Hepatocyte-Like干细胞细胞作为病毒性肝炎研究模型

文摘

病毒性肝炎,肝脏疾病的主要原因,是诱导hepatotropic感染病毒,包括甲型肝炎病毒B, C, D, E。由于他们的专性细胞内的生活方式,文化系统有效的病毒复制是至关重要的。虽然基础和转化研究病毒性肝炎已执行多年,传统的肝细胞培养系统并非最优。这些研究极大地受益于最近努力提高病毒复制和感染细胞培养模型研究。这里我们总结人类hepatocyte-like干细胞细胞的使用hepatotropic病毒感染的研究,包括宿主交互的解剖和病理占据以及识别和验证新型抗病毒药物。

1。介绍

病毒性肝炎最终表现为连续的肝脏炎症和肝损伤和肝衰竭。总结如表1病毒性肝炎的主要病原体是五hepatotropic病毒,包括甲型肝炎病毒(HAV),乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV), D型肝炎病毒(HDV为),和E型肝炎病毒(HEV)。甲肝病毒和戊肝病毒通常是通过接触受污染的水或食物传播,导致估计每年150万甲型肝炎病毒感染和2000万年戊肝病毒感染的发生率1,2]。甲型肝炎和戊肝病毒通常引起急性感染;然而,也会引起慢性感染亨德拉病毒在免疫功能低下的患者2]。乙肝病毒、丙肝病毒和丁肝病毒是通过输血传播,器官移植,性,和注射的行为3- - - - - -5]。大约10 - 15%的长期HBV-infected患者合并感染丙肝病毒和5%丁肝病毒(6]。感染乙肝病毒、丙肝病毒和丁肝病毒可以引起自限性和慢性肝炎和肝病的主要原因包括肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌(HCC) (3,4,7]。为了防止疾病进展,早期诊断和治疗是至关重要的。尽管最近丙型肝炎的治疗取得巨大进步,基于成功的丙肝病毒基础研究(8),仍然需要了解底层的分子和细胞机制的肝脏其他hepatotropic病毒引起的发病机理。小说特定药物的发展对hepatotropic病毒感染是一个具有挑战性的任务,部分由于缺少生理相关细胞培养模型,可用于介质/高通量药物筛选。

肝癌细胞的无价的整个历史hepatotropic病毒在细胞培养的研究。然而,他们异常的细胞内信号和代谢活动限制调查病毒和细胞的先天免疫的相互作用以及对细胞增殖的影响,新陈代谢,细胞凋亡通路。此外,大多数肝癌细胞株缺乏各种功能的酶,如CYP450和其他阶段I, II, III摘要,让他们不适合于评估抗病毒药物的相互作用和新陈代谢9,10]。因此,研究使用这些模型的能力是有限的模仿自然病毒诱导肝脏病理。

最真实的hepatotropic病毒细胞培养系统的研究是人类肝细胞主要(收购PHH)。然而,阻碍了它们的使用是有限的捐助供应,donor-to-donor可变性,和快速的去分化在镀在细胞培养(11]。鉴于使用的限制和挑战肝癌细胞和收购phh, hepatocyte-like细胞(hlc)来自人类胚胎干细胞(为)或诱导多能干细胞(iPSC)已成为一个有前途的细胞培养模型研究基础和转化肝病以及肝炎病毒感染(12- - - - - -14]。hlc已经区分来自不同资源,如为,则,liver-resident肝祖细胞和骨骨髓来源间充质干细胞(15]。分化hlc在功能上表现为生产尿素、吲哚菁绿,糖原存储和诱导细胞色素P450 (CYP450)活动16]。此外,他们可以拯救移植后肝功能为动物模型(17]。到目前为止,HLC感染模型乙肝病毒、丙肝病毒,和戊肝病毒已经成功建立了(17- - - - - -19]。在这里,我们总结当前知识用于这些病毒和细胞培养模型强调hlc的优势来源于干细胞作为基础和转化病毒性肝炎研究改进系统。

2。Hepatocyte-Like乙型肝炎病毒感染的细胞

尽管可用性的一种有效的预防性疫苗,乙肝病毒感染仍然是一个全球公共卫生负担的人估计有2.57亿慢性感染的风险增加发展中肝related-fibrosis、肝硬化和肝细胞癌(HCC) (25]。乙肝病毒包含一个部分双链,放松的环状DNA (rcDNA)基因组约3.2 kb,共价链接到HBV聚合酶(26]。rcDNA传递到细胞核病毒输入并转换为完全双链DNA后,由结扎本身转换成一个细胞内乙型肝炎病毒复制中间称为共价闭合环状DNA (cccDNA)。cccDNA负责HBV持续感染细胞(6,26]。治疗慢性乙型肝炎的治疗应该因此目标永久转录沉默或消除cccDNA [27]。

目前,慢性乙型肝炎的治疗方法仅限于1型干扰素(IFN -αide)和五个批准干扰素有(t)类似物(NAs) [28]。由于干扰素治疗的严重的副作用,只有少数患者有资格获得治疗,不到10%的人表现出持续的病毒学反应证明损失的乙型肝炎表面抗原(HBsAg) [29日]。NAs是最有效的药物;替诺福韦和恩替卡韦可以减少病毒DNA,经常低于检出限较低阻力发展(30.,31日]。然而,大多数病人仍HBsAg-positive即使长期治疗和频繁的病毒反弹在治疗撤军表示需要终身治疗(32]。此外,长期政府替诺福韦与Fanconi综合症,有关骨矿物质密度下降和慢性肾小管损伤(33]。因为目前的抗病毒策略不能完全根除病毒感染,迫切需要开发新型抗病毒疗法仍然是(34]。

基本和转化研究受到的缺失在体外实验模型,功能肝细胞的生理条件和允许有效的乙肝病毒和感染。如表所示2、人肝癌细胞系,如Huh-7 HepG2,被广泛用作代理模型对乙型肝炎病毒感染,即使他们只是部分模拟肝的生理功能。稳定HBV-integrated肝癌细胞系生成通过与一个HBV-expressing培养的肝癌细胞转染质粒(35- - - - - -38]。乙肝病毒基因组的替代系统交付baculoviral或运载体,导致足够的乙肝病毒复制和病毒粒子生产(39,40]。然而,这些细胞系不宽容的自然感染,因为他们无法调解病毒感染的早期步骤,包括入口、脱壳,cccDNA的形成。主要人类肝细胞(收购phh)支持完整的病毒复制周期和作为乙肝病毒感染的金标准。然而,他们有很多缺点,包括捐赠变异性高,寿命短,和有限的可用性。尽管许多试图改善方法保持新鲜孤立的收购phh,他们经常迅速去分化,在培养皿中(19,41- - - - - -43]。HepaRG细胞肝脏祖细胞可以在体外分化,然后整个乙肝病毒生命周期支持,乙肝病毒研究的另一个工具(35,44]。然而,在这些差异化HepaRG乙型肝炎病毒感染细胞的效率仍低于其他细胞系统。此外,分化的细胞含有肝细胞和胆管血统,影响HBV-host hepatocyte-specific环境相互作用研究(45]。新的乙型肝炎病毒感染细胞培养模型已经开发当人类牛磺胆酸盐钠协同转运多肽(NTCP)被确认为乙肝病毒进入受体(46]。NTCP-overexpressing肝癌细胞系生成包括HepG2-NTCP和Huh-7-NTCP细胞系,为HBV-host交互提供一个便利的平台和抗病毒研究[46,47]。但是,正如上面提到的,尽管整个乙肝病毒生命周期完成,改变了肝癌细胞的生理信号通路。

最近,iPSC-derived hlc据报道支持乙型肝炎病毒感染(19,63年]。时间进程实验表明,全面激活转录机械和NTCP的表达在细胞表面实现生产力的乙型肝炎病毒感染是至关重要的。这证明了人类的潜力iPSC-derived hlc在体外感染乙肝病毒生物学的研究,然而,效率仍然很低。尽管作者观察颞诱导干扰素刺激基因(isg) HBV-infected hlc,研究从其他组,而支持这个概念,乙型肝炎病毒是一种隐形病毒在体外和在活的有机体内(68年- - - - - -71年]。同样,樱井等人建立了人类iPSC-derived hlc允许乙型肝炎病毒感染效率约20% (62年]。夏等人使用一个优化协议(72年)来区分non-colony-type为单层培养和万能干细胞hlc(图15天1)。hlc保持它们的分化状态,允许乙型肝炎病毒感染超过4周。重要的是,作者成功地证明了HLC分化提供了一个优化的协议在体外模型能够支持乙肝病毒传播。值得注意的是,去分化过程发生在较慢的速度比收购phh hlc,高表达水平的前病毒的因素,包括NTCP, HNF4A, RXRA,维持超过3周,一个合适的模型对长期乙型肝炎病毒感染的研究(19]。推倒NTCP降低乙型肝炎病毒感染而推倒抗病毒因子APOBEC3A增强病毒复制,表明hlc构成一个适当的系统的病毒-宿主相互作用的研究。利用该模型,作者确定了两个host-targeting代理、精制和PA452新的抗病毒药物。最近,聂等人使用万能干细胞生成肝瀑样和评估他们的应用程序在研究HBV病毒-宿主相互作用[73年]。他们培养iPSC-derived内胚层的间叶细胞,内皮细胞与定义的化学介质三维(3 d) microwell文化系统的细胞组织本身逐渐分化成有功能的肝瀑样。他们表明,瀑样表现出更强的肝脏功能比2-cultured hlc更高对乙型肝炎病毒感染的易感性(73年]。元等人开发了一个小鼠模型来研究在活的有机体内乙型肝炎病毒感染的嫁接iPSC-derived hlc成拥有[老鼠74年]。这些包含大约40% hlc小鼠的肝脏在星期6和维持在这个水平至少14周。乙型肝炎病毒感染后,病毒复制指标如HBsAg, e抗原,RNA, DNA, cccDNA血清中检测到。此外,这些老鼠可用于测试不同的抗病毒药物74年]。在一起,所有这些研究表明hlc完全支持HBV感染和病毒-宿主相互作用,允许识别和验证新型抗病毒药物。

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图1

hepatocyte-like干细胞细胞支持病毒研究乙肝病毒,丙肝病毒和戊肝病毒。(a)在分化,iPSC或hESC进行明确的内胚层感应,肝规范,hepatoblast扩张,肝成熟成为宽容的hlc感染肝炎病毒。(b)乙型肝炎病毒感染、细胞激活素A和Wnt-3A处理增强了4天,HGF和岩石抑制剂y - 27632一天,其次是胶质瘤1星期。Hepatoblast细胞与敏捷管理3天,可用于乙型肝炎病毒感染。受感染的细胞可以维持胰岛素的存在,HC和DMSO另1个月(19]。(c)对于丙肝病毒应用程序,使用两种方法iPSC / hESC是有区别的。上:这手臂是相似的(b) (a, (17])。低:细胞激活素A和对待FGF-2直到第四天FGF-10添加了2天,然后用维甲酸和TGF - coaddedβ抑制剂SB431542直到第十天。胶质瘤细胞进一步处理FGF-4, EGF(大约10天65年]。(d) 5天,内胚层是由苯丙酸诺龙,FGF-2, bFGF和进一步分化BMP4和bFGF直到第十天。细胞通过EGF和HGF hepatocyte-like细胞终末分化。细胞可以感染戊肝病毒或维护在中包含oncostatin-M [18,75年]。缩写:AAT:α1-antitrypsin;法新社:α胎蛋白;飞机观测:载脂蛋白B;BMP4:骨形成蛋白4;研究:81年集群的区别;CK-7:细胞角蛋白7;CLDN1: claudin-1;趋化因子受体CXCR4: C-X-C趋化因子受体类型4;CYP: 450细胞色素酶;敏捷:地塞米松; DMSO: dimethyl sulfoxide; EGF: epidermal growth factor; FGF: fibroblast growth factor; FOXA2: forkhead box protein A2 (also known as hepatocyte nuclear factor 3-beta); GATA4: GATA-binding protein 4; HC: hydrocortisone; hESC: human embryonic stem cells; HGF: hepatocyte growth factor; HNF: hepatocyte nuclear factor; iPSC: induced pluripotent stem cells; KRT19: cytokeratin 19; NANOG: Nanog homeobox; NTCP: sodium taurocholate cotransporting polypeptide; OCT4: octamer-binding transcription factor 4; PROM1: prominin 1; RXR: retinoid X receptor; SOX17: sex determining region Y-box 17; TGF: tumor growth factor.

3所示。Hepatocyte-Like丙肝病毒感染的细胞

全世界约7100万人慢性丙肝病毒感染,从而增加进行性肝病的风险(76年]。虽然照顾慢性丙肝病毒感染的标准是通过直接的显著提高抗病毒药物(DAAs),它仍然带来了重大问题,包括在一些病人团体治疗失败和有限的访问疗法治疗由于高成本。此外,保护性疫苗仍然是需要的。值得注意的是,15 - 45%的hcv感染的个体能够清楚病毒在六个月内没有干预,但底层机制仍然未知77年,78年]。

为了解决这些科学问题和开发新的anti-HCV药物,各种在体外丙肝病毒感染模型已经开发出来。JFH-1是一个独特的细胞培养——(cc)的丙肝病毒适应研究肝癌的完整病毒生命周期系统(79年];然而,它并不反映丙肝病毒感染患者的差异性和多样性80年]。源自Huh-7 Huh-7.5.1细胞系细胞retinoic-inducible基因有缺陷我(rig - I),病毒基因组的一个关键球员承认和宿主免疫反应,经常用于JFH-1 HCVcc感染(81年]。

几项研究已经独立验证,hlc主管支持丙肝病毒感染(表2)。在初步研究,hlc产生分化的细胞则通过腺病毒与生长因子和SOX17,十六进制,HNF4A。所有这些hlc丙肝病毒进入受体表达在,包括研究、SR-B1, claudin-1, occludin,允许进入和丙肝病毒的复制pseudoparticles和subgenomic经由,分别为(82年]。随后,其他团体证明hlc不仅宽容不同形式的细胞culture-adapted丙肝病毒(病毒pseudoparticles JFH-1;HCVpp和HCVcc),但也显示检测感染不同serum-derived HCV基因型1,1,2,3,4;这是不可能与肝癌细胞系,因为他们不宽容感染病人隔离17,83年]。

hlc支持HCV基因型2的完整生命周期21天(图1)[65年,68年]。hlc的另一个特点是丙肝病毒可以从感染的细胞扩散到相邻细胞,表明可能的直接细胞间传播丙肝病毒,已经在HuH-7前面描述的细胞(17]。最近的一项研究使用人类源自人类间充质干细胞的细胞则随后分化为hlc多顺反子OSKM-reprogramming因素。这些hlc支持野生型丙肝病毒的整个生命周期(1 b基因型1,3,3 b, f 6,和6 n)隔离患者,取得了感染率增加孵化细胞α生育酚。HCV病毒颗粒释放可能感染天真hlc和HuH-7细胞,容易与干扰素治疗α、利巴韦林、sofosbuvir [85年]。

尽管hlc代表一个独特的和高度相关的模型来研究HCV感染在体外和在活的有机体内,尤其是在特定的遗传背景的背景下,该模型的一些局限性仍有待解决。首先,病毒颗粒的生产与报道相比仍然很低水平HuH-7细胞系(86年]。它已经表明,宽容和持续感染丙肝病毒的肝祖细胞是影响肝脏特异性微rna - 122和细胞细胞因子(87年,88年]。通过抑制JAK / STAT通路阻止干扰素反应,病毒感染和复制在hlc改善(89年]。此外,更高的丙肝病毒复制水平观察STAT2——但不是STAT1-deficient hlc [89年]。即使JAK / STAT通路抑制剂治疗,hlc展示完整的III型干扰素和ISG反应。这表明hlc可能是一个合适的模型来研究HCV-host互动(86年]。在不同地区多个突变的病毒基因组JFH-1 HCVcc增强HuH-7细胞的浓度,和感染动物模型中维护,但突变的出现没有hlc的调查。进一步关注HLC模型之间观察到的变化与时间或细胞系细胞因子浓度肝细胞分化所必需的。因此,iPSC差异化协议和HLC培养条件需要优化。例如,人性化肝嵌合体小鼠基于人类肝细胞(如hlc)移植据报道支持丙肝病毒感染(90年]。嫁接hlc在活的有机体内生产人类肝脏嵌合小鼠模型已经充满了低效率(91年]。通过使用一个优化转基因小鼠肝细胞分化的协议,它携带uPA (urokinase-type纤溶酶原激活物)基因由主要的尿蛋白启动子在SCID(重度联合免疫缺陷症)/米色背景、hlc分化为和特定的细胞则能够灌输并接受进一步成熟在活的有机体内。生产和慢性丙肝病毒感染在这些添肝损伤模型可以推出高剂量接种(1000 CID50 /鼠标)17]。尽管挑战仍然存在,健壮的细胞培养和动物模型使用hlc serum-derived丙肝病毒提供卓越的系统调查丙肝病毒生命周期和HCV-associated肝癌发展。

4所示。Hepatocyte-Like戊肝病毒感染的细胞

戊肝病毒被认为是一个重要的全球卫生问题(92年]。戊肝病毒是nonenveloped正链RNA病毒Hepeviridae家庭,分为两类:Orthohepevirus和Piscihepevirus(93年]。的Orthohepevirus属进一步分为四个物种A, B, C, d . Human-infecting戊肝病毒菌株属于Orthohepevirus,其中包括human-restricted基因型(gt) 1和2以及人畜共患基因型3、4和7。human-restricted基因型粪口传播,偶尔导致大型发展中国家的水源性疾病疫情,卫生设施不良(综述[94年])。这些感染是急性和self-resolving但可导致孕妇增加毒性,导致25%的孕产妇死亡率第三阶段(95年]。人畜共患病毒,感染动物作为水库和可以通过消费传播戊肝病毒感染肉(94年]。这些人畜共患种戊肝病毒导致免疫功能低下的患者(急性和慢性疾病92年]。减少免疫抑制结合标示外使用利巴韦林是唯一可用的治疗,但治疗抗性已报告(96年- - - - - -98年]。高效疫苗在中国开发和许可但不在24]。

7.2 kb腺苷酸戊肝病毒基因组包含三个部分重叠的开放阅读框架(ORF1-3)(综述(2])。ORF1编码病毒复制酶,ORF2衣壳,和小蛋白质参与病毒ORF3组装和分泌2]。一系列不同的表达系统已经用于研究戊肝病毒没有造成真正的病毒复制(67年]。在这方面,像其他hepatotropic亨德拉病毒病毒,它们在细胞培养生长不佳,已严重阻碍了分子的研究,使其生命周期的许多基本方面知之甚少(67年]。

突破开发健壮的戊肝病毒细胞培养系统已经通过特定的隔离病毒株复制效率提高和兼容的细胞系的识别99年]。系列使这些细胞系后,分离菌株积累突变和/或插入,这增加了他们的复制能力。HEV病毒,例如,g3 Kernow-C1菌株,分离从病人慢性戊肝病毒(One hundred.)和连续六次通道(通道6)在肝癌细胞株HepG2 [101年]。一个病毒插入来自人类的40年代核糖体蛋白肌力ORF1地区成为更大的优势种在体外复制能力和扩大宿主范围(101年]。同样,其他菌株与增强病毒插入到已报告ORF1健康在体外(102年- - - - - -104年]。这些改编克隆使分子戊肝病毒混合动力生物学研究,取得了有价值的见解。然而,这种方法仅限于g3和4病毒,据我们所知,还没有成功的其他基因型。

研究提出了利用hlc分化从iPSC / hESC作为替代戊肝病毒细胞培养模型肝癌细胞和收购phh(图1)[18,66年]。hlc可以感染了改编p6应变(18,66年,75年]。过渡的研究表明,胚叶细胞支持细胞内复制但不感染亨德拉病毒(66年]。只有当他们是内皮细胞是分化不成熟肝细胞成为感染亨德拉病毒的易感(18]。这充分表明,病毒进入,由未知的细胞蛋白的表达,是限制因素也可以组织趋向性亨德拉病毒的关键因素(66年]。此外,hlc很容易宽容从动物感染戊肝病毒分离株gt1-4事先适应(18]。令人惊讶的是,早期,不适应Kernow-C1应变通过复制比hlc的改编p6应变。这表明,在细胞培养中获得突变减弱病毒复制更多的生理相关制度。hlc因此使研究不仅真实的戊肝病毒复制还pan-genotype戊肝病毒生物学。戊肝病毒基因型之间的高度异质性迄今为止尚未完全探索,但hlc现在可能提供可再生的平台来研究这种差异。因此,病毒或细胞决定因素可能定义一个宿主范围和跨物种感染壁垒尚未定义,许多鲜为人知的话题之一。

采用精确编辑技术,例如CRISPR(集群定期中间短回文的重复序列)/ Cas9 (CRISPR-associated蛋白9),允许快速和高效的基因编辑相关的宿主因素在干细胞在戊肝病毒复制路径探索的重要性。使用CRISPR-Cas9,我们发现至少有一个显著的区别不适应和适应戊肝病毒复制(18]。宿主因素还有,之前报道限制戊肝病毒复制(18),只有抑制细胞culture-adapted p6克隆而不是原始Kernow-C1隔离复制hlc [18]。确凿的证据表明之间的药物反应差异在体外和在活的有机体内条件;分子(即。,mycophenolic acid and rapamycin) that affected adapted HEV replication in cell culture [105年,106年在病人[]未能表现出任何效果107年]。如果这种差异是由于病毒基因组的改变或反映在活的有机体内复杂性与病毒复制研究单个细胞类型,现在可以使用hlc探索。与最近的努力识别新化合物抑制戊肝病毒复制(75年,108年- - - - - -110年在hlc),验证系统将变得越来越相关。

一些研究显示,感染亨德拉病毒宿主基因确定敏感性[111年- - - - - -113年]。研究复制的能力不适应戊肝病毒分离株与自体串联,patient-derived则使感染亨德拉病毒的个性化模型(67年]。这可能提供病人个体化平台测试潜在的治疗方法在体外,特别是对于慢性戊肝病毒已经有了抗药性的患者对各类单体。另一种治疗方法,我们目前正在探索基于使用不致病的腺相关病毒(AAV)结合CRISPR-Cas9提供短发卡RNA(成分)下调戊肝病毒复制。在这个场景中,基因疫苗将通过转导HLC之前patient-derived万能干细胞分化和移植的肝脏慢性戊肝病毒患者建立基因保护肝细胞的数量。另外,hepatotropic装甲防护将允许直接交付目标成分在活的有机体内。这些方法不限于戊肝病毒,hlc宽容丙肝病毒和乙肝病毒分离株(63年,65年)(表1)。,hlc提供一个独特的可再生的和基因易处理的蜂窝系统的执行合并感染研究的广泛使用的肝癌细胞株不同病毒放纵(表2)。

hlc之外,干细胞技术也可以提供一个平台来研究戊肝病毒生物学的其他方面。戊肝病毒主要感染肝脏但可能附加的组织(114年]一些病人经历肝外表现包括神经障碍,血小板减少症,肾损伤,和其他条件115年]。这是通过观察进一步证实,戊肝病毒可以复制在体外在nonhepatic细胞类型,如肺(116年,神经117年),胎盘(118年细胞系。干细胞,其内在产生各种血统的细胞的能力,有助于定义戊肝病毒组织取向的决定因素(66年]。总之,知识在病毒生命周期的戊肝病毒和病毒-宿主相互作用,即。系统性和细胞水平上,仍然稀缺。pan-genotype戊肝病毒生物学研究在细胞生理相关系统如hlc,支持真正的戊肝病毒感染和复制,将极大地促进我们对戊肝病毒生物学的理解。这将推动和促进特定anti-HEV疗法的发展。

5。结论和未来的发展方向

hlc源自hiPSC或hESC提供一种很有前途的工具来研究hepatotropic病毒的生物学和筛选新型抗病毒治疗。我们在发展中总结当前进展hlc支持整个生命周期的乙肝病毒,丙肝病毒和戊肝病毒(图1)。hlc构成一种新型细胞培养模型,比永生化生理相关肝癌细胞系。除此之外,hlc的使用可以帮助克服两个主要的局限性收购phh: donor-to-donor可变性和长期的文化研究慢性感染。具体来说,hlc支持高效的和长期的乙肝病毒复制,值得注意的是,病毒的传播(19]。的本质而言,不同的基因型和高复制的RNA病毒的突变,如丙肝病毒和戊肝病毒,hlc允许pan-genotype放纵,甚至支持直接感染patient-derived隔离在细胞培养中没有被改编。嫁接hlc为免疫抑制肝损伤小鼠模型,比如uPA / SCID小鼠,可能促进抗病毒药物评价与宿主相互作用的研究在活的有机体内。

合并感染肝炎病毒(如乙肝病毒、丙肝病毒和戊肝病毒)发生在病人。然而,合并感染的确切方式描述不良是由于单人放纵的文化模型(表2)。hlc因此构成万能工具,来研究两种或两种以上肝炎病毒如何调节宿主因素(s)如小牛,还有。这可能提供的信息和订单合并感染患者的治疗。

hlc来源于细胞则是更少的社会和伦理问题比收购phh或胎儿tissue-derived肝细胞。此外,hlc作为一个强大的工具来评估遗传因素对病毒感染的影响,为hlc由万能干细胞可以生成不同的遗传背景。

尽管有这些优势和优化可用的协议,HLC分化仍然是费时和复杂。尽管hlc比许多生理相关肝癌细胞系,他们保留一个不成熟的表型和不能完全概括肝细胞功能。也许,分化3 d-culture条件下可能会改善,产量hlc收购phh更相似。支持这个,Gieseck等人已经证明hepatocyte-specific hlc基因高表达,在三维培养条件(119年]。

最终,hlc病毒性肝炎研究提供一个个性化的平台。病人不响应可用治疗,个性化iPSC-derived hlc是最好的模型来研究宿主因素和验证二线抗病毒药物。综上所述,hlc提供研究的一个重要工具肝炎病毒的生命周期,尽管不同的乙肝病毒复制自然,丙肝病毒和戊肝病毒。hlc来自干细胞的发展打开了一个新时代,并提供一个生理相关制度,以推进我们对病毒生命周期的理解。这将最终导致小说的发展对消除病毒性肝炎治疗策略。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

Y夏由中国病毒学国家重点实验室。这个项目一直与教育拨款支持通过基科学研究在亚洲肝病学者计划。瞿B是由证期局/ TRR179项目号码272983813 -由德国研究基金会资助。张C是由从德国中心的皮毛Infektionsforschung奖学金。六世刀这是由CHS Stiftung和德意志Forschungsgemeinschaft(脱硫、德国研究基金会)-Projektnummer 240245660 - sfb1129。我们感谢安德鲁Freistaedter和Xianfang吴的批判阅读手稿。

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