比较人类Dental-Derived干细胞成骨分化潜能的牙髓隔绝,牙周韧带,牙科卵泡,牙槽骨

文摘

背景。间充质干细胞(msc)已经成为有前途的候选人为再生医学由于multidifferentiation潜力和免疫调节能力。与经典的msc来源于骨髓和脂肪,dental-derived msc显示高塑性,可访问性和适用性。因此,它们被认为是再生医学的替代来源。方法。四种类型的msc被孤立于牙髓、牙周韧带,牙科卵泡,和牙槽骨的捐赠,有五个不同的个体。我们分析了他们的形态,immunophenotype、增殖率、凋亡,trilineage分化潜能,在成骨分化和基因表达。结果。PDLSCs,我们的研究表明,DPSCs DFPCs和ABMMSCs相似的形态学和immunophenotype展出。DFPCs显示较高的增殖和细胞凋亡。在trilineage分化培养基培养时,所有类型的msc骨生成的分化潜能,脂肪形成,软骨形成。通过染色过程中成骨诱导和遗传分析,ABMMSCs PDLSCs显示,成骨的能力最高,其次是DPSCs, DFPCs是最低的。结论。总的来说,我们的研究结果表明,不同的dental-derived干细胞具有不同的生物学特性。骨组织工程,ABMMSCs PDLSCs可作为种子细胞的最佳候选人。

1。介绍

在临床治疗骨再生是一个具有挑战性的问题。有多种原因,如创伤、先天异常,或肿瘤切除,可以破坏骨并导致功能障碍。到目前为止,自体组织移植提供了一种可能的治疗方法与功能重建手术的发展(1]。然而,由于供体不足等缺陷组织来源和伤口感染,功能重建是有限的(2]。近年来,骨组织工程基于干细胞,生物材料,生物活性大分子在骨缺损的重建成为一个新的领域和种子细胞的选择是一个关键因素(3]。理想的种子细胞应具备的优点包括范围广泛的来源,容易提取,迅速扩张,multilineage分化潜能。另外,干细胞应该显示的能力结合脚手架材料稳定,形成一个合适的微环境4]。

间充质干细胞(msc)是多能祖细胞,可以分化成不同类型的血统,包括成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、上皮细胞、neuron-like细胞,hepatocyte-like细胞(5]。这些特点使得msc具有吸引力再生医学治疗,尤其是骨缺损的修复和重建。此外,由于低免疫原性和重要的免疫调节能力,msc治疗应用被认为是理想的候选人。从骨髓首次成功隔离后,msc随后被孤立的从不同的其他组织,如脂肪组织,脐带,羊膜,牙齿,滑膜6- - - - - -10]。近年来,dental-derived msc备受关注,由于其可塑性,可访问性和适用性。然而,组织再生的理想dental-derived msc仍有待阐明。

到目前为止,各种各样的msc从牙科组织分离和特征,包括牙髓干细胞(DPSCs) [11(PDLSCs)[],牙周韧带干细胞12),牙科卵泡祖细胞(DFPCs) [13),肺泡bone-derived msc (ABMMSCs) [14),从人类脱落乳牙干细胞(棚)15(SCAP)[],顶端乳头状干细胞16),牙胚祖细胞(TGPCs) [17),牙龈msc(业务)18]。因为骨髓间充质干细胞(BMMSCs)已广泛应用于临床治疗,dental-derived msc的特点通常是与BMMSCs相比。类似于BMMSCs, dental-derived msc可以分化成三种类型的细胞谱系,至少他们也表现出不同的特征。此外,dental-derived msc显示免疫调节和抗炎特性的优势在当地环境19]。然而,没有研究系统DPSCs的特点相比,PDLSCs DFPCs, ABMMSCs,可以很容易地从提取获得第三臼齿及其周围组织。

在这项研究中,我们取代传统BMMSCs ABMMSCs可以获得较低的创伤和形态进行了系统比较,immunophenotype,增殖率,antiapoptosis能力,和DPSCs trilineage分化潜力,PDLSCs DFPCs, ABMMSCs。成骨的能力和基因表达模式四种类型的干细胞的成骨的过程比较评估其临床应用潜力在修复骨缺损提供理论支持的选择最好的骨组织工程的种子细胞。

2。材料和方法

2.1。细胞隔离和文化

健康的牙齿和牙槽骨样本来自提取的第三臼齿和捐助者16 - 20岁。每种类型的MSC来自同一个捐赠者被用于以下实验中,有五个不同的个体。所有的程序都是研究伦理委员会批准的上海交通大学医学院(sh9h - 2020 tk60 - 1)。DPSCs的隔离、PDLSCs DFPCs,牙髓组织,牙科毛囊组织,三分之一的牙周韧带组织在根表面是用磷酸盐(PBS)洗净,切成小块的1 - 2毫米³。然后,他们与3毫克/毫升I型胶原酶消化(美国σ)40分钟37°C。在那之后,组织于70年通过μm过滤器(美国热科学);然后,悬挂在1200转离心5分钟。细胞颗粒resuspended MEM -α介质(Biolnd,以色列)含20%胎牛血清(Biolnd的边后卫,以色列)和100 U /毫升penicillin-streptomycin (Beyotime,中国),然后被镀成菜。ABMMSCs隔离的,牙槽骨碎成小块,播种在菜肴使用相同的媒介。所有类型的细胞在37°C在湿润的气氛中孵化有限公司为5%₂。在80%左右融合,细胞分离0.25%胰蛋白酶(Beyotime,中国)和分裂的比率1:3。中所有类型的细胞每3天刷新。细胞通过3是用于进一步的实验。

2.2。流式细胞术

msc在通道3的四种类型被trypin-EDTA收获(美国σ),在1200转离心5分钟。然后,细胞颗粒在PBS resuspended和转移到测试管。分析了immunophenotype以下抗体:FITC-conjugated CD24、CD29、CD44、CD45、和CD73 PE-conjugated CD34, CD90、CD105, CD146。相应isotype-matched抗体被用作控制。所有抗体购自BD生物科学(美国新泽西州)。细胞培养在黑暗中收集的30分钟,流式细胞分析仪。分析的结果是使用Cell-Quest麦金塔电脑软件。

2.3。TUNEL染色

msc在细胞培养的幻灯片,直到达到80%汇合,然后替换为无血清培养基为24小时。然后,他们被固定为4% PFA 30分钟,与PBS洗3次。然后,我们遵循制造商的指令TUNEL检测设备(Servicebio,中国)和荧光显微镜下拍照。红灯代表凋亡细胞核通过TUNEL染色,和蓝色光被DAPI染色的细胞。红色荧光细胞的数量的百分比蓝色荧光细胞的数量代表总细胞凋亡细胞的比例。

2.4。细胞增殖

根据制造商的指示,细胞计数Kit-8 (Dojindo、日本)是用于检测细胞增殖。四种类型的msc被播种在96 -孔板(美国康宁公司)的密度 细胞/好,每一个含有100μlαmem的边后卫为10%。孵化后第一个24小时,细胞数量每24小时连续七天测试。确定数量的msc、10μL CCK-8试剂添加到每个好然后孵化2小时37°C。光密度值波长450纳米检测与Multiskan(美国热科学)。每个实验中执行三个复制。

2.5。脂肪形成的分化

脂肪形成的差异化,四种类型的msc被播种在每个6-well板的密度 细胞/和维护在MEM -α中含有10%的边后卫。confluency当细胞达到100%,与脂肪形成的分化培养基中取代了(美国Cyagen)根据制造商的指示和21天。合成的脂质滴分化细胞被发现使用油红染色(美国Cyagen)。

2.6。Chondrogenic分化

chondrogenic分化, 细胞在15毫升离心聚丙烯管(美国康宁公司)和500年resuspendedμL chondrogenic分化培养基(美国Cyagen)。每3天中被刷新。21天后,细胞颗粒固定在4% PFA然后切成石蜡切片5μ米厚度。评估粘多糖沉积,与阿尔新蓝染色的部分(美国Cyagen)。

2.7。成骨分化

对于成骨分化,msc被播种在每个6-well板的密度 细胞/和维护在MEM -α中含有10%的边后卫。细胞融合达到60 - 70%时,介质被替换为成骨分化培养基(美国Cyagen)。细胞被播种在成骨分化培养基为21天,每3天刷新中。

2.8。高山活动染色和化验

成骨分化后,msc被高山染色检测工具(中国建成生物技术)和高山活动分析工具包(Solarbio,中国),3天,7和14。高山染色的细胞被孵化20分钟解决方案在37°C。扫描仪(惠普、中国)是用于获取数字图像。高山活动规范化的蛋白质浓度。标准协议后,蛋白质提取使用里帕裂解缓冲(美国σ)和由布拉德福德蛋白质浓度测定分析工具包(Sangon生物技术,中国)。

2.9。茜素红染色和钙沉积量化

成骨分化后21天,msc被发现的矿化结节利用茜素红染色(美国Cyagen)的解决方案。这些细胞被固定在4% PFA 30分钟和孵化与茜素红染色溶液在室温下。5分钟后,反应是然后用PBS停在洗。扫描仪和显微镜是用来捕捉数字图像。与茜素红染色后,钙结节溶解10%党和孵化在37°C 30分钟。然后,上层清液被转移到一个96孔板,和590海里的吸光度测量统计分析。

2.10。RNA提取和存在

总RNA提取利用RNAiso +(豆类、日本)trilineage msc分化。RNA浓度和纯度测定使用Multiskan(美国热科学)。互补脱氧核糖核酸合成的RNA通过使用retrotranscription工具包(豆类、日本)。定量实时聚合酶链反应(存在)进行混合使用SYBR绿色我的主人(豆类、日本)和运行LightCycler 96(罗氏,CH)。引物序列表中列出1。每个基因的相对表达了使用2^{- - - - - -ΔΔCt}获得的值正常化β肌动蛋白的RNA作为内部控制。

2.11。西方墨点法

DPSCs经过21天的成骨分化,PDLSCs, DFPCs, ABMMSCs,细胞总蛋白提取使用里帕裂解缓冲(σ,美国),和由布拉德福德蛋白质浓度测定试验设备(Sangon生物技术,中国)。培养在MEM - mscα中含有10%的边后卫是用作控制。样本加热8分钟在100°C。等量的蛋白质分离10% SDS-polyacrylamide凝胶和转移到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)(美国Bio-Rad)。膜被封锁的5%脱脂牛奶在室温下2小时然后孵化主要抗体RUNX2(1: 2000年,ab236639 Abcam),高山(1:2000年,ab83259 Abcam), OSX(1: 2000年,ab94744 Abcam), OPN(1: 2000年,ab8448 Abcam)β肌动蛋白(1:2000,ab8227 Abcam)一夜之间在4°C。洗后用TBST缓冲区,这些墨迹孵化了合山羊anti-rabbit(1: 1000年,Abcam)在室温下1小时。蛋白质是可视化使用ChemiDoc成像系统(美国Bio-Rad)。

2.12。统计分析

所有统计分析计算软件使用GraphPad棱镜8。差异超过三组,单向方差分析应用。所有实验至少重复三次,并给出了数据 。被认为具有统计显著性结果价值; 被认为是统计学意义( , ,和 与DPSCs;^# ,^{# #} ,和^{# # #} 与PDLSCs;^& ,^{& &} ,和^&&& 与DFPCs;^__ ,^组合 ,和^††† 比ABMMSCs)。

3所示。结果

3.1。MSC形态

隔离和培养DPSCs之后,PDLSCs DFPCs ABMMSCs, msc是扩大和培养基的通道。倒置相差显微镜是用来评估的形态学msc在通道0和3(图1(一))。我们发现所有类型的msc展出呈长梭形形状和收敛时显示旋转的安排。3通道后,细胞形态仍然是光滑的和一致的。无显著差异,而在形态学观察四种类型的细胞。

3.2。MSC Immunophenotype

我们通过流式细胞术分析了msc的immunophenotype。数据显示低表达内皮细胞和造血标记(CD24、CD34、CD45)和高表达典型的MSC标记(CD73 CD90、和CD105)和CD29、CD44, CD146(图1 (b))。结果表明,四种类型中没有区别msc immunophenotype。据报道,cd146 msc增殖和分化能力高于CD146-negative msc (20.]。为了消除CD146的干扰,我们选择了msc CD146表达高(> 95%)以下测试。

3.3。细胞凋亡和增殖率

通过血清剥夺我们MSC诱导细胞凋亡。结果表明,凋亡率DFPCs最高和ABMMSCs最低,其次是DPSCs PDLSCs。之间没有统计凋亡率的差异DPSCs和PDLSCs(数字2(一个)和2 (b))。

根据CCK-8连续7天测试结果,分析了生长曲线和吸引。结果表明,所有的msc慢慢扩散前两天,在第三天进入对数生长期。DFPCs的增殖率显著高于ABMMSCs, DPSCs和PDLSCs第二(图2 (c))。

3.4。高山活动染色和化验

高山主要表现在矿化矩阵由成骨分化细胞产生和被认为是成骨细胞的早期标志(21]。成骨诱导过程中,四种类型的msc的高山活动随时间增加。在3天、7和14的成骨诱导,ABMMSCs显示最高的高山活动,其次是PDLSCs DPSCs, DPFCs拥有最低的(数据3(一)和3(b))。

3.5。茜素红染色和钙沉积量化

为了检测DPSCs的成骨的能力,PDLSCs, DFPCs, ABMMSCs,我们进行成骨分化实验。每种类型的细胞在成骨分化培养基培养是21天。染色结果证实,所有的msc经历了成骨分化,但效率是不同的。如数据所示3(c) -3(e)、ABMMSCs和PDLSCs茜素红染色显示强于DFPCs,其次是DPSCs,这表明成骨的能力从ABMMSCs下降,PDLSCs, DPSCs DFPCs。为了量化的钙沉积水平细胞基质沉积钙溶解在10%使用标(图党和量化3(d))。正如所料,ABMMSCs钙含量和PDLSCs DPSCs和DFPCs相比更高。

3.6。成骨的基因表达分析

我们进一步评估msc的成骨的能力通过比较相对的mRNA表达成骨的标记在天0、7、14和21的成骨诱导(图4)。除了DPSCs COL-1、PDLSCs DFPCs显示一个向下的趋势在骨的第七天,OPN, OCN, RUNX2, OSX,高山在msc所有随时间增加。在21天的成骨诱导,结果表明,所有的标记都表达在ABMMSCs最高,DFPCs最低,DPSCs PDLSCs第二。

我们还研究了成骨分化的表达蛋白质标记RUNX2,高山,OSX, OPN使用免疫印迹(数字5(一个)和5 (b))。成骨诱导后21天,OSX和高山上级表达在msc与对照组相比。此外,成骨的转录因子RUNX2和已故的标记OPN在ABMMSCs显著增强,PDLSCs, DPSCs,但只显示DFPCs蛋白质含量略高于控制细胞。总的来说,这些发现表明,msc隔绝不同dental-derived组织表现出独特的成骨分化能力,和osteogenesis-related基因的表达有显著差异。结合茜素红染色结果,得出四种类型的msc、ABMMSCs成骨的效率最高,其次是PDLSCs, DPSCs温和,DFPCs最低。

3.7。脂肪形成的分化和基因表达分析

为了测试DPSCs的脂肪形成的能力,PDLSC, DFPCs, ABMMSCs, msc在脂肪形成的诱导培养介质。大约7天后感应,msc变得平坦,脂质空泡在诱导细胞开始出现。经过21天的感应,这些细胞被固定4% PFA然后脂肪生成验证了油红O染色。胞质油滴的积累可以清楚地观察到msc(图的四种类型6(一))。我们进一步评估msc的脂肪形成的能力通过比较相对mRNA表达的脂肪形成的标记在天0和脂肪形成的感应(图216 (b))。结果表明,所有的脂肪形成的标记在ABMMSCs表达最高。

3.8。Chondrogenic分化和基因表达分析

DPSCs的chondrogenic能力、PDLSC DFPCs, ABMMSCs, msc在15毫升锥形管离心机。与软骨分化培养基培养后21天,软骨细胞颗粒被固定,切成石蜡切片。部分被阿尔新蓝染色,这表明chondrogenic苷。所有测试msc显示(图染色阳性结果7(一))。我们进一步评估msc的chondrogenic能力通过比较相对的mRNA表达chondrogenic标记在天0和chondrogenic感应(图217 (b))。结果表明,所有chondrogenic标记在DPSCs表达最高。

4所示。讨论

msc发挥关键作用在健康和疾病之间的平衡22]。结合不同类型的支架材料,如HAP和解放军,他们为骨再生提供新的治疗方法23]。考虑他们的角色在组织和器官,许多研究致力于探索的基本生物学机制和潜在的临床应用msc (24- - - - - -28]。msc的优势包括容易收获,并不倾向于形成肿瘤。在特定的增长条件下体外培养时,也显示自我更新和分化成多种细胞类型的特点(29日]。此外,事实证明,不同来源的msc具有显著的免疫调节功能。在炎性疾病,msc编制了一个独特的反应自导和融入受损组织30.]。这些独特的免疫调节特性使得msc许多临床研究领域的主要细胞类型(31日]。更具体地说,msc显示巨大的潜力在骨损伤和疾病的病理生理学和可以作为治疗选择在未来32]。

最好的组织工程种子细胞的评价包括许多方面。除了考虑的特征细胞含有增殖和分化成特定的血统,同样重要的是确定干细胞的来源。相比两个躯体msc BMMSCs ADSCs, dental-derived干细胞是成为一个有前途的细胞的再生医学,因为组织来源可以从医疗废物,如获得智慧的牙齿,这是简单的和更少的道德争议。与此同时,这些组织可以存储使用。BMMSCs,额外的侵入性程序捐赠者可能会导致严重的并发症,如感染。此外,可以获得较低的细胞群是隔离BMMSCs时遇到的一个缺点。虽然ADSCs可以通过抽脂手术或剖腹产,进展仍然是侵入性(33,34]。鉴于上述原因,dental-derived比体细胞干细胞干细胞表现得更好。本研究旨在描述DPSCs的生物学特性和成骨分化潜力,PDLSCs, DFPCs, ABMMSCs和确定其应用潜力骨再生。到目前为止,这样的直接比较没有被报道。

为了避免个体差异,我们从同一个人分离出四种类型的细胞。通过细胞表面标记的识别和tri-lineage分化的能力,我们孤立的细胞满足msc的标准(5]。细胞治疗和组织工程的应用程序需要大量的细胞,细胞的增殖能力是非常重要的。我们评估四种类型的msc的增殖率连续7天。结果表明,所有的msc达到对数生长期的第三天,之后快速增长。DFPCs的扩散速度是最快的,DPSCs和PDLSCs第二,和ABMMSCs是最慢的。

干细胞的antiapoptosis能力也是一个重要的方面在考虑治疗应用。据报道,约99%的msc丢失在细胞移植后第一个24小时,和细胞凋亡被认为是主要因素35]。很多机制可能会导致移植细胞的凋亡,包括营养不足和炎性环境(36]。我们部分的微环境模拟移植网站通过使用无血清培养基,成功地诱导MSC细胞凋亡。结果表明,ABMMSCs拥有最强的抗凋亡能力。

此外,我们研究了DPSCs的成骨分化能力,PDLSCs DFPCs, ABMMSCs。成骨分化能力被高山染色证实,高山活动分析,茜素红染色。成骨诱导后,ABMMSCs显示更多的高山染色在第七天,黑暗在第14天,其次是DPSCs PDLSCs, DFPCs拥有最轻的颜色。高山活动测试结果与高山染色一致。成骨诱导的21天,ABMMSCs显示更强的茜素红染色,PDLSCs第二但略强于DPSCs, DFPCs是最轻的。这些结果表明,产生更多的矿化结节ABMMSCs成骨诱导过程中最敏感的成骨细胞的分化。

在基因层面上,我们分析的表达成骨的标记(包括高山、RUNX2 COL-1, OCN, OPN,和OSX)进一步证明成骨分化。结果表明,随着成骨诱导时间的增加,在ABMMSCs成骨的基因的表达显著增加,高于DPSCs PDLSCs, DFPCs。同时,我们分析了蛋白质含量在21天或没有成骨的感应。在成骨诱导的后期阶段,msc仍显示成骨的潜力。在ABMMSCs成骨的蛋白质的表达明显高于DFPCs, PDLSCs和DPSCs紧随其后。总之,我们的研究结果表明,相对于上述四种dental-derived干细胞,ABMMSCs拥有最强的成骨能力,PDLSCs略弱,DPSCs第二,他们都比DFPCs更好。考虑到可用性的细胞来源,增殖,凋亡,成骨的能力、ABMMSCs PDLSCs被认为是潜在的替代品BMMSCs骨组织工程。

5。结论

总之,我们的结果表明DPSCs, PDLSCs DFPCs, ABMMSCs来自同一个体具有不同的生物学特性。ABMMSCs PDLSCs显示,更高的成骨的潜力,这将使他们为骨组织工程最佳的干细胞。然而,我们只有相比生物学特性和这些干细胞体外成骨的潜力。体内需要做更多的研究来确定最优骨再生的干细胞来源。

缩写

msc:	间充质干细胞
DPSCs:	牙髓干细胞
PDLSCs:	牙周韧带干细胞
DFPCs:	牙科卵泡祖细胞
ABMMSCs:	肺泡骨髓间充质干细胞
PFA:	多聚甲醛
存在:	RNA提取和定量实时聚合酶链反应
高山:	碱性磷酸酶
COL-1:	胶原蛋白I型
第二列:	胶原蛋白II型
能:	Aggrecan
RUNX2:	Runt-related转录因子2
OSX:	Osterix
OCN:	骨钙素
OPN:	骨桥蛋白
APN:	脂联素
FABP4:	脂肪酸结合蛋白4
中国共产党:	Cetylpyridine氯。

数据可用性

作者声明,所有的数据支持本研究的发现可以从相应的作者通过电子邮件以合理的要求。

伦理批准

道德伦理委员会的批准获得上海交通大学医学院(sh9h - 2020 tk60 - 1)。

同意

同意并不是必要的。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

这项研究是由Q.Z.设计和C.Y.基准线问进行了大部分的实验和起草了手稿。开出信用证的核进行了一些实验。D.H.Z.帮助与统计分析。Y.L.帮助论文的编辑。阅读和批准所有的作者都最后的手稿。杨气、清周贡献本文同样。

确认

这项研究得到了国家自然科学基金(81870785)、上海市医院新兴前沿技术联合关键项目(SHDC12017101),医学科学的凸轮创新基金(CIFMS) (2019 - i2m 5 - 037),自然科学基金会的计划(2019 - zd - 0775和2020 - ms - 175,辽宁、中国),和科技计划项目(20-205-4-052、沈阳、中国)。

引用

1. c . c .许c . y . y . Loh l . y . Te和c·h·林,“股骨内侧髁皮瓣重建拇指intercondylar病理骨折,”整形手术。全球开放,5卷,不。2,p . e1242 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. a . Oryan m . b . Eslaminejad卡马利a也展示,s . Hosseini a . Moshiri和h . Baharvand“间充质干细胞播种到组织工程论述支架加强批评-大小的径向骨缺损愈合过程的老鼠,”细胞和组织的研究,卷374,不。1,第81 - 63页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. m . k . Reumann c . Linnemann r·h·Aspera-Werz et al .,“施主能级位置对扩散至关重要,干细胞能力,和脂肪间充质干细胞成骨分化/基质细胞:对骨组织工程”国际分子科学杂志》上,19卷,不。7,1868年,页2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. m .马瑞利b·科迪斯波蒂r·m·谢尔顿et al .,“牙髓干细胞mechanoresponsiveness:机械刺激对牙髓干细胞的影响行为,”前沿生理学2018年,卷。26日。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. ai Caplan,间充质干细胞,骨科研究期刊》的研究,9卷,不。5,641 - 650年,1991页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. c . r .同伴c·马特r . Zakany和m . a . KhanIM“脂肪、骨髓和滑膜joint-derived间充质干细胞软骨修复,”遗传学前沿,7卷,不。213年,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. k . Shiraishi n .龟井静香竹内et al .,“质量评价的人类骨髓间充质干细胞软骨修复,”干细胞国际卷。2017年,9页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. s l·弗朗西斯·s . Duchi c . Onofrillo c·d·贝拉和p . f . m . Choong)“脂肪间充质干细胞软骨组织工程的使用:需要一个快速隔离程序,”干细胞国际卷。2018年,9页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. t . Morito t . Muneta k Hara et al .,“滑膜fluid-derived人类间充质干细胞增加关节内韧带受伤后,“风湿病学卷,47号8,1137 - 1143年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. 郭y,刘,w . et al .,“人类脐带沃顿胶间充质干细胞结合非细胞软骨细胞外基质支架改善软骨修复与微裂缝在山羊的模型相比,“骨关节炎和软骨,26卷,不。7,954 - 965年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. s . Gronthos m . Mankani j .卜拉欣·g·罗比和美国史,“产后人类牙髓干细胞(DPSCs)在体外和体内,”美国国家科学院院刊》上,卷97,不。25日,第13630 - 13625页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. b . m . Seo m .三浦s Gronthos et al .,”调查的多功能产后干细胞从人类牙周韧带,”《柳叶刀》,卷364,不。9429年,第155 - 149页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. c . Morsczeck w . Gotz j . Schierholz et al .,“孤立的前体细胞(pc)的人类智齿牙卵泡,”矩阵生物学,24卷,不。2、155 - 165年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. t .松原,k . Suardita m . Ishii et al .,“肺泡骨髓再生医学作为细胞来源:肺泡和髂骨髓基质细胞之间的差异,”骨和矿物质研究杂志》上,20卷,不。3、399 - 409年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m .三浦s Gronthos m .赵et al .,“流:从人类脱落乳牙干细胞,”美国国家科学院院刊》上,卷100,不。10日,5807 - 5812年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. t·w·Sonoyama y . Liu Yamaza et al .,”表征顶端的乳头及其居住干细胞从人类未成熟恒牙:一个试点研究,“Endodontia杂志,34卷,不。2、166 - 171年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. 池田e . k .八木天线m .小岛et al .,“多功能细胞从人类第三磨牙:细胞治疗肝脏疾病的可行性,“分化,卷76,不。5,495 - 505年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. 刘问:张先生,美国史,y . et al .,“间充质干细胞来源于人类齿龈能够免疫调节功能和改善实验性结肠炎组织炎症性破坏,”免疫学杂志,卷183,不。12日,第7798 - 7787页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. g . Spagnuolo b·科迪斯波蒂m .马瑞利c, s, m . Tatullo,“承诺oral-derived干细胞在牙颌面应用程序中,“牙科杂志》第六卷,没有。4 p。72年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. x, w .郭,k咋et al .,“浓缩CD146 +脂肪中提取干细胞结合关节软骨细胞外基质支架促进软骨再生,”开展。,9卷,不。17日,第5121 - 5105页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. x c .杨x f . Walboomers j·j·j·p·范Beucken, z . a .扁m . w .风扇和j·a·詹森“硬组织形成STRO-1-selected鼠牙髓干细胞体内,”组织工程的一部分。,15卷,不。2、367 - 375年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. f . a . Schildberg和v . s . Donnenberg基质细胞在健康和疾病”,血细胞计数的一部分。,卷93,不。9日,第875 - 871页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 科迪斯波蒂m . Tatullo g . Spagnuolo b . et al .,“PLA-based mineral-doped支架播种与人类根尖周的cyst-derived msc:再生在牙科治疗,一个有前途的工具”材料,12卷,不。4、597 - 614年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. a . Kuchnio盖斯基埃b, b . w . Wong和p . Carmeliet”基质代谢和免疫细胞在健康和疾病,”自然,卷511,不。7508年,第176 - 167页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. j·阿斯m . Krampera j·巴雷特et al .,“国际社会对免疫细胞治疗的角度为间充质基质细胞功能检测力量释放标准先进的临床试验阶段,“Cytotherapy,18卷,不。2、151 - 159年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. k . k . Pasumarthy n . d . Jayavelu l . Kilpinen et al .,“Methylome人类骨髓msc的分析,将揭示广泛的年龄,culture-induced变化远端管理元素,”干细胞的报道,9卷,不。3、999 - 1015年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. 答:T.-L。Lam j . j . Li P.-W。(et al .,“生物可降解聚-ε己内酯微载体高效生产人类的间充质基质细胞和分泌细胞因子在批处理和馈料式生物反应器,”Cytotherapy,19卷,不。3、419 - 432年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. p . Ercal g . g . Pekozer, g . t .高丝”牙齿干细胞在骨组织工程:当前的概述和挑战,”放置Exp。地中海,杂志。卷,1107年,第127 - 113页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 最新信息和t . a . Hentunen”分化成骨细胞和骨细胞的间充质干细胞,”目前干细胞研究和治疗,3卷,不。2、131 - 145年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. 美国马:谢,w·李,b .元,y, y王,“间充质干细胞的免疫生物学,”细胞死亡和分化,21卷,不。2、216 - 225年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. w·费拉来说,r . Atoui Immunotolerant间充质干细胞的特性:更新审查,”干细胞国际,卷2016,不。4、文章ID 1859567, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. r . Berebichez-Fridman r . Gomez-Garcia j . Granados-Montiel et al .,“整形手术的圣杯:间充质干细胞细胞这些当前的使用和潜在的应用,”干细胞国际卷,2017篇文章ID 2638305, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. s·m·穆勒和j . Glowacki下降与年龄相关的人类骨髓细胞培养的成骨的潜力在三维胶原蛋白海绵,”细胞生物化学杂志》上,卷82,不。4、583 - 590年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. j·p·罗德里格斯l . Montecinos里奥斯,p .雷耶斯和j·马丁内斯,“间充质干细胞从骨质疏松性患者产生一种我collagen-deficient细胞外基质有利于脂肪形成的分化,“细胞生物化学杂志》上,卷79,不。4、557 - 565年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. 江t . l . j . a . Wang Chen j . et al .,“缺氧预处理变弱缺氧/ reoxygenation-induced在间充质干细胞凋亡,”Pharmacologica学报卷,29号1,第82 - 74页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. r . z和李问:p,“改善的结果移植间充质干细胞对缺血性心脏病,”生物化学和生物物理研究通信,卷376,不。2、247 - 250年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2021瞿Guanlin et al。这是一个开放分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。