通过脂肪源性间充质干细胞抑制同种异体和自体T细胞增殖的脂肪衍生的脊柱刺激性肺炎患者

抽象的

背景．在强调脊柱炎（AS）中，伴有慢性炎症，T细胞扩张起到病原作用;骨髓衍生的间充质干细胞（BM-MSCs）的免疫调节性质受到损害，而其脂肪组织衍生的对应物的功能特征是（ASCS）未知。方法．我们评估了从20名患者获得的AS / ASC的抗增殖活性，朝向同种异体和自体T淋巴细胞，使用来自健康供体（HD / ASC）作为参考细胞系的ASC。PHA活化外周血单核细胞（PBMC）在细胞 - 细胞接触和转换条件下与未经处理的或TNF + IFN进行共同化γ-（Ti-）许可的ASC，然后通过流式细胞术分析以鉴定增殖和不增强CD4⁺和CD8⁺T细胞。犬科素浓度，前列腺素e₂（PGE.₂），并且在培养上清液中测量IL-10。结果．在同种异体系统中，HD/ASCs和AS/ASCs同样降低了CD4的增殖⁺和CD8⁺T细胞主要通过可溶性因子作用。犬舍素和PGE的浓度₂与T细胞增殖呈负相关，这些因子合成的选择性抑制剂显著恢复了T细胞反应。AS/ASCs对自体T细胞也有类似的抗增殖作用。结论．我们首次报道，尽管在体内长期暴露于炎症条件，AS/ASCs仍保持正常能力，抑制异体和自体CD4细胞的扩张⁺和CD8⁺T细胞主要通过眠尿氨酸和PGE发挥作用₂，因此可能具有潜在的治疗价值。AS / ASCS和HD / ASCS的抗增殖效果之间的一些区别表明了AS / ASC的体内许可。

1.介绍

强直性脊柱炎(AS)是一种风湿性疾病，以慢性炎症和轴关节病理性新骨形成为特征，并导致脊柱节段融合。外周关节炎、肌腱炎、骨质疏松和骨外症状，如累及眼睛、皮肤或肠道，也很常见[1］．本文认为，免疫屏障功能障碍(肠道、皮肤)和/或机械应激部位(内吞、血管壁)的异常免疫反应，以及先天免疫机制和适应性免疫机制之间的相互作用，是触发、发展和调控AS的关键[2］．AS与HLA-B的显著相关性27个等位基因以及与编码内质网氨肽酶(ERAP)等位基因的上位性相互作用表明抗原呈递到T细胞的关键致病作用，随后是适应性免疫反应的发展和持续，主要涉及T细胞亚群[3.］．在AS患者中，T细胞在早期和活动性骶髂炎中占优势，约占浸润受病关节细胞的50% [4.那5.］．CD4的数量增加和更大的增殖⁺和CD8⁺在这些患者的滑膜液和外周血中都发现了T细胞[6.-9.］．在各种组织中存在的间充质基质/干细胞（MSCs）赋予免疫调节效力。已知这些细胞对不同免疫细胞产生免疫抑制作用，包括T淋巴细胞[10］．MSCs通过可溶性介质和细胞接触依赖途径作用，抑制T细胞的激活和增殖，抑制效应，但保护或诱导调节性T细胞(Treg) [11］．多种可溶性因子中，前列腺素e₂（PGE.₂)和吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)/鹿嘌呤通路被认为是人间充质干细胞免疫抑制活性的主要介质，包括抑制T细胞增殖[12-14］．为了改善MSCs的治疗特征，用于成功临床应用，开发了几种策略，并用促炎细胞因子进行预处理，例如肿瘤坏死因子（TNF）和干扰素γ（IFN.γ），通常使用[15］．重要的是，AS患者骨髓源性MSCs (BM-MSCs)的基因表达、分泌潜能和免疫调节活性降低[16-18］．此外，骨髓间充质干细胞被认为有助于异常的骨稳态，这是AS的特征，因为它们有很强的能力抑制破骨细胞形成，并增强成骨细胞和脂肪分化[19-21］．因此，在目前正在进行的临床试验同种异体，但不是自体的，各种组织源的MSCs用于患者的治疗。但是，已知具有比BM-MSC更强的免疫抑制性质具有更强的免疫抑制性能的脂肪衍生的间充质干细胞（ASC。14]，尚未过测试[22］．此外，在风湿病中，骨髓是发生炎症的部位，而非未受影响的外周脂肪组织[23］．有趣的是，含有脂肪来源间充质干细胞(ASCs)的自体基质血管碎片(SVF)的应用前景良好，提示这些细胞在AS中的治疗应用[24］．不幸的是，对AS患者ASCs (AS/ASCs)的生物学了解甚少，关于AS/ASCs免疫调节特性的数据也缺乏。我们之前发现AS患者的ASCs (AS/ASCs)在表面标记物表达和可溶性因子分泌方面表现出一定的异常，但保留了调节T细胞激活标记物表达的能力[25那26］．考虑到T细胞作为发病机制和自体ASC的潜在治疗施用的重要作用，在本研究中，我们通过评估了抗增殖活性和作用机制，进一步评估了AS / ASCS的免疫调节潜力在同种异体和自体CD4上的这些细胞⁺和CD8⁺T淋巴细胞。为此，将有丝分裂原刺激的外周血单个核细胞(PBMCs)与未处理或TNF + IFN共培养γ(TI)从AS患者和健康供体(HD)获得的预处理ASCs;然后是CD4的增殖⁺和CD8⁺分析了T淋巴细胞以及PGE2，犬舍酮和白细胞介素 - （IL-）10的释放。通过防止细胞 - 细胞接触，使用Transwell系统和PGE的特异性抑制剂的应用，通过防止细胞 - 细胞接触来验证可溶性介质对免疫调节ASCS作用的贡献₂和犬尿氨酸合成。

2.材料和方法

2.1。患者和样品收集

一组20名符合国际脊椎关节炎评估协会(ASAS) AS标准的患者(8名女性，12名男性)[27]包括在研究中。表中给出了患者的特征1．该研究符合《赫尔辛基宣言》中包含的所有标准，并获得了波兰华沙国家老年病学、风湿病学和康复研究所伦理委员会的批准(批准方案编号:KBT-8/4/20016)。所有患者均在入组前给予书面知情同意。

２.２.ASC分离培养

通过18g针活检，从患者中取出皮下腹部脂肪的标本。如前所述进行组织处理，ASC分离和培养[28］．五种人类脂肪源间充质细胞系(Lonza Group, Lonza Walkershille Inc.， MD, USA;供体编号:0000440549、0000410252、0000535975、0000605220、0000550179)作为对照。所有实验均采用3-5代ASCs进行。ASCs在由DMEM/F12 (PAN Biotech UK Ltd, Wimborn, UK)、10%胎牛血清(FCS) (Biochrom, Berlin, Germany)、200 U/ml青霉素、200μg/ml链霉素(Polfa Tarchomin S.A，华沙，波兰)μg / ml紫素（Invivogen，圣地亚哥，加州，美国）。通过用人重组肿瘤坏死因子（TNF）和干扰素刺激细胞，通过刺激细胞进行促炎细胞因子的预处理（“引发”或“许可”）。γ（IFN.γ）（来自R＆D Systems，Minneapolis，Mn，USA;每种施用在10ng / ml）。TNF和IFN的浓度γ是根据以往的出版物确定的[29-31］．

2.3。与外周血单核细胞（PBMC）接触和非接触的ASC患者

所有共培养物都在完整的DMEM / F12培养基中进行。ascs（ /孔/ 2ml培养基)接种于24孔板，用IFN刺激γ和TNF(见上文)。根据Ficoll-Paque (GE Healthcare，乌普萨拉，瑞典)的常规应用程序，从从健康男性荣誉献血者(<60岁)和AS患者获得的白棕色外套中分离出PBMCs。分离后，pbmc ( /孔/ 2ml培养基)直接播种(接触共培养)或在0.4μM孔径Transwell滤波器（MD24，带有载体的载体0.4我，Thermo Fisher Scientific，Massachusetts，Ma，USA）（非接触式共养成）进入24孔板，凭证ASCS（ /well)， 2.5μg/ml植物血凝素(PHA, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)。共培养5天后，收集培养上清液(SNs)和pmcs进行进一步分析，即测定可溶因子kynurenines、PGE的浓度₂、IL-10或流式细胞术检测。单独培养的pbmc作为对照。

2.4。培养上清液中可溶性因子的测量

如别处所述分光光度测量测量犬核苷酸浓度[32］．这一目标,SNs与30%三氯乙酸混合2:1比和孵化30分钟在5°C,然后在10000×g离心5分钟和最后稀释1:1的比例在埃尔利希试剂(100毫克p-dimethyl苯甲醛和5毫升冰醋酸;Sigma-Aldrich，圣路易斯，MO，美国)。在490 nm波长处测量样品的光密度。用培养基稀释L-Kynurenine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)制备标准曲线。PGE的浓度₂和IL-10的测定使用商业可用的试剂盒-参数试剂盒(R&D Systems，明尼阿波利斯，MN)和人IL-10酶联免疫吸附法(Thermo Fischer;猫。不。分别为88-7104-88)。所有的测量都是重复的。

2.5。阻止实验

探讨PGE2和犬尿苷在ASC的免疫调节能力中的作用，这些因素合成的特异性抑制剂，即10^－6M的吲哚美辛(Sigma-Aldrich, Germany)或1 mM的1-甲基色氨酸(1- mt, Sigma-Aldrich, Germany)，分别在细胞培养初期添加。以上的浓度是从以往研究的文献检索中选取的[32-36］．ASCs与特异性抑制剂预孵育48小时后，加入pha激活和cfse染色的PBMCs培养。然后再加1-MT或吲哚美辛。培养物在37°C、5% CO的湿化气氛中培养5天₂．在共培养结束时，收集pbmc进行进一步的细胞分析。

2.6。流式细胞术分析

2.6.1。识别T细胞亚群

从培养物中获得的pbmc在50分钟内重悬μl的FACS缓冲液，并用荧光标记的人特异性单克隆抗体CD4-APC-Cy7 (BD Pharmingen, San Diego, CA, USA)或CD8-PerCP (eBioscience, San Diego, CA, USA)在冰上染色30分钟，以获得各自的膜抗原。洗涤步骤完成后，使用FACSCanto细胞计数仪和Diva软件对细胞进行分析。所有实验均采用适当的同型对照。

2.6.2。扩散分析

对于增殖测定，PBMC用羧基荧光素二乙酸酯琥珀酰亚胺（CFSE）（CFSE）（Thermo Fisheretts，MASACHUSTTS，MA，USA）染色，然后用PHA刺激，并通过如上所述的ASC培养。通过流式细胞术分析从培养物收获的细胞以鉴定增殖和不增殖细胞。为了表征细胞增殖反应，如其他地方所述计算增殖细胞，增殖指数（PI）和复制指数（RI）的百分比[37]，使用以下数学公式：

增殖指数是反应细胞，即细胞分裂的平均数量;是该部门中的细胞数量，以及是划分的数量。

复制指数为响应细胞，随培养时间的fold expansion;是该部门中的细胞数量，以及是划分的数量。

图中显示了pha刺激的PBMCs在各种培养变体中的增殖情况1s（补充材料）。

2.7。数据分析

使用GraphPad Prism软件版本7进行分析数据。Shapiro-Wilk测试被用作正常测试。使用重复措施和后HOC Tukey检验的单向分析（ANOVA）用于评估未处理和TNF / IFN的效果γ- 在靶细胞上进行的ASCS，以比较接触（与）非接触性共培养和同种异体与自体共培养。应用Mann-Whitney测试以分析HD / ASCS和ASCS之间的差异。

参数（Pearson的线性）和非参数（Spearman的秩）相关性测试用于评估分析参数之间的关联。小于0.05的概率值被认为是显着的。

3.结果

３.１.病人

患者队列在人口统计学和临床资料方面是异质性的(表)1）.百分之九十的患者是HLA-B27阳性，其中40％具有眼部症状（葡萄膜炎），10％具有外周关节炎。它们主要用非甾体类抗炎药（NSAID）治疗，而非医药疾病改性抗急性药物（DMARDs）和糖皮质激素的应用较小。

３．２．ASCs对T细胞增殖的抑制作用

在对照组中，分别培养pha处理的PBMCs (pmcs_PHA)，主要是CD4⁺和CD8⁺T细胞增殖（ 和 那分别)，但观察到相当大的PBMC供体依赖变异(图1（a）和1（d））.如图所示2由于相同的HD/ASCs或AS/ASC系对来自不同供体的PBMCs产生的影响是不相同的(比较供体编号为no. S)，所以增殖反应的抑制程度取决于供体的个体特异性。1和2)。因此，HD/ASC和AS/ASC活性在相同的实验中进行了评估，使用的是来自相同供体的pbmc。在未处理和ti刺激的ASCs存在时，两个亚群的增殖T细胞数量和每个增殖细胞的分裂数量(PI)以及这些细胞的倍数扩张(RI)显著减少。重要的是，HD/ASCs和AS/ASCs具有类似的抑制作用(图)1（a）-1 (f)）.在具有高清/ ascs和hd / ascs的共科卢比中_TI.vs. AS/ASCs和AS/ASCs_TI.，增殖的CD4的数量⁺细胞被抑制 和 vs。 和 那分别，而增殖CD8的数量⁺细胞减少 和 vs。 和 那分别为( ；数据未显示）。通过未经处理和Ti治疗的效果之间没有显着差异和作为/ ascs（图1（a）-1 (f))，而ti处理的HD/ASCs比未处理的HD/ASCs更能有效抑制T细胞增殖(图)1（a）-1（d）和1 (f)）.

３．3.细胞间接触和可溶性因子对ASCs抗增殖作用的贡献

在允许或防止(transwell)细胞间直接接触的共培养条件下，未经处理和ti处理的AS/ASCs同样降低了CD4的增殖⁺(数据2 (d)-2 (f))和CD8⁺(数据3 (d)-3（f）) T细胞，而HD/ASCs在transwell中的抑制作用甚至比细胞间接触培养更强，这种差异在CD4细胞的情况下观察到⁺(数据2(一个)-2 (c))和CD8⁺(数据3(一个)-3 (c)）T细胞。这些结果指出了分泌因子，因为ASCS的临界介质引发了抗增殖效应。

3.4。上调鸡蛋鱼和PGE₂在ascs与pbmcs的节目中

未处理的pbmc产生少量或中等数量的眠氨酸，激活后显著增加( 那 vs。 那 对于未经处理的PBMCS与PBMCS_PHA）.PGE也有类似的显著增加₂水平也发现(无分泌vs。 那 对于未经处理的PBMCS与PBMCS_PHA）.根据我们之前的发现，HD/ASCs和AS/ASCs都分泌kynurenines ( vs。 那 ）和PGE.₂（ vs。 那 ）自发性地，这些介质的释放在Ti预处理增加到较低的水平与现有共培养实验中发现的水平（Kynurenines vs。 那 ；铂族元素₂ vs。 那 ）[24］．然而，这些指示性数据不能直接用于目前的共培养条件，因为ASCs来源于其他捐赠者。与单独培养的pbmc相比_PHA，在这些细胞的共培育中，具有未处理和Ti刺激的高清/ ascs和/ ascs，显着增加的犬舍内素和PGE₂观察生产情况(图4(一)和4 (d)）.与未处理的ASCs相比，添加ti处理的HD/ASCs引发了kynurenines的显著增加(PGE也有类似的趋势₂而在ti处理的AS/ASCs中PGE的释放量更高₂被找到。然而，鸡胸鱼和PGE的幅度之间没有显着差异₂找到了HD / ASC的存在与/ ascs的升高。相比之下，在同一培养条件下，IL-10的分泌没有上升（图3.年代)。

3.5。细胞对细胞接触的贡献和可溶性因子对兴奋和PGE的上调₂通过对asc

kynurenines和PGE升高₂在transwell中，未经处理的HD/ASCs和AS/ASCs的产量显著高于与pmcs的细胞-细胞接触共培养_PHA在含有ti处理过的ASCs的共培养中也观察到类似的趋势(图)4 (b)那4 (c)那4 (e),4 (f)分别），表明可溶性因子在昆仑素和PGE的上调中的溶解因子的重要作用₂．

3.6。可溶性因子的分泌与ASCs抗增殖作用的关系

如图所示5.，在PBMC的共科栏中_PHA在ti处理的HD/ASCs和AS/ASCs中，kynurenines的浓度与CD4的增殖百分率呈负相关⁺(a, e)和CD8⁺（B，F）T细胞。观察到类似的关系，因为未经治疗为/ ascs（图（图）4.然而，在HD/ASCs中，仅在CD8方面有统计学意义⁺，但不是CD4⁺，细胞增殖(图4.S，PANELS B和A）。增殖CD4百分比与百分比的负相关⁺和CD8⁺T细胞和PGE₂也发现了分泌物，但由于实验次数少，并不总能达到统计学意义。然而，只有在ti处理的情况下才会注意到(图)5（c）那5（d）,5（h）；在(g)中有类似的趋势，但未经处理(图)4.S，面板C，D，G，H）ASC。相比之下，IL-10的分泌未能显示与增殖T细胞的数量的反比相关（图5.s），并在PBMC的共科术中_PHA对asc HD /_TI.IL-10的分泌甚至与CD4的增殖呈正相关⁺T细胞(图5.这些结果指出了狼嘌呤和PGE₂IL-10可能是ASCs抗增殖能力的调节因子。为了验证这一点，我们进行了阻断实验，其中有kynurenines (1-MT)和PGE的选择性抑制剂₂(吲哚美辛)代(图6.和7.）.

部分，但显着地，1-Mt和吲哚美辛，废除了Ti治疗的HD / ascs对CD4的抗增殖作用⁺和CD8⁺细胞，增加增殖细胞的数量以及增殖和复制索引。相比之下，应用抑制剂未能逆转通过未处理的HD / asc施加的弱抑制效果对这些细胞的增殖（图6(一)-6 (c)和数字7（a）-7（c）分别)。在As /ASCs的抗增殖能力方面，1-MT可抵消ti处理细胞对CD4的影响⁺(数据6 (d)-6 (f))和CD8⁺(数据7（d）-7 (f))显著增加T淋巴细胞的增殖数量和/或增殖和复制指数。而吲哚美辛则几乎完全恢复了正在增殖的CD4细胞的数量⁺和CD8⁺在ti处理和未处理的AS/ASCs存在时，细胞数量显著减少。

3.7。AS / ASCS对自体PBMCS的免疫调节效应

同种异体或自体PBMC的同种治疗和ASCS的同时进行的未处理和Ti治疗的共培养物的比较_PHA证明，在两个系统中，如/ ascs对CD4发挥了类似的抗抗解效应⁺和CD8⁺T细胞（图8(一个)-8（f））以及升高了犬藻素和PGE的浓度₂(图表8（g）和8（h）分别)。此外，Ti治疗的AS / ASCS引发了甚至显着提高了自体于同种异体PBMCS（图8（g））.

4。讨论

很好地确定，MSCS通过阻尼各种免疫细胞的激活，包括T淋巴细胞，单核细胞/巨噬细胞和树突细胞来发挥显着的免疫调节作用。在许多监管活动中，MSCs对T细胞增殖的免疫抑制作用已经在体外和体内病症中证实了[10-14那32那38］．在强直性脊柱炎中，局部和外围的T细胞扩张被认为起致病作用[4.-9.］．重要的是，AS患者的骨髓间充质干细胞有一些功能缺陷，被认为有助于病理性骨稳态[16-21］．值得注意的是，骨髓比脂肪组织更容易发生慢性炎症。所有这些观察可能表明自体骨髓间充质干细胞在AS中的治疗作用减弱。大量数据表明，不同组织来源的MSCs的免疫调节效果并不相同，脂肪组织来源的MSCs (ASCs)比骨髓间充质干细胞具有更强的免疫抑制特性[14那39］．不幸的是，随着患者的ASC，在这方面尚未调查。Our previous findings suggested that at least some AS/ASC properties may be changed, because of the reduced basal level of some surface molecules, i.e., CD90 and intracellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) on AS/ASCs, impaired basal secretion of kynurenines and galectin-3 by these cells, but the normal capability to regulate expression of activation markers on allogeneic T cells was revealed [25那26］．因此，在本研究中，我们以HD/ASCs作为参考细胞系，通过考察AS/ASCs对T细胞增殖的控制能力，进一步评估AS/ASCs的功能。重要的是，我们发现在异基因系统中，HD/ASCs和AS/ASCs都抑制增殖的CD4细胞数量⁺和CD8⁺具有类似效力的T细胞(图1（a）和1（d））.此外，每增殖CD4的分裂数量显着降低⁺和CD8⁺还观察到细胞（图1（b）和1 (e)因此，两种事件都导致T细胞扩张的减少（图1（c）和1 (f)）.总的来说，我们的结果与其他人对MSC属性的观察结果一致[10-14那40那41]，但表明AS/ASCs是异体CD4细胞增殖的有效抑制因子⁺和CD8⁺T细胞是一个新的发现。

为了提供成功的免疫调节，MSCs采用直接细胞对细胞相互作用和可溶性因子[10那11那14那42那43］．与其他报告相似[34那44，我们观察了HD/ASCs和AS/ASCs对两种CD4细胞的抗增殖作用⁺和CD8⁺T细胞主要由可溶性因子介导(图)2和3.）.进一步的实验鉴定出狼毒素和PGE₂对健康供体和as患者ASCs的抗增殖作用具有重要作用。首先，我们发现狼毒素和PGE的浓度₂(数据4(一)和4 (d))，而非抗炎细胞因子il -10(图3.S)，在pbmc共培养中显著上升_PHA未经治疗以及Ti刺激的高清/ ascs和/ ascs。其次，在Ti预处理的HD / ascs和AS / ascs存在下，两种因素的浓度，尤其是鸡蛋葡萄酒，与增殖CD4的数量相反⁺和CD8⁺细胞（图5.)，而在IL-10的病例中没有发现这种关联(图5.最后，选择性抑制kynurenine和PGE可部分但显著地消除HD/ASCs和AS/ASCs的抗增殖作用₂代(数据6.和7.）.我们的观察结果与其他报告一致，证明kynurenine途径在ASC抑制人T细胞增殖中发挥最关键的作用[32那44那45］．在该途径中，吲哚胺2,3-二恶英酶（IDO）分解了必需氨基酸色氨酸（TRP），导致局部TRP剥夺和犬留蛋白产生，最终导致抑制T细胞增殖，这些细胞凋亡和Treg细胞的形成[46那47］．Kynurenine途径可以通过TRP类似物，1-甲基 - 色氨酸（1-MT）阻断，所述1-甲基 - 色氨酸（1-MT）与铁IDO复合物结合，而是由于另外的甲基，不能被催化转化为犬舍植物[48］．类似于Kynurenine途径，据报道，PGE2也介绍了各种类型MSC对T细胞的抗增殖效果[49-51］．前列腺素E₂，是前列腺素家族中最有效的成员之一，已知能调节T细胞激活中的大量事件，包括细胞周期阻滞[52］．像其他前列腺一样，PGE₂从依赖于环加氧酶（COX）同工酶的酶活性的代谢途径，主要是COX-1和COX-2的代谢途径合成。53］．吲哚美辛是一种非甾体抗炎药，是非选择性COX-1和COX-2活性抑制剂，因此是前列腺素生成抑制剂[51］．有趣的是,铂族元素₂据报道，诱导IDO / kynurenine途径在耐常甲状腺细胞中，并通过MSCs在NK细胞的免疫抑制中促进该途径[36那54］．因此，两种途径也可以协作介导ASCS对T细胞的抗增殖作用。基于封闭实验的现有结果和相关分析以及与各种类型的MSCs的其他报告一致[44那45那49那50，我们指出狼毒素和PGE₂作为HD/ASCs和as /ASCs抗增殖作用的重要介质。

需要澄清的是，因为两家pbmc_PHAASCs产生kynurenines和PGE₂在我们的实验环境中，在整个细胞共培养期间存在1-MT和吲哚美辛。如结果所述（部分3.4.)、狼尿氨酸和PGE的基础释放₂通过休息PBMC，PHA治疗显着升高，并进一步在未经处理的和Ti处理的HD / ASC和AS / ASC的存在下增强（图4(一)和4 (d)）.另一方面，我们之前报道，与HD / ASC相比，通过/ ascs的自发生成作为/ ascs的蛋白质产生，而PGE的基础合成₂是正常的。此外，我们注意到，即使在TI刺激上，AS / ASC和HD / ASCS之间的这些差异也持续存在，这显着提升了Kynurenines和PGE的产生₂[26］．然而，尽管在单独的培养物中观察到的基础差异，但目前的结果表明，在靶细胞的共培养物中，靶细胞作为/ asc的含量至少为高清/ ascs（图4(一)和4 (d)）.

如前所述，MSCs免疫调节电位的执行是一个复杂的过程，涉及各种可溶性介质以及MSCs与免疫细胞的直接相互作用。与transwell系统相比，在细胞接触共培养中，T细胞增殖抑制程度和免疫抑制介质水平是由间充质干细胞与PBMCs池中不同类型细胞之间复杂的、多向的相互作用造成的。目前的结果显示(图2和3.)，表明HD/ASCs与T细胞接触时对T细胞增殖的抑制作用较transwell共培养时弱，提示HD/ASCs与其他细胞类型的相互作用可能会抵消并监督这些细胞的抗增殖作用。在AS/ASCs中也观察到类似的趋势，但差异在统计学上不显著，表明对这些细胞活动的控制较弱。提供促生存信号可能有助于这一事件的发生。例如，在PBMCs-ASCs中，共培养的T、B和NK细胞粘附于ASCs，部分结合的T细胞保持在激活、增殖状态。有趣的是，这些细胞表达了高水平的内质网蛋白，内质网蛋白可转换生长因子β(TGFβ)从抗增殖途径到促增殖途径的信号[55］．此外，BM-MSCs被发现通过直接细胞接触支持B细胞的活力，导致血管内皮生长因子(VEGF)的上调，从而保护B细胞免受凋亡[56］．在具有MSCs的单核细胞的共科培养中，即使MSC单层的密度也可能产生刺激信号，因为单层密度的降低之后是淋巴细胞增殖的剂量依赖性增加[57］．最后，介导细胞对细胞接触的各种表面分子的低表达水平并有助于MSC的免疫抑制性质[58]也可能影响MSCs的抗增殖活性，这在CD90的情况下被证明[59］．尽管我们发现HD/ASCs和AS/ASCs总体上对T细胞增殖具有类似的抑制作用，且主要通过可溶性因子kynurenines和PGE发挥作用₂，这些细胞系之间也有一些不同之处。首先，ti - primer显著增强了HD/ASCs的抗增殖作用，而不是AS/ASCs对两种CD4细胞的抑制作用⁺和CD8⁺细胞（图1）.类似地，犬留碱浓度与增殖CD4的数量之间的反比相关性⁺和CD8⁺在含ti许可的共培养中细胞更明显(图)5（a）和5（b））比未经治疗的HD / ascs（图3.相比之下，在由未处理和ti处理的AS/ASCs组成的共培养中，这些关联是可比较的(图A, B)5（e）和5（f）与图4.s，面板e，f）。因此，AS / ASC似乎与HD / ASCS敏感到TI触发的功能的增强。MSCS与促炎细胞因子的灌注，一个名为“许可”的程序是为治疗应用产生高职能MSC的若干策略之一[39］．使用TNF和/或IFN的ASCs许可γ据报道，增强这些细胞的免疫抑制功能，包括抑制T细胞增殖[60那61]，这与关于HD / ASCS的当前结果一致。据信这种方法可以模仿组织炎症内部，已知促进MSC的免疫调节功能[39］．由于患者的ASCS在体内暴露于慢性炎症微环境，因此体外比健康捐赠者对Ti牌照的敏感性较小，所以可能在良好发育的抗增殖能力的体内持续细胞中。

有趣的是，相关分析和阻断实验结果表明，kynurenines和PGE的作用₂对于健康供体的抗增殖活动，并且随着患者的抗增殖活性并不平等。虽然kynurenines和pge₂被发现是ti介导的HD/ASCs活性的必要介质(图5（a）-5（d）那6(一)-6 (c),7（a）-7（c）)，它们在未治疗的HD/ASCs抗增殖作用较弱的过程中发挥更小的作用(图)6(一)-6 (c)那7（a）-7（c），和3S，面板A-D)。对于AS/ASCs, kynurenines被证明是ti处理和(在较小程度上)未处理细胞的抗增殖活性的介质，影响了增殖反应的所有测试参数(图)5（e）-5（h）那6 (d)-6 (f)那7（d）-7 (f),3.S，面板E，面板F)，而贡献PGE₂这些细胞的功能受到限制，因为吲哚美辛抵消了未处理和ti处理的AS/ASCs对增殖T细胞数量的抑制作用(图)6 (d)-6 (f)和7（d）-7 (f)）.

因为先前据报道，体外失活的T细胞部分和以时间依赖性方式，抵抗ASC的抗增殖作用[62]，我们最终检查AS / ASC是否可以抑制自体T淋巴细胞的增殖 - 长期暴露于炎症Milieu的细胞。目前的结果表明，在具有同种异体和自体PBMC的聚集糖中，AS / ASCS抑制CD4的增殖响应⁺和CD8⁺具有类似效力的T细胞(图8(一个)-8（f））.此外，在异体和自体共培养中，PGE浓度相似₂被发现(图8（h）)，在自体条件下犬尿氨酸的生成甚至高于异体条件下(图8（g））.

我们的研究有一些限制。由于门控策略，我们使用的是，其他群体的CD4 +或CD8 +子集中的小污染不能排除在外。

5.结论

总之，我们首次报道了来自强直性脊柱炎患者脂肪组织(AS/ASCs)的间充质干细胞是同种异体和自体CD4的有效抑制因子⁺和CD8⁺与来自健康供体的T细胞(HD/ASCs)类似，T细胞主要通过可溶性因子(狼毒嘌呤和PGE)发挥这种抗增殖作用₂）.此外，HD/ASCs和AS/ASCs的抗增殖活性之间的一些差异表明后者在体内获得许可。

数据可用性

用于支持这项研究结果的数据包括在文章中。

的利益冲突

作者宣布没有关于本文的出版物的利益冲突。

致谢

我们感谢所有为我们的研究捐献脂肪组织的患者。该研究得到了波兰国家科学中心(批准号2016/21/B/NZ5/00500)和波兰科学和高等教育部对NIGRR的核心资助(批准号S/6)的资助。

补充材料

图1S：示例性直方图，显示各种培养变体中外周血单核细胞（PBMC）的PHA触发的增殖：（a）CD4 +细胞的增殖;（b）CD8 +细胞的增殖。ASCS：脂肪衍生的间充质干细胞;TI：TNF + IFNγ细胞治疗。图2S: T细胞增殖抑制程度取决于pbmc供体。两株HD/ASCs (A, C)和两株AS/ASCs (B, D)分别取自2例AS患者(B, D)，与4种不同供体(供体1-4)的pbmc共培养。共培养条件见图1．图3S: pha刺激的外周血单个核细胞单独培养(PBMCs)或与健康供体(HD/ASCs)和AS患者(AS/ASCs)的ASCs共培养的IL-10分泌。细胞的制备和培养条件如材料和方法中所述。未经治疗和TNF + IFNγ- 使用（Ti-）处理的ASC。PBMC和细胞共培养的单独培养物之间没有显着差异。＃ 进行组间(HD vs. AS)比较。图4S: kynurenines与PGE的相关性₂浓度具有增殖T细胞的数量。细胞制备，培养条件，CD4的评价⁺（a，c，e，g）和cd8⁺（b，d，f，h）细胞增殖，以及knyurenines和pge的测量₂浓度如图所示5.，但只使用未经处理的ASCs。Spearman的排名（ ）（A，B，E，F）和Pearson（ ）(C, D, G, H)相关系数和显示值。其他解释如图所示1．图5S: IL-10浓度与增殖的T细胞数量没有负相关关系。细胞的制备、培养条件和CD4的评价⁺（a，c，e，g）和cd8⁺(B, D, F, H)细胞在未处理和ti处理ASCs存在下的增殖情况，分别如图5和4S所示。培养上清中IL-10浓度的测定如材料和方法所述。皮尔森( ）相关系数和相关系数显示值。其他解释如图所示1．（补充材料）

参考文献

1. J. D. Taurog, A. Chhabra，和R. A. Colbert，《强直性脊柱炎和中轴性脊柱炎》，新英格兰医学杂志第374卷26，第2563-2574页，2016。查看在：出版商的网站|谷歌学者
2. D. McGonagle，S.Z.Aydin，A.Gül，A.Mahr和H. direskeneli，“MHC-I-Opathy” - 脊椎炎和Behçet疾病的统一概念，“自然评论风湿病学，第11卷，第5期。12, pp. 731-740, 2015。查看在：出版商的网站|谷歌学者
3. A. Cortes，S. L.Luit，P.J.Leo等，“强直性脊柱炎的主要组织相容性复杂关联是复杂的并且涉及进一步简化与_erap1_，”自然通信，第6卷，第2期1, p. 7146, 2015。查看在：出版商的网站|谷歌学者
4. M. Bollow和T. Fischer，“脊柱关节病中骶髂活检的定量分析:T细胞和巨噬细胞在早期和活动性骶髂炎中占主导地位——细胞数量与磁共振成像检测到的增强程度相关。”风湿病的血清，卷。59，没有。2，pp。135-140,2000。查看在：出版商的网站|谷歌学者
5. J.Braun，M.休尚，L.Neure等，“使用免疫组织学和原位杂交技术在患有强直性脊柱炎患者骶髂关节活检标本的检查中的使用”关节炎和风湿病第38卷第2期4，第499-505页，1995。查看在：出版商的网站|谷歌学者
6. M. A. Treviño, E. Teixeiro，和R. Bragado，“在脊椎关节病发病时滑膜液中CD8+ T细胞寡克隆扩增，选择性增生以响应自身抗原:非克隆人群中细胞特异性的表征。”风湿病学杂志，卷。31，不。10，pp。1962-1972，2004。查看在：谷歌学者
7. P. Bowness, A. Ridley, J. Shaw等人，“表达KIR3DL2+并对HLA-B27同源二聚体反应的Th17细胞在强直性脊柱炎中增加，”免疫学杂志第186期4, pp. 2672-2680, 2011。查看在：出版商的网站|谷歌学者
8. I. won - baeza, A. Ridley, J. Shaw等，“KIR3DL2与HLA- b27二聚体和游离H链的结合比其他HLA I类更强，并促进强直性脊柱炎中T细胞的扩张，”免疫学杂志，卷。190，没有。7，pp。3216-3224,2013。查看在：出版商的网站|谷歌学者
9. A.Šuður，Z.Jajić，I.Matijašević等，“组合手动和自动免疫蛋白质透明度鉴定了类风湿性关节炎，强直性脊柱炎和银屑病关节炎的疾病特异性外周血免疫群。临床和实验风湿病学，第38卷，第903-916页，2020。查看在：谷歌学者
10. J. Cagliani, D. Grande, E. P. Molmenti, E. J. Miller, H. L. R. Rilo，“间充质基质细胞的免疫调节及其临床应用”，干细胞与再生生物学杂志，卷。3，不。2，pp。1-14,2017。查看在：出版商的网站|谷歌学者
11. M. M. Duffy, T. Ritter, R. Ceredig和M. D. Griffin，“间充质干细胞对t细胞效应通路的影响”，干细胞研究与疗法，第2卷，第2期4，第34页，2011。查看在：出版商的网站|谷歌学者
12. A. Aggarwal和M. F. Pittenger，《人间充质干细胞调节异基因免疫细胞反应》移植，卷。105，没有。4，PP。1815-1822,2005。查看在：出版商的网站|谷歌学者
13. J. SU，X. Chen，Y.Huang等人，“在哺乳动物物种中间充质干细胞介导的免疫抑制中的INOS和IDO功能的系统发育区别”细胞死亡和分化，卷。21，不。3，pp。388-396,2014。查看在：出版商的网站|谷歌学者
14. X. L. Fan，Y. Zhang，X. Li和Q.L.Fu，“富士，”基于间充质干细胞疗法的保护作用的机制，“细胞与分子生命科学，卷。77，没有。14，pp。2771-2794,2020。查看在：出版商的网站|谷歌学者
15. B. C. Lee和K. S. Kang，“间充质干细胞免疫调节的功能增强策略及其治疗应用，”干细胞研究与疗法，第11卷，第5期。1，第397页，2020。查看在：出版商的网站|谷歌学者
16. “强直性脊柱炎骨髓间充质干细胞全基因组表达谱分析及信号通路筛选”，“强直性脊柱炎骨髓间充质干细胞全基因组表达谱分析及信号通路筛选”，干细胞国际，卷。2014年，913011页，2014年。查看在：出版商的网站|谷歌学者
17. Xie Z.， P. Wang, J. Li, et al.，“MCP1在强直性脊柱炎中间充质干细胞异常成骨分化过程中触发单核细胞功能障碍，”分子医学杂志第95卷第1期2，页143-154,2017。查看在：出版商的网站|谷歌学者
18. “强直性脊柱炎中骨髓间充质干细胞诱导的CCR4+CCR6+ Th/Treg细胞亚群失衡的免疫调节潜力降低”，关节炎研究与治疗，第13卷，第2期1, p. R29, 2011。查看在：出版商的网站|谷歌学者
19. Liu Z.， P. Wang, S. Cen等，“增加BMPR1A表达增强强直性脊柱炎患者间充质干细胞的成脂分化，”干细胞国际，卷。2019年，第4143167号，13页，2019年。查看在：出版商的网站|谷歌学者
20. 郑刚，谢正忠，王平等，“强直性脊柱炎中间充质干细胞的增强成骨分化:基于三维仿生环境的研究，”细胞死亡与疾病，第10卷，第5期。5，第350页，2019年。查看在：出版商的网站|谷歌学者
21. W.刘，P. Wang，Z.Xie等，“通过MIR-4284 / CXCL5轴在强直性脊柱炎中的MIR-4284 / CXCL5轴”异常抑制骨髓细胞发生异常抑制“细胞死亡与疾病，第10卷，第5期。3，第188页，2019。查看在：出版商的网站|谷歌学者
22. K. Abdolmohammadi, F. Pakdel, H. Aghaei等，“强直性脊柱炎和间充质间质/干细胞治疗:一种新的治疗方法，”生物医学和药物治疗，卷。109，pp。1196-1205,2019。查看在：出版商的网站|谷歌学者
23. E. Kuca-Warnawin，T.Burakowski，W.Kurowska等，“患者骨髓中最近活化的T细胞数量升高的类风湿性关节炎：白细胞介素15？”风湿病的血清，第70卷，第2期1, pp. 227-233, 2011。查看在：出版商的网站|谷歌学者
24. B.明亮，R.明亮，P.明亮和A.Imaye，“强直性脊柱炎，慢性疲劳和抑郁症后骨关节炎的基质血管分数治疗后改善：案例报告”医学病例报告杂志，卷。12，不。1，p。238,2018。查看在：出版商的网站|谷歌学者
25. E. Kuca-Warnawin，U.Skalska，I. Janicka等，“脂肪酸疾病患者的脂肪衍生间充质干细胞（ASC）的表型和分泌活性”，细胞，卷。9，p。1659年，2019年。查看在：出版商的网站|谷歌学者
26. E. Kuca-Warnawin, I. Janicka, P. Szczęsny等，“风湿病患者脂肪组织来源间充质干细胞对t细胞激活标记物表达的调节”，细胞移植2020年第29卷第096368972094568条。查看在：出版商的网站|谷歌学者
27. M. Rudwaleit, D. van der Heijde, R. landdewe等，“脊柱关节炎评估国际协会中轴性脊柱关节炎分类标准的发展(第二部分):验证和最终选择”，风湿病的血清第68卷第2期6，第77 - 783页，2009。查看在：出版商的网站|谷歌学者
28. U. Skalska, E. Kontny, M. prochorecc - sobieszek，和W. Maslinski，“来自类风湿性关节炎患者的关节内脂肪源性间充质干细胞维持软骨分化的功能，”风湿病（牛津）第51卷第1期10, pp. 1757-1764, 2012。查看在：出版商的网站|谷歌学者
29. K. English, F. P. Barry, C. P. Field-Corbett和B. P. Maho，“IFN-γ和tnf-α小鼠间充质干细胞对免疫调节的差异调控免疫学的信，卷。110，没有。2，pp。91-100,2007。查看在：出版商的网站|谷歌学者
30. J. Cuerquis, R. Romieu-Mourez, M. François等，“在抑制T细胞增殖之前，人类间充质间质细胞通过激活的T细胞暂时增加细胞因子的产生:干扰素的作用γ和肿瘤坏死因子 -α刺激。”cytotherapy.，第16卷，第5期。2, pp. 191-202, 2014。查看在：出版商的网站|谷歌学者
31. Z.Tu，Q. Li和H.Bu，“间充质干细胞通过分泌因子H抑制补体激活”干细胞和发展第19卷第2期第11页，1803-1809页，2010。查看在：出版商的网站|谷歌学者
32. J.O.Ahn，J.S.Chae，Y.R.Coh等，“人脂肪组织衍生的间充质干细胞抑制体外和体内T细胞淋巴瘤生长，”抗癌研究，卷。34，没有。9，pp。4839-4847，2014。查看在：谷歌学者
33. Ren g, Su j, Zhang L. et al.，“间充质干细胞介导的免疫抑制机制的物种变异”，干细胞第27卷第2期8，PP。1954-1962，2009。查看在：出版商的网站|谷歌学者
34. M. Kampera，L. Cosmi，R. Angeli等，“干扰素的角色 -γ在人骨髓间充质干细胞的免疫调节活动中，“干细胞，第24卷，第2期2, 2006。查看在：出版商的网站|谷歌学者
35. I. PRIGIONE，F. BENVENUTO，P.BOCCA，L. Battistini，A.UCCelli和V.PISToia，“人间充质干细胞之间的相互作用相互作用γδT细胞或不变的自然杀伤T细胞干细胞第27卷第2期3，第693-702页，2009。查看在：出版商的网站|谷歌学者
36. G. M. Spaggiari, A. Capobianco, H. Abdelrazik, F. Becchetti, M. C. Mingari，和L. Moretta，“间充质干细胞抑制自然杀伤细胞增殖，细胞毒性，和细胞因子的产生:吲哚胺2,3 -双加氧酶和前列腺素E2的作用，”血，卷。111，没有。3，pp。1327-1333,2008。查看在：出版商的网站|谷歌学者
37. M. Roederer，“对细胞增殖数据的解释：避免庞罗赛斯，”血细胞计数。部分，卷。79，pp。95-101，2011。查看在：谷歌学者
38. 高林，刘芳，谭林，刘涛，陈振中，史灿，“非培养真皮间充质基质细胞的免疫抑制特性和移植物抗宿主病的控制”，生物材料第35期11, pp. 3582-3588, 2014。查看在：出版商的网站|谷歌学者
39. Y. Seo, T. H. Shin, H. S. Kim，“当前增强脂肪干细胞功能的策略:更新，”国际分子科学杂志，第20卷，第2期。15，第3827页，2019。查看在：出版商的网站|谷歌学者
40. M. Najar, G. Raicevic, H. I. Boufker等，“间充质基质细胞使用PGE2调节淋巴细胞亚群的激活和增殖:脂肪组织、Wharton 's果冻和骨髓来源的联合比较，”细胞免疫学，第264卷，no。2，页171-179,2010。查看在：出版商的网站|谷歌学者
41. “间充质干细胞通过抑制天然杀伤因子2、成员D蛋白受体的表达和前列腺素E2、吲哚胺2,3 -双加氧酶和转化生长因子-的分泌来抑制CD8+T细胞介导的激活β”,临床和实验免疫学，第178卷，第2期3, pp. 516-524, 2014。查看在：出版商的网站|谷歌学者
42. “间充质干细胞与免疫调节的关系:现状与展望”，北京大学学报(自然科学版)，细胞死亡与疾病，第7卷，第5期1、2016年第e2062条。查看在：出版商的网站|谷歌学者
43. Y. Zhou，Y. Yamamoto，Z. Xiao和T.Ochiya，“通过帕拉卡碱活性介导的间充质基质/干细胞的免疫调节功能”临床医学杂志，卷。8，不。7，p。1025,2019。查看在：出版商的网站|谷歌学者
44. O. Dela Rosa，E. Lombardo，A. Beraza等，“要求IFN-Gamma介导的吲哚胺2,3-二恶英酶表达在淋巴细胞增殖调节中，通过人脂肪衍生的干细胞，”组织工程。部分， vol. 15, pp. 2795-2806, 2009。查看在：谷歌学者
45. R. Menta，P.Mancheño-Corvo，B.Del Rio等，“色氨酸浓度是脂肪凋亡间充质细胞容量的主要介质，以抑制T淋巴细胞增殖_in vitro_，”cytotherapy.，第16卷，第5期。12，pp。1679-1691,2014。查看在：出版商的网站|谷歌学者
46. A. L. Mellor和D. H. Munn，“色氨酸分解代谢和调节自适应免疫力”免疫学杂志第170卷12，页5809-5813,2003。查看在：出版商的网站|谷歌学者
47. Y. Mándi和L. Vécsei，“犬神经氨酸系统和免疫调节”，神经传输杂志，卷。119，没有。2，pp。197-209，2012年。查看在：出版商的网站|谷歌学者
48. E. Wirthgen, A. Hoeflich, A. Rebl，和J. Günther，“Kynurenic酸:免疫调节色氨酸代谢物的双重作用及其与病理条件的联系”免疫学前沿，第八卷，页1957,2018。查看在：出版商的网站|谷歌学者
49. A. J. Cutler, V. Limbani, J. Girdlestone，和C. V. Navarette，“脐带来源的间充质间质细胞调节单核细胞功能抑制T细胞增殖，”免疫学杂志第185卷第1期11，第6617-6623页，2010。查看在：出版商的网站|谷歌学者
50. Wang D.， K. Chen, W. T. Dyu et al.，“CD14⁺单核细胞促进人脐带基质干细胞的免疫抑制作用，“实验细胞研究第316卷15，页2414-2423,2010。查看在：出版商的网站|谷歌学者
51. A.yañez，A.Oviedo，M.Aldea，J.A.Bueren和M. L. Lamana，“前列腺素E2在脂肪和骨髓组织衍生的间充质细胞的免疫抑制性质中起着关键作用”实验细胞研究第316卷19, pp. 3109-3123, 2010。查看在：出版商的网站|谷歌学者
52. V.Sreeramkumar，M.Fresno和N. Cuesta，“前列腺素E2和T细胞：朋友或敌人？”免疫学和细胞生物学，卷。90，没有。6，pp。579-586,2012。查看在：出版商的网站|谷歌学者
53. W. J. Sander，H.G.O'neill和C.H.Pohl，“前列腺素E2作为病毒感染的调节剂”，生理学的前沿， 2017年第8卷，第89页。查看在：出版商的网站|谷歌学者
54. M. S. von Berfgwelt-Baildon, A. Popov, T. Saric et al.，“CD25和吲哚胺2,3 -双加氧酶在体内被前列腺素E2上调，并被肿瘤相关树突状细胞表达:t细胞抑制的附加机制，”血，卷。108，没有。1，pp。228-237,2006。查看在：出版商的网站|谷歌学者
55. M. E. Quaedackers，C.C.Baan，W.Weimar和M.J.Hoogduijn，“脂肪衍生的基质细胞和激活的T淋巴细胞之间的细胞接触相互作用”欧洲免疫学杂志第39卷第3期12, pp. 3436-3446, 2009。查看在：出版商的网站|谷歌学者
56. M. E. Healy，R.Bergin，B.P.Mahon和K.英语，“间充质基质细胞通过VEGF的接触依赖性上调来保护CD19 +外周B细胞的Caspase 3介导的凋亡”干细胞和发展，第24卷，第2期20，pp。2391-2402,2015。查看在：出版商的网站|谷歌学者
57. G. Li Pira，F.Ivaldi，L. Bottone，R.Quarto和F.Manca，人骨髓基质细胞妨碍CD4和CD8 T淋巴细胞与抗原呈递细胞的特异性相互作用，“人类免疫学，第67卷，第5期12, pp. 976-985, 2006。查看在：出版商的网站|谷歌学者
58. Liu S.， F. Liu, Y. Zhou, B. Jin, Q. Sun, S. Guo，“Cell Surface receptor介导的MSCs免疫抑制特性”，免疫学前沿，卷。11，p。1076,2020。查看在：出版商的网站|谷歌学者
59. D. Campioni，R.Rizzo，M. Stignani等人，“人间充质基质细胞（MSCs）上的CD90降低的阳性与MSCs的免疫抑制活性丧失相关，”血细胞计数，第76B卷，no。3, pp. 225-230, 2009。查看在：出版商的网站|谷歌学者
60. R. Domenis，A.Cifu，S.Quaglia等，“促炎刺激增强了脂肪间充质干细胞的免疫抑制功能 - 衍生的外泌体，”科学报告，卷。8，第13325,2018款。查看在：出版商的网站|谷歌学者
61. A. R.T. Serejo，A.E. Silva-Carvalho，L. D.C.F.F. Braga等，“评估INF的免疫抑制潜力γ脂肪间充质干细胞，它们的分泌体和细胞外囊泡细胞， 2019年第8卷第22页。查看在：出版商的网站|谷歌学者
62. P. Mancheño-Corvo, R. Menta, B. del里约热内卢等，“T淋巴细胞预刺激以时间依赖性的方式损害脂肪间充质干细胞抑制增殖的能力:干扰素的作用γ，聚I：C，和色氨酸代谢在恢复脂肪糖间充质干细胞抑制作用，“干细胞和发展，第24卷，第2期18, pp. 2158-2170, 2015。查看在：出版商的网站|谷歌学者

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