Sox9-Increased mir - 322 - 5 - p促进BMP2-Induced Chondrogenic针对Smad7分化的间充质干细胞

文摘

骨形成蛋白2 (BMP2)诱导软骨形成有效促进间充质干细胞(msc)的Sox9表达式。然而,BMP2也诱导软骨细胞肥大和软骨内成骨移植Smad7表达,导致软骨形成的破坏。此外,可以抑制Smad7 Sox9。因此,这种现象的潜在机制仍不清楚。目前,越来越多的研究表明,小分子核糖核酸chondrogenic和病理生理过程中发挥关键作用的软骨。本研究的目的是确定哪些Smad7 microRNA是增加了Sox9,目标,从而协助BMP2维持稳定的软骨形成。我们发现mir - 322 - 5 - p满足要求通过下一代测序(上天)和生物信息学分析。针对关系mir - 322 - 5 - p和Smad7 dual-luciferase记者化验,证实了qPCR,免疫印迹(WB)。体外研究表明,过度的mir - 322 - 5 - p明显抑制Smad7表达式,从而导致增加chondrogenic分化和减少肥厚性分化,而沉默mir - 322 - 5 - p导致相反的结果。流式细胞仪(FCM)分析表明,过度的mir - 322 - 5 - p明显降低早期凋亡率BMP2-stimulated msc、虽然沉默mir - 322 - 5 - p率增加。 A mouse limb explant assay revealed that the expression of miR-322-5p was negatively correlated with the length of the BMP2-stimulated hypertrophic zone of the growth plate. An in vivo study also confirmed that miR-322-5p assisted BMP2 in chondrogenic differentiation. Taken together, our results suggested that Sox9-increased miR-322-5p expression can promote BMP2-induced chondrogenesis by targeting Smad7, which can be exploited for effective tissue engineering of cartilage.

1。介绍

创伤或退行性软骨缺陷是一个具有挑战性的临床问题,作为软骨组织缺乏血管,神经,或淋巴结构(1]。上述特征有助于软骨的可怜的自愈能力。因此,软骨受伤需要重建一次(2]。间充质干细胞(msc)被确认为软骨组织工程理想的种子细胞由于chondrogenic分化潜能(2- - - - - -4]。

骨形成蛋白2 (BMP2)的成员转化生长因子β(TGF -β)总科,是一个有力的生长因子,诱导MSC分化chondrogenic [5- - - - - -7]。然而,BMP2无法实现稳定的软骨形成,因为它刺激chondrogenic肥厚性分化和软骨内成骨,而破坏软骨表型(3,8,9]。由BMP2 Sox9,诱发显著的关键转录因子维持软骨细胞表型和软骨内稳态。这个分子中扮演一个重要的角色在生产和保护关节软骨细胞外基质的10- - - - - -13]。我们的团队的一项研究显示,过度的Sox9增强BMP-2-induced chondrogenic msc分化的表达下调Smad7表达式(14- - - - - -16]。然而,这种现象的潜在机制的Sox9调节Smad7还不清楚。

越来越多的证据表明,小分子核糖核酸(microrna)是至关重要的监管网络的软骨细胞分化和软骨功能(17,18]。microrna是一类非编码、单链和小分子rna中大约18 - 24个核苷酸长度。他们发挥着至关重要的作用在许多生物过程通过目标基因表达的转录后的负调控sequence-specific绑定到3未翻译区(utr)的目标信使rna (mrna) [17,19,20.]。因此,我们假设Sox9可以促进某些microrna的表达目标和抑制Smad7表达式。

在目前的研究中,我们调查的功能mir - 322 - 5 - p BMP2-mediated chondrogenic和肥厚性分化在msc。Sox9被发现增加的表达mir - 322 - 5 - p, Smad7目标。我们的实验显示,过度的mir - 322 - 5 - p抑制BMP2-induced MSC早期细胞凋亡和软骨细胞肥大,从而促进BMP2-induced chondrogenic分化。这些发现有助于阐明BMP2-mediated chondrogenic肥厚性分化,这可以利用BMP2-mediated软骨组织工程。

2。材料和方法

2.1。细胞培养和化学物质

小鼠骨髓MSC C3H10T1/2和人类胚胎肾HEK 293细胞系得到来自美国文化类型集合(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)。细胞系被维护在完成杜尔贝科修改鹰的介质(美国BioExplorer DMEM)补充10%胎牛血清(的边后卫,潘生物技术,德国),100毫克/毫升链霉素和100 U /毫升青霉素在37°C调湿大气二氧化碳(公司为5%₂)。除非否则,提到的所有化学试剂均购自热费希尔科学或Sigma-Aldrich。

2.2。建设和代重组AdBMP2运载体,AdSox9, AdGFP AdshSox9, AdRFP

AdEasy技术是用来产生重组腺病毒(如前所述)(21]。AdBMP2、AdSox9 AdshSox9以前特征(8,14,16,22];AdGFP和AdRFP被用作模拟病毒控制。短暂,mouse-derived Sox9的完整成绩单和人为BMP2的编码区PCR扩增和subcloned adenoviral穿梭载体产生重组运载体;向量包含Sox9或BMP2随后被用来产生重组腺病毒在hek - 293细胞。从Vigene AdshSox9购买(山东、中国)。监测感染效率、AdBMP2和AdSox9与绿色荧光蛋白(GFP)标记,和AdshSox9标有红色荧光蛋白(RFP)。

2.3。Chondrogenic msc在Micromass文化的分化

模仿msc的凝结,我们使用micromass文化分化诱导chondrogenic如前所述[23]。C3H10T1/2细胞感染AdGFP、AdRFP AdBMP2, AdSox9或AdshSox9。操纵mir - 322 - 5 - p的表达,我们感染mir - 322 - 5 - p agomir antagomir,从GenePharma购买(上海,中国),由siRNA-Mate™(GenePharma)根据制造商的指示,分别使用agomir-NC或antagomir-NC作为正常对照组。24小时后感染,收集细胞,resuspended高密度(∼10⁵每50μl DMEM),随后播种在每个在6-well板块的中心,然后孵化有限公司₂孵化器。两个小时后孵化2毫升的完整的DMEM添加到每个好;一半的媒介是每三天更换一次。

2.4。RNA隔离和qPCR

总RNA分离与RNAiso +(豆类,中国)和接受逆转录PrimeScript RT试剂盒(豆类,中国)根据制造商的指示。qPCR实验进行CFX96实时PCR检测系统(Bio-Rad、美国)使用SYBR预混料交货Taq II工具包(豆类,中国)在下列情况下:95°C 30年代,95°C 5 s、40和60°C 30年代,重复周期。GAPDH是作为内部参考,是规范化的数据2^−ΔΔct方法。引物序列见表1。

2.5。门店和生物信息学分析

从两组总RNA, BMP2 + RFP和BMP2 + shSox9,是上天的提取Illumina公司HiSeq2500编曲50 SE adenoviral感染后6天。然后,数据分析产生火山情节,维恩图、散点图https://www.omicstudio.cn/tool(24]。预测的microrna执行针对Smad7数据库米兰达,母星,TargetScan。

2.6。Dual-Luciferase记者分析

检测Smad7之间的交互和mir - 322 - 5 - p,质粒含有变异Smad7-3UTR (Smad7-3UTR-MT)和野生型Smad7-3UTR (Smad7-3UTR-WT)。当hek - 293细胞培养在confluency 24-well板达到80%,50 nM mir - 322 - 5 - p agomir或数控与2 cotransfected进入细胞μg质粒介导Lipofectamine 2000(表达载体)。此外,Renilla荧光素酶- (RL)加载pRL-TK转染作为内部控制。48小时后,Dual-Luciferase报告基因分析工具(Beyotime)是用于检测RL的强度和萤火虫荧光素酶(FL)根据制造商的协议。因此,FL RL反映的抑制效果比Smad7 mir - 322 - 5 - p。每组有5个重复的井。

2.7。西方墨点法(WB)

蛋白质提取与裂解进行缓冲,radioimmunoprecipitation化验(里帕)缓冲区(Beyotime生物技术、中国)含1% phenylmethanesulfonyl氟化物(PMSF) (Beyotime生物技术,中国),并随后声波降解法。离心后,上清液煮了总蛋白质的变性和决心用BCA蛋白质浓度测定工具包(Beyotime生物技术,中国)。等量的蛋白质被装载在7 - 10% sds - PAGE凝胶电泳(Omni-Easy™一步页面凝胶快速准备装备,EpiZyme,中国)和转移到聚偏二氟乙烯膜(PVDF, 0.2μ米,Bio-Rad)。膜被封锁后5%的脱脂牛奶在室温下1 h,一夜之间,蛋白质被孵化在4°C以下主要抗体:Sox9(禅宗生物,1:2000),COL2A1 (Abcam, 1: 3000), COL10A1(圣克鲁斯生物技术;1:1000),Smad7(圣克鲁斯,1:1000),和GAPDH(禅宗生物,1:2000)。膜用TBST洗净后,他们孵化与相应的二次抗体(山羊anti-rabbit免疫球蛋白g, 1: 10000年,战Bio)在室温下1 h。后顺序洗涤TBST和TBS,目标蛋白质检测的发射极耦合逻辑检测设备(热费希尔科学),和ImageJ软件用于量化带密度。

2.8。流式细胞术检测细胞凋亡

细胞被胰蛋白酶处理(0.25%)和监控在消化的过程中,在显微镜下,立即停止通过添加DMEM包含的边后卫当大部分的细胞变成了圆形。离心后,细胞被反复resuspended轻轻PBS和离心两次,随后在500年再悬浮μl CytoFLEX PBS立即检测。

2.9。老鼠胎儿肢体外植体培养

前肢的小鼠胚胎(E18.5)是皮肤和软组织的解剖,除了骨膜,在无菌条件下和孵化DMEM含有0.5%牛血清白蛋白(BSA,σ),50μg / ml抗坏血酸,1毫米β甘油磷酸盐、链霉素100毫克/毫升和100 U /毫升青霉素在37°C在湿润的气氛中有5%的二氧化碳(有限公司₂)长达14天如前所述25,26]。五个样本的每个。在孵化的起始,skin-free四肢被感染,通过添加AdBMP2 AdSox9或AdshSox9, mir - 322 - 5 - p agomir,或antagomir培养基。一半的媒介改变了每隔一天。监测细胞的存活,前肢GFP和RFP信号在显微镜下观察。组织固定的组织学评估培养14天后。

2.10。皮下MSC移植

动物使用和护理和实验过程是经重庆医科大学动物保健和使用委员会。皮下干细胞植入过程进行了描述(3,14]。短暂,C3H10T1/2细胞感染AdBMP2 AdGFP, AdRFP, AdSox9, AdshSox9, mir - 322 - 5 - p agomir, antagomir。转染24小时后,这些细胞被收集和resuspended PBS-diluted基底膜基质(康宁)皮下注射无胸腺的裸体小鼠的侧翼(4周大,女, /组, 细胞每注射)。注射后4周,动物牺牲大众异位的集合。在4%多聚甲醛固定后(Servicebio,武汉,中国)24小时在室温下,群众受到乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙作用在4°C 14天,其次是在石蜡包埋。连续5μ米厚的部分加工特殊染色和组织学评价。

2.11。组织学评价:苏木精和伊红()),阿尔新蓝染色,马森的三色的

与分段顺序deparaffinization二甲苯和补液后乙醇,他走时,马森的三色的,阿尔新蓝染色进行使用标准协议如前所述[8,14,16]。短暂,deparaffinized样本首先受到抗原检索和定位,其次是他走时,马森的三色的染色。光学显微镜(日本奥林巴斯)是用于组织学评价。

2.12。免疫组织化学分析

与分段顺序deparaffinization二甲苯和补液后乙醇,部分被煮10毫米柠檬酸缓冲在95 - 100°C为抗原检索10分钟,冲洗3% H₂O₂在室温下10分钟抑制内源性过氧化物酶活性,和阻止10%山羊血清在室温下10分钟。然后,部分与初级孵化胶原蛋白抗体2α1 (COL2A1) (Abcam 1: 400)和胶原蛋白10α1 (COL10A1) (Abcam 1: 200)在一夜之间在4°C。洗后,与二次孵化的部分抗体在37°C为30分钟,其次是孵化与streptavidin-HRP共轭在室温下20分钟。染色没有抗体主要是用作负控制。显微镜(日本奥林巴斯)是用于成像。

2.13。统计分析

所有实验都独立完成至少三次。数据表示为 (SD)与SPSS分析软件(版本21日,IBM)。统计分析进行了使用单向方差分析和学生的 - - - - - -测试; 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。沉默Sox9抑制BMP2-Induced软骨形成

AdBMP2在有或没有AdshSox9 C3H10T1/2细胞感染。基因表达检测到qPCR在天3,6、8、10感染后透露,沉默Sox9抑制BMP2-induced Sox9, COL2A1表达式,同时促进BMP2-induced Smad7表达式(数字1(一)- - - - - -1 (c))。世行结果符合qPCR(数据的结果1 (d)- - - - - -1 (g))。Micromasses感染AdRFP, AdGFP、AdBMP2 AdBMP2 + AdshSox9培养了7天之前接受阿尔新蓝染色,这证明削弱染色AdBMP2 + AdshSox9组相比AdBMP2 + AdRFP组。这些结果表明,沉默Sox9抑制BMP2-induced软骨形成。

3.2。门店和生物信息学分析表明,沉默的Sox9减少mir - 322 - 5 - p的表达,这是Smad7预计目标

火山地块(图2(一个))表明,41和57个microrna表达下调和调节表达式,分别在BMP2 + shSox9组。预测后的microrna瞄准Smad7数据库米兰达,母星,和TargetScan,维恩图解分析显示只有两个microrna在microrna的表达下调表达BMP2 + shSox9组出现在所有三个数据库(图2 (b))。因此,mir - 322 - 5 - p,但不是mir - 181 - 5 - p,是下面的实验的重点。接下来,散点图显示,相关系数为0.9,这提出了一个可靠的组织(图之间的趋势2 (c))。

3.3。Sox9 / mir - 322 - 5 - p / Smad7轴被qPCR证实,世行,Dual-Luciferase记者化验

总RNA提取天3、6、8和10 postinfection进行C3H10T1/2细胞感染AdBMP2 + AdSox9 AdBMP2, AdBMP2 + AdshSox9。随后,mir - 322 - 5 - p的表达被qPCR检测,建议增加响应的overexpressing Sox9,沉默Sox9(图表达下调的反应3(一个))。根据预测TargetScan, mir - 322 - 5 - p匹配的位置69 - 76 Smad7 3UTR(图3 (b))[27]。验证目标mir - 322 - 5 - p之间的关系和Smad7,我们使用antagomirs agomirs促进和抑制mir - 322 - 5 - p的函数,分别。序列如表所示2。鉴于BMP2的表达,白平衡的结果,依照qPCR结果,显示减少的表达Smad7在mir - 322 - 5 - p agomir转染和表达增加的Smad7 mir - 322 - 5 - p antagomir转染(数字3 (c)- - - - - -3 (e))。此外,dual-luciferase记者分析了荧光素酶活性明显降低,并演示了mmu - mir - 322 - 5 - p + Samd7-3比agomir数控+ Smad7-3 UTR-WT集团UTR-WT组;此外,没有观察到显著差异之间的mmu - mir - 322 - 5 - p + Samd7-3UTR-MT和agomir数控+ Smad7-3UTR-MT组(图3 (f))。

3.4。Smad7-Induced早期细胞凋亡的表达水平负相关mir - 322 - 5 - p

确定的影响mir - 322 - 5 - p Smad7-related早期细胞凋亡,我们进行了流式细胞术(FCM)。所表示的结果,超表达Sox9明显降低早期凋亡率(数字4 (b)和4 (c)),这在一定程度上恢复了强制表达mir - 322 - 5 - p antagomir(数字4(一)和4 (b));此外,沉默的Sox9显著调节早期凋亡率(数字4 (c)和4 (d)),它被使用部分逆转mir - 322 - 5 - p agomir(数字4 (d)和4 (e))。每组的统计图显示了早期凋亡率(图4 (f))。

3.5。BMP2-Induced软骨细胞肥大在胎鼠前肢外植体抑制了mir - 322 - 5 - p

文化14天后,胎鼠前肢受到切片和圆)染色评估肥厚性区域的长度。结果表明overexpressing Sox9减少BMP2-induced肥厚性区,由强制表达部分逆转mir - 322 - 5 - p antagomir(数字5(一个)- - - - - -5 (c));此外,沉默的Sox9扩展肥厚性区域,由使用部分逆转mir - 322 - 5 - p agomir(数字5 (c)- - - - - -5 (e))。在黑暗的蓝色和黄色的箭头表示的长度prehypertrophic和肥厚性区(HZs),分别为(图5 (f))。统计图显示赫兹的长度在每组(图5 (g))。

3.6。BMP2-Induced软骨形成增强了mir - 322 - 5 - p体外

C3H10T1/2细胞感染AdBMP2 + AdSox9 + antagomir, AdBMP2 + AdSox9 AdBMP2, AdBMP2 + AdshSox9或AdBMP2 + AdshSox9 + agomir在micromasses培养7天,其次是总蛋白提取和阿尔新蓝染色。如图所示的墨迹,overexpressing Sox9提拔BMP2-induced COL2A1的表达而抑制COL10A1和Smad7(数字6(一)- - - - - -6 (d))。当Sox9-induced mir - 322 - 5 - p表达式被antagomir沉默,所有上述标记的表达在一定程度上逆转(数字6(一)- - - - - -6 (d))。然而,沉默表达Sox9抑制BMP2-induced COL2A1但提升COL10A1和Smad7(数字6(一)- - - - - -6 (d))。当mir - 322 - 5 - p表达式是使用agomir引起的,结果也部分逆转(数字6(一)- - - - - -6 (d))。此外,在转录水平表达支持世行分析(数据的结果6 (e)- - - - - -6 (g))。此外,阿尔新蓝染色显示Sox9-enhanced染色是削弱了antagomir(图6 (h)》);此外,shSox9-weakened染色增强是由使用mir - 322 - 5 - p agomir(图6 (h)iii-v)。

3.7。BMP2-Induced软骨形成增强了mir - 322 - 5 - p体内

测定是否mir - 322 - 5 - p是在压制Smad7有效,从而促进BMP2-induced体内软骨形成,C3H10T1/2细胞感染AdBMP2 + AdSox9 + antagomir, AdBMP2 + AdSox9 AdBMP2, AdBMP2 + AdshSox9 AdBMP2 + AdshSox9 + agomir, AdGFP, AdRFP, AdSox9, AdSmad7, mir - 322 - 5 - p agomir和antagomir皮下注入裸鼠的侧翼。结果表明,没有检测到群众中形成细胞感染AdGFP AdRFP, AdSox9, mir - 322 - 5 - p agomir,或独自antagomir。群众4周后被注入。Sox9的数量和mir - 322 - 5 - p呈正相关,透明cartilage-like外观(图7(a))。

根据组织学评估,overexpressing Sox9肥厚性软骨细胞的数量减少(黄色箭头),由使用部分逆转mir - 322 - 5 - p antagomir(数字7(b)》7(c));此外,沉默Sox9减少差异化的软骨细胞的数量(蓝色箭头)和增加的数量未分化的msc(黑色箭头),由强制表达部分逆转mir - 322 - 5 - p agomir(数字7(b) iii-v和7(d))。根据马森染色,形成软骨组织的提升增加了Sox9的增加在一定程度上逆转mir - 322 - 5 - p antagomir(图7(e)》),而降低生产引起的软骨组织沉默的强制表达Sox9部分逆转mir - 322 - 5 - p agomir(图7(e) iii-v)。

此外,免疫组织化学显示超表达Sox9 COL2A1合成的增加和减少COL10A1的一代,和两个变化被使用部分逆转mir - 322 - 5 - p antagomir(数字7(f),7(g)》,7(h)和7(我));此外,沉默的Sox9生产COL2A1降低,增加COL10A1的形成,和两个变化被使用部分逆转mir - 322 - 5 - p agomir(数字7(f),7(g) iii-v,7(h)和7(我))。

4所示。讨论

关节软骨缺损造成的创伤或变性增加每年随着社会的发展和人们生活习惯的变化。然而,软骨的修复有缺陷的世界仍然是一个具有挑战性的问题。BMP2-induced软骨形成的msc已被广泛接受为chondrogenic模型在组织工程。然而,也不仅BMP2诱导软骨形成,软骨内骨化(8,14]。之前由我们的团队已经研究表明,过度的Sox9促进BMP2-induced软骨形成和功能可能通过抑制效应的Sox9 Smad7 [14,16]。当前的研究澄清,沉默Sox9削弱BMP2-induced软骨形成,移植Smad7表达式。机制可能是Sox9诱发mir - 322 - 5 - p,它绑定到3UTR Smad7和抑制其功能。

Sox9高度增加了BMP2,促进BMP2-induced chondrogenic分化(11,16,28]。这个分子直接调节COL2A1的生产,这是软骨细胞特定的(29日,30.]。Smad7抑制剂在Smad家庭;它在TGF起到了抑制作用β/ BMP通路,软骨形成的过程是至关重要的31日- - - - - -33]。先前的研究已经发现BMP2-induced高表达Smad7作为chondrogenic分化的关键抑制剂(32,34]。此外,肥厚性软骨细胞的分化,标有COL10A1 [15,35),是由Smad7,至少在某种程度上,在chondrogenic分化(15]。进一步的研究表明,Smad7抑制软骨组织的形成引起BMP2通过抑制P38和Smad1/5/8通路(32,36]。

越来越多的研究显示软骨细胞的重要角色的microrna过程形成和软骨的病理生理功能。在这个研究中,门店和生物信息学分析发现,mir - 322 - 5 - p被沉默表达下调表达Sox9,结果被qPCR进一步澄清。此外,超表达Sox9调节mir - 322 - 5 - p的表达。这些结果证实,Sox9上调mir - 322 - 5 - p的表达。此外,dual-luciferase记者分析证实了目标之间的关系mir - 322 - 5 - p和Smad7。随后,体外实验还表明,mir - 322 - 5 - p确实会抑制Smad7的表达在转录和翻译水平。

目前,只有少数报告的生物功能mir - 322 - 5 - p。之前的报告显示,mir - 322 - 5 - p参与心脏肥大与肺动脉高压大鼠通过瞄准igf - 1 (37]。此外,mir - 322 - 5 - p是参与FAM3B-mediated高血糖的血管平滑肌细胞增殖和迁移38]。RNA序列基于cartilage-derived祖细胞和干细胞发现mir - 322 - 5 - p的核心监管分子在办公自动化的发展(39]。由我们的团队在另一个RNA序列分析,高mir - 322 - 5 - p的表达呈正相关,BMP-2-induced软骨形成(数据没有显示)。据报道,mir - 322 - 5 - p的过度激活TGF -β途径,维持体内平衡是很重要的关节软骨的37,38,40]。鉴于先前的报告和数据显示的相关性mir - 322 - 5 - p与软骨内稳态和软骨形成,这个分子与Smad7[预测更相关41]。因此,当最后两个microrna筛选出来,我们专注于mir - 322 - 5 - p为后续实验。我们所知,这是第一个研究揭示的监管效果mir - 322 - 5 - p Smad7和软骨形成。

5。结论

总之,我们的研究结果表明,Sox9 / mir - 322 - 5 - p / Smad7监管存在轴在BMP2-induced软骨形成,Sox9-increased mir - 322 - 5 - p可以Smad7目标,从而抑制BMP2-induced软骨细胞肥大软骨形成和帮助维持稳定。

数据可用性

数据可以在请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

我们要感谢分子肿瘤学实验室,医疗中心,芝加哥大学使用AdBMP2, AdSox9, AdGFP。报道工作得到了国家自然科学基金(国家自然科学基金委)(授予数量:81371972,81572142,81972069)。

引用

1. a . r . Armiento m·j·斯托达特m . Alini和d不遗余力地“为关节软骨组织工程生物材料:学习生物学,”Acta Biomaterialia卷,65年,页1 - 2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. m·a·Szychlinska m·j·斯托达特,D 'Amora l . (m . Alini和g . Musumeci“间充质干细胞软骨再生方法和细胞衰老:我们可以操纵细胞衰老和功能吗?”组织工程。B部分、评论,23卷,不。6,529 - 539年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. g·戴·h·肖,赵c, h·陈,j .廖和w·黄”LncRNA段H19调节BMP2-induced肥厚性分化的间充质干细胞促进Runx2磷酸化,”细胞生物学和发展前沿,8卷,p。580年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. m·p·墨菲l . s . Koepke m·t·洛佩兹et al .,“关节软骨再生骨骼干细胞激活”自然医学,26卷,不。10日,1583 - 1592年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. m . k . Majumdar e . Wang和e·a·莫里斯“BMP-2和BMP-9促进人类multipotential chondrogenic分化间充质细胞和克服了il - 1的抑制作用,”细胞生理学杂志,卷189,不。3、275 - 284年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. a . t . Mehlhorn p·k·Kaschte et al .,“BMP-2和TGF -微分的影响β1 chondrogenic分化的脂肪干细胞,”细胞增殖,40卷,不。6,809 - 823年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. n . j . Kovermann诉Basoli,大肠德拉贝拉et al .,“BMP2 TGF -β合作期间不同synovial-derived干细胞软骨形成dexamethasone-dependent的方式,”细胞,8卷,不。6,636年,页2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. n .周问:李x林et al .,“BMP2诱发chondrogenic分化、干细胞成骨和软骨内成骨分化,“细胞和组织的研究,卷366,不。1,第111 - 101页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. p . j . m . m . Caron埃曼,a .克莱莫et al .,“肥厚性分化在chondrogenic分化的祖细胞由BMP-7 BMP-2刺激,但压制,”骨关节炎和软骨,21卷,不。4、604 - 613年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. h . Uusitalo a . Hiltunen m . Ahonen et al .,“加速老年病L-Sox5 Sox6,由BMP-2 Sox9基因转移在小鼠骨折愈合过程中,“骨和矿物质研究杂志》上,16卷,不。10日,1837 - 1845年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. b . k . Zehentner、c·多尼和h . Burtscher“转录因子Sox9参与BMP-2信号,”骨和矿物质研究杂志》上,14卷,不。10日,1734 - 1741年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. c·f·刘,m . Angelozzi a . Haseeb诉Lefebvre,“SOX9可有可无的表观遗传改造的启动和激活标记基因在软骨形成的开始,“发展,卷145,不。14日,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. c·f·刘,诉Lefebvre转录因子SOX9和SOX5 / SOX6合作全基因组通过super-enhancers软骨形成,”核酸的研究,43卷,不。17日,第8203 - 8183页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. c .赵w .江:周et al .,“Sox9增强BMP2-induced chondrogenic分化的表达下调Smad7在间充质干细胞(msc),“基因与疾病,4卷,不。4、229 - 239年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. 朱·肖z, c . du et al .,”沉默Smad7强化BMP2-induced chondrogenic分化,抑制软骨内骨化在人类synovial-derived间充质基质细胞,”干细胞研究与治疗,12卷,不。1,p。132年,2021。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j·廖:周,林l . et al .,“Co-expression BMP2的Sox9促进chondrogenic间充质干细胞体外分化,“南方医科大学学报,34卷,不。3、317 - 322年,2014页。视图:谷歌学术搜索
17. b . c . Wu田,x et al .,“小分子核糖核酸在骨关节炎软骨形成和发挥作用(审查),“国际分子医学杂志》上,34卷,不。1,13-23,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. e .香港和a . h . Reddi”小分子核糖核酸在软骨形成,关节软骨和骨关节炎:用于组织工程的影响,“组织工程。B部分、评论,18卷,不。6,445 - 453年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. d . t . Chang j .谢h . Li Li p . Liu, y,“MicroRNA-30a促进细胞外基质降解的关节cartilageviadownregulation Sox9,”细胞增殖卷,49号2、207 - 218年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. e . Razmara a . Bitaraf h . Yousefi et al .,“非编码rna在软骨发展:一个更新的评论,“国际分子科学杂志》上,20卷,不。18,4475年,页2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 周t . c, s . l . t da Costa, j . Yu k .从事和b·福格斯坦”产生重组腺病毒,一个简化的系统”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷95,不。5,2509 - 2514年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. a . l . Kim j . h, s . c . Chaudhary朱y、m·阿特和d . r .小吵不断,“SOX9转录调节mTOR-induced基底细胞癌扩散,”《皮肤病学研究杂志》上,卷138,不。8,1716 - 1725年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 周j .廖n, n . et al .,“Sox9强化BMP2-induced chondrogenic分化,抑制BMP2-induced成骨分化,“《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。2篇文章e89025 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. https://www.omicstudio.cn/tool?order=complex。
25. 江w . l . Chen,黄j . et al .,“胰岛素样生长因子2 (IGF-2)强化BMP-9-induced成骨分化和骨形成,”骨和矿物质研究杂志》上,25卷,不。11日,第2459 - 2447页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. z z, l .阴王et al .,“小说鼠标椎间盘组织的器官培养模型,”细胞、组织、器官,卷201,不。1,38-50,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. http://www.targetscan.org/vert_72/。
28. 问:潘,y,问:陈et al .,“Sox9、骨形成的一个关键转录因子protein-2-induced软骨形成,激活通过BMP通路和CCAAT盒在近端启动子,“细胞生理学杂志,卷217,不。1,第241 - 228页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. d·m·贝尔k . k .梁s c·惠特利et al .,“SOX9直接调节输入ll胶原蛋白的基因,”自然遗传学,16卷,不。2、174 - 178年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. 诉Lefebvre w·黄诉r·哈利·n·格拉汉姆·古德费勒和b . de Crombrugghe”SOX9的有效活化剂chondrocyte-specific增强剂的proα1(2)胶原蛋白基因,”分子和细胞生物学,17卷,不。4、2336 - 2346年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. j . r . n . Wang Green z王et al .,“骨形成蛋白(BMP)信号在发展和人类疾病,”基因与疾病,1卷,不。1,第105 - 87页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. t .自制Murai j . h . Yoshikawa, n . Tsumaki”Smad7抑制软骨细胞分化在多个步骤在软骨内骨形成和下调p38 MAPK途径,”《生物化学》杂志上,卷283,不。40岁,27154 - 27164年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. t . Sakou t馆,山本t, t . Nagamine t . k .位于和p .十Dijke Smads本地化,TGF -β家庭在软骨内成骨细胞内信号组件”骨和矿物质研究杂志》上,14卷,不。7,1145 - 1152年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. y Ito, p . j . Bringas a . Mogharei j .赵c·邓和y柴”,Receptor-regulated和抑制性Smads至关重要在调节转化生长因子?介导美克耳氏软骨发展。”发展动态,卷224,不。1,第78 - 69页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. f .求欢,g .姚明,j . a . Ouellet a .小和j .安东尼奥由于“甲状旁腺激素对X型和II型胶原蛋白表达间充质干细胞在骨关节炎的病人,”组织工程。部分,16卷,不。11日,第3455 - 3449页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. k·n·k·d·埃斯特拉达w . Wang沤麻et al .,“Smad7调节终端成熟生长板软骨细胞的,”发育生物学,卷382,不。2、375 - 384年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. 庞,y, c .胡马z, s .林和h .易Myeloid-derived抑制Th17细胞转变/ Treg比率,促进系统性红斑狼疮发展通过arginase-1 / mir - 322 - 5 - p / TGF -β途径。”临床医学(英国伦敦),卷134,不。16,2209 - 2222年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. c . Wang j .沈j .应d·肖和r . j . O’keefe中介TGF -“FoxO1是至关重要的β/ TAK1信号和预防骨关节炎关节软骨保持体内平衡,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷117,不。48岁,30488 - 30497年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. 张,问:一,p .胡锦涛et al。”核心监管RNA分子识别关节软骨干细胞/祖细胞在骨性关节炎的进展,”表观基因组学,11卷,不。6,669 - 684年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. m . w . Liu, c . t . Jayasuriya et al .,“人类骨关节炎cartilage-derived基质细胞激活通过鉴定及侧关节退行性变信号,”美国实验生物学学会联合会杂志,34卷,不。12日,第16566 - 16552页,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. “targetscan (EB / OL)。”http://www.targetscan.org/cgi bin/targetscan/vert_72/view_gene.cgi?rs=enst00000262158.2&taxid=10090&members=mir p&showcnc=0&shownc=0&subset=1——181 - 5。视图:谷歌学术搜索

版权

版权©2021年永胜曾庆红等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。