL / 6小鼠表达增加。此外,mir - 106 b负调控成骨分化的间充质干细胞在体外直接针对BMP2部分是通过。总之,microrna之间的关系和GIOP吸引了关注;然而,调查重点之间的关系改变GIOP circRNAs表达的是有限的。

据报道,circRNAs可以作为microrna的海绵和发挥至关重要的监管作用通过与疾病相关的交互microrna [31日]在几个骨科疾病,包括强直性脊柱炎(32)和骨质疏松症(33]。例如,在骨质疏松症患者,赵et al。34)确定circ_0001275作为一个潜在的绝经后骨质疏松症诊断的生物标志物;黄等。35)进行了微阵列分析和PCR验证,表明circ_0006873和circ_0002060与低BMD相关状态。在骨肉瘤患者,circTada2a据报道,促进骨肉瘤的发展和增加肿瘤恶性行为通过mir - 203 - a - 3 - p / CREB3轴,这将是一个新的治疗骨肉瘤的目标(19]。在骨关节炎,circserPine2可能提供一个潜在的有效治疗骨关节炎的策略减少软骨细胞凋亡、促进细胞外基质合成代谢通过mir - 1271 / ERG通路(20.]。在椎间盘变性,circRNA-CIDN透露,促进细胞外基质通过miRNA-34a-5p / SIRT1的稳态轴和抑制细胞凋亡,提供一个新的视角研究压缩椎间盘退变的发病机制(21]。然而,GIOP的转录组表达分析,特别是circRNAs的特定功能在GIOP bmsc的成骨分化,很少报道(36,37]。在我们的研究中,我们从BMSC样本测序获得的所有circRNAs GIOP老鼠和正常对照组和2990 circRNAs识别,其中17 circRNAs差异表达的值< 0.05和 。其中,7 circRNAs调节,而其他10个表达下调在GIOP bmsc骨生成的过程。包括circARSB在内的四个circRNAs circAKT3、circTRPM7 circPTEN,选择基于他们的原始强度,改变,折起来价值观和被存在验证。circARSB circAKT3被证实能显著调节,而circTRPM7和circPTEN GIOP BMSC样品中表达下调。根据生物信息学分析,circARSB的宿主基因,circAKT3, circTRPM7, circPTEN,即Arsb [38,39],Akt3 [40,41],Trpm7 [42,43),Pten [44,45),分别牵扯骨代谢的重要监管机构。的差别在我们的深入研究,对这些circARSB和circPTEN表达成骨分化导致了相应的变化,表明circARSB消极,积极而circPTEN,调节BMSC成骨分化。

circRNAs在骨生成的角色可能与miRNA-mediated效果。microrna一类小非编码RNA序列,基因表达的转录后的调控至关重要(46]。根据先前的研究,microrna在调节成骨分化也起到关键作用。陈等人。47)确认miR-19a-3p促进成骨分化hMSCs通过抑制HDAC4表达式,从而缓解骨质疏松症的进展。程等。48)透露,mir - 365 - a - 3 - p负调节hBMSCs通过针对RUNX2的成骨分化,促进骨质疏松症的进展。circAKT3,基于我们假设circARSB circTRPM7,和circPTEN函数作为强有力的microrna的海绵预测microrna的结合位点,我们预测相关的差异表达circRNAs和潜在的功能机制。mir - 216 a - 3 - p和mir - 135 - 5 - p可能的目标circARSB和circAKT3 circRNA-miRNA网络。circTRPM7和circPTEN mir - 881 - 3 - p和mir - 6326都可以有针对性的circRNAs circRNA-miRNA网络。在以前的研究中,mir - 135 - 5 - p被报道在骨质疏松症的发展扮演关键角色。例如,陈等人。49)表明,mir - 135 a - 5 - p抑制3 t3-l1 preadipocyte分化,通过激活规范Wnt /脂肪形成β连环蛋白信号通过直接瞄准Apc。高et al。50)证实,mir - 135 - 5 - p发挥了积极作用在脂肪生成针对LATS1和MOB1B表达式,从而促进了河马信号通路。史和张51]发现mir - 135 - 5 - p可能发挥作用在骨质疏松症的进展通过RUNX2通过调节成骨分化。mir - 216 - a - 3 - p,然而,没有在骨代谢研究对其的作用。这里,mir - 135 - 5 - p被预测的目标circARSB和circAKT3 circRNA-miRNA网络诱导成骨的过程中。mir - 881 - 3 - p被确认在某些胰岛素分泌和与年龄相关的功能通路在年龄在非酒精性脂肪肝大鼠(52)和海马中被发现差异表达应对长期大剂量酒精管理局在老鼠53]。然而,并没有先前的研究mir - 6326在骨代谢的作用。我们假设mir - 881 - 3 - p,连同circTRPM7 circPTEN, circRNA-miRNA网络中可能扮演着重要的角色在促进GIOP bmsc的成骨分化。

尽管我们发现了差异表达circRNAs与GIOP老鼠,这种现象的潜在机制仍知之甚少。我们假设mir - 135 - 5 - p可能的目标circARSB和circAKT3 circRNA-miRNA网络和mir - 881 - 3 - p可能的目标circTRPM7和circPTEN circRNA-miRNA网络。因此,我们去执行和KEGG通路分析预测相关的差异表达circRNAs和潜在的功能机制。在目前的研究中,我们发现一些骨代谢的通路富集分析与调节的circRNAs GIOP有关。这些途径包括调节脂肪细胞的脂解作用,VEGF信号通路,和mTOR信号通路,这被认为是骨代谢中起着重要作用[54- - - - - -58]。同样,骨代谢的途径与circRNAs下调GIOP被发现,包括矿物质的吸收,mTOR信号通路,FoxO信号通路,PI3K-Akt信号通路。结果表明,这些circRNAs可能扮演了一个重要的角色在调节GIOP的生理过程。因此,我们建议circRNA-miRNA-mRNA轴可能参与促进成骨细胞分化的机制。然而,这还需要进一步的研究来验证这一机制。

总之,我们报道了circRNA表达谱RNA-seq GIOP老鼠的分析。相关监管互动网络构建基于测序数据。这些最初发现的生物功能可以提供一些线索circRNAs GIOP的病理生理机制。此外,差异表达的机制和功能circRNAs应该进一步验证了严格的分子生物学实验研究和今后应深入研究工作。

5。结论

我们的研究描述了MSC circRNA表达谱和功能网络参与GIOP的规定。我们的研究结果为GIOP的发展提供可能的分子机制。我们假设circARSB / circakt3 - mir - 135 - 5 - p和circPTEN / circtrpm7 - mir - 881 - 3 - p可能是可能的候选人机制。这些拟议的机制可能有助于阐明GIOP分子治疗靶点。

数据可用性

RNA-seq数据用于支持本研究的结果都包含在这篇文章,可从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者感谢支持我们的研究参与者。这项工作是支持由中国自然科学基金会(没有。31570976)和科技项目的广州,中国(没有。201604020148)。完全的责任作者和内容并不一定代表国家自然科学基金委的官方观点。

补充材料

补充1。图S1: circARSB击倒抑制成骨分化,而circPTEN击倒促进成骨分化。击倒circARSB和circPTEN效率评价中存在化验(a),击倒circARSB bmsc的成骨分化能力下降,而击倒circPTEN bmsc的成骨分化能力增加,由高山评估活动分析和ARS染色(b, c)。补充2:circARSB和circPTEN小干扰RNA的RNA序列(siRNA)寡核苷酸利用本研究显示如下。(补充材料)